Summary
이 원고 마우스 5/6일 부분 신 (PNx) 극 결 찰과 수행에 상세한 2 단계 수술 절차를 제공 합니다. 수술 후 4 주 운영 하는 가짜 쥐에 비해 PNx 마우스 개발 장애 신장 기능, 빈 혈, 심장 비 대, 심장 섬유 증, 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소.
Abstract
만성 신장 병 (CKD) 심혈 관 질환 이벤트 및 사망률에 대 한 큰 위험 요소 이며 "신부전 심근" 라는 임상 표현 형에 점차적으로 발전 한다. 여기 극 결 찰, 수술 4 주 후에 신부전 심근 개발 5/6일 부분 신 (PNx) 라는 하는 실험적인 CKD 마우스 모델을 설명 합니다. 이 PNx 모델 2 단계 수술에 의해 수행 되었다. 단계 1 수술에서 왼쪽된 신장의 두 극 출혈 했다. 수행 단계 1 수술 후 7 일, 2 단계 수술에서 오른쪽 신장은 제거 되었다. 가짜 수술 같은 수술 절차 수행 하지만 없이 왼쪽된 신장 결 찰 또는 오른쪽 신장 제거 장 대. 수술 절차는 쉽고 보다 적게 시간이 걸리는 다른 방법에 비해. 그러나, 나머지 기능 신장 질량 신장 동맥 결 찰으로 쉽게 제어 되지 않습니다. 수술 후 4 주 운영 하는 가짜 쥐에 비해 PNx 마우스 개발 장애 신장 기능, 빈 혈, 심장 비 대, 심장 섬유 증, 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소.
Introduction
CKD, 일컬어 만성 신부전, 신장 기능의 진보적인 손실 결국 영구적인 신부전으로 발전 하는 시간이 끝났습니다. CKD, 끝 단계 신장 질병 (ESRD)을 초기 단계 신장 질병 상태에서 심혈 관 질환 이벤트 및 사망률에 대 한 큰 위험 요소 이며 점차적으로 "신부전 심근"1, 라는 임상 표현 형을 개발 2,3. CKD 또는 ESRD 환자에서 신부전 심근은 심장 혈관 이상, 주로 좌 심 실 (LV) 압력 및/또는 볼륨, LV 비 대 (LVH), LV 팽창 및 LV 수축 부전4의 오버 로드로 인 한 연관 ,,56. 심장 섬유 증 심장 준수 LV 확장기 부전 결과로 감소 신부전 심근의 또 다른 일반적인 병 적인 과정 이다. 심각한 심장 섬유 증은 그 없이 심장 증상7에 갑작스런 심장 죽음으로 이어질 수 있습니다.
5/6일 PNx은 신부전 심장 근육 병 증, 고혈압, 신부전을 포함 하는 동물 연구에 대 한 일반적으로 사용 되 CKD 동물 모델 이다. PNx 5/6 신장 실질의 제거에 의해 달성 된다. 쥐 모델 처음 개발한 두와 함께 가장 일반적인 프로토콜 외과 절제술 또는 경색 되 고 고용. 쥐 PNx 모델은 혈압, 심장 비 대 및 장애인된 diastolic 기능에 상당한 고도 함께 신부전 심근을 공부 하는 매우 유용한 모델. 나중에, 마우스 PNx 모델, 쥐 모델로 비슷한 기술로 운영 넓은 가용성 및 마우스 시스템에 유전자 조작의 용이성으로 인해 개발 되었다.
그것은 잘 문서화 된 조직의 산화 스트레스는 모두 임상 및 실험 신부전 심근8,9의 일정 기능입니다. 게다가, 산화 스트레스 신부전 증후군10에 기여 하 고 신부전 심근11,,1213에서 심장 종양의 병 인에 중요 한 역할을 한다. 이 시점에, 우리가 보여준 그 설치류 5/6일 PNx 모델 발생 생리, 형태학, 생화학 기능과 신부전 심근14,,1516, 의 17. 여기에 설명 된 마우스 PNx 모델에서 운영 하는 PNx 마우스 개발 중요 한 산화 스트레스, Na/K-ATPase 함수를 PNx 중재 실험 신부전 심근에 중요 한 신호에 의해 적어도 부분적으로 중재. Na/K-ATPase 신호 감쇠 뿐만 아니라 산화 증폭 줄어들지만 또한 PNx 중재 실험 신부전 심근18phenotypical 변화를 살펴볼.
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Protocol
모든 동물 관리 및 실험 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 마샬 대학 제도 동물 보호와 사용 위원회 (IACUC) 국립 보건원 (NIH) 가이드에 의해 승인 했다. 남성 C57BL/6 마우스 (10-12 주 이전) 지정 객실 12 h 명암 주기에서 공기를 정화 제공 연습장을 갖추고 병원 체 무료 동물 시설에 보관 되어 있었다. 음식과 물 공급된 광고 libitum 했다.
1. 수술 준비
참고: 수술 도구와 재료 수술 작업에 특정 하지 않은 다른 소스에서 얻을 수 있습니다. 악기와 다른 소스 로부터 자료 또한 동일한 목적을 위해 사용할 수 있습니다. 수술 악기의 목록에 대 한 테이블의 자료를 참조 하십시오.
- 수술에 대 한 준비
- 장소 운영 곳 다음 테이블: 온난화 패드, 할로겐 램프, 산소 탱크 및 isoflurane 탱크, isoflurane 기화 기, 머리 깎기, 제 모 크림, 비늘, 살 균 세트, 소독된 외과 넨, 면봉, 70% 알코올, polyhydroxydine 솔루션 (1% 요오드 포함), 0.9 %NaCl 용액, 1 mL 주사기 및 바늘 (30 G), 3-0와 4-0 비단 봉합 buprenorphine, 페니실린, 항생제 연 고를 운영 하 고 윤 활 유 눈 연 고.
- 감 금 소를 청소 하 고 수술 후 주택 마우스 침구 아래 열 패드 배치.
2. 단계 1 수술: 극 결 찰의 왼쪽 신장
참고: 수술 동안 멸 균 상태를 유지. 압력가 마로 소독 외과 기구 살 균 패드와 함께 커버. 수술 동안 교차 오염을 방지 하기 위해 더 이상의 수술 외과 악기의 하나 이상의 세트를 손에 계속. 악기를 다시 사용 해야, 여러 수술의 경우 betadine 솔루션 및 70% 에탄올, 악기를 소독 하 고 5 분 소독 70% 에탄올과 운영 지역에 대 한 germinator 유리 구슬 소독 기에 소독. (커버 코 입)를, (헤드 커버)에 모자, 마스크, 가운을 착용 하 고 멸 균 장갑 한 켤레. 각 수술 후 장갑 변경.
- 세척 및 손 소독 및 멸 균 수술 장갑을 착용. 머리 모자와 마스크 착용.
- 테이블 70% 알코올로 소독. 마 취에서 눈 건조를 방지 하기 위해 마우스의 두 눈에 윤활제 눈 연 고를 적용.
- Isoflurane 기화 기 시스템의 유도 실에서 마우스를 배치 하 고 2.5% isoflurane 1-2 분에 대 한 100% 산소 (0.8-1.2 L/min)의 혼합물으로 마 취 유도
참고: 마 취의 효능 통증 반사 종을 반사의 부재에 의해 뿐만 아니라, 꼬리를 곤란 하 게 하 여 눈 꺼 풀을 만져 elicited의 부재에 의해 결정 되었다. - 페니실린 (40000 단위/kg 몸 무게, 임)과 buprenorphine (0.02 mg/kg 몸 무게, 사우스 캐롤라이나) 수술 중 통증과 감염을 방지 하기 위해 주입.
- 유지 절차 동안 체온 37 ° C의 주위를 감시 하는 직장 온도계로 지구 온난화 패드 (처음에 42 ° C에서 설정)에 마우스를 놓습니다. 마우스 코 코 콘으로 놓고 0.8-1.2의 혼합물으로 환기 % isoflurane 100% 산소 (0.8-1.2 L/min) 수술 하는 동안.
- 는 오른쪽에 마우스를 놓습니다. 머리 깎기로 외과 영역의 머리를 면도 하 고 제 모 크림으로 제거. 뒤에 70% 에탄올 (1% 요오드 포함) polyhydroxydine 솔루션 사이트를 소독. 외과 영역에 압력가 수술 린 넨 정렬.
- ~1.0 cm 허리 절 개를 하 고 근육과 근 노출 메스 집게 ( 그림 1a)를 사용 하 여 왼쪽된 신장 분리.
- 당겨 왼쪽된 신장 밖으로 아주 부드럽게 perirenal 지방에 작은 무뚝뚝한 집게와. 과정에서 부 신 샘을 방해 하기 위하여 이동 아드레날린 선 위쪽으로 신장에서 집게.
- 무딘 집게를 사용 하 여, 부드럽게 결합 조직과 신장 혈관에 입력 하 고 출구의 중간 pylorus 향해 신장의 우수한 끝에서 아드레날린 선 애타게. 식별 하 고 격리 ureter.
참고: 열 등 한 결합 조직에 포함 된 및 빛에서 명확 하 게 보이는 신장 절반 주위 ureter 거짓말. - 부드럽게 잡아 결합 조직 및 ureter 출혈 되지 보장 하기 위해 신장 조직에서 분리.
- 폴라 ligations 전에 신장의 뛰어난 및 하 부 1/3 부분을 식별 하는 메 마른 자를 사용. 마우스 신장은 일반적으로 1.25-1.5 cm 오래 주위
- Ligate 3-0 비단 봉합 문자열과 적절 한 힘을 사용 하 여, pylorus의 중앙으로 우수한 부분에서 약 0.4 c m와 마찬가지로, 0.4 cm pylorus ( 그림 1a, 점선으로 열 등 한 부분에서 라인).
- 두 극 ( 그림 1b) ligating, 후 아니 출혈은 되도록 2 분 관측 시간 허용.
참고:이 과정에서 매우 중요 하다 부 신, 신장 동맥, 및 ureter 결 찰을 피하기 위해. 왼쪽된 ureter 출혈 하는 경우 마우스의 2 단계 수술에서 오른쪽 신장 제거 후 죽을 것 이다. 결 찰 힘 내 신장 출혈을 유발 하지 않고 폴란드에 혈액 흐름을 제한할 수 있습니다. 결 찰 후 1-2 분 이내 폴란드는 폴란드에 혈액 흐름의 제한으로 인해 변색. - 밀어 왼쪽된 신장 다시 원래 장소. 근육과 피부를 4-0와 3-0 비단 봉합 문자열에 각각 닫습니다. 더 나은 복구 및 소독에 대 한 외과 영역에 항생제 연 고를 적용.
- 결 찰, 후 집에 별도로 마우스 열 램프와 감 금 소에는 침구 영역 (온도계와 모니터링), 37 ° C 가까이 개별 장에 동물을 배치 하기 전에.
참고: sternal recumbency를 유지 하기 위해 충분 한 의식 회복 될 때까지 마우스를 모니터. - 복구 하는 동안 물과 음식에 쉽게 액세스를 허용합니다. 페니실린과 buprenorphine 감염 및 고통을 방지 하기 위해 첫 3 일 후 수술에 대 한 모든 12 h.
참고: 마우스 2-3 일 이내 수술의 외상에서 회복 해야 하 고 다시 정상적인 식사, 음주와 이동 하는 것. 이 시간에서 전체 복구에 대 한 개별적으로 마우스를 집. 다음 모니터링 해야 합니다: 음주, 식사, 패턴, 어 색 한 걸음 걸이, 돌출, 눈 또는 비 강 방전 뒤로하고 공격적인 행동을 걸어. 발작, 혼 수 상태, untreatable 감염, 어려움 걷기, 걸음 걸이, 음식과 음료, 수 없습니다의 손실 및 15%의 손실의 어떤 표시 든 지 표시 하는 경우 마우스를 안락사 사전 작업 무게.
3. 단계 2 수술: 오른쪽 신장의 제거
- 7 일 후, 단계 2.1에 2.10, 마우스의 왼쪽된 측면에 배치를 제외 하 고 왼쪽된 신장에 대 한 설명 된 대로 오른쪽 신장 노출.
- 리넨에 오른쪽 신장 고 무딘 집게와 주변 지방과 결합 조직 취소.
- 신장 동맥과 정 맥, 식별 하 고 두 개의 합자 (3-0 실크) 각 단일 느슨한 매듭 혈관 주위 장소. 부드럽게 결합 조직과 부 신을 애타게 중간 pylorus 무딘 집게를 사용 하 여 신장으로 신장의 우수한 끝에서 선. 부드럽게 열 등 한 끝에서 ureter을 치환 하 고 모든 넥타이 혈관 함께 (3-0 실크) 출혈 발생 하지 않고.
- 혈관을 따라 두 개의 느슨한 묶인 매듭을 이동합니다. 복 부 대동맥 쪽을 향해과 다른 하나 하나 신장 쪽을 향해.
- 먼저 넥타이 (복 부 대동맥 측면)으로 묶인 매듭을 두 배 매듭, 단단한 매듭 오른쪽 신장의 색을 변경 합니다. 두 배 매듭 (신장 측)으로 묶인 매듭을 묶어. 합자 매듭을 절단 하지 않고 두 매듭 사이의 혈관을 잘라 수 있도록 이러한 두 개의 두 배 매듭 사이의 충분 한 공간을 두고.
- 두 매듭 사이의 신장 혈관 고 오른쪽 신장 제거. 가능 신장 혈관의 출혈에 대 한 확인 하십시오.
- 오른쪽 신장 멸 균 거 즈를 사용 하 여 건조 하 고 그것의 무게
- 4-0 비단 봉합 문자열 근육 절 개를 닫고 다음 3-0 비단 봉합 문자열 피부 절 개를 닫습니다.
- 복구에 적어도 24 시간을 위한 음식과 물에 쉽게 접근할 케이지 (단계 2.15) 동안 열 램프와 깨끗 한 독방에 별도로 마우스를 집. 페니실린과 buprenorphine 감염 및 고통을 방지 하기 위해 3 일에 대 한 모든 12 h.
참고: 마우스 2-3 일 이내 수술의 외상에서 회복 해야 하 고 다시 정상적인 식사, 음주와 이동 하는 것. - 수술 후 3 일, 그리고 하루에 실험의 기간에 대 한 다음 한 번에 대 한 마우스를 두 번 매일 모니터링. 수술 후 모니터링 및 치료 단계 2.16에서에서 설명한 절차에 따라.
4. 수술 가짜
- 가짜 수술에 대 한 노출의 신장, 조직, 그리고 상처 폐쇄, 하지만 왼쪽된 신장 극 결 찰 없이 해 부 또는 오른쪽 신장의 제거를 포함 하 여 동일한 수술 절차를 수행 합니다.
5. 실험적인 신부전 심근 평가의
- 희생 하기 전에 1 일 transthoracic 심장 초음파 검사를 수행 하 고 캡처 이미지 18.
참고: 여기, transthoracic 심장 초음파 처리 테이블 고 직장 온도계 마우스와 함께 수행 되었다. Echocardiographic 이미지 이미징 시스템에 연결 된 동작 주파수 변환기는 18-38 MHz를 사용 하 여 점령 했다. 우리가 18 설명한 상대 벽 두께 (RWT), 심근 성과 지표 (MPI), 그리고 좌 심 실 질량 지 수 (LVMI) 계산 했다. - 희생의 때에 몸 무게를 측정. 제조 업체에 따라 HCT 원심 분리기가 (HCT) 측정 ' s 지시. 4 ° c 탁상 냉장된 원심 분리기에서 1500 x g에서 10 분 동안 혈액 샘플 centrifuging 여 헤 파 린 코팅 된 튜브를 사용 하 여 플라즈마 샘플을 준비 합니다. Cystatin C, 크와 벤 다음 제조 업체 키트를 사용 하 여 측정 ' s 지시. 중복에는 측정을 수행.
- 실험의 끝에, anesthetize xylaxine (10 mg/kg, IP) 케 타 민 (90 mg/kg, IP)와 쥐와 thoracotomy 희생. 가슴에서 그것을 제거한 후 심장 무게를 측정 합니다. 18 , 19 전에 설명한 것 처럼 Type 1 콜라겐 (1 열), c-Src 및 단백질에서 인 산화의 결정 뿐만 아니라 심장 (LV) 및 신장 homogenates을 준비.
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Representative Results
데이터 표시이 수정 5/6일 극 결 찰에 의해 PNx 모델은 신부전 심근을 조사 하는 간단 하 고 효과적인 모델. 수술 4 주 후,이 PNx 모델 선물 심장 섬유 증, 심장 비 대, 빈 혈, 신장 기능 장애 및 심장 수축 기 및 diastolic 기능 감소. 결과 아래에 요약 된다.
수술 4 주 후, PNx 쥐 인간의 신부전 심근의 phenotype과 일치 심장 형태학 및 생화학 적인 변화 뿐만 아니라 장애인된 신장 기능 개발. 이러한 PNx 중재 변경 포함 운영 하는 가짜 쥐에 비해 다음과 같은 관찰이 됩니다. 첫째, 예상 했던 대로, PNx 수술 신장 기능의 중요 한 장애를 발생 합니다. 그림 2에서 같이, PNx 수술 크게 증가 Cystatin C의 플라즈마 수준 (그림 2는n = 16), 크 (그림 2b, n = 16), 롤빵 (그림 2c, n = 16), 가짜에 비해 수술입니다. 둘째, PNx 자극 빈 혈 PNx 마우스에 상당히 낮은 HCT에 의해 증명 했다 (그림 2d, n = 8). 셋째, 심장 비 대 PNx 중재 및 확장기 부전 증가 심장 무게/몸 무게 비율 (그림 3는), 그리고 상당한 보여주는 transthoracic 심장 초음파 (에코) 분석에 의해 설명 되었다 증가 후부 벽 두께 (PWT), 앞쪽에 벽 두께 (AWT), RWT (그림 3b), MPI그림 3(c), 그리고 LVMI (그림 3d). 방출 분수 (EF, %)의 더 큰 변화가 없었다. 넷째, PNx 중재 심장 섬유 증 입증 되었다에 의해 PNx 유발 증가 유형 나 LV homogenates (그림 4는)에 콜라겐 식 남은 신장 homogenates (그림 4b)를 떠났다. 다섯째, 산화 스트레스 실험 신부전 심근에 중요 한 역할을 재생합니다. 이 PNx 모델에서 PNx는 크게 직접 단백질에서 수정 여러 단백질그림 4(c) 및 c-Src 활성화 (그림 4d) LV homogenates에 자극. PNx 수술 수술 4 주 후에 몸 무게의 상당한 손실이 발생 하지 않았다. 그러나, 극 결 찰 방법으로 PNx 모델에는 고혈압을 유도 하지 않았다. 수축 기 혈압, 확장기 혈압과 평균 혈압 (데이터 표시 되지 않음)에서 단계 1 수술 전에 1 일와 희생, C57BL/6 마우스 긴장은 개념와 일치 하기 전에 1 일 측정에 가짜와 PNx 마우스 사이의 큰 차이 없었다 하지는 설립된 고혈압 모델20,21. 데이터 또한이 PNx 모델 어렵습니다 건의 급성 신부전의 모델. 또한, PNx 중재 심장 변화, 하지 손상된 신장 기능, 하지만 c-Src 활성화의 막힘 또는 heme oxygenase-1 (호-1)18의 유도 의해 감쇠 했다.
그림 1 : 왼쪽된 신장 결 찰 극. 사진 왼쪽된 신장 결 찰 (오른쪽) 전후 결 찰 (왼쪽)으로 나타났다. 왼쪽된 그림에서 doted 라인 예상된 결 찰 라인을 보여주었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 극 결 찰 발생과 PNx 장애 신장 기능과 혈. 수술 4 주 후에 PNx 수술 크게 증가 (한) Cystatin C의 플라즈마 레벨 (n = 16), (b) 크 (n = 16), (c) 롤빵 (n = 16), 가짜 수술에 비해. PNx 또한 크게 감소 (d)가 (HCT) PNx 마우스 (n = 8). 데이터 평균 ± SEM.로 표현 되었다 * *, p < 0.01, 가짜 운영 쥐 쥐 PNx 운영 하는 대. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 심장 비 대를 자극 하는 극 결 찰으로 PNx. 수술 4 주 후에 PNx 수술 크게 증가 (는) 심장 무게/몸 무게 비율 (a, n = 8), (b) 상대 벽 두께 (RWT, n = 1 9-21), (c) 심근 성과 지표 (MPI, n = 19-21), 그리고 (d) 좌 심 실 질량 지 수 (LVMI, n = 19-21). 데이터 평균 ± SEM.로 표현 되었다 * *, p < 0.01, 가짜 운영 쥐 쥐 PNx 운영 하는 대. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : 극 결 찰 자극된과 PNx 유형 I 교원 질 식, 단백질에서 c-Src 활성화. 수술 4 주 후에서 PNx 자극된 나 콜라겐에 식을 입력 왼쪽된 심 실 (LV) homogenates (a, n = 11) 나머지 신장 homogenates를 왼쪽 (b, n = 7-10). 또한 LV homogenates에는 PNx 직접 단백질에서 자극 (c, n = 6) 및 c-Src 활성화 (d, n = 6). 데이터 평균 ± SEM.로 표현 되었다 * *, p < 0.01, 가짜 운영 쥐 쥐 PNx 운영 하는 대. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
쥐 5/6일 PNx 모델 널리 CKD를 공부 하는 데 사용 되었습니다. 크기 때문에 훨씬 작은 신장 마우스에서, 클래식 동맥 결 찰 및 극 절제 가능한 높은 사망률 및 예기치 않은 출혈/혈액 손실이 마우스 모델에서 매우 어려운 있습니다.
우리는 출혈/혈액 손실을 극복 하기 위해 극 결 찰 마우스 PNx 모델을 채택 했다. 이 PNx 모델 향상 된 생존 율 및 높은 재현성으로 시간이 적게 걸립니다. 이 극 결 찰 모델 4 주 수술 후, 당시의 인간의 신부전 심근의 phenotypic 변화를 개발 하 고 따라서 따라 장치를 마더보드 및 치료 대상을 연구 하는 모델을 제공 합니다.
이 PNx 모델에서 5/6일 PNx는 이후, 신장 질량 감소의 대략적인 추정 이며 지금까지, 정확 하 게 다른 크기/질량에 있는 두 콩 팥의 남은 신장 질량을 계산 하는 방법은 없습니다. 그러나,는 결 찰 작업 편차를 줄이기 위해 매우 유사한 방법으로 수행 되어야 한다. 우리 신부전 심근 표현 형의 개발을 희생 하지 않고는 약 40%의 왼쪽된 신장 (또는 총 신장 질량의 약 20%)를 유지를 대폭 줄일 수 사망 율 (20%)으로 예상. 또 다른 문제는 연습을 필요로 하는 결 찰의 힘 이다.
5/6일 에 비해 극 절제 또는 신장 동맥 결 찰15,20, 극 결 찰 방법 PNx 모델은 쉽게, 빠르고, 덜 성악 요구. 이 PNx 모델의 가능한 장점을 포함: 1) 회피 가능한 혈액 출혈의 극 절제 또는 동맥 결 찰, PNx 모델에서 본 2) 장애인 염증 반응에 의해 발생 하는 산화 스트레스의 증가 함께 신장 기능 극 결 찰, 3) 낮은 사망률 (약 20%), 및 4) 신부전 심근 형의 빠른 개발. 성공적인 극 결 찰 진보적인 돌이킬 수 없는 피해와 합자 폴란드의 저하를 보여 줍니다. 합자 극 수술 2 주 후 (그림 4)에서 볼 수 있습니다 하 고 주로 수술 4 주 후 (그림 5)에서 사라집니다. 2 주와 4 주 후 수술에 합자 기둥의 비교 극 결 찰에 응답 염증 반응을 나타냅니다.
이 PNx 모델 마약 작업 및 치료 약물 검사의 따라 장치를 마더보드에 공부 유용할 수 있습니다. 우리는 최근에이 PNx 모델을 사용 하 여 신부전 심근의 개발에 Na/K-ATPase 신호 및 산화 긴장의 역할을 조사. PNaKtide, Na/K-ATPase 신호 특정 적의 관리 뿐만 아니라 신부전 심근의 개발을 방지 하지만 또한 신부전 심근18의 발병을 반대로 바꿉니다.
프로토콜 내에서 중요 한 단계는 다음과 같습니다: 1) 공격적인 결 찰 (신장 대량 왼쪽 나머지는 30% 미만) 사망률 (약 50%)을 크게 늘어난다. 2) 결 찰의 힘 필요를 연습 하는 지점에 도달는 결 찰 캡슐과 신장 직물을 깨지 않고는 기둥에 혈액 공급을 제한 합니다. 오른쪽 신장 제거 후 죽음을 일으킬 수 있는 인트라 신장 출혈에 신장 조직을 리드를 깨고. 성공적인 합자 극 극 혈의 제한으로 인해 결 찰 후 1-2 분 이내 변색 됩니다. 3) 특별 한 주의 왼쪽된 신장 ureter ligating 또는 ligating 폴란드 때 ureter을 손상 하지 않도록 해야 합니다. 합자 또는 손상 ureter로 마우스 오른쪽 신장 제거 후 하지 살아남을 것입니다. 이 극 결 찰 방법의 가장 눈에 띄는 단점이 있을 수 있습니다. 4) 수술 과정과 수술 후 관리 하는 동안 체온의 유지 보수. 5) 항생제를 사용 하 여 가능한 감염의 제어 합니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 NIH R15 1R15DK106666-01A1 (J. Liu) 하 고 NIH RO1 HL071556 (J.I. 샤 피로)에 의해 지원 되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Iris Scissors, 11.5 cm, Straight | World Precision Instruments | 501758 | |
| WPI Swiss Tweezers #5 11 cm, 0.1x0.06 mm Tips | World Precision Instruments | 504506 | |
| Jewelers #5 Forceps, 11cm, Straight, Titanium | World Precision Instruments | 555227F | |
| Iris Forceps, 10cm, Straight, Serrated | World Precision Instruments | 15914 | |
| Tweezers #3, 11cm, 0.2x0.4mm Tips | World Precision Instruments | 501976 | |
| Medesy Iris 4.5" Curved Scissors, Stainless Steel | Net23 | 3512 | www.Net32.com |
| Dr. Slick Iris Scissors; 3.5" | Avid Max | 220-1-965-IrisScsrs-P | www.Avid Max.com |
| Miltex Iris Scissors 4 1/8" Curved | 4mdmedical | V95-306 | www.4mdmedical.com |
| 5" Hemostat clap, curved jaw | PJTool | 4355 | www.pjtool.com |
| sklar Knapp Iris scissors, straight and sharp/blunt 4" | Medical Device depot | 64-3430 | www.medicaldevicedepot.com |
| Kelly Hemostatic Forceps straight 5.5" | Pilgtimmedical | FA710-50 | www.pilgtimmedical.com |
| C57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals Inc. | ||
| Mouse Handling Table and rectal thermometer | Visualsonics | ||
| MicroScan transducer | Vevo 1100 | MS400 | |
| Vevo 1100 Imaging System | FUJIFILM VisualSonics Inc. | ||
| Cystatin C ELISA kit and mouse creatinine kit | Crystal Chem. Inc. | ||
| Mouse BUN ELISA kit | MyBioSource Inc |
References
- Sarnak, M. J., et al. Kidney Disease as a Risk Factor for Development of Cardiovascular Disease: A Statement From the American Heart Association Councils on Kidney in Cardiovascular Disease, High Blood Pressure Research, Clinical Cardiology, and Epidemiology and Prevention. Circulation. 108 (17), 2154-2169 (2003).
- Levey, A. S., et al. Controlling the epidemic of cardiovascular disease in chronic renal disease: what do we know? What do we need to learn? Where do we go from here? National Kidney Foundation Task Force on Cardiovascular Disease. Am J Kidney Dis. 32 (5), 853-906 (1998).
- Schiffrin, E. L., Lipman, M. L., Mann, J. F. E. Chronic Kidney Disease. Effects on the Cardiovascular System. 116 (1), 85-97 (2007).
- Foley, R. N., et al. Clinical and echocardiographic disease in patients starting end-stage renal disease therapy. Kidney Int. 47 (1), 186-192 (1995).
- Foley, R. N., et al. The prognostic importance of left ventricular geometry in uremic cardiomyopathy. J Am Soc Nephrol. 5 (12), 2024-2031 (1995).
- Alhaj, E., et al. Uremic cardiomyopathy: an underdiagnosed disease. Congest Heart Fail. 19 (4), 40-45 (2013).
- Gulati, A., et al. Association of fibrosis with mortality and sudden cardiac death in patients with nonischemic dilated cardiomyopathy. JAMA. 309 (9), 896-908 (2013).
- London, G. M., Parfrey, P. S. Cardiac disease in chronic uremia: pathogenesis. Adv Ren Replace Ther. 4 (3), 194-211 (1997).
- Mohmand, B., Malhotra, D. K., Shapiro, J. I. Uremic cardiomyopathy: role of circulating digitalis like substances. Front Biosci. 10, 2036-2044 (2005).
- Himmelfarb, J., McMonagle, E.
- Okamura, D. M., Himmelfarb, J. Tipping the redox balance of oxidative stress in fibrogenic pathways in chronic kidney disease. Pediatr Nephrol. 24 (12), 2309-2319 (2009).
- Himmelfarb, J., Stenvinkel, P., Ikizler, T. A., Hakim, R. M. The elephant in uremia: oxidant stress as a unifying concept of cardiovascular disease in uremia. Kidney Int. 62 (5), 1524-1538 (2002).
- Becker, B. N., Himmelfarb, J., Henrich, W. L., Hakim, R. M. Reassessing the cardiac risk profile in chronic hemodialysis patients: a hypothesis on the role of oxidant stress and other non-traditional cardiac risk factors. J Am Soc Nephrol. 8 (3), 475-486 (1997).
- Drummond, C. A., et al. Reduction of Na/K-ATPase affects cardiac remodeling and increases c-kit cell abundance in partial nephrectomized mice. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 306 (12), 1631-1643 (2014).
- Kennedy, D. J., et al. Partial nephrectomy as a model for uremic cardiomyopathy in the mouse. Am J Physiol Renal Physiol. 294 (2), 450-454 (2008).
- Haller, S. T., et al. Monoclonal antibody against marinobufagenin reverses cardiac fibrosis in rats with chronic renal failure. Am J Hypertens. 25 (6), 690-696 (2012).
- Tian, J., et al. Spironolactone attenuates experimental uremic cardiomyopathy by antagonizing marinobufagenin. Hypertension. 54 (6), 1313-1320 (2009).
- Liu, J., et al. Attenuation of Na/K-ATPase Mediated Oxidant Amplification with pNaKtide Ameliorates Experimental Uremic Cardiomyopathy. Sci Rep. 6, 34592 (2016).
- Yan, Y., et al. Involvement of reactive oxygen species in a feed-forward mechanism of Na/K-ATPase-mediated signaling transduction. J Biol Chem. 288 (47), 34249-34258 (2013).
- Leelahavanichkul, A., et al. Angiotensin II overcomes strain-dependent resistance of rapid CKD progression in a new remnant kidney mouse model. Kidney Int. 78 (11), 1136-1153 (2010).
- Ma, L. J., Fogo, A. B. Model of robust induction of glomerulosclerosis in mice: importance of genetic background. Kidney Int. 64 (1), 350-355 (2003).
