Summary
Questo manoscritto fornisce una procedura chirurgica in due passaggi dettagliati per eseguire nefrectomia parzialeth da mouse 5/6 (PNx) con legatura di palo. Quattro settimane dopo la chirurgia, in confronto ai topi falsità-azionati, i topi di PNx sviluppato fibrosi cardiaca, insufficienza renale, l'anemia, ipertrofia cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore.
Abstract
Malattia renale cronica (CKD) è un grande fattore di rischio per eventi cardiovascolari e mortalità e progressivamente si sviluppa al fenotipo clinico chiamato "cardiomiopatia uremica". Descriviamo qui un modello sperimentale di topo CKD, denominato 5/6th il nephrectomy parziale (PNx) con legatura di palo, che ha sviluppato la cardiomiopatia uremica alla post-chirurgia quattro settimane. Questo modello di PNx è stato effettuato da un intervento chirurgico in due fasi. In chirurgia passo-uno, entrambi i poli del rene di sinistra erano legati. Nella chirurgia di passaggio-due, che è stata effettuata 7 giorni dopo l'intervento di passo-uno, è stato rimosso il rene di destra. Per la chirurgia di falsità, le stesse procedure di chirurgia sono state effettuate ma senza poli legatura del rene di sinistra o alla rimozione del rene di destra. Le procedure chirurgiche sono più facili e meno dispendio di tempo, rispetto ad altri metodi. Tuttavia, il residuo massa renale funzionale non è controllata come facilmente come la legatura dell'arteria renale. Quattro settimane dopo la chirurgia, in confronto ai topi falsità-azionati, i topi di PNx sviluppato fibrosi cardiaca, insufficienza renale, l'anemia, ipertrofia cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore.
Introduction
CKD, noto anche come insufficienza renale cronica, è una perdita progressiva della funzione del rene nel tempo che si sviluppa poi in insufficienza renale permanente. CKD, dagli Stati di malattia renale fase precoce di malattia renale di stadio finale (ESRD), è un grande fattore di rischio per eventi cardiovascolari e mortalità e progressivamente si sviluppa al fenotipo clinico chiamato "cardiomiopatia uremica"1, 2,3. La cardiomiopatia uremica nei pazienti con CKD o ESRD è associata con le anomalie cardiovascolari, principalmente causate da sovraccarico di pressione ventricolare di sinistra (LV) e/o volume, portando a ipertrofia (LVH), la dilatazione di LV e la disfunzione sistolica LV4 ,5,6. Fibrosi cardiaca è un altro processo patologico comune di cardiomiopatia uremica che riduce la compliance cardiaca conseguente disfunzione diastolica di LV. La fibrosi cardiaca severa può portare alla morte cardiaca improvvisa, anche in quelli senza sintomi cardiaci7.
Il 5/6th PNx è un modello animale di CKD comunemente utilizzato per gli studi sugli animali che coinvolgono l'indebolimento renale, cardiomiopatia uremica e ipertensione. PNx è raggiunto tramite ablazione del parenchima renale 5/6. Modello del ratto è stato inizialmente sviluppato con i due più comuni protocolli impiegati essendo la resezione chirurgica o infarto. Il modello di PNx ratto è un modello estremamente utile per studiare la cardiomiopatia uremica con sostanziali aumenti nella pressione sanguigna, l'ipertrofia cardiaca e alterata funzione diastolica. Più tardi, i modelli murini di PNx, operati con le tecniche simili come modello del ratto, sono stati sviluppati grazie alla vasta disponibilità e facilità di effettuare manipolazioni genetiche del sistema del mouse.
È ben documentato che lo stress ossidativo sistemico è una caratteristica costante di entrambi cardiomiopatia uremica clinica e sperimentale8,9. Inoltre, lo sforzo dell'ossidante contribuisce alla sindrome uremica10e svolge un ruolo critico nella patogenesi delle anomalie cardiache visto in cardiomiopatia uremica11,12,13. A questo punto, abbiamo dimostrato che il roditore 5/6th PNx modello causa le caratteristiche fisiologiche, morfologiche e biochimiche di cardiomiopatia uremica14,15,16, 17. nel modello del topo di PNx descritto qui, topi PNx-azionati sviluppato forte stress ossidativo, almeno parzialmente mediato di Na/K-ATPasi funzione, che è fondamentale in cardiomiopatia uremica sperimentale PNx-mediata di segnalazione. Attenuazione di Na/K-atpasi di segnalazione non solo riduce l'amplificazione ossidativo, ma migliora anche le modifiche fenotipiche in cardiomiopatia uremica sperimentale PNx-mediata18.
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Protocol
tutti cura degli animali e gli esperimenti sono stati approvati dalla Marshall University istituzionali cura degli animali e uso Committee (IACUC) in conformità con la guida del National Institutes of Health (NIH) per la cura e l'uso di animali da laboratorio. I topi maschii C57BL/6 (10-12 settimane) sono stati alloggiati in una struttura animale libero agente patogeno in determinate stanze dotate di gabbie che forniscono aria purificata sotto un ciclo luce/buio di 12 h. Il cibo e l'acqua era fornito ad libitum.
1. preparazione all'intervento
Nota: I materiali e gli strumenti chirurgici sono ottenuti da diverse fonti che non sono specifici per gli interventi di chirurgia. Strumenti e materiali da altre fonti possono essere utilizzati anche per lo stesso scopo. Vedi la Tabella materiali per un elenco di strumenti chirurgici.
Tabella- preparazione per la chirurgia
- posto di seguito alla portata di funzionamento: riscaldamento pad, lampada alogena, bombola di ossigeno e isoflurano serbatoio, vaporizzatore isoflurano, tagliatore di capelli, crema depilatoria, bilance, sterilizzati funzionamento insieme, lino chirurgico sterilizzato, tamponi di cotone, alcool al 70%, soluzione polyhydroxydine (contenente 1% di iodio), soluzione di NaCl 0,9%, 1 mL siringhe ed aghi (30 G), punti di sutura seta 3-0 e 4-0, buprenorfina e penicillina, pomata antibiotica, e unguento oculare lubrificante.
- Pulire una gabbia e posizionare una piastra di calore sotto la biancheria da letto per topi alloggiamento dopo chirurgia.
2. Chirurgia passo-uno: palo legatura del rene di sinistra
Nota: mantenere condizioni sterili durante l'intervento chirurgico. Coprire gli strumenti chirurgici sterilizzati nell'autoclave con un tampone sterile. Tenere più di un set di strumenti chirurgici in mano per più di un intervento chirurgico per evitare la contaminazione incrociata durante l'intervento chirurgico. Se gli strumenti devono essere utilizzati nuovamente, nel caso di interventi chirurgici multipli, disinfettare gli strumenti con soluzione di betadine ed etanolo al 70% e quindi sterilizzare in uno sterilizzatore di perlina di vetro germinator per 5 min, disinfetta l'area operativa con etanolo al 70%. Indossare un abito, maschera (per coprire naso e bocca), PAC (per coprire la testa) e un paio di guanti sterili. Cambiare i guanti dopo ogni intervento chirurgico.
- Lavare e disinfettare le mani e indossare guanti chirurgici sterili. Indossare un berretto in testa e una maschera.
- Disinfettare la tabella con alcool al 70%. Applicare l'unguento oculare lubrificante in entrambi gli occhi del mouse per prevenire la secchezza dell'occhio mentre sotto anestesia.
- Posizionare il mouse in una camera d'induzione di un sistema di vaporizzatore isoflurano e inducono anestesia con una miscela di 2,5% isoflurane con ossigeno al 100% (0,8 - 1,2 L/min) per un minimo di 1-2
Nota: L'efficacia dell'anestesia è stato determinato dall'assenza del riflesso di dolore suscitato pizzicando la coda, così come dall'assenza del riflesso palpebrale toccando la palpebra. - Iniettare penicillina (40.000 unità/kg di peso corporeo, IM) e buprenorfina (0,02 mg/kg peso corporeo, SC) per prevenire l'infezione e dolore durante l'intervento chirurgico.
- Posizionare il mouse su un tappetino riscaldante (inizialmente fissato a 42 ° C) con un termometro rettale per mantenere e monitorare la temperatura corporea intorno ai 37 ° C durante la procedura. Posizionare il mouse naso nel cono di naso e ventilare con una miscela di 0.8-1.2% isoflurane con ossigeno 100% (0,8-1,2 L/min) durante l'intervento chirurgico.
- Posizionare il mouse sul lato destro. Radersi i capelli del campo operatorio con un tagliatore di capelli e poi rimuovere con la crema depilatoria. Disinfettare il sito con soluzione polyhydroxydine (contenente 1% di iodio), seguito da etanolo al 70%. Allineare la biancheria in autoclave chirurgico sulla zona chirurgica.
- Fare un'incisione lombare di cm ~1.0 e separare il muscolo e la fascia per esporre il rene di sinistra utilizzando il bisturi e pinze ( Figura 1a).
- Estrarre il rene di sinistra molto delicatamente, tirando il grasso perirenale con piccolo forcipe smussato. Nel processo, in modo da non disturbare la ghiandola surrenale, spostare la ghiandola surrenale verso l'alto dal rene con forcipe.
- Using forcipe smussato, stuzzicare delicatamente il tessuto connettivo e la ghiandola surrenale dall'estremità superiore del rene verso il piloro centrale del rene dove vasi sanguigni entrare ed uscire. Identificare e isolare l'uretere.
Nota: L'uretere si trova intorno alla metà inferiore del rene incorporato nel tessuto connettivo e chiaramente visibile sotto la luce. - Delicatamente afferrare il tessuto connettivo e separata dal tessuto renale per garantire che l'uretere non è legato.
- Prima polar legature, utilizzare un righello sterile per identificare la parte superiore ed inferiore di 1/3 del rene. Il rene del topo è solitamente intorno 1.25-1.5 cm long.
- Legano usando una seta 3-0 suturare stringa e con adeguata forza, circa 0,4 cm dalla parte superiore verso la metà del piloro e allo stesso modo, 0,4 cm dalla parte inferiore verso il piloro ( Figura 1a, punteggiato linee).
- Dopo legatura entrambi i poli ( Figura 1b), consentire un periodo di osservazione di 2 min per assicurarsi che non esiste nessun sanguinamento.
Nota: Nel processo, è molto importante evitare la legatura del surrene, dell'arteria renale e dell'uretere. Se è legato l'uretere di sinistra, il mouse morirà dopo la rimozione del rene di destra nella chirurgia passo-due. La forza di legatura può limitare il flusso di sangue ai poli senza causare sanguinamento intra-renale. Entro 1-2 min dopo la legatura, i polacchi sono scoloriti a causa del limite di flusso sanguigno ai poli. - Spingere indietro il rene di sinistra al posto originale. Chiudere il muscolo e la pelle con stringhe di sutura seta 4-0 e 3-0, rispettivamente. Applicare pomata antibiotica per l'area chirurgica per una migliore ripresa e disinfezione.
- Dopo la legatura, casa del mouse separatamente in una gabbia con una lampada di calore sopra la gabbia affinché la zona di biancheria da letto è vicino a 37 ° C (controllato con un termometro), prima di mettere gli animali in gabbie individuali.
Nota: Controllare il mouse fino a quando ha riacquistato coscienza sufficiente per mantenere decubito sternale. - Consentire un facile accesso all'acqua e cibo durante il recupero. Amministrare la penicillina e buprenorfina ogni 12 h per il primo post-ambulatorio 3 giorni prevenire l'infezione e dolore.
Nota: Il mouse dovrebbe recuperare dal trauma dell'intervento chirurgico entro 2-3 giorni e dovrebbe essere tornato alla normale mangiare, bere e in movimento. In questo momento, casa del mouse individualmente per il pieno recupero. Devono essere monitorati i seguenti: bere, mangiare, camminare modelli, andatura goffa, gobba, scarico oculare e/o nasale e comportamento aggressivo. Eutanasia il mouse se Mostra segni di grippaggio, coma, infezione incurabile, difficoltà a camminare, perdita di andatura, in grado di mangiare e bere e perdita di più di 15% pre-operazione peso.
3. Passaggio-due chirurgia: rimozione del rene di destra
- sette giorni più tardi, esporre il rene di destra come descritto per il rene di sinistra nei passaggi 2.1 a 2.10, tranne posizionare il mouse sul suo lato sinistro.
- Inserire il rene di destra sulla biancheria e deselezionare circostante grasso e tessuto connettivo con forcipe smussato.
- Identificare l'arteria renale e la vena e quindi posizionare due legature (seta 3-0) ciascuna con un singolo nodo sciolto intorno ai vasi. Delicatamente prendere in giro il tessuto connettivo e surrenale ghiandola dall'estremità superiore del rene verso il piloro centrale del rene usando il forcipe smussato. Delicatamente spostare l'uretere dall'estremità inferiore e legare tutti i vasi insieme (seta 3-0) senza provocare sanguinamento.
- Spostare i due nodi di legatura sciolti lungo i vasi. Uno verso il lato dell'aorta addominale e l'altra verso il lato del rene.
- Prima legare il nodo di legatura (verso il lato dell'aorta addominale) con doppi nodi; un solido nodo cambierà il colore del rene di destra. Legare il nodo di legatura (verso il lato del rene) con doppi nodi. Lasciare spazio sufficiente tra questi due doppi nodi in modo da tagliare i vasi tra i due nodi senza tagliare i nodi legature.
- Tagliare i vasi renali tra i due nodi e rimuovere il rene di destra. Controllare i possibili emorragie dei vasi renali.
- Asciugare il rene di destra con garza sterile e pesare it.
- Chiudere l'incisione del muscolo con stringa di sutura seta 4-0 e quindi chiudere l'incisione cutanea con stringa di sutura seta 3-0.
- Casa del mouse separatamente in una gabbia pulita solitario con una lampada di calore sopra la gabbia (punto 2.15) con facile accesso all'acqua e cibo per almeno 24 h di recupero. Amministrare la penicillina e buprenorfina ogni 12 h per 3 giorni per prevenire l'infezione e dolore.
Nota: Il mouse dovrebbe recuperare dal trauma dell'intervento chirurgico entro 2-3 giorni e dovrebbe essere tornato alla normale mangiare, bere e in movimento. - Dopo la chirurgia, monitorare i topi due volte al giorno per tre giorni e poi una volta al giorno per tutta la durata dell'esperimento. Seguire le procedure di monitoraggio e trattamento post-chirurgiche descritte nel passaggio 2.16.
4. Sham chirurgia
- per la chirurgia di sham, eseguire le stesse procedure di chirurgia, compresa l'esposizione del rene, la dissezione del tessuto e la chiusura della ferita, ma senza la legatura di palo del rene di sinistra o la rimozione del rene di destra.
5. valutazione della cardiomiopatia uremica sperimentale
- un giorno prima del sacrificio, eseguire un ecocardiogramma transtoracico e catturare immagini 18.
Nota: Qui, l'ecocardiografia transtoracica è stata effettuata con un termometro rettale e tabella di gestione del mouse. Le immagini ecocardiografiche sono state acquisite utilizzando un 18-38 MHz trasduttore di frequenza di funzionamento collegato a un sistema di imaging. Spessore della parete relativa (RWT), indice di performance miocardica (MPI) e indice di massa ventricolo sinistro (orientamento) sono stati calcolati come descritto 18. - Al momento del sacrificio, misurare il peso del corpo. Misurare l'ematocrito (HCT) con una centrifuga HCT secondo produttore ' s istruzioni. Preparare i campioni di plasma utilizzando provette sensibilizzate con eparina mediante centrifugazione i campioni di sangue per 10 min a 1.500 x g a 4 ° C in una centrifuga refrigerata da tavolo. Misurare la cistatina C, creatinina e BUN utilizzando kit seguendo il produttore ' s istruzioni. Eseguire le misurazioni in duplicato.
- Alla fine dell'esperimento, anestetizzare i topi con ketamina (90 mg/kg, IP) e xylaxine (10 mg/kg, IP) e sacrificio dal thoracotomy. Misurare il peso del cuore dopo averlo tolto dal petto. Preparare cardiaco (LV) e degli omogeneati del rene, come pure la determinazione di collagene di tipo 1 (COL-1), la fosforilazione di c-Src e proteina carbonilazione, come descritto prima 18 , 19.
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Representative Results
I dati hanno indicato che questo modificato 5/6th PNx tramite la legatura di palo è un modello semplice ed efficace per studiare la cardiomiopatia uremica. Alla quattro settimane post-chirurgia, questo PNx modello presenta alterata funzione renale, l'anemia, l'ipertrofia cardiaca, fibrosi cardiaca e ridotta funzione sistolica e diastolica del cuore. I risultati sono riassunti qui di seguito.
Alla post-chirurgia quattro settimane, i topi di PNx sviluppato insufficienza renale oltre a cambiamenti morfologici e biochimici cardiaci che sono coerenti con il fenotipo di cardiomiopatia uremica umano. Queste modifiche PNx-mediata includono le seguenti osservazioni rispetto ai topi falsità-azionati. In primo luogo, come previsto, l'ambulatorio di PNx causati significativa compromissione della funzione renale. Come mostrato nella Figura 2, l'ambulatorio di PNx ha aumentato significativamente i livelli del plasma di Cystatin C (Figura 2a, n = 16), creatinina (Figura 2b, n = 16), BUN (Figura 2c, n = 16), rispetto alla sham chirurgia. In secondo luogo, c'era l'anemia PNx-stimolata testimoniano l'HCT significativamente più basso nei topi PNx (Figura 2d, n = 8). In terzo luogo, l'ipertrofia cardiaca PNx-mediata e la disfunzione diastolica sono stati dimostrati da un cuore aumentato peso/rapporto del peso corporeo (Figura 3a) e l'analisi di ecocardiografia transtoracica (ECHO) mostrando la significativa spessore (AWT), RWT (Figura 3b), MPI (Figura 3c) e orientamento (Figura 3d) aumento nello spessore della parete posteriore (PWT), anteriore della parete. Non c'era cambiamento significativo della frazione di eiezione (EF, %). In quarto luogo, la fibrosi cardiaca PNx-mediata è stata dimostrata da PNx-indotta aumenta in tipo sono espressione del collagene in omogeneati del LV (Figura 4a) e lasciato residuo omogeneati del rene (Figura 4b). In quinto luogo, lo sforzo dell'ossidante svolge un ruolo importante nella cardiomiopatia uremica sperimentale. In questo modello di PNx, PNx stimolato significativamente modifica di carbonilazione di diretto della proteina di più proteine (Figura 4c) e l'attivazione di c-Src (Figura 4d) in omogeneati LV. Chirurgia di PNx non ha causato perdita significativa del peso corporeo alla post-chirurgia quattro settimane. Tuttavia, il modello di PNx dal metodo di legatura di palo non ha indotto l'ipertensione. Non c'era differenza significativa tra farsa e PNx topi in BP sistolica, diastolica e media BP (dati non mostrati) misurati ad un giorno prima dell'intervento di passo-uno e a un giorno prima del sacrificio, che è coerenza con la nozione che il ceppo di topo C57BL/6 è non un iperteso stabilito modello20,21. I dati inoltre suggeriscono che è improbabile che questo modello di PNx un modello di indebolimento renale acuto. Inoltre, i cambiamenti cardiaci PNx-mediata, ma non alterata funzione renale, sono stati attenuati dal blocco dell'attivazione di c-Src o induzione di eme ossigenasi-1 (HO-1)18.
Figura 1 : Legatura di palo del rene di sinistra. Le foto mostravano rene sinistro prima legatura (a sinistra) e dopo (a destra) la legatura. Le linee tratteggiate nell'immagine di sinistra ha mostrato le linee di legatura stimato. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2 : PNx con legatura di palo causata alterata funzione renale e l'anemia. Alla post-chirurgia quattro settimane, l'ambulatorio di PNx aumenta significativamente i livelli del plasma di (un) Cystatin C (n = 16), creatinina (b) (n = 16), (c) BUN (n = 16), rispetto alla chirurgia di sham. PNx anche significativamente ridotto (d) l'ematocrito (HCT) nei topi di PNx (n = 8). I dati sono stati espressi come media ± SEM. * *, p < 0,01, topi falsità-azionati vs topi PNx-azionati. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3 : PNx con legatura di palo ha stimolato l'ipertrofia cardiaca. Alla post-chirurgia quattro settimane, l'ambulatorio di PNx aumenta significativamente (un) cuore/rapporto peso peso corporeo (una, n = 8), (b) spessore relativo (RWT, n = 1 9-21), (c) indice di performance miocardica (MPI, n = 19-21), e Indice di massa ventricolo sinistro (d) (orientamento, n = 19-21). I dati sono stati espressi come media ± SEM. * *, p < 0,01, topi falsità-azionati vs topi PNx-azionati. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4 : Tipo di PNx con palo legatura stimolata I espressione del collagene, attivazione della proteina carbonilazione e c-Src. Alla post-chirurgia quattro settimane, il PNx stimolato tipo espressione del collagene in omogeneati del ventricolo sinistro (LV) (a, n = 11) e sinistra degli omogeneati del rene residuo (b, n = 7-10). Anche in omogenati di LV, il PNx stimolato carbonylation della proteina diretto (c, n = 6) e l'attivazione di c-Src (d, n = 6). I dati sono stati espressi come media ± SEM. * *, p < 0,01, topi falsità-azionati vs topi PNx-azionati. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Il ratto 5/6th PNx modello è stato ampiamente utilizzato per lo studio di CKD. A causa della dimensione molto più piccola del rene nel topo, la legatura dell'arteria classica e la resezione di palo sono molto impegnativi in modelli murini con possibili alti tassi di mortalità e la perdita di sangue sanguinamento inaspettato.
Abbiamo adottato un modello di topo PNx con legatura di palo per superare la perdita di sangue/sangue. Questo modello di PNx richiede meno tempo con il tasso di sopravvivenza migliore e un'elevata riproducibilità. Questo modello di legatura di palo sviluppa i cambiamenti fenotipici di cardiomiopatia uremica umana al momento della post-chirurgia quattro settimane e quindi fornisce un modello per studiare i suoi meccanismi e target terapeutico.
In questo modello di PNx, il 5/6th PNx è una stima approssimativa della riduzione della massa renale dal, e fino ad ora, non esiste un metodo per calcolare esattamente la massa renale residuo dei due reni che hanno diverse dimensioni/masse. Tuttavia, la legatura deve essere eseguita in modo molto simile a ridurre le variazioni di funzionamento. Stimiamo che mantenere circa il 40% del rene di sinistra (o circa il 20% della massa totale renale) possono diminuire significativamente il tasso di mortalità (di circa il 20%) senza sacrificare lo sviluppo del fenotipo cardiomiopatia uremica. Un altro problema è la forza della legatura che richiede pratica.
In confronto il 5/6th PNx modelli di palo resezione o la legatura dell'arteria renale15,20, il metodo di legatura di palo è facile, veloce e meno strumentalmente esigenti. I possibili vantaggi di questo modello di PNx includono i seguenti: 1) assenza di sangue possibile sanguinamento come visto nel modello PNx da palo resezione o la legatura dell'arteria, 2) la funzione renale alterata con aumento nello sforzo ossidativo causato dalla risposta ad infiammazione la legatura di palo, 3) ridurre il tasso di mortalità (circa il 20%) e le 4) rapido sviluppo del fenotipo di cardiomiopatia uremica. Una legatura di successo pole Mostra un progressivo danno irreversibile e degradazione dei pali legati. I polacchi legati sono visibili alla post-chirurgia due settimane (Figura 4) e per lo più scompaiono alla post-chirurgia quattro settimane (Figura 5). Confronto dei pali legati in due settimane e quattro settimane dopo l'intervento, indica la reazione di infiammazione risponde per la legatura di palo.
Questo modello di PNx può essere utile per studiare i meccanismi di azione dei farmaci e droghe terapeutiche. Abbiamo recentemente utilizzare questo modello di PNx per indagare il ruolo dello stress ossidativo e segnalazione del Na/K-ATPasi nello sviluppo di cardiomiopatia uremica. Somministrazione di pNaKtide, un antagonista specifico della segnalazione di Na/K-ATPasi, non solo impedisce lo sviluppo di cardiomiopatia uremica ma anche inverte l'insorgenza di cardiomiopatia uremica18.
I passaggi critici all'interno del protocollo sono come segue: 1) una legatura più aggressiva (residuo lasciato la massa renale è inferiore al 30%) aumenterà in modo significativo il tasso di mortalità (circa il 50%). 2) la forza della legatura richiede pratica per raggiungere il punto che la legatura limita l'apporto di sangue ai poli senza rompere il tessuto del rene e della capsula. Rompere i fili di tessuto renale per spurgo intra-renale che può causare morte dopo la rimozione del rene di destra. Un successo legato palo è scolorito entro 1-2 min dopo la legatura, a causa del limite di flusso sanguigno al Polo. 3) particolare attenzione è necessaria per evitare legando l'uretere del rene sinistro o danneggiare l'uretere quando legando i poli. Un mouse con uretere legati o danneggiato non sopravviverà dopo la rimozione del rene di destra. Questo potrebbe essere lo svantaggio più evidente del metodo di legatura del palo. 4) mantenimento della temperatura corporea durante il processo di chirurgia e cura post-operatoria. 5) controllo dell'infezione possibile usando gli antibiotici.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla a rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato supportato da NIH R15 1R15DK106666-01A1 (a J. Liu) e NIH RO1 HL071556 (di J.I. Shapiro).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Iris Scissors, 11.5 cm, Straight | World Precision Instruments | 501758 | |
| WPI Swiss Tweezers #5 11 cm, 0.1x0.06 mm Tips | World Precision Instruments | 504506 | |
| Jewelers #5 Forceps, 11cm, Straight, Titanium | World Precision Instruments | 555227F | |
| Iris Forceps, 10cm, Straight, Serrated | World Precision Instruments | 15914 | |
| Tweezers #3, 11cm, 0.2x0.4mm Tips | World Precision Instruments | 501976 | |
| Medesy Iris 4.5" Curved Scissors, Stainless Steel | Net23 | 3512 | www.Net32.com |
| Dr. Slick Iris Scissors; 3.5" | Avid Max | 220-1-965-IrisScsrs-P | www.Avid Max.com |
| Miltex Iris Scissors 4 1/8" Curved | 4mdmedical | V95-306 | www.4mdmedical.com |
| 5" Hemostat clap, curved jaw | PJTool | 4355 | www.pjtool.com |
| sklar Knapp Iris scissors, straight and sharp/blunt 4" | Medical Device depot | 64-3430 | www.medicaldevicedepot.com |
| Kelly Hemostatic Forceps straight 5.5" | Pilgtimmedical | FA710-50 | www.pilgtimmedical.com |
| C57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals Inc. | ||
| Mouse Handling Table and rectal thermometer | Visualsonics | ||
| MicroScan transducer | Vevo 1100 | MS400 | |
| Vevo 1100 Imaging System | FUJIFILM VisualSonics Inc. | ||
| Cystatin C ELISA kit and mouse creatinine kit | Crystal Chem. Inc. | ||
| Mouse BUN ELISA kit | MyBioSource Inc |
References
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