Summary
تم تنفيذ مزيج من التقنيات البصرية المتقدمة في ليزر المسح المجهري مع الطول الموجي الفوتوني متعدد الأسفار الإثارة منذ وقت طويل لالتقاط التصوير عالية الدقة، ثلاثي الأبعاد، في الوقت الحقيقي للهجرة crest العصبي في تيراغرام (sox10:EGFP) والأجنة الزرد تيراغرام (foxd3:GFP).
Abstract
العين الخلقية والشذوذ الجمجمة تعكس اضطرابات في قمة العصبية، عدد سكانها عابر للخلايا الجذعية المهاجرة التي تؤدي إلى العديد من أنواع الخلايا في جميع أنحاء الجسم. فهم بيولوجيا crest العصبي كان محدودا، مما يعكس عدم وجود نماذج أصعب وراثيا التي يمكن دراستها في فيفو وفي الوقت الحقيقي. الزرد نموذج إنمائي أهمية خاصة لدراسة السكان خلية المهاجرة، مثل قمة العصبية. لدراسة الهجرة crest العصبي في العين النامية، تم تنفيذ مزيج من التقنيات البصرية المتقدمة في ليزر المسح المجهري مع الإثارة fluorescence فوتون متعدد الطول الموجي الطويل التقاط الفيديو عالية الدقة، ثلاثي الأبعاد، في الوقت الحقيقي للعين النامي في الأجنة المعدلة وراثيا الزرد، هما تيراغرام (sox10:EGFP) وتيراغرام (foxd3:GFP)، كما قد ثبت في العديد من النماذج الحيوانية لتنظيم المبكر crest العصبي التمايز والمرجح أن تمثل علامات للخلايا العصبية كريست sox10 و foxd3 . تصوير الوقت الفاصل بين فوتون متعددة استخدمت لتمييز السلوك وأنماط الهجرة اثنان السكان خلية crest العصبي تسهم في الإسراع بتطوير العين. هذا البروتوكول يوفر المعلومات لتوليد الوقت الفاصل بين أشرطة الفيديو أثناء الهجرة crest العصبي الزرد، على سبيل مثال، ويمكن تطبيقها أيضا على تصور التطور المبكر للعديد من الهياكل في الزرد وغيرها من الكائنات نموذج.
Introduction
أمراض العيون الخلقية يمكن أن تسبب عمي الطفولة وغالباً ما تكون بسبب شذوذ قمة العصبية الجمجمة. هي الخلايا العصبية كريست عابرة من الخلايا الجذعية التي تنشأ من الأنبوب العصبي وتشكل أنسجة عديدة في جميع أنحاء الجسم. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 الخلايا العصبية كريست، المستمدة من بروسينسيفالون وميسينسيفالون، تؤدي إلى العظام والغضاريف ميدفيس في المناطق الأمامية، وايريس، القرنية، ميشوورك ترابيكولار، والصلبة في الجزء الأمامي من العين. 4 , 6 , 7 , 8 خلايا crest العصبي من النموذج رهومبينسيفالون بلعومية الأقواس والفك، والمسالك تدفق القلب. 1 , 3 , 4 , 9 , 10 قد أبرزت الدراسات بمساهمات قمة العصبية للعين والتنمية بيريوكولار، مؤكدا على أهمية هذه الخلايا في التنمية عين الفقاريات. وفي الواقع، انقطاع الهجرة الخلية كريست العصبية والتمايز تؤدي إلى الشذوذ الجمجمة والعين كما هو ملاحظ في متلازمة أكسينفيلد-ريجر ومتلازمة بيترز بالإضافة إلى. 11 , 12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 تقديم فهم شامل للهجرة، وانتشار والتفريق بين هذه الخلايا العصبية كريست هكذا، في نظرة ثاقبة التعقيدات الكامنة وراء أمراض العيون الخلقية.
الزرد كائن نموذج قوية لدراسة التنمية العين، هياكل العين الزرد مماثلة لنظرائهم في الثدييات، وتقحم حفظت العديد من الجينات بين الزرد والثدييات. 18 , 19 , 20 ، وباﻹضافة إلى ذلك، الأجنة الزرد شفافة والاباضه، تسهيل تصور التنمية العين في الوقت الحقيقي.
التوسع في الأعمال المنشورة سابقا، وصفت6،،من720 نمط الهجرة من الخلايا العصبية كريست استخدام فوتون متعدد الأسفار الوقت الفاصل بين التصوير على خطوط الزرد المعدلة وراثيا المسمى مع البروتين الفلورية الخضراء (بروتينات فلورية خضراء) تحت سيطرة جمهورية يوغوسﻻفيا (تحديد الجنس منطقة Y) النسخي-مربع 10 (sox10) أو "مربع فورخيد" D3 المناطق التنظيمية الجينات (foxd3). 21 , 22 , 23 , 24-فوتون متعدد الأسفار الوقت الفاصل بين التصوير هو تقنية قوية أن يجمع بين التقنيات البصرية المتقدمة لليزر المسح المجهري مع طويلة الطول الموجي الفوتوني متعدد الأسفار الإثارة لالتقاط الصور ذات الدقة العالية، وثلاثي الأبعاد للعينات الموسومة fluorophores. 25 , 26 , 27 استخدام الليزر متعددة فوتون مزايا متميزة أكثر مجهرية [كنفوكل] القياسية، بما في ذلك اختراق الأنسجة المتزايدة وتبيض فلوروفوري انخفض.
باستخدام هذا الأسلوب، كان السكان مميزة اثنين من الخلايا العصبية كريست متفاوتة في توقيت الهجرة ومسارات الهجرة crest العصبي الذين يتعرضون للتمييز، وهي: foxd3-إيجابية الخلايا في ميسينتشيمي بيريوكولار والعين النامية وكريست العصبية الإيجابية sox10 خلايا mesenchyme الجمجمة. مع هذا الأسلوب، وهو عرض نهج لتصور الهجرة الهجرة crest العصبي العين والجمجمة في الزرد، مما يجعل من السهل لمراقبة الهجرة الخاضعة للتنظيم العصبي كريست في الوقت الحقيقي أثناء التطوير.
هذا البروتوكول يوفر المعلومات لتوليد الوقت الفاصل بين أشرطة الفيديو أثناء تطوير العين مبكرا في تيراغرام (sox10:EGFP) والزرد المعدلة وراثيا تيراغرام (foxd3:GFP)، على سبيل مثال. يمكن تطبيق هذا البروتوكول كذلك للمرئيات عالية الاستبانة، ثلاثي الأبعاد، في الوقت الحقيقي للإسراع بتطوير أي بنية العين والجمجمة المستمدة من الخلايا العصبية كريست في الزرد. وعلاوة على ذلك، يمكن كذلك تطبيق هذا الأسلوب لتصور تطوير الأنسجة والأعضاء في الزرد وغيرها نماذج حيوانية أخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تصوير الوقت الفاصل بين فوتون متعدد الأسفار ولدت سلسلة من أشرطة الفيديو التي كشفت عن أنماط الهجرة الجمجمة العصبي كريست الخلايا التي تؤدي إلى الهياكل الجمجمة والجزء الأمامي من العين في تيراغرام (sox10:EGFP) وتيراغرام (foxd3:GFP) خطوط الزرد. على سبيل مثال، ترحيل sox10خلايا كريست العصبية الإيجابية بين 12 و 30 هبف من حافة الأنبوب العصبي في منطقة الجمجمة (فيديو 1، الشكل 2). تهاجر الخلايا من بروسينسيفالون وميسينسيفالون الظهري والبطني للعين النامية لملء ميسينتشيمي بيريوكولار. وبالإضافة إلى ذلك، تشكل هذه الخلايا sox10الإيجابية في عملية فرونتوناسال. ترحيل بطنيا الخلايا العصبية كريست من رهومبينسيفالون وأن تؤدي إلى الأقواس البلعوم. الوقت الفاصل بين التصوير من foxd3-الخلايا إيجابية العصبي كريست بين 30 و 60 هبف أظهرت أن هذه الخلايا يتم ترحيل بين كأس البصرية والأديم الظاهر السطحي، ومن خلال الشق العين (2 فيديو، الشكل 3). هذه foxd3-الخلايا الإيجابية يتمحور حول العدسة، وتشكيل ستروما قزحية.
الشكل 1 . الإعداد. ألف كل مكون من مكونات الجنين تركيب الجهاز، بما في ذلك غرفة حمام مفتوح، المحول الأساسي ومرحلة التبادل السريع. باء- الجمعية الدائرة المفتوحة حمام. جيم إضافة 2% [اغروس] حل (60-70 درجة مئوية) إلى دائرة حمام مفتوحة. د- تنسيب الجنين في قاعة حمام مفتوح تحت مجهر فلوري. هاء الجنين (في 24 هبف) توضع أفقياً في وسط الحل مبلمرة [اغروس] في قاعة حمام مفتوحة. واو إضافة الوسائط إلى سطح الحل مبلمرة [اغروس] لتغطي كامل الجنين في قاعة حمام مفتوحة. زاي غرفة حمام مفتوح في منصة التبادل السريع والمتمركزة في محول المرحلة. حاء – موضع الجنين تركيب الجهاز في مرحلة المجهر فوتون متعددة. أولاً الليزر السلامة مربع. يتم الإشارة إلى أبواب إنزلاقية (1 و 2) لإعادة الملء الدائرة المفتوحة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . ممثل ديكونفولفيد والمسقط ماكس الصور من تصوير تيراغرام الوقت الفاصل بين فوتون متعددة (sox10:EGFP) الجنين الزرد من 12 إلى 30 هبف. ترحيل الخلايا إيجابية sox10-من بروسينسيفالون (ع) وميسينسيفالون (M) لملء ميسينتشيمي بيريوكولار (دائرة منقطة تعني العين) وعملية فرونتوناسال (السهم مفتوحة). Sox10-إيجابية الخلايا من رهومبينسيفالون (R) هاجر بطنيا إلى تشكيل الأقواس البلعوم (سهم مغلقة). الصور التي حصل عليها كل 20 دقيقة خلال الإطار الزمني ومخيط معا لإنشاء فيديو 1. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3 . الممثل ديكونفولفيد والمسقط ماكس الصور من تصوير تيراغرام الوقت الفاصل بين فوتون متعدد(foxd3:GFP) الجنين الزرد من 24 إلى 48 هبف. Foxd3--الخلايا إيجابية دخلت في الغرفة الأمامية للعين (النجمة تعني العدسة) بين سطح الأديم الظاهر وكأس البصرية، مع المزيد من الخلايا المترجمة إلى الظهرية ("D")-الخلفي ("P") رباعي مقارنة بالامامي ("A") والبطني الأرباع ("V"). وباﻹضافة إلى ذلك، هاجر foxd3-إيجابية الخلايا المتاخمة لها، ومن خلال الشق العين. الصور التي حصل عليها كل 20 دقيقة خلال الإطار الزمني ومخيط معا لإنشاء فيديو 2. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4 . الممثل ديكونفولفيد والمسقط ماكس الصور من تصوير تيراغرام الوقت الفاصل بين فوتون متعدد(foxd3:GFP) الجنين الزرد من 30 إلى 60 هبف. Foxd3--الخلايا إيجابية دخلت في الغرفة الأمامية للعين (الدائرة المتقطعة الخارجي يدل على الحواف الطرفية للعين، الدائرة المنقطة الداخلية ترمز إلى العدسة) بين سطح الأديم الظاهر وكأس البصرية، مع المزيد من الخلايا المترجمة إلى الظهرية ("d")-الخلفي ("p") رباعي مقارنة الأمامي ("أ") والارباع البطني ("v"). وباﻹضافة إلى ذلك، هاجر foxd3-إيجابية الخلايا المجاورة، ومن خلال الشق العين (رأس السهم الأبيض يدل على ترحيل العصبي كريست، خط متقطع أحمر فىالوقت الشق العين). 60 هبف، foxd3-الخلايا إيجابية مطوقة تماما العدسة (الأسهم مغلقة)، تشير إلى إغلاق الشق. وبالإضافة إلى ذلك، في 60 هبف، foxd3 أعرب أيضا في فوتوريسيبتورس (رأس السهم مفتوحة)، الذي لم يترافق مع التعبير عن هذا عامل النسخ في الخلايا العصبية كريست. الصور التي حصل عليها كل 20 دقيقة خلال الإطار الزمني ومخيط معا لإنشاء 3 الفيديو. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الفيديو 1 من . الوقت الفاصل بين فيديو تيراغرام (sox10:EGFP) الجنين الزرد من 12 إلى 30 هبف. العلامة النجمية ترمز إلى العين. اضغط هنا لتحميل هذا الفيديو.
الفيديو 2 من . الوقت الفاصل بين فيديو تيراغرام (foxd3:GFP) الجنين الزرد من 24 إلى 48 هبف. تشير العلامة النجمية إلى العدسة. تدل العلامة النجمية الشق العين. د، الظهرية؛ الخامس، البطني؛ ف، اللاحق؛ أ، الأمامي. اضغط هنا لتحميل هذا الفيديو.
الفيديو 3 من . الوقت الفاصل بين فيديو تيراغرام (foxd3:GFP) الجنين الزرد من 30 إلى 60 هبف. تشير العلامة النجمية إلى العدسة. السهم يشير إلى شرخ العين. د، الظهرية؛ الخامس، البطني؛ ف، اللاحق؛ أ، الأمامي. اضغط هنا لتحميل هذا الفيديو.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تصوير الوقت الفاصل بين فوتون متعددة يمكن التتبع في فيفو السكان خلية العابرة والمهاجرة. يمكن استخدام هذه التقنية القوية لدراسة العمليات الجنينية في الوقت الحقيقي، وفي هذه الدراسة، نتائج هذا الأسلوب تعزيز المعارف الراهنة للهجرة الخلية crest العصبي والتنمية. عادة استخدام الدراسات الوقت الفاصل بين التصوير السابقة [كنفوكل] ليزر المسح المجهري. 29 , 30 , 31 , 32 ، نقدم هنا استخدام تقنية فوتون المتعددة، التي لديها العديد من المزايا عبر الفحص المجهري [كنفوكل] التقليدية. الأساس للفحص المجهري الفوتونات المتعددة أن الفوتونات اثنين من أطول موجات الأشعة تحت الحمراء وتستخدم لإثارة فلوروفوري. نتيجة لذلك هناك تشتت أقل ومن ثم انخفاض الخلفية، تمكن اختراق الأنسجة الأعمق، وتحقيق تصوير أعماق تزيد عن 1 مم في الأنسجة البيولوجية مع كشف أكثر كفاءة من الفحص المجهري [كنفوكل]. هذه الخصائص أيضا تقليل الضيائية، واعتبار هام مع اكتساب صورة متكررة ومتكررة. 25 , 26 , 27 من هذه الخصائص، الفحص المجهري اثنين-فوتون يمكن الصورة الجامعة-الهيئة التحضيرية والأنسجة في النماذج الحيوانية الصغيرة، (مثل الفئران، والأجنة الزرد في 12 هبف-كما في حالة هذه الدراسة). علاوة على ذلك، تمكن هذه النماذج الحيوانية الصغيرة استخدام البروتينات الفلورية المشفرة جينياً، التي يمكن أن تكون مترجمة في النسيج للفائدة. وهكذا، يمكن أن يعزز استخدام الفحص المجهري الفوتونات المتعددة الحصول على الصور للتجارب الوقت الفاصل بين.
وهناك العديد من الخطوات في هذا البروتوكول، والتي تعتمد على نوع فوتون متعددة نظام الليزر والكشف عن قيد الاستخدام. وتنشأ معظم المشاكل مع هذا البروتوكول مع إعدادات الليزر واقتناء الصور استناداً إلى نظام الكشف المستخدمة. معلومات العمل الخاصة بالنظام الفردي والوصول إلى الدعم التقني الحاسمة. وبالإضافة إلى ذلك، تجربة سابقة مع [كنفوكل] ليزر المسح المجهري مفيدة لاستكشاف الأخطاء وإصلاحها. وعلاوة على ذلك، قد يكون النظام الأولى إعداد يستغرق وقتاً طويلاً. وبمجرد الانتهاء من إعداد النظام، تعديلات صغيرة فقط غير مطلوبة عادة عند استخدام نفس المنوال المحورة وراثيا.
واستخدمت في هذه الدراسة، الزرد الأجنة بين 12 و 60 هبف لهذه التجارب. خلال هذه الفئة العمرية، الأجنة الصغيرة والمدمجة بسهولة في [اغروس] وسهولة تخديره مع تريكيني. ولكن الأجنة يمكن أن يصبح النمو وتأخر تنمويا تبعاً لطول التجربة. ولذلك، يجب الحرص على التأكد من أن الجنين يتم عرضه على نحو مناسب في نهاية التجربة.
فوتون متعدد تصوير الوقت الفاصل بين الغلة التصور عالية الاستبانة، ثلاثي الأبعاد، في الوقت الحقيقي للهجرة الخلية، وليس فقط يعزز القدرة على الدراسة في فيفو embryogenesis الزرد، ولكن يمكن أيضا تطبيقها على العديد من الأنظمة الأخرى. على الرغم من أن البروتوكول المحدد يركز على الهجرة الخلية العصبية كريست الزرد، هذا الأسلوب بسهولة يمكن تكييفها لأغراض التصوير الأخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وكان هذا العمل الدعم المالي من خلال المنح المقدمة من المعهد الوطني للعين للمعاهد الوطنية للصحة (K08EY022912-01) ورؤية البحوث الأساسية (P30 EY007003).
Acknowledgments
يشكر المؤلفون توماس شيلينغ للاهداء يرجى الأسماك تيراغرام (sox10:eGFP)، وماري هالوران للاهداء يرجى الأسماك تيراغرام(foxd3:GFP) .
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breeding Tanks with Dividers | Aquaneering | ZHCT100 | Crossing Tank Set (1.0-liter) Clear Polycarbonate with Lid and Insert |
| M205 FA Combi-Scope | Leica Microsystems CMS GmbH | Stereofluorescence Microscope - FusionOptics and TripleBeam | |
| Sodium Chloride | Millipore (EMD) | 7760-5KG | Double PE sack. CAS No. 7647-14-5, EC Number 231-598-3 |
| Potassium Chloride | Millipore (EMD) | 1049380500 | Potassium chloride 99.999 Suprapur. CAS No. 7447-40-7, EC Number 231-211-8. |
| Calcium Chloride Dihydrate | Fisher Scientific | C79-500 | Poly bottle; 500 g. CAS No. 10035-04-8 |
| Magnesium Sulfate (Anhydrous) | Millipore (EMD) | MX0075-1 | Poly bottle; 500 g. CAS No. 7487-88-9, EC Number 231-298-2 |
| Methylene Blue | Millipore (EMD) | 284-12 | Glass bottle; 25 g. Powder, Certified Biological Stain |
| Sodium Bicarbonate | Millipore (EMD) | SX0320-1 | Poly bottle; 500 g. Powder, GR ACS. CAS No. 144-55-8, EC Number 205-633-8 |
| N-Phenylthiourea | Sigma | P7629-25G | >98%. CAS Number 103-85-5, EC Number 203-151-2 |
| Dimethylsulfoxide | Sigma | D8418-500ML | Molecular Biology grade. CAS Number 67-68-5, EC Number 200-664-3 |
| Tricaine Methanesulfonate | Western Chemical Inc. | MS222 | Tricaine-S |
| Low-Melt Agarose | ISC Bioexpress | E-3112-25 | GeneMate Sieve GQA Low Melt Agarose, 25 g |
| Open Bath Chamber | Warner Instruments | RC-40HP | High Profile |
| Glass Coverslips | Fisher Scientific | 12-545-102 | Circle cover glass. 25 mm diameter |
| High Vacuum Grease | Fisher Scientific | 14-635-5C | 2.0-lb. tube. DOW CORNING CORPORATION 1658832 |
| Quick Exchange Platform | Warner Instruments | QE-1 | 35 mm |
| Stage Adapter | Warner Instruments | SA-20LZ-AL | 16.5 x 10 cm |
| TC SP5 MP multi-photon microscope | Leica Microsystems CMS GmbH | ||
| Mai Tai DeepSee Ti-Sapphire Laser | SpectraPhysics | ||
| Laser Safety Box | Leica Microsystems CMS GmbH | ||
| Leica Application Suite X (LAS X) Software | Leica Microsystems CMS GmbH | ||
| Photoshop CS 6 Version 13.0 x64 Software | Adobe | ||
| iMovie Version 10.1.4 Software | Apple |
References
- Barembaum, M., Bronner-Fraser, M. Early steps in neural crest specification. Sem Cell Dev Biol. 16, 642-646 (2005).
- Gage, P. J., Rhoades, W., Prucka, S. K., Hjalt, T. Fate maps of neural crest and mesoderm in the mammalian eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 46 (11), 4200-4208 (2005).
- Minoux, M., Rijli, F. M. Molecular mechanisms of cranial neural crest cell migration and patterning in craniofacial development. Development. 137, 2605-2621 (2010).
- Trainor, P. A. Specification of neural crest cell formation and migration in mouse embryos. Sem Cell Dev Biol. 16, 683-693 (2005).
- Johnston, M. C., Noden, D. M., Hazelton, R. D., Coulombre, J. L., Coulombre, A. Origins of avian ocular and periocular tissues. Exp Eye Res. 29, 27-43 (1979).
- Bohnsack, B. L., Kahana, A. Thyroid hormone and retinoic acid interact to regulate zebrafish craniofacial neural crest development. Dev Biol. 373, 300-309 (2013).
- Chawla, B., Schley, E., Williams, A. L., Bohnsack, B. L. Retinoic acid and pitx2 regulate early neural crest survival and migration in craniofacial and ocular development. Birth Defects Res B Dev Reprod Toxicol. , (2016).
- Trainor, P. A., Tam, P. P. L. Cranial paraxial mesoderm and neural crest cells of the mouse embryo-codistribution in the craniofacial mesenchyme but distinct segregation in branchial arches. Development. 121 (8), 2569-2582 (1995).
- Hong, C. S., Saint-Jeannet, J. P. Sox proteins and neural crest development. Sem Cell Dev Biol. 16, 694-703 (2005).
- Steventon, B., Carona-Fontaine, C., Mayor, R. Genetic network during neural crest induction: from cell specification to cell survival. Sem Cell Dev Biol. 16, 647-654 (2005).
- Dressler, S., et al. Dental and craniofacial anomalies associated wth Axenfeld-Rieger syndrome with PITX2 mutation. Case Report Med. , 621984 (2010).
- Ozeki, H., Shirai, S., Ikeda, K., Ogura, Y. Anomalies associated with Axenfeld-Rieger syndrome. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 237 (9), 730-734 (1999).
- Strungaru, M. H., Dinu, I., Walter, M. A. Genotype-phenotype correlations in Axenfeld-Rieger malformation and glaucoma patients with FOXC1 and PITX2 mutations. Invest Ophthalmol Vis Sci. 48, 228-237 (2007).
- Tumer, Z., Bach-Holm, D. Axenfeld-Rieger syndrome and spectrum of Pitx2 and Foxc1 mutations. Eur J Hum Genet. 17, 1527-1539 (2009).
- Schoner, K., et al. Hydrocephalus, agenesis of the corpus callosum, and cleft lip/palate represent frequent associations in fetuses with Peters plus syndrome and B3GALTL mutations. Fetal PPS phenotypes, expanded by Dandy Walker cyst and encephalocele. Prenat Diagn. 33 (1), 75-80 (2013).
- Aliferis, K., et al. A novel nonsense B3GALTL mutation confirms Peters plus syndrome in a patient with multiple malformations and Peters anomaly. Ophthalmic Genet. 31 (4), 205-208 (2010).
- Lesnik Oberstein,, S, A., et al. Peters Plus syndrome is caused by mutations in B3GALTL, a putative glycosyltransferase. Am J Hum Genet. 79 (3), 562-566 (2006).
- Brittijn, S. A., et al. Zebrafish development and regeneration: new tools for biomedical research. Int J Dev Biol. 53, 835-850 (2009).
- Bohnsack, B. L., Kasprick, D., Kish, P. E., Goldman, D., Kahana, A. A zebrafish model of Axenfeld-Rieger Syndrome reveals that pitx2 regulation by retinoic acid is essential for ocular and craniofacial development. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (1), 7-22 (2012).
- Williams, A. L., Eason, J., Chawla, B., Bohnsack, B. L. Cyp1b1 regulates ocular fissure closure through a retinoic acid-independent pathway. Invest Ophthalmol Vis Sci. 58 (2), 1084-1097 (2017).
- Curran, K., Raible, D. W., Lister, J. A. Foxd3 controls melanophore specification in the zebrafish neual crest by regulation of Mitf. Dev Biol. 332 (2), 408-417 (2009).
- Dutton, K., Dutton, J. R., Pauliny, A., Kelsh, R. N. A morpholino phenocopy of the colourless mutant. Genesis. 30 (3), 188-189 (2001).
- Dutton, K. A., et al. Zebrafish colourless encodes sox10 and specifies non-ectomesenchymal neural crest fates. Development. 128 (21), 4113-4125 (2001).
- Kucenas, S., Takada, N., Park, H. C., Woodruff, E., Broadie, K., Appel, B. CNS-derived glia ensheath peripheral nerves and mediate motor root development. Nat Neurosci. 11, 143-151 (2008).
- Denk, W., Strickler, J., Webb, W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248 (4951), 73-76 (1990).
- Helmchen, F., Denk, W. Deep tissue two-photon microscopy. Nat Methods. 2 (12), 932-940 (2005).
- Denk, W., Delaney, K. Anatomical and functional imaging of neurons using 2-photon laser scanning microscopy. J Neurosci Methods. 54 (2), 151-162 (1994).
- Bohnsack, B. L., Gallina, D., Kahana, A. Phenothiourea sensitizes zebrafish cranial neural crest and extraocular muscle developmnt to changes in retinoic acid and insulin-like growth factor signaling. PLoS ONE. 6, e22991 (2011).
- Gfrerer, L., Dougherty, M., Laio, E. C. Visualization of craniofacial development in the sox10:kaede transgenic zebrafish line using time-lapse confocal microscopy. J Vis Exp. (79), e50525 (2013).
- Lopez, A. L. R., Garcai, M. D., Dickinson, M. E., Larina, I. V. Live confocal microscopy of the developing mouse embryonic yolk sac vasculature. Methods Mol Biol. 1214, 163-172 (2015).
- McGurk, P. D., Lovely, C. B., Eberhart, J. K. Analyzing craniofacial morphogenesis in zebrafish using 4D confocal microscopy. J Vis Exp. (83), e51190 (2014).
- Nowotschin, S., Ferrer-Vaquer, A., Hadjantonakis, A. K. Imaging mouse development with confocal time-lapse microscopy. Methods Enzymol. 476, 351-377 (2010).
