Summary
Vi har utviklet en horisontal skive fremstilling av den voksne pattedyr hinnen med planet til seksjonering parallelt med retinal overflaten. Dendrittiske felt av nonradially orienterte netthinnens nerveceller ble ikke avkortet, slik at studiet av signalbehandling med patch-clamp og avbildningsteknikker.
Abstract
Vertikale skive forberedelsene er godt etablert for å studere kretser og signaloverføring i den voksne pattedyr netthinnen. Planet for seksjonering i disse preparater, er vinkelrett på retinal overflaten, noe som gjør den ideell for studiet av radialt orienterte neuroner som fotoreseptorene og bipolare celler. Imidlertid, den store dendrittiske arbors av horisontale celler, bred-felt amacrine celler, og ganglion-celler er stort sett avkortet, slik markert redusert synaptisk aktivitet i disse cellene. Mens ganglion celler og ford amacrine celler kan studeres på en helt montert utarbeidelse av netthinnen, horisontale celler og amacrine celler lokalisert i det indre kjernefysiske lag er bare dårlig tilrettelagt for elektroder i hele netthinnen vev.
For å oppnå maksimal tilgjengelighet og synaptisk integritet, har vi utviklet en horisontal skive forberedelse av musen netthinnen, og studerte signaloverføring ved synapse mellom fotoreseptorene og horisontalceller. Horisontal seksjonering tillater (1) enkel og entydig visuell identifisering av horisontale celle organer for elektrode målretting, og (2) bevaring av den utvidede horisontal celle dendrittiske felt, som en forutsetning for intakt og funksjonell kjegle synaptic innspill til horisontale celle dendritter.
Horisontale celler fra horisontale skiver utstilt tonic synaptisk aktivitet i mørket, og de svarte på korte lysglimt med en reduksjon av innover strøm og redusert synaptisk aktivitet. Immunocytokjemisk bevis indikerer at nesten alle kjeglene i den dendrittiske felt av en horisontal celle etablere synapser med sine perifere dendritter. Den horisontale slice forberedelse er derfor godt egnet til å studere fysiologiske egenskaper horisontalt utvidet retinal nevroner samt sensorisk signaloverføring og integrasjon på tvers av utvalgte synapser.
Introduction
Visuell informasjon er kodet som en dynamisk rom-tid-mønster av fotoreseptoren aktivering, og båndet synapse mellom fotoreseptorene og andre-ordens nevroner bestemmer nedstrøms overføring av visuell informasjon. Den vertikale skive fremstilling av pattedyr hinnen er et meget verdifullt verktøy for å studere signalbehandling i vertikale baner, det vil si mellom fotoreseptorene og bipolare celler, og mellom bipolare celler og noen typer amacrine celle en, to, tre, fire.
Men vertikal seksjonering alltid fører alvorlig avkutting av de dendrittiske felt av mange netthinnens nerveceller, som fører til betydelig tap av synaptiske kontakter. Spesielt i ytre netthinnen, er horisontale celler berørt på grunn av sine lateralt spredt lengre dendrittiske felt og axon terminalsystemer 5. I en vertikalskive preparat, den synaptiske input av hundrevis av kjegle fotoreseptoren terminalene til dendrittene av en horisontal celle er således redusert til noen få spredte kontakter. Dette kan være nok til å studere egenskapene til enkelte synapser, men det gjør på ingen måte representerer de signalbehandling evner ligger til grunn for synkronisert aktivering av fotoreseptoren bånd synapser.
Vi har derfor utviklet en horisontal skive preparat, som etterlater nesten alt av konusen fotoreseptoren synaptiske inngang til horisontale celle dendritter intakt og funksjonelt. Planet for seksjonering løper parallelt med overflaten av netthinnen, ideelt sett å skjære gjennom det indre kjernesjikt mellom horisontale celler og amacrine celler. Således er horisontale skiver av den ytre retina opprettes inneholdende, på den presynaptiske området, fotoreseptorer med indre og ytre segmenter samt synaptiske terminaler, og horisontale celler og bipolare celler på den postsynaptiske området. Dette preparatet er godt egnet to undersøke koordinerte synaptiske input i horisontale celle dendritter av alle kjegle fotoreseptorene innenfor sitt dendrittiske felt. Det derfor kan være nyttig for å bedre forstå virkefotoreseptoren bånd synapse, noe som er avgjørende for overføring av visuell informasjon fra matrise av fotoreseptoren aktivisering til en postsynaptisk respons.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer ble utført i samsvar med de retningslinjer for dyreforsøk utstedt av Forbundsrepublikken Tyskland.
MERK: Fordi netthinnevev vil være blottet for oksygen i løpet av lengre deler av denne fremgangsmåten, bør alle trinn utføres så raskt som mulig. Mus bør være mørk-tilpasset minst tre timer før disseksjon. For å unngå lys tilpasning av netthinnen, forberedelse og kutting bør utføres under svakt rødt lys.
1. Utarbeidelse av Media og andre kjemikalier
- Forbered Ames 'Medium 6. Etter disseksjon, fordype retinal vev i Ames 'Medium til alle tider.
- Løs opp 2,2 g av Ames 'Medium og 298 mg HEPES i 250 ml destillert vann. Konsentrasjonen av HEPES vil være 5 mM. Rør forsiktig inntil alle partiklene er oppløst.
- Boble Ames-medium ved værelsestemperatur med karbogen (95% oksygen, 5% bilbon karbondioksid) i minst 5 min. Tilførsel karbogen med et glass Pasteur-pipette til oppløsningen. Koble Pasteur pipette via passende slange til utløpet av gassregulator.
- Legg 475 mg natrium-bikarbonat i oppløsning. Tilsetningen av bikarbonat etter bobling forhindrer utfelling av kalsiumkarbonat.
- Forbered lav geleringstemperaturen agarose. Agarose er nødvendig for innebygging av retinal vev under vibratome snitting.
- Oppløs 180 mg agarose i 9 ml Ames 'Medium og 1 ml destillert vann. Bruk en mikrobølgeovn til sakte varme opp agarose løsning inntil alle faste stoffer blir oppløst. Varme i 5 - 10 trinn sek for å unngå overløp. Oppløsningen skal være klar og gjennomsiktig.
- Lagres oppløst agarose i vannbad ved 37 ° C under hele fremgangsmåten.
2. Sette opp Vibratome
MERK: All seksjonering er gjennomført medvibratome oppført i Materials tabell. De oppgitte innstillinger referere til denne typen vibratome bare. For ytterligere informasjon om vibratome seksjonering av nervevev henvises til referanse 7.
- Plasser vibratome injektor blad i bladholderen.
- Mål vertikal avbøyning av bladet med "vibrocheck" enhet. Benytte justeringsskruen på bladholderen til å vippe bladet inntil den er parallell med skjæringsplanet. Den nøyaktige posisjonering av bladet er nødvendig for å hindre persienne virkninger på delen overflate og for å frembringe en flat del som inneholder levende celler på overflaten.
- Sett vibratome til følgende innstillinger: amplitude, 1.00; hastighet, 0,20; tykkelse, 180-200 um.
3. Disseksjon av Mouse Retina
- Bedøver voksen C57BL / 6 mus ved fordampning av omtrent 1 ml isofluran i en lufttett beholder. Når anestesi er fullført, avlive dyret ved cervikal dislokasjon. Demus bør ikke være eldre enn 3 måneder, ellers kvaliteten av sektorene vil forringes.
- Fjern øye ball ved å plassere en buet tang under øyet. Forsiktig løfte opp øyet ballen vil utsette synsnerven. Skjær synsnerven med en fjær saks og overføre øyet ballen til en 35 mm petriskål som inneholder 2 ml Ames 'Medium.
- Gjennomføre alle etterfølgende trinnene på scenen av en stereo mikroskop. Juster forstørrelsen til en verdi som gir optimal visuell kontroll av følgende prosedyrer (trinn 3.4 til 3.9).
- Punktere hornhinnen ved overgangen til sclera med spisse tang eller en 20 G nål. Under dette trinnet, stødig øyet ballen med en annen tang. Vær forsiktig så du ikke skader netthinnen med punkterings enheten.
- Sett våren saks inn i det lille hullet gjorde i trinn 3,3 og kuttet en sirkel rundt hornhinnen. Igjen, stødig øyet ballen med tang mens kutte. Hold innsnitt meget nær overflaten for ikke å cutca inn i netthinnen.
- Fjern forsiktig hornhinnen, linsen og glasslegeme med pinsett. Glasslegemet omfatter bare et tynt gjennomsiktig sjikt på baksiden av øyet. Imidlertid er det viktig for vibratome seksjonering at glasslegemet er fullstendig fjernet.
- I petriskål, plasser eyecup på en måte som man ser gjennom hullet ned på netthinnen. Kanten av åpningen bør bestå av skleral vev bare. Dersom det er fore ut den sirkulære kutt (trinn 3.4) for nær ekvator av eyecup, vil netthinnevev også være til stede nær snittet. Vær forsiktig så du ikke skader netthinnen i trinn 3.8.
- Ta tak i sclera med pinsett og forsiktig rive vev fra hverandre. Det er viktig ikke å briste på netthinnen i løpet av dette trinnet. Om nødvendig, løsne netthinnen fra ora serrata av stabiliserende scleralområdet del av vevet med pinsett og forsiktig peeling av netthinnen med de andre tang. Hold tang lukket; aldri håndtere retina med pinsett siden vev er meget myk og vil gi måte umiddelbart.
MERK: På dette trinnet, netthinnen og resten av øyemusling vil bli koblet bare på synsnerven hodet. - Kutt festestedet på synsnervepapillen med våren saks. Netthinnen skal nå være fritt flytende som et enkelt stykke av vev i Ames-medium.
- Skjær netthinnen i 4 - 6 små rektangler på ca 23 mm ved hjelp av en buet skalpell blad ved å holde netthinnen langs kantene med pinsett, for å manipulere den på plass. Unngå å knipe retinal vev i rektangler. Ta stykker fra de sentrale deler av netthinnen, ikke helt til periferien.
- Overfør retinal stykker med en stor diameter plast Pasteur-pipette til en 35 mm petriskål av plast, hvis bunn er blitt erstattet med en mesh med gitterstørrelse mindre enn 1 mm. Fest petriskål i øvre tredjedel av et beger eller erlenmeyerkolbe og senk retinal brikker i Ames 'Medium bubbled med carbogen.
4. Inkludering av Netthinne Pieces i Agarose
- overføre nøye 2 - 3 retinal stykker inn i en 35 mm plast petriskål sammen med noen av Ames 'Medium. Det er mest praktisk å bruke en stor diameter plast Pasteur pipette for overføring. I dette trinn blir den nøyaktige orientering av de retinale stykkene ingen rolle.
- Fjerne så mye som mulig av den gjenværende Ames-medium med et glass Pasteur pipette. Så snart fluidet er fjernet fortsette med trinn 4.3. Ikke la retinal vev tørr.
- dekke straks retinale stykker med 2 ml oppløst agarose (37 ° C). Gitt den størrelse som er nevnt i trinn 3.10, vil bitene ikke krølle opp i agarose.
- I væsken agarose, presse forsiktig retinal stykker til bunnen av petriskålen. Ganglion celle laget skal vende ned. Bruk en stereo mikroskop for dom nøyaktige plasseringen. For posisjonering, håndtere retinal pieces med en liten slikkepott. Plasser netthinnen som rask og presis som mulig siden agarose stivner raskt.
- Ordne retinal stykker parallelt med undersiden av glasset rett; ellers seksjoner vil være tangentiell eller skrå. Individuelle brikkene skal ikke berøre hverandre, men også bør ikke være for langt fra hverandre. Prøv å plassere retinal stykker mer eller mindre på samme horisontale nivå.
- Sett glass petriskål med innebygd retinal stykker inn i kjøleskap (4-6 ° C) i minst 2 min. Det vil raskt stivne agarose for videre behandling. Så snart agarosen har polymerisert fortsette med neste trinn.
5. Montering av Retinal Pieces
- Fjern forsiktig agarose blokken inneholder retinal stykker fra petriskålen. Bruke en spatel eller en lignende anordning for å løfte agarose blokk fra glasset. På grunn av lim krefter, kan dette vise seg å være ganske vanskelig. Men unngå å bryteagarose blokken. Utfør denne og alle påfølgende trinn ved romtemperatur.
- Plasser agarose blokken på et dekkglass og justere størrelsen med et skalpellblad. La 1 - 2 mm av agarose på hver side av netthinnens stykker. Den endelige størrelsen på blokken bør være rundt 1,066 mm (10 mm refererer til høyden av blokken, 6 mm til dens kantlengde).
- Lim agarose blokken til prøven innehaveren av vibratome å bruke en umiddelbar lim. Retinal stykker bør være plassert på toppen av den 10 mm høy blokk og orientert parallelt med overflaten, mens den nederste er festet til holderen.
- Dekk blokken umiddelbart ved å helle den tidligere boblet Ames 'Medium inn i bufferbrettet av vibratome.
6. Utarbeidelse av Horisontal vibratome Seksjoner
- Begynn seksjonering. I begynnelsen satt tykkelsen ha klippet manuelt til fragmenter av retinal vev vises i stykket. Så bytt til innstillingene i trinn 2.3. sidenmus hinnen er bare ca 200 mikrometer tykk, vil det ikke være mer enn 2-3 skiver per agarose blokken.
- Fjern seksjoner fra bufferbrettet med en glasstav og overføre dem til 2 ml Ames 'Medium i en 35 mm petriskål.
- Oppbevar deler umiddelbart i en inkubator ved 37 ° C (5% CO 2/55% O 2). Agarose som omgir seksjonene vil forbli fast i inkubatoren, og kan brukes til å håndtere seksjonene uten å skade netthinnen. Bedre skive kvalitet oppnås ved lagring ved 37 ° C i løpet av de respektive atmosfære i forhold til oksygenerte Ames-medium ved RT. Seksjoner kan brukes umiddelbart eller kan lagres i opptil fire timer i kuvøse med gode fysiologiske resultater.
- Embed neste retinal brikker i agarose og gjenta §§ 4 - 6.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I horisontale skiver av musen netthinnen, kan horisontale celle organer lett identifiseres i henhold til deres unike morfologi med flere primær dendritter dukker opp fra en mangekantet cellekroppen (figur 1A). Horisontale cellelegemer som ligger nær overflaten av den skive ble rutinemessig tilgjengelig for patch-clamp elektroder. Under opptakene ble celler fylt med et fluorescerende fargestoff, avslører sine intrikate dendrittiske arborization, som lignet morfologi axon bærende horisontale celler i intakte mus hinnen 8 (figur 1B). Merking av kjegle pedicles med fluorescein-coupled jordnøttagglutinin viste en nær romlig relasjon mellom kjegle pedicles og horisontale celle dendritter (figur 1C). Med få unntak ble alle kjegle pedicles innenfor den horisontale cellens dendrittiske felt kontaktet av dendrittiske prosesser.
ent "fo: keep-together.within-page =" 1 "> For å bevise at kontaktene mellom kjegler og horisontale celler var funksjonelle, patch-clamp opptakene ble utført fra horisontale celle organer under mørke tilpasset forholdene, aktuelle svarene var. kjennetegnet ved en stor strøm innover ledsaget av moderat til høy-frekvens synaptisk aktivitet (figur 2A). avviket fra grunnlinjen, og de eksitatoriske postsynaptiske strømmene ble forårsaket av konstant frigjøring av glutamat i mørket, aktivere postsynaptiske AMPA- og kainat-type glutamat reseptorer 9. Individuelle synaptiske hendelser ble preget av en monofasisk kurve eller mer komplekse nåværende baner (figur 2B). tilstedeværelsen av tonic postsynaptiske aktivitet tyder på at glutamat ble utgitt på synaptiske kontakter mellom kjegle fotoreseptorene og horisontale celle dendritter vist i figur 1C.Horizontal celler registrerte svarte på endringer i lysintensitet, noe som indikerer at signaloverføring i kaskade kjegle fotoreseptorene ble også intakte og funksjonelle i en horisontal skive preparat. På grunn av den reduksjon av transmitterfrigjørelse, ble tonic innover strøm av mørketilpasset horisontale celler inhiberes, og synaptisk aktivitet opptrådte tydelig redusert i løpet av tilstedeværelsen av en full-felt lys stimulus (1300 W / cm 2, 470 40 nm) (figur 3A). Likeledes, en bryter til mørket fra en lys-tilpasset tilstand forårsaket en innover strøm og økt synaptisk aktivitet (figur 3B). I tillegg ble det korte elektriske pulser (1-15 V, 1 msek) tilført gjennom en platina-iridium bipolar stimuleringselektrode for å depolarisere alle kjegle fotoreseptorene i nærheten av en horisontal celle legeme. Stimulering-indusert frigjøring av glutamat vakte stor amplitude eksitatoriske postsynaptiske strømninger i den innspilte horisontal celle (figur 3C). i summary disse funnene viser overbevisende at synapse mellom kjegle fotoreseptorene og horisontale celler kan manipuleres eksperimentelt ved enten endogene stimulus lys eller ved kontrollert depolarisering av presynaptiske elementer.
Figur 1: morfologi og Synaptic Kontakt horisontale celler i en horisontal Slice forberedelse. En horisontal celle (pil) som befinner seg nær overflaten av den skive ble visualisert med Dodt kontrastoptikk. Målestokk = 10 um (A). For bildebehandling eksperimenter, ble en horisontal celle fylt med Oregon Grønn 488 BAPTA-en (100 uM) via en patch-elektrode, som fremdeles er festet til cellen. Scale bar = 10 mm (B). Overlapping av et fargestoff-injisert horisontal celle og rekken av koniske pedicles merket med fluorescein-koplet jordnøttagglutinin avdekker mulige synaptiske kontakter. Målestokk = 10 um (C). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Synaptic aktivitet Registrert fra en horisontal Cell Body. Hel-celle-spenning klemme innspilling på et holdepotensial på -60 mV viser høyfrekvens-tonic synaptisk aktivitet (A). Ved høyere tidsoppløsning (B), synaptiske hendelser vise monofasiske bølgeformer (pil) eller mer komplekse nåværende baner (pilspisser). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
g3.jpg "/>
Figur 3: Aktuelle Responses horisontale celle organer fremkalt av lys og elektrisk stimulering. Lys respons av en mørk-tilpasset horisontal cellen kroppen føres til -60 mV holder potensial. Full-felt belysning hemmer den toniske innover strøm og reduserer synaptisk aktivitet (A). En lett-tilpasset horisontal cellen kroppen registrert under samme forhold viser en indre strøm etter en mørk flash ledsages av økt synaptisk aktivitet under mørke (B). Horisontale linjer i A og B representerer tidspunktet for stimulus. Ekstracellulær stimulering av korte elektriske pulser induserer store amplitude eksitatorisk postsynaptisk strøm som følge av den synkroniserte frigjøring av glutamat fra kjegle fotoreseptorer (C). Holding potensial: -60 mV. Pilen indikerer tidspunktet for stimulering puls. Avkortede strømninger i begynnelsen av sporet representerer stimulerings gjenstander..com / filer / ftp_upload / 55173 / 55173fig3large.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I motsetning til vertikale skiver, er dendrittiske morfologien av radialt orienterte neuroner som horisontale celler og celler amacrine vel bevart. Sammenlignet med hele netthinnen forberedelser, disse celletypene er lett tilgjengelig for mikroelektroder og kan studeres av både elektrofysiologiske og avbildningsteknikker. Her fokuserte vi på den ytre hinnen; derimot, har en lignende tilnærming blitt rapportert spesielt for amacrine cellene i indre netthinne 10.
Egenskapene til det horisontale stykke fremstillingen har flere konsekvenser for funksjonelle studier. Antallet av synaptiske kontakter mellom kjegle fotoreseptorene og postsynaptisk horisontale celler var nesten umulig å skille fra det intakte hinnen. Synaptiske kontakter var funksjonelle, viser tonic frigjøring av nevrotransmitter i mørket. Synapsen kan aktiveres ved enten endogene stimuli som lys / mørke overganger eller ved ekstern bipolar stimulering.
Teknikken som presenteres her er stort sett begrenset til horisontalt orienterte nerveceller. Derfor er det ikke mulig å ta opp fra fotoreseptorene og intakte bipolare celler i et horisontalt snitt, ettersom de bipolare celle aksoner vil bli avkortet. I tillegg er det mulig å helt kontrollere nivået av seksjonering. En enkelt retinal stykke mIght således bli skåret i et uønsket nivå, for eksempel mellom ytre og indre segmenter av fotoreseptorene. Ved å øke antallet av netthinnens brikker innenfor en blokk av agarose øker sjansene for en korrekt plan snitting i det minste i ett stykke.
Den horisontale slice forberedelse er godt egnet til å studere de unike egenskapene til bånd synapser av stang og kjegle fotoreseptorer. Så langt har vi brukt et dyr knock-out system for å undersøke hvilken rolle presynaptiske proteiner complexin 3 og complexin 4 på synaptisk overføring mellom kjegle fotoreseptorene og horisontale celler 11. Det er også mulig å studere egenskapene til postsynaptiske nevrotransmitterreseptorer, som vist tidligere ni.
Fremtidige søknader vil omfatte studiet av synaptiske proteiner basert på transgene mus linjer med elektrofysiologiske og avbildningsteknikker. Det vil også være mulig å undersøke biofysiske proeiendommer av gap veikryss mellom horisontale celler. Siden lys responser kan måles, vil den teknikk som også brukes til å undersøke den koding av endogene stimuli ved den første synapse av det visuelle systemet. Det er mulig å gjennomføre fremstillingen i mørket for å hindre lys tilpasning av vev, ellers lys responser vil være stort sett kjegledrevet.
I sammendraget, representerer den horisontale slice forberedelse en ny tilnærming for å øke tilgjengeligheten til enkelte synapser som en forutsetning for å studere deres funksjonelle egenskaper i pattedyr netthinnen 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ames' Medium | Sigma | A1420 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Hepes | Sigma | H3375 | |
| Carbogen | Air Liquide | ||
| Agarose | Sigma | A9045 | |
| 35 mm Petri dish (plastic) | Nunc Thermofisher | 150318 | |
| Glass Petri dish | Chemoline | 50-1470-40 | |
| Isoflurane | Dispensary university hospital | ||
| Vibratome injector blade | Biosystems | 39053250 | |
| Vibratome | Leica Microsystems | VT1200 | |
| Vibrocheck | Leica Microsystems | ||
| Microwave | |||
| Water bath | |||
| Forceps | |||
| 20 G needles | |||
| Spring scissors | |||
| Curved scalpel blades | |||
| Stereo microscope | |||
| Plastic Pasteur pipette | |||
| Glass Pasteur pipette |
References
- DeVries, S. H., Li, W., Saszik, S. Parallel processing in two transmitter microenvironments at the cone photoreceptor synapse. Neuron. 50, 735-748 (2006).
- Jackman, S. L., et al. Role of the synaptic ribbon in transmitting the cone light response. Nature Neuroscience. 12 (3), 303-310 (2009).
- Rabl, K., Cadetti, L., Thoreson, W. B. Kinetics of exocytosis is faster in cones than in rods. J. Neurosci. 25 (18), 4633-4640 (2005).
- Singer, J. H., Lassová, L., Vardi, N., Diamond, J. S. Coordinated multivesicular release at a mammalian ribbon synapse. Nature Neuroscience. 7 (8), 826-833 (2004).
- Peichl, L., González-Soriano, J. Morphological types of horizontal cell in rodent retinae: a comparison of rat, mouse, gerbil, and guinea pig. Vis. Neurosci. 11, 501-517 (1994).
- Ames, A., Nesbett, F. B. In vitro retina as an experimental model of the central nervous system. J. Neurochem. 37 (4), 867-877 (1981).
- Mathis, D. M., Furman, J. J., Norris, C. M. Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology. J. Vis. Exp. (49), (2011).
- Peichl, L., Sandmann, D., Boycott, B. B. Comparative anatomy and function of mammalian horizontal cells. Development of the Retina. , Plenum Press. New York. (1998).
- Feigenspan, A., Babai, N. Functional properties of spontaneous excitatory currents and encoding of light/dark transitions in horizontal cells of the mouse retina. Eur. J. Neurosci. 42 (9), 2615-2632 (2015).
- Enoki, R., Jakobs, T. C., Koizumi, A. Horizontal slice preparation of the retina. J. Vis. Exp. (1), e108 (2006).
- Babai, N., et al. Functional roles of complexin3 and complexin4 at mouse photoreceptor ribbon synapses. J. Neurosci. 36, 6651-6667 (2016).
- Thoreson, W. B. Horizontal slices of mouse retina expose horizontal cells and their properties (Commentary on Feigenspan & Babai). Eur. J. Neurosci. 42 (9), 2613-2614 (2015).
