Summary
Düzenleme çoğu yetişkin organizmalarda tümörleri ile ilgili genler Homeobox genleri bulunmaktadır. Biz onların karşılaştırmalı ifade immunohistokimyasal ve gerçek zamanlı PCR analizleri, normal ve inflamatuar burun mucosae ve onlara olası tanı ve tedavi hedefleri kullanmak için sinonasal neoplazmlar tarafından araştırdık.
Abstract
OTX (HB) homeobox genleri embriyonik morfogenez ve yetişkin organizmalarda koku epitel gelişimi sırasında ifade edilir. Bu genlerinde meydana gelen mutasyonlar kez insan tumorigenesis ilgili. Veri ile ilgili OTX genler ve burun boşluğuna tümörler arasındaki olası korelasyon bugün mevcuttur. Bu çalışmanın amacı, OTX1 ve OTX2 olarak nazal tümör gelişiminde moleküler belirteçleri kabul edilebilir eğer anlamaktır. Biz immunohistokimyasal ve gerçek zamanlı PCR analizleri OTX1 ve OTX2 genlerin ifade araştırmak için Burun kemiği ve sinonasal Adenokanserine seçildi. OTX1 ve OTX2 devamsızlık saatlerinizi tüm örneklerinde sinonasal bağırsak tipi Adenokanserine (ITACs). OTX2 mRNA sadece koku nöroblastomlar (ONs) ifade edildi iken OTX1 mRNA sadece sigara-Intestinal tip Adenokanserine içinde (NITACs) tespit edilmiştir. OTX1 ve OTX2 genler için fark gen ekspresyonu sinonasal tümör farklı tür ayırt edilebilmesi için yararlı bir moleküler işaretçisi olabilir göstermiştir.
Introduction
OTX HB genler (otd) Drosophila orthodenticle genlerin omurgalı homologue ve onlar normalde sırasında embriyonik morfogenez ifade edilir transkripsiyon faktörleri için kodlamak, ama onlar da farklı fonksiyonları ile yetişkin canlı ifade edilebilir . Embriyonik gelişim sırasında hücre kimliğini, hücre farklılaşma ve vücut axis¹ konumlandırma belirtimi kontrol ediyorlar. OTX ailesi farklı işlevler görüntülemek OTX1 ve OTX2 gen içerir. OTX1 beyin ve duyu organı geliştirme ilgilenmektedir. Yetişkin canlı duyu organları ifade edilir ve2hipofiz ön LOB düşük seviyelerde sentezlenir; Bu da hematopoiesis, hematopoetik pluripotent ve progenitör hücrelerin3ifade bir rol oynar. OTX2 rostral başından gelişiminde ilgilenmektedir ve onun çevrilmiş protein eylemleri bir morphogen olarak hangi diğer genler yoluyla bir degrade üretir çünkü aktif veya böylece hücreye katkıda spatio-zamansal bir şekilde bastırılmış nükleer silahların yayılmasına karşı ve farklılaşma. Yetişkin organizmada OTX2 sadece choroid plexus ve epifiz bezi4' te bulunur.
OTX genlerdeki mutasyonlar kez insan Konjenital, somatik veya metabolik kusurları görünümünü ilişkilidir. Onlar düzgün hücresel büyüme ve/veya farklılaşma5kontrol etmek mümkün değilse kazanç veya kaybın OTX genlerdeki mutasyonlar tumorigenesis teşvik. Kanserini ve kanserleri de olduğu gibi birçok solid tümör (örn., medulloblastomas6, agresif non-Hodgkin kanserleri2, meme karsinomlar7, kolorektal kanserler8ve Retinoblastom9), kuralsız OTX HB genler iyi belgelenmiş10ifadesidir. Buna ek olarak, OTX2 mutasyonlar anophthalmia ve microphtalmia11 bu gen göz geliştirme kontrolü için çok önemli rolü nedeniyle durumlarında gösterilmiştir.
Katı neoplazmlar bağlamında, moleküler ve fenotipik işaretleri keşfi tanı, sınıflandırma ve tümör11burun ve paranazal köken de dahil olmak üzere, çeşitli tedavi için önemli bir sorun olduğunu. sinüsler. Aslında, bu rağmen bu alanlarda sadece mütevazı bir anatomik alan, Mukozal epitel, bezleri, yumuşak doku, kemik, kıkırdak veya sinirsel/nöroektodermal işgal, ve hematolymphoid hücreleri genellikle karmaşık ve histolojik olarak farklı kökeni için site olabilir tümör grupları. Neoplazmlar sinonasal yolu içeren farklı türde çeşitli ne genellikle üst aerodigestive sistem veya bile vücut12birçok yerinde boyunca görülen üstesinden özellikler mevcut. Sinonasal maligniteler nadirdir ve 1:100,000 nüfuslu bir yıllık insidansı dünya çapında mevcut ve bu yüzden bu çalışmalar ile ilgili tumorigenesis ve alternatif tedavi stratejileri test yolları önler. Buna rağmen teknikleri, Imaging'de gelişmeler cerrahi yaklaşımlar ve radyoterapi sinonasal kanser klinik yönetiminin iyileştirilmiştir. Ayrıca, hücre hatları gibi hayvan modelleri ve kanser genetik profilleme gelişimi şu anda gelecekte hedeflenen antikanser terapiler13temelini oluşturmaktadır. Bugüne kadar neoplazmlar OTX1 ve/veya OTX2 ifadede burun boşluğuna, paranazal sinüsler ve nazofarinksi ilgili hiçbir raporlar vardır. Daha önce meme kanseri7' OTX1 ve OTX2 dahil olan gözlemledim beri bu genler mevcut değil sadece normal nazal mukoza aynı zamanda burun boşluğuna içinde tümörler olup olmadığını merak etti. Biz "Ospedale di Circolo" Varese örneklerinde normal mukoza ve 1985 2012'ye toplanan ve Dünya Sağlık Örgütü (WHO) göre sınıflandırılmış Burun kemiği ve sinonasal Adenokanserine patoloji Bölümü elde edilen bu hedefe ulaşmak için Baş ve boyun tümörleri sınıflandırılması. Gerçek zamanlı PCR ve immünhistokimya analizleri çözümlemek seçtiğimiz ve bu tür tümör moleküler işaretleyiciler düşünülebilir eğer belirlemek için OTX1 ve OTX2 ifade değerlendirilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm çalışmaları (1975) Helsinki Bildirgesi ile aydınlatılmış onam yazılı ve Varese Insubria Üniversitesi etik kurul tarafından onaylanmış göre yapıldı.
1. toplama örnekleri
- Toplamak ve insan Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (FFPE) örnekleri WHO sınıflamasına göre baş ve boyun tümörleri14göre farklı alt gruplar bölmek.
Not: Aşağıdaki örnekleri burada kullandığımız: Normal sinonasal mukoza kontrolü (10 örnekleri); Ters Papilloma (IP, ICD-O kodu 8121/1); Sinonasal ITAC (ICD-O kodu 8144/3, 32 örnekleri); NITAC (ICD-O kodu 8140/3, 12 örnekleri); Adenoid Kistik Karsinom (ACC, ICD-O kodu 8200/3); Pleomorfik adenom (PA, ICD-O kodu 8941/3); (ICD-O kodu 9522/3, 13 örnekleri); Ayrıştırılan kötü nöroendokrin Karsinomu (PDNEC, ICD-O kodu 8041/3, 19 örnekleri); Nöroendokrin tümör (NET, ICD-O kod 8041/3).
2. İmmünokimya
-
Deparaffinization ve rehydration bölümleri
- Örnek slaytlar bir fırında 30 dk 60 ° C'de ısı ve su bir alkol serisi kullanarak 3 µm kalınlığında FFPE bölümleri rehydrate.
- Kısaca slaytları Ksilen 10 dakika yıkayın ve bu adımı yineleyin; 5 min için slaytlar %100 alkol yıkama ve % 95, % 85 ve % 75 alkol seri olarak kullanarak bu adımı yineleyin. 5 dakika içinde distile su slaytlarını durulayın.
-
Endojen etkinlik engelleme
- Endojen faaliyetleri % 3 sulu hidrojen peroksit 12 dk için slaytları yerleştirerek engellemek.
-
Antijen alma
- Antijen alma ile 10 mM bir mikrodalga tedavi 10 min için sitrat arabellek (pH 6) tedavisi ile gerçekleştirin.
-
Kuluçka birincil antikor ile
- TBS arabellek (pH 7,4) bölümlerinde yıkayın, sonra 10 dakika için engelleme çözüm ekleyin.
- TBS arabellek (pH 7,4) bölümlerinde yıkayın, sonra %0,2 Triton X ekleyin.
- Gecede keçi Anti-insan OTX2 antikor seyreltilmiş 1: 100 ile 4 ° C'de kuluçkaya.
-
Kuluçka ikincil antikor ile
- Biotinylated tavşan Anti-keçi ikincil antikor seyreltilmiş 1: 200 ABC-peroksidaz kompleksi tarafından takip ile oda sıcaklığında 1 h için bölümleri kuluçkaya ( Malzemeleri tablolarıgörmek).
-
İmmunoreaction geliştirme
- 3, 3'-diaminobenzidine tetrahydrochloride kullanarak immunoreaction geliştirmek ve Harris Hematoksilen ile çekirdeği counterstain.
-
Montaj ve görüntüleme
- Bir Hilal alkol ölçeği kullanarak bölümleri kurutmak ve Terpen kökenli bir takas madde kullanarak bunları açıklamak ( Tablo malzemelerigörmek). Montaj orta bölümleri embed, bölümleri bir mikroskop slaytta yer ve bölümleri bir optik mikroskobu gözlemlemek.
3. RNA çıkarma ve ters-transkripsiyon
-
RNA çıkarma
- RNA immunoprecipitation Protokolü (bakınız Bölüm 2.1) ilk adımı uygulayarak bölümleri ayıklamak ve slaytları distile suda tut. Günahı bölümleri ilgili Hematoksilen-parçaları ilgi tanımlamak için bölümler lekeli Eozin ile çakışıyor.
- FFPE örnekleri ( Tablo malzemelerigörmek) ve aşağıdaki prosedürü yerine getirin için ticari bir RNA ekstraksiyon kiti kullanarak RNA ayıklama gerçekleştirmek.
-
RNA ters-transkripsiyon
- Retro uyarlamak-RNA cDNA için ticari bir setini kullanın (bkz. Tablo reçetesi) protokol sonrası. Retro-uyarlamak en az 1000 ng birkaç çözümlemesi yapma toplam RNA'ın.
4. gerçek zamanlı PCR ve veri analizi
-
Gerçek zamanlı PCR
- Nicel gerçek zamanlı PCR analizleri (qRT-PCR) prob tabanlı teknoloji ile gerçekleştirmek ( Tablo malzemelerigörmek) ve termal cycler.
-
PCR reaksiyon karışımı hazırlanması
- Sonda tabanlı ana karışımı 12.5 µL PCR reaksiyon karışımının hazırlamak, OTX1, OTX2 ve ACTB her 1,25 µL probları (bkz. Tablo reçetesi) 50 ng cDNA ve nükleaz ücretsiz su toplam hacminin 25 µL.
- Bütün tepkiler nüsha ACTB gen gen ifade düzeyleri normale endojen denetimi olarak kullanarak gerçekleştirin.
- Plaka 1,109 x g 3 dk santrifüj kapasitesi ve deneme kadar ışık 4 ° C'de korunuyorsunuz plaka saklayın.
-
Termal cycler ayarlama
- 40 devredir 15 95 ° c termal cycler profil bir ilk sıcak başlaması ile birlikte döngüsü 50 ° c 2 dakika ve 10 dakika, 95 ° C kümesi ardından s ve bir final çevriminde 60 ° C'de 1 dak.
-
Gen ifade düzey analizleri
- ACTB gen endojen denetimini kullanarak karşılaştırmalı döngüsü eşik (ΔCt) yöntemi ile gen ifade düzeyleri normale.
- 2-ΔCt yöntemini kullanarak gen ifade düzeyini değerlendirin ve sonuçları arsa.
-
İstatistiksel analizler
- İstatistiksel analizler öğrencinin tkullanarak gerçekleştirmek-testi, p < 0,05 ile istatistiksel olarak anlamlı sonuçlar göz önüne alındığında.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Normal mukoza OTX genler siliyer pseudostratified türü solunum epitel ve submucosal glandüler hücreler (şekil 1A) için güçlü ve homojen nükleer reaktivite görülmektedir. Bulduk nükleer ifadede tüm NITACs örnekleri (şekil 1B), az ise veya immunoreactivity OTX1 için ITACs (şekil 1 c) vurgulandı. Yoğun immunoreactivity mevcut tüm ONs (şekil 1 d); PDNECs arasında OTX ifade çeşitli yoğunluk ve pozitif hücrelerinin (şekil 1E) yüzdesi. Chi kare ve/veya Fisher'ın tam testi ile istatistiksel analiz gerçekleştirilen immunohistokimyasal gösterdi ITAC örnekleri OTX genlerinde yokluğu istatistiksel olarak anlamlıydı (n = 23, p < 0,01).
Gerçek zamanlı PCR analizleri kontrol örnekleri (şekil 2A-B); OTX1 ve OTX2 genlerinde ifadeyi doğruladı OTX1 ama yok OTX2 NITAC örneklerinde ifade ve her iki genler tamamen downregulated ITACs (şekil 2A-B) içinde idi. İçinde örnekleri üzerinde sadece OTX2 gen ifade OTX1 downregulated ve PDNEC örnekleri arasında her iki genlerin ifade (şekil 2A-B) çeşitli bulduk.
Öğrenci t testi üzerinde gerçek zamanlı PCR yapılan denetimlerde ITACs vs OTX1 için istatistiksel olarak anlamlı veri doğruladı (n = 9, p < 0,05), denetimleri ONs vs (n = 6, p < 0,05), denetimleri vs PDNECs (n = 8, p < 0,05), ve OTX2 NITACs vs. kontrolü için (n = 5, p < 0,05), denetimleri ITACs vs (n = 9, p < 0,05), denetimleri ONs vs (n = 6, p < 0,05) ve denetimler PDNECs vs (n = 8, p < 0,05).
Resim 1 : OTX immunohistokimyasal ifadede denetim ve neoplastik dokulara temsilcisi görüntülerini. Sinyal (koyu kahverengi) 5 kontrol FFPE kısımlarında normal sinonasal mukoza(a)sigara bağırsak tipi Adenokanserine (NITACs) (B), 7 7 olgunun görünür peroksidaz Birleşik ikincil antikor tarafından geliştirilen tepki ortaya durumlarda koku nöroblastomlar (ONs) (D), 11 durumlarda kötü nöroendokrin Karsinom (PDNECs) (yok immunoreactivity tespit ederkenE), analiz 23 durumlarda bağırsak tipi Adenokanserine (ITACs), (C) farklı. DAB-Hematoksilen; Özgün büyütmeye: 200 x, ölçek çubuğu 100 µm =.
Resim 2 : OTX1 (A) ve OTX2 (B) mRNA ifade normal ve neoplastik burun dokularda gerçek zamanlı PCR analizi. Gerçek zamanlı PCR analizleri için aşağıdaki örnekleri kullanılmıştır: 5 FFPE bölümlerini kontrol normal mukoza, 5 sigara bağırsak tipi Adenokanserine (NITACs) durumlarında, bağırsak tipi Adenokanserine (ITACs) 9 olgunun, koku nöroblastomlar (ONs), 8 6 olgunun Kötü durumlarda nöroendokrin Karsinom (PDNEC) farklı. 2- ΔCt değerleri Y ekseni temsil ederken X ekseni üzerinde örnek türü, bildirilmektedir. Denetim ve tümörler arasında istatistiksel olarak anlamlı veri (p < 0,05) öğrencinin ttarafından elde-test ve yıldız ile vurgulanır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu çalışmada gösterir, mRNA düzeylerine göre ilk defa OTX1 ve OTX2 HB genler ifade normal sinonasal mukoza ve submucosal bezleri, inflamatuar polipler, sinonasal Schneiderian papillomas ve farklı epitel ve nöroektodermal neoplazmlar, Skuamöz Karsinom, bağırsak türü sinonasal Adenokanserine, Tükürük bezi tipi tümörler, nöroendokrin neoplazmlar ve ONs da dahil olmak üzere.
Değişiklikler ve sorun giderme:
RNA yıkımı önlemek için biz patoloji laboratuvar deparaffinization Protokolü uygulandı. Sonra slaytlar çizik, tüm örnekleri hızla soğutmalı ve daha fazla kadar kullanmak kuru buzun içinde depolanan. Daha sonraki analizler ve aseptik deneysel koşullar korumak için RNA contaminations önlemek için steril ipuçları ile Pipetler adanmış bir dizi kullanarak bir laminar akış Emanet mahallede gerçekleştirilen.
Teknik sınırlamaları:
Sinonasal boşluğu tümörleri genellikle nadir olduğundan tekniği asıl sınırlandırılması örnekleri kullanılabilirliğine dayanır. Çünkü RNA çekme--dan FFPE örnekleri analiz etmek zordur parçalanmış RNA içinde sonuçlar ayıklanan RNA'ın bir diğer önemli konu tutardır.
Önemi ile ilgili mevcut yöntemler:
Burun boşluğuna tümör tanısı genellikle röntgen analizleri, endoskopik muayene burun boşluğuna, tomografi, manyetik rezonans (RMN) ve biyopsi oluşur. Son yıllarda, cerrahi araçları gelişmeler ve teknikleri Imaging ilerlemesini sinonasal tümörler için tercih edilen strateji olarak endoskopik cerrahi açmıştı. Özellikle, bu teknik sinonasal tümör15farklı iyi huylu veya kötü huylu türleri için uygun olarak bildirilmiştir. Bizim teknik qRT-PCR üzerinde dayalı differentially örnekleri farklı tümörleri ayırt edebilirsiniz moleküler biyolojik tanımlaması sağlar: Aslında, biz her iki HB genlerinde ITACs yokluğu moleküler işaretleyiciler bunun için kullanılabileceğini kanıt Tümör gibi NITACs OTX2 yokluğu türü. Ayrıca, bu teknik Biyopsiyi hemen sonra uygulanabilir ve az 6 saat gün veya hafta hastaneden rapor için gerekli ile ilgili kesin sonuçlar verebilir.
Gelecekteki uygulamalar:
Gen ve protein ifade düzeyleri gerçek zamanlı PCR analizleri, Western blot ve ayirt ile özel antikorlar tespit sadece OTX1 ve OTX2 kullanarak OTX1 ve OTX2 HB genlerin, aynı zamanda p53 aile ifade düzeyleri analiz dahil bizim gelecekteki çalışmaları. Biz daha önce OTX1 ifade p53 meme kanseri7tarafından düzenlenmiştir gösterdi beri böyle bir düzenleme de burun boşluğuna tümörler olup olmadığını anlamak için ilginç olabilir. Bir ayirt tahlil ve Kromatin Immunoprecipitation (ChiP) tahlil, sırasıyla, bir protein-protein ve p53 ve OTXs arasında bir DNA-protein etkileşim ortaya çıkarabilir. Böyle bir bağlantı bulunamazsa, p53 (ve aile üyeleri, p63 ve p73), hedeflenen susturmak ortaya aşırı ifade veya aşağı-Yönetmeliğin OTX genlerin p53 üzerinde bağımlı olup olmadığını.
p53 kaybı kendisi ya da p53 için sinyal yolları tedirginlikler işlev p53 mutasyonu aracılığıyla, insan kanser16çoğunluğu ortak özelliğidir. P53 mutasyonları küme DNA'ya bağlanıcı etki alanı içindeki çoğu; Bu nedenle, DNA'ya bağlanıcı değiştirilmez, transkripsiyon genlerdeki değişikliklerin mutant p53 etkinliği16anahtarı olabilir düşündüren kritik işlevi faaliyettir. p53 mutasyonları sinonasal kanser, % 77, genel bir frekans ile ortak bir özelliği olarak bildirilmiştir ve Derneği adenokarsinom ve ahşap-toz pozlama17gösteriyorlar. Böylece, bizim örnekleri, mRNA ve protein seviyesini (qR-PCR ve Western Blot analizi tarafından) ve nasıl yapılacağını belirlemek veya etkinleştirme/ihracı mutasyonlar varlığı dışlamak için bu gen gerçekleştirmek için ilginç olacaktır. Son olarak, bir tümör tipi belirli tekrarlayan mutasyon ise bulundu, mühendislik hücreleri ve bu mutasyon liman fareler (ile bir mutant gen) üretmek için önemli olacağını ve mutasyon hastalık özetlemek inceleyin.
Kritik adımlar:
Bu çalışmanın önemli adımlar içerir iyi saklı örnekleri, elde RNA koruyucu tampon veya en az 8 µm kalınlığında FFPE örnekleri ve en az 200 çıkarma depolanan biyopsi olarak ng qRT-PCR analizleri gerçekleştirmek için RNA'ın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu eser tarafından Centro Grandi Strumenti Università dell'Insubria, Fondazione Comunitaria del Varesotto, Fondazione del desteklenmiştir Monte di Lombardia ve Fondazione Anna Villa e Felice Rusconi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation | Applied Biosystem | AM1975 | |
| High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit | Applied Biosystem | 4368814 | |
| TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG | Applied Biosystem | 4326614 | |
| ABI Prism 7000 | Applied Biosystem | 270001857 | |
| ACTB probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX1 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| OTX2 probe | Applied Biosystem | Out of production. Sequence protected by copyright | |
| Acqueous Hydrogen Peroxide | Merk | 1072090250 | |
| Citrate Buffer | Sigma-Aldrich | 20276292 | |
| Triton | Sigma-Aldrich | 101473728 | |
| Tris | Merk | 108382 | |
| NaCl | Merk | 106404 | |
| Goat Anti-OTX2 Antibody | Vector Laboratories | Out of production. Catalog number not available | |
| Rabbit Anti-Goat Antibody | Vector Laboratories | BA5000 | |
| ABC-Peroxidase Complex | Vector Laboratories | PK6100 | |
| 3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) | Sigma-Aldrich | D5905 | |
| Harris Hematoxylin | Bioptica | 0506004/L | |
| Pertek | Kaltek SRL | 1560 | |
| BioClear | Bioptica | W01030799 |
References
- Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36 (1), 30-37 (1993).
- Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma. American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).
- Levantini, E., et al. Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100 (18), 10299-10303 (2003).
- Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain. J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).
- Abate-Shen, C. Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence? Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).
- de Haas, T., et al. OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).
- Terrinoni, A., et al. OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53. Oncogene. 30 (27), 3096-3103 (2001).
- Yu, K., et al. OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition. Biochem. Biophys Res Commun. 44 (1), 1-5 (2014).
- Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma. J. Neurochem. 111 (1), 250-263 (2009).
- Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis. J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).
- Cordes, B., et al. Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification. Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).
- Stelow, E. B., Bishop, J. A. Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base. Head Neck Pathol. 11 (1), 3-15 (2017).
- Llorente, J. L., et al. Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances. Nat. Rev. Clin. Oncol. 11 (8), 460-472 (2014).
- Sidransky, D. World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors. 9, WHO Press. (2005).
- Radulesku, T., et al. Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118 (4), 248-250 (2017).
- Muller, P. A. J., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature cell biology. 15 (1), 2-8 (2013).
- Holmila, R., et al. Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer. Mutat Res. 686 (1-2), 9-14 (2010).
