Summary
כאן אנו מתארים שיטה נפוצה כדי לגרום נזק כבד כרונית בעכברים על ידי האכלה של תזונה לקויה כולין, בתוספת ethionine (CDE). נדגים לניטור תקינות זלוף בכבד, בידוד, שימור. קורס זמן של 6 שבועות ניתן להודיע על פגיעה בכבד, pathohistology, פיברוזיס, דלקתיות, ותגובות תא קדמון בכבד.
Abstract
מחלות כבד כרוניות, כגון דלקת כבד נגיפית, מחלת כבד אלכוהולית או מחלת כבד שומני לא אלכוהוליים, מאופיינים על ידי דלקת מתמיד, ההרס מתקדם והתחדשות של התא קדמון parenchyma הכבד, כבד התפשטות, פיברוזיס. בשלב הסופי של כל מחלת כבד כרונית היא שחמת, גורם סיכון מרכזי לפיתוח של קרצינומה hepatocellular יסודי. ללמוד תהליכי ויסות המחלה ייזום, הקמה, התקדמות, משמשים מספר מודלים בבעלי חיים במעבדות. כאן נתאר קורס שישה שבועות זמן של כולין לקויה, בתוספת ethionine (CDE) העכבר המודל, הכוללת האכלה עכברים C57BL/6J זכר 6 - בן שבועיים עם חשוכת-כולין צ'או ו- 0.15% DL-ethionine-בתוספת שתייה. פיקוח על בעלי חיים בריאות, עיקול אובדן משקל הגוף טיפוסי מוסברים. הפרוטוקול מדגים בחינת שטופלו CDE הכבד והדם אוסף מגעיל על ידי ניקוב לב עבור ניתוחים סרום עוקבות. הבא, הטכניקה זלוף הכבד ואוסף של אונות הכבד שונה עבור הערכות סטנדרטיים הם היסטולוגיה הכבד שמוצג, לרבות הערכות hematoxylin ו אאוזין או סיריוס אדום stainings, זיהוי immunofluorescent של תאי הכבד אוכלוסיות כמו גם transcriptome סטיגמה של microenvironment הכבד. מודל זה העכבר מתאים ללמוד דלקתיות, fibrogenic של תאים ובתאים הכבד dynamics המושרה דרך למחלת כבד כרונית והוא יכול לשמש כדי לבדוק את סוכני טיפולית פוטנציאליים אשר ייתכן לווסת תהליכים אלה.
Introduction
הכבד הוא האיבר הגדול ביותר של הבלוטות חילוף החומרים של הגוף ויש לו הרבה פונקציות מורכבות. תפקידי מפתח על הכבד כוללות מערכת העיכול, חילוף החומרים, ניקוי רעלים, אחסון של חומרים מזינים חיוניים, הייצור של רכיבי חלבון פלזמה וחסינות מתווכת דרך מקרופאגים תושב או תאים Kupffer. הכבד יש יכולת להתחדש גם אם עד 70-90% המסה הכוללת אובד. במקרה של פגיעה בכבד חריפה, כגון ראיתי בעקבות של hepatectomy חלקית או הרעלת פרצטמול, hepatocytes בריא הנותרים להתרבות לתקן את הנזק תהליך מתואם מאוד1. עם זאת, כאשר hepatocytes נפצעים באופן כרוני עקב זיהום ויראלי לטווח ארוך, חריפים או אלכוהוליים מחלת כבד שומני, microenvironment דלקתיות מפעיל את ההפעלה של נהיגה פיברוזיס בתאי stellate הכבד ו התפשטות של הכבד ובתאים (LPCs) עם פוטנציאל להתמיין cholangiocytes או hepatocytes2,3,4,5. המקור המדויק, בידול גורל LPCs, תרומתם התחדשות הכבד, hepatocarcinogenesis היו הנושאים שעוררו ותלויות ככל הנראה חומרת הפציעה ואת ההקשר2. סדר האירועים הקשורים התחדשות מוקדם גם משווקי הנדונה, עם כמה חוקרים וקבע כי הפעלת תאי stellate הכבד ובניה מטריקס חיונית לדור של העדפה-LPC נישה6, ואילו אחרים דוח LPC הרחבה, התגובה Ductular כביכול נדרשים ההדק fibrogenesis7. ישנם דגמים בעלי חיים רבים ללמוד היבטים ספציפיים של פציעה, התחדשות, תוך ניסיון להבין את כל הגורמים כבסיס המסדירים את התקדמות המחלה, בסופו של דבר לפתח אסטרטגיות חדשות לטיפול בחולים8.
כולין לקויה, בתוספת ethionine (CDE) תזונתיים המודל פותח במקור לשימוש אצל חולדות, מאוחר יותר שינה עבור אינדוקציה כרונית פגיעה בכבד עכברים9,10. מחסור תזונתי של כולין התוצאה הרכבה לקוי הפרשת ליפופרוטאין בצפיפות נמוכה מאוד. משטר טיפול זה בשילוב עם hepatocarcinogen DL-ethionine, שמוביל שומן עודפת הכבד טעינה, דלקת מתמשכת, periportal פיברוזיס, התגובה LPC ולטווח hepatocellular קרצינומה של פיתוח11,12 . עם זאת, חשוב, העכבר שונים זנים התערוכה דפוסים ייחודיים של דלקתיות, fibrogenic ו LPC dynamics בתגובה13. פרוטוקול זה מתאר פגיעה כבד כרונית אינדוקציה בעכברים C57BL/6J, הנפוץ ביותר בשימוש מוכלאים העכבר זן.
במחקר ממחלות כבד כרוניות, ניתוחים טיפוסי כוללות הערכות היסטולוגית hematoxylin אאוזין וכן אדום סיריוס מכתים להמחיש קולגן התצהירים, immunohistochemical או immunofluorescent זיהוי של אוכלוסיות תאים בכבד, ניתוח transcriptomic של microenvironment הכבד זה האחראית השינויים הסלולר המושרה באמצעות פקטורי גדילה מורכבים ציטוקין רשתות14,15,16,17 , 18.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. ניסויים בבעלי חיים
כל מחקרים שנעשו בבעלי חיים תיאר בחקירה הזו אושרו על-ידי ועדת האתיקה של חיה מאוניברסיטת קורטין (מספר אישור: AEC_2014_28) לפני תחילת ניסויים, שבוצעה על פי קוד אוסטרלי על טיפוח ועל השימוש בבעלי חיים-
- חיות
- השתמש עכברים C57BL/6J זכר 6 - בן שבועיים על הניסויים.
- עיצוב ניסיוני
- בעקבות הגעתו למדינת חיה, לאפשר עכברים להתאקלם במשך ארבעה ימים לפני פתיחתה של ניסוי מדעי.
- עכברים בבית על מצעים יטה מי מוץ, אשר התרוקן של גרגרים גלוי, גבעולי ולשמור על עכברים על 12 שעות מחזורי יום/לילה בנפרד מאוורר כלובים. שינוי מצעים כל יום שלוש ושבע, ולאחר מכן מדי שבוע לאחר מכן. דיאטה
- מספקים עכברים עם ad libitum גישה כולין לקויה, שתיית מים בתוספת 0.15% DL-ethionine. לשמור DL-ethionine-בתוספת מים ב 4° C ולהחליף שתיית מים כל יום השני להבטיח רעננות ולעודד את השתייה. לטעינת האוכל חשוכת-כולין בכל יום השני עם השינוי המוחלט של צ'או פעם בשבוע.
- עכברים להתבונן במצב מנוחה, ובמהלך הטיפול. הצג סימנים סטנדרטיים של בעלי חיים בריאות, כולל המראה הכללי, יציבה, אינטראקציה חברתית, הטיפוח, מעיל תנאי, למשקל הגוף.
- העכברים שוקלים מדי יום במהלך השבועיים הראשונים של הניסוי כדי להבטיח כל החיות בתערוכה יותר מ-20% גוף במשקל מורדמים כדי להגביל את סבל מיותר. בדרך כלל זהו המקרה של פחות מ-5% של בעלי חיים. אחרי שבועיים, ניתן להפחית את התדירות של שקילה עד שלוש פעמים מדי שבוע (למשל, שני, רביעי, שישי).
- הכבד זלוף ובידוד
- עזים ומתנגד עכברים בנקודות הזמן המצוין (במחקר זה אחת, שתיים, שש שבועות בדיאטה CDE) עם קטמין (100 מ ג/ק ג), חריגות השירותים הווטרינריים (10 מ"ג/ק"ג) על ידי הזרקת בקרום הבטן. לבדוק את רפלקס הנסיגה פדלים כדי להבטיח הרדמה נאותה.
- להרטיב את הפרווה עם 70% אתנול, עושים חתך אנכי קו האמצע בקיר הבטן עד לסרעפת באמצעות מספריים מאיו. ניתן להסיר את כלוב הצלעות לצורך גישה קלה יותר אל הלב.
- לאסוף דם על ידי ניקוב לב איטי באמצעות 25 G x 1/2 " קיר רגיל מחט כדי למנוע קריסה של הלב. לאפשר את הדם להיקרש צינור microcentrifuge בטמפרטורת החדר, כדי להשיג את הדוגמאות סרום לאחר צנטריפוגה ב g x 2,000 למשך 10 דקות. מאוחר יותר, למדוד רמות transaminase בסרום אלנין-נהלי 12.
- להעביר את הקיבה והמעי הדק לצד ולחשוף את וריד שער הכבד. לחתוך את הלב באמצעות מספריים מאיו כדי לאפשר נוזלים לצאת perfuse הכבד עם פוספט סטרילי buffered מלוחים (ה-pH = 7.4) מאת cannulating וריד שער הכבד באמצעות 27 G x 1/2 " קיר רגיל המחט. את הכבד. אחיד blanched ציון זלוף מוצלחת של כל אונות הכבד.
- בקפידה לנתק את הכבד ומניחים אותו בצלחת פטרי באמצעות מלקחיים ומספריים מאיו. הסרת רקמת עודף, שאינו כבד, כיס המרה.
- הכבד שימור
- אחרי המשקל הכבד הכולל הוקלט, חותכים אונה אחת קטנה כמה חתיכות קטנות של כמה מילימטרים רבועים, להעביר אותם צינורות סטרילי, snap-הקפאת בחנקן נוזלי של RNA מאוחר יותר והפקת חלבונים, לפי פרוטוקולים סטנדרטיים. Snap-להקפיא את חתיכות רקמה בהקדם האפשרי לאחר אוסף איברים כדי למנוע כל השפלה רקמות.
- לאסוף אונה אחת בפורמלין במאגר נייטרלי 10% עבור עיבוד מאוחר יותר של פרפין הטבעה, כמו לכל פרוטוקולים סטנדרטיים.
- מקום אונה אחת לתוך תבנית מלא cryomatrix טמפרטורה אופטימלית חיתוך הטבעה שרף snap-הקפאת בחנקן נוזלי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
לאורך כל הקורס שישה שבועות זמן הפגיעה הנגרמת CDE כרונית בכבד, הפרמטרים היו העריכו בימים 7 (שלב האינדוקציה), 14, 21 (הקמת שלב), ו- 42 (שלב התחזוקה). לעומת בקרת עכברים, עכברים שטופלו CDE שקוע עד 20% ממשקל גופם הראשונית שלב ההסתגלות הראשונית, נוטים להחזיר משקל בשלבים הקמה, אחזקה (איור 1). משקל הגוף היה הפוך בקורלציה עם רמות transaminase בסרום אלנין, מחוון של hepatocellular פציעה (איור 2). ארבעה מקטעי רקמת הכבד מיקרומטר-דק פורמלין-קבוע, פרפין-מוטבע היו מוכתמים hematoxylin ואאוזין כדי להעריך את הארכיטקטורה הכבד. כבדי בריאה מוצגת ארכיטקטורת נורמלי עם כבלי מסודרת של hepatocytes הקורן הווריד המרכזי, ויוצרים parenchyma בכבד. לעומת זאת, שטופלו CDE כבדי הראה חדירה parenchymal של תאים basophilic רבים ואדריכלות כבד בהרבה שיבשו אינדוקציה והקמת שלב ו נורמליזציה בשלב התחזוקה (איור 3). כדי להעריך fibrogenesis, 4-מיקרומטר דק פורמלין-קבוע, פרפין-מוטבע מקטעים הכבד היו מוכתמים לצבוע פולי-אזו אדום סיריוס, אשר מדמיין קולגן הכבד התצהיר. בשלב אינדוקציה של CDE-induced פציעת כבד כרונית, קולגן שנצבר ב- parenchyma באזורים periportal. עם זאת, רמות מנורמל הקמה, תחזוקה שלב (איור 4). מטריקס-מוטבע, מוקפאים snap רקמת הכבד היה חותכים למקטעים דק 7-מיקרומטר על cryostat. צביעת immunofluorescent לסמני תא בוצעה ואז לנתח ההסדר הזמני, מרחבית של אוכלוסיות תאים בכבד מסוים במהלך הזמן. ב כבדים בריא, panCK סמן התא קדמון בכיס המרה, הכבד רק הכתים מבנים צינור המרה, ואילו סמן התא דלקתיים CD45 זוהה מקרופאגים תושב בכבד או תאים Kupffer. ב כבדים כרוני פצועים, עם זאת, panCK מוגברת מכתים לידי התפשטות תאים קדמון בכיס המרה, הכבד, אשר הגיעה לשיאה, להגיע למצב יציב לאחר כ 14 ימים של טיפול CDE. המספר של תאים דלקתיים CD45-חיובית, המייצג את תאי הכבד תושב, חדירה, גם הגיעה לשיאה בשלב הגיוס של פציעה CDE-induced ו לאט מנורמל לרמות שליטה בשלבים הקמה, אחזקה ( איור 5). התרחבות זו של תאים דלקתיים אוכלוסיות ב כבדי פצוע כרוני לוותה השינויים המהירים microenvironment הכבד. אינדוקציה מהירה או עלייה משמעותית ברמות שעתוק של ציטוקינים וגורמים לצמיחה של נצפתה. אלה כוללים גידול נמק פקטור (TNF), כמו גידול נקרוזה מקדם משרן חלש של אפופטוזיס (לצבוט), lymphotoxin-בטא (LTβ), hepatocyte פקטורי גדילה (דבורה שחר), צורה של גורם גדילה-בטא (TGFβ) ולאחר interleukin-6 (IL-6), לדוגמה. רמות התעתיק שלהם כל הגיעה לשיאה בשלב הגיוס, מנורמל בשלב הקמה, אחזקה - דומה המחלה בעבר להציג פרמטרים (איור 6).
איור 1 . גוף במשקל הקלטות של עכברים שטופלו CDE ובריאה. עכברים פצוע כרוני שקוע עד 20% ממשקל גופם הראשונית בשלב הגיוס של האכלה CDE ושוחזר לאחר מכן. דיאגרמה נציג מוצג. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2 . רמות transaminase בסרום אלנין בעכברים בריאים ו שטופלו CDE. סרום אלנין transaminase רמות (ALT) נשאר ללא שינוי בעכברים בריאים במהלך קורס שישה שבועות זמן אבל הגיעה לשיאה בשלב הגיוס, עם נורמליזציה בשלב הקמה, אחזקה בבעלי חיים שטופלו CDE. דיאגרמה נציג מוצג. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3 . Stainings Haematoxylin ואאוזין סעיפים הכבד. קטעים פורמלין-קבוע ומוטבעים פרפין רקמת הכבד היו מוכתמים H & E הפגינו הסדרים מסודרת של מיתרי hepatocyte בעכברים שליטה. לעומת זאת, הארכיטקטורה הכבד הופרעו במידה רבה אצל עכברים שטופלו CDE בשלב הגיוס, עם נורמליזציה לקראת סוף מסלול הזמן שישה שבועות. סרגל קנה מידה מייצג 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 4 . סיריוס אדום ויזואליזציה קולגן מכתים הקלו בעכברים בריאים ו שטופלו CDE. בהשוואה לעכברים שליטה רק מוצגים perivenous מינור קולגן התצהירים, בעלי חיים פצועים באופן כרוני הראו הצטברות קולגן periportal parenchyma אזורים בשלב הגיוס, עם נורמליזציה איטית לעבר שלב התחזוקה של CDE כמובן זמן של 6 שבועות. סרגל קנה מידה מייצג 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5 . Immunofluorescent זיהוי של דלקתיות והכבד בכיס המרה/ובתאים. כבדים בריא, רק בכיס המרה מבנים מוכתם panCK סמן התא קדמון בכיס המרה, הכבד (אדום), הנוגדן CD45 דמיינו מקרופאגים הכבד תושב או תאים Kupffer (ירוק). בשלב אינדוקציה של CDE האכלה, מספר CD45+ תאים עלה באופן דרסטי אשר כללה תושב הכבד, כמו גם שחדר תאים דלקתיים. תגובה דלקתית זו מנורמל לקראת סוף tהקורס הוא שישה שבועות זמן. קדמון בכיס המרה, הכבד תאים את הכתם עם panCK סמן גדל במספרים עד השבוע השני והגיע למצב יציב לאחר מכן. דאפי שימש כימות גרעינית. סרגל קנה מידה מייצג 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 6 . ניתוח Transcriptomic של ציטוקינים וגורמים לצמיחה. RNA הופרדה מרשת מוקפאים snap פיסות שטופלו CDE רקמות הכבד כדי לבצע ניתוח transcriptomic של microenvironment הכבד. דיאגרמות נציג של הגידול נקרוזה מקדם (TNF), כמו TNF משרן חלש של אפופטוזיס (לצבוט), מוצגים lymphotoxin-בטא (LTβ), גורם הגדילה hepatocyte (דבורה שחר), צורה של גורם גדילה-בטא (TGFβ) ולאחר interleukin-6 (IL-6). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מחלת כבד כרונית הוא לרוב מחלה שקטה עם רוב המטופלים להיות אסימפטומטיים, הוא אחד התורמים העיקריים על התחלואה והתמותה ברחבי העולם. אלכוהוליזם כרוני בנגיף הפטיטיס C הגורמים המובילים בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. פגיעה בכבד כרוני מאופיין על ידי דלקת הכבד, פיברוזיס, שחמת במקרים חמורים, קרצינומה, אי ספיקת כבד בסופו של דבר. יש כיום אין תרופה זמינים, למרות התקדמות גדולה נעשו כדי להבין את המנגנונים של מחלת כבד, דרכים טיפוליות חדשות יש עדיין צורך בדחיפות.
הדיאטה CDE הוא מודל פשוט זמן-יעיל, administrable בקלות על אינדוקציה, המחקר של שינויים שומניים או steatosis הכבד, דלקת, פיברוזיס, התפשטות LPC, בניסויים לטווח ארוך, פיתוח של קרצינומה hepatocellular6 ,11,12,13,16,17. בתחילה נעשה שימוש חולדות19,20, שזה מאוחר יותר הותאמה כדי להקל על הלימודים LPC wildtype עכברים מהונדסים9.
במעבדה שלנו, מצאנו זה קריטי להשתמש מוץ יטה מי במקום חלופות אחרות במצעים. אף-על-פי זה תיגמר של גרגרים גלוי, גבעולי, כמה חומרים מזינים נוספים נשארים מצעים יטה מי מוץ, מאוזנים חלק מתופעות קשות האינדוקציה CDE-induced פציעת כבד כרונית. בנוסף, מצעים זה מספק העשרה סביבתית ומעודדת התנהגות חיפוש אוכל רגיל בעכברים. הרוב המכריע של אירועים קשים היו שנצפתה בשבוע הראשון של הטיפול CDE, לעתים נדירות לאחר מכן. הסבירות של אירועים קשים יכול להיות מופחת על ידי שימוש בעכברים בעלי משקל התחלתי של פחות 16 גרם. עם זאת, אם המשקל ההתחלתי הוא יותר מ 18-20 גרם, מספר המושרה ובתאים בכבד ייתכן נמוכה יותר. המודל CDE ניתן ללמוד steatosis הכבד דלקת, תגובות תאים בכבד קדמון, פיברוזיס, פיתוח קרצינומה hepatocellular ללא הנוכחות שחמת הכבד, כמו אצל כמה אלכוהוליים מחלת כבד שומני (NAFLD) ו בחולים הנגועים בנגיף הפטיטיס B21,22. לשם השוואה, המודל thioacetamide (TAA) של פגיעה כרונית בכבד מייצג משטר אגרסיבי יותר. זה גורם מתון שינויים שומניים, דלקת, ובתאים כבד ו פיברוזיס אשר כבר מתקדמת כדי שחמת בתחילת סביב נקודת הזמן 6-בשבוע12. לפיכך, האכלה CDE הוא הציע אם תהליכים הקשורים NAFLD הם במוקד המחקר, ואילו קורס זמן TAA עשוי להיות יתרון כאשר שונים שלבים של חומרת פיברוזיס הם עניין.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
. אין מה להיות מגולה על-ידי המחברים.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים הלאומי לבריאות, המועצה למחקר רפואי (NHMRC) של אוסטרליה (APP1042370, APP1061332, APP1087125). המחברים רוצה להודות הצוות במכון המחקר של חדשנות בריאות קרטין לקבלת סיוע טכני.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Six-week-old male C57BL/6J mice | Animal Resource Centre of Western Australia, Murdoch, WA, Australia | N/A | |
| 10 Kg Steam Cut Wheaten Chaff | Specialty Feeds, Glen Forrest, WA, Australia | N/A | |
| Water for irrigation 1000ml bottle (Baxter) | Surgical House, Perth, WA, Australia | AHF7114A | |
| Choline- deficient diet, modified (pellets) | MP Biomedicals Australasia Pty Limited, WA, Australia 02960210 | ||
| DL-Ethionine | Sigma-Aldrich, Castle Hill, NSW, Australia | E5139-25G | |
| Ketamil injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| Ilum Xylazil-20 injection | Troy Laboratories Pty Limited, Glendenning, NSW, Australia | N/A | |
| 27G x 1/2", Regular Wall Needle | Terumo Australia Pty Limited, NSW, Australia | NN-2713R | |
| Syringes Terumo 1ml and 10ml | Terumo Australia Pty Limited, Macquarie Park, NSW, Australia | 1018242, 1018037 | |
| Tissue-Tek OCT compound | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 25608-930 | |
| Neutral buffered formalin | Amber Scientific, Midvale, WA, Australia | NBF-2.5L | |
| Ethanol absolute anaLaR normalpur | VWR International Pty Limited, Tingalpa, QLD, Australia | 20821.33 | |
| Superfrost Plus slides | Grale Scientific Pty Limited, Ringwood, VIC, Australia | SF41296SP | |
| Dako Protein Block, serum-free | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | X090930-2 | |
| Dako antibody diluent | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | s0809 | |
| rat anti-CD45 | eBioscience, San Diego, California, USA | m0701 | 1/200 dilution |
| rabbit anti-panCK | Dako Australia Pty Limited, North Sydney, NSW, Australia | Z0622 | 1/300 dilution |
| Goat anti-rabbit (Alexa Fluor 488) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11008 | 1/500 dilution |
| Goat anti-rat IgG (Alexa Fluor 594) | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | A-11007 | 1/500 dilution |
| ProLong Gold Antifade Reagent with DAPI | Life Technologies Australia Pty Limited, Mulgrave, VIC, Australia | P36935 | |
| Picrosirius Red Stain Kit | Polysciences Inc., Warrington, PA, USA | ab150681 |
References
- Taub, R. Liver regeneration: from myth to mechanism. Nat Rev Mol Cell Biol. 5, 836-847 (2004).
- Kohn-Gaone, J., Gogoi-Tiwari, J., Ramm, G. A., Olynyk, J. K., Tirnitz-Parker, J. E. The role of liver progenitor cells during liver regeneration, fibrogenesis, and carcinogenesis. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 310, G143-G154 (2016).
- Lu, W. Y., et al. Hepatic progenitor cells of biliary origin with liver repopulation capacity. Nat Cell Biol. 17, 971-983 (2015).
- Prakoso, E., et al. Analysis of the intrahepatic ductular reaction and progenitor cell responses in hepatitis C virus recurrence after liver transplantation. Liver Transpl. 20, 1508-1519 (2014).
- Tirnitz-Parker, J. E., Tonkin, J. N., Knight, B., Olynyk, J. K., Yeoh, G. C. Isolation, culture and immortalisation of hepatic oval cells from adult mice fed a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Int J Biochem Cell Biol. 39, 2226-2239 (2007).
- Van Hul, N. K., Abarca-Quinones, J., Sempoux, C., Horsmans, Y., Leclercq, I. A. Relation between liver progenitor cell expansion and extracellular matrix deposition in a CDE-induced murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 1625-1635 (2009).
- Clouston, A. D., et al. Fibrosis correlates with a ductular reaction in hepatitis C: roles of impaired replication, progenitor cells and steatosis. Hepatology. 41, 809-818 (2005).
- Forbes, S. J., Newsome, P. N. Liver regeneration - mechanisms and models to clinical application. Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 13, 473-485 (2016).
- Akhurst, B., et al. A modified choline-deficient, ethionine-supplemented diet protocol effectively induces oval cells in mouse liver. Hepatology. 34, 519-522 (2001).
- Shinozuka, H., Lombardi, B., Sell, S., Iammarino, R. M. Early histological and functional alterations of ethionine liver carcinogenesis in rats fed a choline-deficient diet. Cancer Res. 38, 1092-1098 (1978).
- Knight, B., Tirnitz-Parker, J. E., Olynyk, J. K. C-kit inhibition by imatinib mesylate attenuates progenitor cell expansion and inhibits liver tumor formation in mice. Gastroenterology. 135, 969-979 (2008).
- Kohn-Gaone, J., et al. Divergent Inflammatory, Fibrogenic, and Liver Progenitor Cell Dynamics in Two Common Mouse Models of Chronic Liver Injury. Am J Pathol. 186, 1762-1774 (2016).
- Knight, B., et al. Attenuated liver progenitor (oval) cell and fibrogenic responses to the choline deficient, ethionine supplemented diet in the BALB/c inbred strain of mice. J Hepatol. 46, 134-141 (2007).
- Dwyer, B. J., Olynyk, J. K., Ramm, G. A., Tirnitz-Parker, J. E. TWEAK and LTbeta Signaling during Chronic Liver Disease. Front Immunol. 5, 39 (2014).
- Karin, M., Clevers, H. Reparative inflammation takes charge of tissue regeneration. Nature. 529, 307-315 (2016).
- Ruddell, R. G., et al. Lymphotoxin-beta receptor signaling regulates hepatic stellate cell function and wound healing in a murine model of chronic liver injury. Hepatology. 49, 227-239 (2009).
- Tirnitz-Parker, J. E., et al. Tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis is a mitogen for liver progenitor cells. Hepatology. 52, 291-302 (2010).
- Viebahn, C. S., Yeoh, G. C. What fires prometheus? The link between inflammation and regeneration following chronic liver injury. Int J Biochem Cell Biol. 40, 855-873 (2008).
- Hayner, N. T., Braun, L., Yaswen, P., Brooks, M., Fausto, N. Isozyme profiles of oval cells, parenchymal cells, and biliary cells isolated by centrifugal elutriation from normal and preneoplastic livers. Cancer Res. 44, 332-338 (1984).
- Tee, L. B., Smith, P. G., Yeoh, G. C. Expression of alpha, mu and pi class glutathione S-transferases in oval and ductal cells in liver of rats placed on a choline-deficient, ethionine-supplemented diet. Carcinogenesis. 13, 1879-1885 (1992).
- Chayanupatkul, M., et al. Hepatocellular carcinoma in the absence of cirrhosis in patients with chronic hepatitis B virus infection. J Hepatol. 66, 355-362 (2017).
- Mittal, S., et al. Hepatocellular Carcinoma in the Absence of Cirrhosis in United States Veterans is Associated With Nonalcoholic Fatty Liver Disease. Clin Gastroenterol Hepatol. 14, 124-131 (2016).
