Summary
여기에서 우리는 제시 방법은 개별 꿀벌과 벌집 콜로니 모두 농약 오염 된 식품을 공급한다. 절차는 기본 유생 다이어트 생체 공급함으로써, 또한 벌집 콜로니의 자연 상태에서 개별 꿀벌의 살충제 효과를 평가한다.
Introduction
환경에서 농약의 존재는 가장 심각한 문제 중 하나 인 영향을 미치는 꿀 꿀벌 1, 2, 3의 생명. 몇몇 연구는 꿀벌 식민지 꿀벌 제품에서 살충제 잔류의 일반적인 존재를 증명하고있다. 대만, 농약의 평균 응용 프로그램 11-12kg / (2005 년부터 2013 년) 매년 하였다. 대만에서 사용되는 농약의 양이 5 EU 국가보다 높은, 그리고 라틴 아메리카 국가 4. 즉, apicultural 환경은 특히 대만과 가능성이 다른 국가에서 심각한 농약 스트레스를 겪고있다.
꿀벌 API를 mellifera이 농업 시스템 (6)의 주요 매개자 중 하나이며 또한 꿀 가치있는 제품을 생산하고 있습니다. 그러나 꿀벌은 박람회는다양한 농약이 농약에 대한 ED 꿀과 꽃가루 7, 8을 수집 할 때 농약을 살포 한 꽃에서 먹이 찾아 돌아다 후 벌통에 다시 가져올 수 있습니다. 또한 자체가 두드러기 9, 10, 11 내 해충 문제를 제어하기 위해 목표로 양봉에 의해 농약에 노출 될 수 있습니다. 꿀벌 유충이 자신의 개발, 유충, 무인 항공기에 대한 간호사 꿀벌에 의해 공급되고 있기 때문에, 심지어 여왕은이 농약으로 오염 된 감로 및 꽃가루 (12)에 노출 될 수 있습니다. 꿀벌에 대한 다양한 농약의 독성 (13)를 해결해야합니다.
많은 노력은 환경 잔류 농약의 문제를 평가하기 위해 이루어졌다. 양 외. 에서 꿀벌 유충의 개발에 신경 독성 살충제 이미다클로 프리드의 영향을 테스트이 벌집과 이미다클로 프리드의 서브 치사량은 성인 꿀벌 후각 (14)의 결합 동작의 결과를보고했다. 또한 Urlacher 등. 실험실 조건 (15)에서 꿀 꿀벌 노동자의 학습 성능에 유기 인계 살충제, 클로르 피리 포스의 하위 치명적인 영향을 조사했다. 이전 연구에서 우리는 애벌레 꿀벌 16 (PPN) pyriproxyfen 곤충 생장 조절제의 영향 (IGR)을 평가.
본 논문에서는 꿀벌의 발전에 화학적 영향을 평가하기위한 방법을 제시한다. 꿀벌 공급 방법을 설명하고 하나의 개별 꿀벌 또는 콜로니에 적용 하였다. 첫째, 우리는 생체 내에서 개별 꿀벌에 대한 농약의 영향을 평가하기 위해 식민지에서 유충에 농약에 오염 된 기본 애벌레 다이어트 (BLD)의 서로 다른 농도를 시험했다. 우리는 자연 CONDIT을 시뮬레이션 진행벌통 내에 농약 오염 시럽을 사용하여 이온 살충제. 이 방법에서, 널리 해충 (17)에 대해 사용되며, 꿀벌 유충 및 번데기 (16), (18, 19)의 발전에 유해하다 PPN은 현장에서 농약의 부정적인 효과를 나타내는 지표가 될 것이다.
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Protocol
1. 준비
- 50 %의 설탕 시럽 1 L합니다. 1 L의 DDH 2 O.에 1kg 자당 녹이고
- BLD에서 pyriproxyfen (PPN) 솔루션을 준비합니다. 10,000 ppm의 PPN 원액 1.1 L을 4 ° C에서 2 DDH O. 스토어 멸균 1 L에 PPN 100 ㎖ 용액을 희석.
- 다음 실험을위한 BLD 0.1, 1, 10 및 100 ㎎ / ㎏ (PPM)의 최종 농도로 PPN 원액을 희석.
- (식민지 레벨) PPN-시럽을합니다. 다음 실험에 대한 50 %의 설탕 시럽 10 및 100 ppm으로 최종 농도로 PPN 주식을 희석.
- 꿀 꿀벌 사육.
참고 : 여기, 실험 위치는 국립 일란 대학 (NIU) 양봉장, 이순신 - 란시, 대만은; (GPS 좌표 : N24.747278, E121.746200).- 꿀벌 (아피스 mellifera이 L.)는 식품 수량 매주 식민지 확인하고 (꿀 저장 영역이 비어) 필요한 경우 1리터 50 %의 설탕 시럽을 공급. 건강한 정의일반적 산란 퀸 각 콜로니의 꿀벌 빗 9 프레임으로서 콜로니.
- 기본 애벌레 다이어트 (BLD)의 100 mL로 준비합니다. (DDH 2 O) 멸균 증류수, 탈 이온수에 6 % D- 글루코오스, 프 룩토 오스 6 %, 1 % 효모 추출물을 용해시키고, 50 % 로얄 젤리 보충. 4 ° C에서 보관하지만 3 일 이상합니다.
실험 전에 35 ° C로 사전 따뜻하고 3 일 이내에 사용합니다.
생체 수유 방법 2.
노트 : 생체 내에서 공급 법은 헨리 등의 알로부터 변형되었다. (20)
- 꿀 꿀벌 유충 선택 및 라벨링.
- 4 프레임 부에 퀸을 제한하면서 4 프레임 5 개 프레임으로 건강한 콜로니 9 프레임 분할 퀸 excluder입니까. 산란을 위해 4 프레임 섹션에서 적어도 하나 개의 빈 프레임을 남겨주세요.
- 여왕이 1 일 산란 후계란의 외관을 검사 프레임 1 일령 유충이 부화까지 72 시간 (4 일째)에 벌통 내부의 알을 유지한다. 손으로 테스트 하이브 밖으로 (24 시간 내에 부화) 1 일 된 노동자 유충을 포함하는 프레임 중 하나를 가지고 꿀벌 브러시 프레임에서 꿀벌 노동자를 제거합니다.
- 투명 슬라이드 (크기 = 길이 X 너비 X 두께 29.7 mm X 21mm X 0.1 mm)를 가진 프레임을 덮고 압정 (도 1a)와 프레임의 가장자리에 상기 투명 슬라이드 손톱.
- 각각의 치료를위한, 임의로 하나 50 일령 유충 (4 일째)을 선택하고, 상기 투명 슬라이드 영구 마커 펜을 사용하여 각 브루 셀 마크 (도 1a 및도 1b).
참고 : 다른 치료 사이의 혼동을 피하기 위해 영구 마커 펜을 사용하여뿐만 아니라 프레임과 투명 슬라이드의 각 치료의 정보를 작성합니다. 표시된 슬라이드를 제거하고 생체에 대한 유지 </ EM> 급전 관찰.
- 생체 먹이.
- 의 흡기 양에 따라 각각 10 μL, 10 μL, 20 μL로 일 1, 2, 3에 피펫으로 각 표지 브루 셀 PPN-BLD (0.1, 1, 10, 100 PPM)의 상이한 농도를 추가 유충의 나이. 대조군에 BLD (NO PPN)의 동일한 금액을 추가합니다. 이에 따라, 각 분류 브루 셀 PPN-BLD의 총 투여 량은 4, 40, 400, 4000 페이지에 축적한다.
참고 : 표시된 투명 슬라이드하여 표시 무리 세포를 인식하고 공급 한 후 표시된 투명 슬라이드를 제거합니다. 일벌에 의해 무리 세포의 청소를 방지하기 위해 공급하는 신선한 BLD를 사용합니다. - 더 관찰의 원래 식민지로 PPN 처리 된 프레임을 돌려줍니다.
참고 : 각각의 치료는 네 개의 식민지에서 네 생물 반복 있습니다.
- 의 흡기 양에 따라 각각 10 μL, 10 μL, 20 μL로 일 1, 2, 3에 피펫으로 각 표지 브루 셀 PPN-BLD (0.1, 1, 10, 100 PPM)의 상이한 농도를 추가 유충의 나이. 대조군에 BLD (NO PPN)의 동일한 금액을 추가합니다. 이에 따라, 각 분류 브루 셀 PPN-BLD의 총 투여 량은 4, 40, 400, 4000 페이지에 축적한다.
- 7 일에서 처리 유충의 관측.
- 일을 관찰하려면전자 표지 무리 세포의 사망률과 상한 율을 기록하기 위해 프레임에 표시된 투명 슬라이드를 반환 유충을 PPN은 처리.
- 하루에 13에서 처리 번데기와 우화 요금의 관측.
- 덮인 무리 세포의 꿀벌 왁스를 제거합니다.
- 브루 셀에 소프트 팁 핀셋을 넣고 클램프 번데기를 아주 약간 부드럽게 번데기를 꺼내.
- 각 웰 아래 기관 조직의 이중층으로 24 웰 조직 배양 플레이트에 번데기로 이동. 번데기 전송 중에 손상과 사망률을 기록합니다.
- (약 팔일) 출현 될 때까지 34 ° C, 70 % 상대 습도 인큐베이터에서 24 웰 조직 배양 플레이트 유지.
- 관찰과 번데기와 등장 꿀벌을 기록합니다.
- 통계
- ± SD 평균값으로 기록 된 데이터와 현재 계산
- SA에 의해 변동 (ANOVA)을 이용하여 분석 데이터를 분석S 및 다른 처리의 두 방법의 차이를 분석하기 위해 최하위 차 (LSD)를 사용하여 시험. P - 값 <0.05로 통계적으로 유의 한 정의합니다. 테이블의 동일한 열에서 서로 다른 글자는 통계적 분석에 의해 현저한 효과를 나타냈다.
벌집에서 식민지 수준에서 PPN 3. 독성
- 꿀벌 그룹을 설정합니다.
- 프레임 4 (파트 A) 및도 5의 프레임 (파트 B) 4 프레임 부에 여왕으로 제한하면서 건강한 콜로니 9 개 프레임을 분할하는 수직 퀸 excluder입니까. 산란을위한 4 프레임 부분에 적어도 하나 개의 빈 프레임을 남겨주세요.
참고 : 다른 여왕 부품 사이에 이동 여왕을 방지하기 위해 여왕 부분의 상단에있는을 excluder 넣습니다. - 여왕이 1 일 산란 한 후, 달걀 모양의 프레임을 선택합니다. 손으로 A 부분에서 계란을 포함하는 적절한 프레임을 가지고 꿀벌 근로자를 제거꿀벌 브러시로 프레임입니다.
- 투명 슬라이드 프레임을 덮고 압정와 프레임의 가장자리에 상기 투명 슬라이드 손톱.
- 임의로 함유 달걀 100 개 브루 셀을 선택하여 상기 투명 슬라이드 영구 마커를 사용하여 각 브루 셀을 표시한다. 그룹 1. 다른 치료 사이의 혼동을 피하기 위해 영구 마커를 사용하여 프레임과 투명 슬라이드의 각 치료의 정보를 기록 이러한 100 개 무리 세포를 할당합니다.
- 3 일 A 부분에 표시된 프레임을 반환 한 후 알을 낳기 위해 파트 B에 여왕을 전송합니다.
- 일일 후, 파트 B의 프레임을 검사 한 적절한 프레임을 선택하고, 단계 3.1.4에 기술 된 바와 같이 계란 함유 100 브루 셀 라벨. 그룹이 이러한 100 개 무리 세포를 할당합니다.
- 3 일 파트 B로 표시된 프레임을 반환 한 후 알을 낳기에이 부분에 여왕을 전송합니다.
- 6 번 파트 A와 파트 B의 여왕 교환을 반복하고 수치 그룹을 할당,각각 (도 2). 9 개 그룹의 총이 있어야합니다.
- 프레임 4 (파트 A) 및도 5의 프레임 (파트 B) 4 프레임 부에 여왕으로 제한하면서 건강한 콜로니 9 개 프레임을 분할하는 수직 퀸 excluder입니까. 산란을위한 4 프레임 부분에 적어도 하나 개의 빈 프레임을 남겨주세요.
- 일 13 PPN 설탕 시럽 T reat 꿀벌 콜로니 (도 2).
- 1 L 플라스틱 꿀벌 급전 박스 (10) 또는 100 PPM (W X L x 높이 = 20 cm X 30cm X 3.5 cm)를 함유하는 50 % PPN 설탕 시럽을 추가 실험 콜로니의 프레임의 상부에 박스를 넣어.
참고 : 무리 세포가 봉인 된 것처럼 그룹 1 13 일째에 PPN을받지 않습니다. - 단계 2.2에 기재된 바와 같이 1 L 50 % 설탕 시럽 (NO PPN)와 대조군 사료.
- 1 L 플라스틱 꿀벌 급전 박스 (10) 또는 100 PPM (W X L x 높이 = 20 cm X 30cm X 3.5 cm)를 함유하는 50 % PPN 설탕 시럽을 추가 실험 콜로니의 프레임의 상부에 박스를 넣어.
- 5 일 (그림 2)에서 각 그룹에 대해 100 개 라벨 무리 세포의 계란 부화 속도로 일일 된 유충 기록을 계산합니다. 꿀 꿀벌 계란은 일반적으로 0일 유충으로 부화 3 일이 걸릴; 따라서 확인하고 100 계란 함유 하루 1에 무리 세포를 라벨 및 부화 속도의 비율을 얻기 위해 하루 5에서 각 그룹에 대해 1 일 된 유충의 수를 계산합니다.
- 기음날 (11) (도 2)에서 각 그룹 (100 개) 표지 브루 셀의 애벌레 캐핑 레이트 캡핑 브루 셀 기록 ount. 6 ~ 7 일 된 애벌레 무리 세포는 애벌레 pupating 꿀 꿀벌 노동자 꿀벌 왁스로 제한됩니다.
- 번데기 성숙을 관찰하고 17 일 (도 2)에서 각 그룹 (100 개) 표지 브루 셀의 우화 율을 기록한다.
- 덮인 무리 세포의 꿀벌 왁스를 제거하고 부드럽게 부드러운 밀고 족집게와 번데기를 꺼내. 각 웰 아래 기관 조직의 이중층으로 24 웰 조직 배양 플레이트에 번데기로 이동.
- 출현 될 때까지 34 ° C, 70 % RH에서 항온 24 웰 조직 배양 판을 유지한다.
- 관찰과 번데기를 기록하고 그룹 9까지 각 그룹 (49 실험 일)를 위해 꿀벌을 등장.
참고 : 각 치료는 네 생물 반복 있습니다.
- 통계
- 기록 데이터를 계산하고, 평균으로서 본± SD.
- 치료의 쌍 사이의 유의 한 차이를 분석하여 (예를 들어 0 PPM / 10 PPM 10 PPM / 100 ppm을 0 PPM / 100 PPM) 학생의 양측의 t -test를 사용하여 각 그룹이다. P - 값 <0.05처럼 통계적으로 유의 한 정의합니다.
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Representative Results
꿀벌 필드 시험, 여왕이 산란을위한 4 프레임 부에 한정되었다. 이 단계는 한 프레임에 무리 밀도를 증가시키고 이후의 관찰을 용이하게 할 수있다. 각각의 치료는 표시되었고, 꿀벌 '개발은 분명 투명 슬라이드를 통해 관찰되었다. 벌집 꿀벌 유충에 PPN-BLD의 생체 먹이 정확하게 콜로니에 꿀벌의 개발 PPN의 영향을 평가하기 위해 수행 하였다. 생체 공급 법을 사용하여 벌집에 화학적 처리의 영향의 관찰을 용이.
PPN-BLD의 각 복용량 오십 개 브루 셀의 총 표시하고 처리 하였다. PPN-BLD를 첨가 한 후, 처리 된 프레임들이 자연 상태에서 관찰 일본어 콜로니로 복귀 하였다. 애벌레 단계 꿀벌에 PPN-BLD의 부정적인 영향은 쉽게 obse했다rved. 투여 량에 의존하는 효과가 관찰되었다. 표 1은 10 내지 100 ppm의 두 고용량의 애벌레 단계에서 사망 꿀벌의 수를 제시한다. 두 투여 량 (0.1 및 1 PPM)에, 표 1에 나타낸 바와 같이, 상기 캐핑 가격, 출현 우화 율을 일의 상당히 높은 비율로 크게 0 (BLD 식품 첨가) 상이하거나 unfed 제어 없었다 1 ppm에서 변형 된 날개를 가진 꿀벌입니다. 번데기 Melanization PPN은 낮은 농도에서 관찰되었다. 또한, 성인 꿀벌의 비율 PPN 고용량 (표 1)와 함께 증가 변형 날개 나타났다.
전체 꿀벌의 식민지 PPN 시럽의 공급, 환경 PPN 잔류 고통 꿀벌 식민지를 시뮬레이션하기 위해 수행되었다. 처리 전에, 각 콜로니 인터넷 (퀸 excluders 3 개 내지 하루 간격으로 9 개 개의 다른 시간 그룹으로 나누었다gure 2). 따라서, 부화 캐핑 및 우화의 환율 PPN의 효과는 자연 환경에서와 동일한 조건 하에서 동시에 관찰되었다.
콜로니 (도 2에서 붉은 점선으로 표시됨) 13 일에서 10 또는 100 ppm의 PPN 시럽을 공급 하였다. PPN-시럽 13 일에 공급되어 그룹 1에 꿀벌이 번데기 있었다 캡핑 때문에 이론적으로, 그룹 1은 PPN없는 제어 하였다; 애벌레 단계에서 꿀벌 그룹 2와 3에 영향을 시작하고, 계란 인해 PPN 오염 된 벌통에서 긴 노출 시간 (그림 2)에 그룹 4-9에 영향을받습니다.
이 연구에서 우리는 PPN 시럽 꿀 꿀벌 식민지를 공급하고 성인 꿀벌 시럽을 소비하고 아마 여왕과 유충을 공급하는 경우 개발을 관찰했다. 이 가정은 hatc에 의해 확인되었다힝, 캐핑 및도 3a에 도시 된 것처럼 우화 율 및 변형 날개 꿀벌는 PPN 치료 후에 관찰 하였다 - 차원. 모든 파라미터는 부화율 (- 차원도 3a)을 제외하고, 제 3 그룹으로 시작 고용량 (100 PPM)에서 크게 다르다. 또한, PPN-시럽 치료 후, 많은 번데기는 검은 색 손톱 또는 등장 실패에 의해 사망했다. 100 PPM PPN 처리에서, 캡핑 된 세포를 파괴하고, 부상 번데기는 콜로니 (도 3e)로부터 제거 하였다.
그림 1 : 브루 셀 라벨의 회로도. (A) 일일 된 노동자 유충은 투명 슬라이드 논문에 포함하고 영구 마커로 표시되었다. (B)는 일일 된 노동자 애벌레 무리 세포를 레이블; 흰색 화살표는 1 나타낸다 일 된 내부 작업자 유충. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2 : PPN은 9 개 실험군에 비해 시작될 때의 타임 라인. PPN의 다른 농도는 하루 13 (빨간 점선)에 공급되었다. 처리 된 콜로니를 나타낸다 산란을위한 부분 B와 반대로 부분 A로부터 파트 A와 파트 B. 여왕 교환으로 분할 하였다. 이는 엘스 비어 (16)로부터 허가를 재현 할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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그림 3 : 전 테스트 꿀벌 식민지에 1kg PPN 시럽을 공급 한 후 꿀벌 유충의 개발. 구 개 집단의 총이 실험에서 조사 하였다 : (A) 부화 속도; (B) 캐핑 레이트; (C) 우화 율; 및 (D) 잘못된 날개 속도. SD 제시된 평균 ±; 빨간색 화살표는 PPN은 꿀벌에 작용 시작할 수있는 시간을 나타냅니다. 블랙 별표 제어 (0 PPM)에 비해 통계적 유의성을 보여줍니다. 레드 별표 10과 100 ppm의 사이에 통계적 유의성을 보여; (E)는 100ppm PPN 시럽 처리 꿀벌 콜로니 캡핑 세포, 아마 변형 번데기 블랙 변형 번데기를 보였다. 이는 엘스 비어 (16)로부터 허가를 재현 할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| PPN-BLD (PPM) | 애벌레 번호 | 애벌레 개발 | ||
| 모자를 씌운 비율 (%) | 우화 율 (%) | 잘못된 날개 (%) | ||
| (100) | (140) | 0B | 0B | - |
| (10) | 139 | 22.2 ± 33.2b | 0B | - |
| 1 | (140) | 72.3 ± 17.9a | 67.7 ± 17.6a | 7.7 ± 5.7a |
| 0.1 | (136) | 78.3 ± 17.5A | 75.4 ± 22.8a | 1.4 ± 2.8b |
| 0 | (138) | 78.9 ± 5.4a | 78.9 ± 5.4a | 0B |
| 비 공급 | (122) | 87.8 ± 9.1a | 86.1 ± 7.2a | 0.8 ± 1.5B |
표 1 : 1 일 된 유충에 PPN의 먹이를 계속 삼일의 효과. 각 애벌레 셀, BLD 10, 10, 20 μL를 각각 1 ~ 3 일에서 첨가 하였다. 각각의 분석은 식민지에서 25-38 유충을 포함, 4 개 식민지가 테스트되었습니다. 평균 ± SD가 제공됩니다. ANOVA는 유의 한 효과를 보였다 후 동일한 열의 다른 글자는 최소 제곱 차 시험 (P <0.05)에 의해 크게 다르다. 이는 엘스 비어 (16)로부터 허가를 재현 할 수 있습니다.
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Discussion
여왕 제한 알을 낳는 방법과 퀸 교환 방법은이 프로토콜 내에서 필드 테스트를 위해 꿀벌 그룹을 설정하기위한 중요한 단계이다. 여왕 제한 알을 낳는 방법은 꿀벌의 수명주기의 동기화를 가능하게한다. 그 결과, 연구진은 살충제의 서로 다른 용량으로 치료를 위해 같은 나이 1 일 된 유충을 선택할 수 있습니다. 퀸 교환 방법, 여왕이 부 A (4 개 프레임) 및 살충제 살충제 잔류 물의 영향을 평가하기위한 필드 테스트 꿀벌 상이한 발달 단계를 얻기 위해 B (5 개 프레임) 사이에서 교환 하였다. 또한, 선택된 브루 셀의 다수의 투명 표시를 위해 슬라이드를 사용하여 필드 테스트에 기록 하였다. 그러나 오버 누워 계란 가끔 산란 여왕에 대한 불충분 한 무리의 세포에서 발생합니다. 따라서, 빈 프레임의 제조는 퀸 교환법 요구된다. 또한, 여왕 제한 알을 낳는 방법은 또한에 사용될 수있다벌집에서 테스트를 위해 다른 꿀벌 그룹을 준비합니다. 파트 A의 2 프레임 부 (7 개) B의 프레임으로 프레임 분리 부 A (2 개 프레임)의 퀸의 위치는 2 프레임 내에 배치 여왕 계란을 제한 할 수있다.
생체 공급 방법, PPN-BLD 각 브루 셀에 첨가 하였다. 꿀 꿀벌 시럽 16, 20 BLD보다 높은 승인을 나타내었다. 꿀 꿀벌 유충은 생존과 로얄 젤리, 설탕, 효모 추출물, 증류수 (22), (23)로 구성된 인공 다이어트 증가 할 수 있습니다. BLD의 포도당과 과당 성분은 생체 외 (21)의 유충의 생존율에 영향을 미치지 않았고, 따라서 BLD는 벌집에서 꿀 꿀벌 성장보다 안정 될 것입니다. 특히,도시 일벌 '애벌레 배제를 막을 수 공급을위한 신선한 BLD의 사용애벌레 먹이 실험. 또한, 공급 과정에서, 부드러운 공급은 초기에 일일 된 유충의 죽음을 방지하기 위해 필요합니다.
현장 시험 동안에 화학적 의한 간호 꿀벌의 후각 높은 감도 벌집 때때로 발생 유충에서 제외 BLD 오염. 설탕 조성물은 상당히 평균 애벌레 생존, 사전 번데기 애벌레 무게, 성인 무게, 그리고 ovariole 번호 (21)에 영향을 미친다. 시럽은 형질 전환 꽃가루 나 꿀 꿀벌 유충에 긍정적 인 제어 살충제 디아 지논을 제공하는 데 사용 된 경우, 근로자는 추가되거나 오염 된 음식 (21)를 포함하는 무리 세포에서 몇 유충을 제거했습니다. 따라서, 당 조성물을 주목해야한다. 일일 된 유충의 수를 증가 또는 또한 문제를 개선 할 수있는 테스트 개별 브루 셀 사이트를 분산. 실제로, PPN-BLD 처리 공정의 관찰과의 극적인 용량 의존적 영향에 따라PPN-BLD는 꿀벌의 개발에, 우리는 간호사가 무리 세포에 인위적으로 추가 BLD를 제거하지 않았다고 가정한다. melanization 및 번데기 24, 25, 26을 조절 phenoloxidase 증가 활성에 의한 가능성이 번데기 PPN 원인 melanization, 저농도. 각 종족 셀에 대한 인공 수유 방법의 사용을 기반으로, 꿀벌의 발전에 PPN-BLD의 극적인 영향은 부화의 첫 번째 날부터 PPN과 직접 접촉에 의한 수 있습니다.
공급 실험에 사용 된 화학 물질 노출량은 꿀벌 하이브에서 수집 된 신선한 꽃가루 샘플에서 농약 잔류에 대한 설문 조사 데이터를 기반으로 설계 할 수있다. 자연 환경에서 식민지의 농약 오염의 다양한 경로가있다. 화학 오염 물질로 인해 공급 MOT에 꿀벌의 식민지로 다시 가져 와서 유충에 의해 섭취 할 수작업자 꿀벌의 이온은, 결국 유충의 개발에 영향을 미치는. 벌집의 식민지 수준에서 PPN의 영향을 평가하기 위해, 시럽은 꿀벌이 화학 물질을 소비하는 것을 보장하기 위해 가장 빠르고 직접적인 방법으로이 연구에서 공급하는 대신 꽃가루를 사용 하였다. 꽃가루의 함량 조절 (예를 들어, 병원균 또는 농약 오염)하기 어려운 반면, 또한, 시럽 상태가 정의 될 수있다.
꿀 꿀벌 식민지에서 꿀벌의 현장 조건, 다른 발달 단계 (계란, 애벌레, 번데기 및 성인 꿀벌)에서 동일한 환경 요인을 겪고 있습니다. 우리의 실험 설정에서, 자연 조건은 역동적 인 환경에서 꿀벌의 개발 단계에있는 화학 물질의 영향을 평가하기 위해 시뮬레이션했다. 따라서, PPN 처리 (십삼일) 후, 우리는 1 군에서 uninfluenced 상한 속도를 관찰 할 수있는 다른 8 개 그룹의 영향을 상한 속도와 영향을 애벌레 단계이러한 조건 등 그룹 2와 3에들, 식민지 내에서 진정한 효과와 전체 식민지 화학 물질의 분산의 경로는 명확하다.
PPN 시럽 처리 꿀벌 콜로니 캡핑 세포 콜로니로부터 번데기 제거의 변형을 나타내었다. 또한, 번데기 광범위 melanization는 100 ppm의 PPN 처리에서 관찰되었다. 따라서, PPN-시럽 공급 법을 관찰 할 수있는 벌집 꿀벌의 라이프 사이클에 화학 물질의 동적 충격시켰다. 이 연구에서, 작업자 및 간호 꿀벌에 의해 흡수 시럽은 아마 여왕과 유충에 공급 하였다. 확인을 위해, 미래 연구는 또한 화학적 오염 벌통의 역학 연구를 촉진하기 위하여 화학 - 함유 시럽 (예 : 식용 색소 등) 화학 마커를 사용한다.
간호사 꿀벌의 음식 소스는 초지 또는 공급되는 벌집과 유충 하악과 hypopharyng에 와야한다간호사 꿀벌 21, 25, 26, 27, 28에 의해 제조 EAL 샘 분비. 유충은 간호사 꿀벌에 의해 공급 될 때, 턱에 하인두암 선에 의해 생성 된 분비물은 PPN-시럽을 희석 할 수있다. 이 생물 희석 효과가 더 밀접하게 자연 조건과 유사하지만, 생체 내 공급 방법에 서로 다른 결과를 설명합니다. 다른 농약, 중금속 및 꿀벌 병원균을 포함하여 여러 가지 재료 평가 및 꿀벌 집단의 역할을 주소이 공급 방법에 적용 할 수있다.
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Disclosures
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없음을 선언합니다.
Acknowledgments
이 연구는 부여 105AS-13.2.3-BQ-B1 교육부에서 동물의 국과 식물 건강 검사 및 검역, 농업위원회, 집행 위안 그랜트 103-2313-B-197-002-MY3에서에 의해 지원되었다 과학 기술 (MOST)의.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Honey bee box | SAN-YI Honey Factory | W1266 | Honeybees rearing |
| Queen excluder (between frames) | SAN-YI Honey Factory | I1575 | Queen limitation |
| Queen excluder (on top) | SAN-YI Honey Factory | I1566 | Queen limitation on top |
| Bee brush | SAN-YI Honey Factory, Taiwan | W1414 | clean the bees on frame gently |
| Bee feeder | SAN-YI Honey Factory, Taiwan | P0219 | feed sugar syrup to colony |
| Transparent slide | Wan-Shih-Chei, Taiwan (http://www.mbsc.com.tw/a01goods.asp?s_id=40) | 1139 | Mark the larval area on the frames (Material: Polyethylene Terephthalate, PET) (Size = Length*Width*thick = 29.7 mm * 21 mm * 0.1 mm) |
| 24 well tissu culture plate | Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd | TCP011024 | Rearing pupae from extraction |
| Autoclave | Tomin medical equipmenco., LTD. | TM-321 | Make sterilized distilled deionized water (ddH2O) |
| P20 pipetman | Gilson | F123600 | Add PPN into bee larval food pool |
| Incubator | Yihder Co., Ltd. | LE-550RD | Rearing pupae from extraction |
| Kimwipes | COW LUNG INSTRUMENT CO., LTD | KCS34155 | Rearing pupae from extraction |
| Royal jelly | National Ilan University (NIU) | NIU | Make basic larval diet (BLD) |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G8270 | Make basic larval diet (BLD) |
| D-(-)-Fructose | Sigma | F0127 | Make basic larval diet (BLD) |
| Yeast extract | CONDA, pronadisa | 1702 | Make basic larval diet (BLD) |
| Sucrose | Taiwan sugar coporation | E01071010 | Make sugar syrup for bee food |
| Pyriproxyfen (11%) | LIH-NUNG CHEMICAL CO.. LTD. | Registration No. 1937 | Insect growth regulator (IGR) used in the experiment |
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