Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Cancer Research

تحديد OTX1 و OTX2 كاثنين من المؤشرات الجزيئية المحتملة للأورام السرطانية سينوناسال و Neuroblastomas حاسة الشم

doi: 10.3791/56880 Published: February 28, 2019
* These authors contributed equally

Summary

هي المورثات هوميوبوكس الجينات التنظيمية التي غالباً ما ترتبط مع الأورام السرطانية في الكائنات الحية الكبار. نحن التحقيق في التعبير عنها مقارنة بالمناعي وتحليل PCR في الوقت الحقيقي، في ماكس العادي والتهاب الآنف والأورام سينوناسال من أجل استخدامها كأهداف تشخيصية وعلاجية ممكنة.

Abstract

يتم التعبير عن المورثات هوميوبوكس (غبطة) أوتكس أثناء morphogenesis الجنينية وتنمية حاسة الشم ظهارة في الكائنات الحية الكبار. وكثيراً ما تتصل بالطفرات التي تحدث في هذه الجينات توموريجينيسيس في الإنسان. لا تتوفر بيانات اليوم فيما يتعلق بالعلاقة الممكنة بين الجينات أوتكس وأورام في تجويف الآنف. والهدف من هذا العمل أن نفهم إذا كان يمكن اعتبار OTX1 و OTX2 الواسمات الجزيئية في تطوير أورام الآنف. اخترنا أدينوكارسينوماس الآنف وسينوناسال للتحقيق في التعبير عن الجينات OTX1 و OTX2 من خلال المناعي وتحاليل PCR الوقت الحقيقي. وتغيب OTX1 و OTX2 في جميع عينات من سينوناسال المعوية من نوع "أدينوكارسينوماس" (إيتاكس). تم تحديد مرناً OTX1 فقط في عدم المعوية "نوع أدينوكارسينوماس" (نيتاكس) في حين أعرب مرناً OTX2 إلا في "نيوروبلاستوماس حاسة الشم" (الوظائف). لقد أظهرنا أن التعبير الجيني التفاضلي للجينات OTX1 و OTX2 قد تكون علامة جزيئية مفيدة للتمييز بين أنواع مختلفة من الأورام سينوناسال.

Introduction

أوتكس غبطة الجينات هي المناظرة الفقاريات الجينات المورفولوجية أورثودينتيكلي (أوتد) وهي ترميز لعوامل النسخ التي عادة ما يتم التعبير عنها أثناء morphogenesis الجنينية، ولكن يمكن أيضا أن أعربوا في الكائن الحي الكبار مع وظائف مختلفة . خلال التطور الجنيني يسيطرون على تحديد هوية الخلية وتمايز الخلية، وتحديد المواقع من axis¹ الجسم. وتشمل الأسرة أوتكس الجينات OTX1 و OTX2 التي تعرض وظائف مختلفة. وتشارك OTX1 في المخ ونمو الأعضاء الحسية. في الكائن الحي الكبار، ويتم التعبير عن في الحواس ويتم نسخها عند مستويات منخفضة في الفص الأمامي من الغدة النخامية2؛ كما أنها تلعب دوراً في هيماتوبويسيس، التي أعرب عنها في pluripotent المكونة للدم و الخلايا السلف3. وتشارك في تطوير الرأس روسترال OTX2 وأفعالها البروتين المترجمة مورفوجين لأنه يولد تدرج من خلال الجينات الأخرى التي هي تنشيط أو قمعت بطريقة الزمانية، مما يسهم في الخلية الانتشار والتفرقة. يوجد OTX2 في الكائن الحي الكبار، وحصرا في الضفيرة والغدة الصنوبرية شرويد4.

الطفرات في الجينات أوتكس غالباً ما ترتبط بظهور عيوب خلقية أو جسدية أو الأيض البشري. يمكن أن تعزز الطفرات المكسب أو الخسارة في جينات أوتكس توموريجينيسيس إذا لم تكن قادرة على التحكم بشكل صحيح في النمو و/أو التمايز الخلوي5. باللوكيميا والأورام الليمفاوية، وكذلك كما هو الحال في العديد من الأورام الصلبة (مثلاً، ميدولوبلاستوماس6، والعدوانية غير هودجكين الأورام الليمفاوية2و سرطانات الثدي7، سرطان القولون والمستقيم8والشبكيه9)، حررت التعبير عن الجينات غبطة أوتكس هي موثقة جيدا10. وبالإضافة إلى ذلك، أثبتت الطفرات OTX2 في حالات أنوفثالميا وميكروفتالميا11 نظراً للدور الحاسم لهذا الجين في مراقبة التنمية العين.

في السياق الأورام الصلبة، يتم اكتشاف علامات جزيئية والمظهرية تحديا هاما للتصنيف والتشخيص والعلاج للعديد من أنواع الورم11، بما في ذلك تلك التي تنشأ في تجويف الآنف والانفيه الجيوب الأنفية. في الواقع، على الرغم من أن احتلال هذه المناطق فقط مسافة تشريحية متواضعة، ظهارة مخاطية، الغدد، الأنسجة الرخوة، والعظام، والغضاريف أو العصبية/نيوروكتوديرمال، والخلايا هيماتوليمفويد يمكن أن يكون غالباً الموقع لأصل معقدة ومختلفة الأشيع مجموعات من الأورام. أنواع مختلفة من الأورام الخبيثة التي تنطوي على المسالك سينوناسال يقدم مجموعة متنوعة من الميزات التي التغلب على ما يعتبر عادة في المسالك أيروديجيستيفي العلوي أو حتى في جميع أنحاء معظم أجزاء الجسم12. سينوناسال الأورام الخبيثة نادرة، وتعرض الإصابة سنوية 1: 100.000 نسمة في جميع أنحاء العالم، وحتى يمنع هذا دراسات تتعلق بسبل المشاركة في توموريجينيسيس واختبار استراتيجيات العلاج البديل. وعلى الرغم من ذلك، أوجه التقدم في تقنيات، التصوير النهج الجراحية، والعلاج بالأشعة قد تحسنت الإدارة السريرية لسرطان سينوناسال. وعلاوة على ذلك، وضع خطوط الخلايا، فضلا عن نماذج حيوانية والتنميط الجيني السرطان حاليا تشكل الأساس ل علاجات السرطان المستهدفة مستقبلا13. وحتى الآن، لا توجد تقارير بشأن التعبير OTX1 و/أو OTX2 في الأورام تجويف الآنف والجيوب الأنفية والبلعوم الأنفي. نظراً لأننا لاحظنا سابقا أن OTX1 و OTX2 متورطون في سرطان الثدي7، تساءلنا إذا هذه الجينات يمكن أن تكون موجودة ليس فقط في الغشاء المخاطي للأنف العادية ولكن أيضا أورام في تجويف الآنف. للوصول إلى هذا الهدف التي حصلنا عليها من قسم علم الأمراض من "سيركولو المستشفى دي" في فاريزي عينات من الغشاء المخاطي الطبيعي، والأنف وسينوناسال أدينوكارسينوماس التي تم جمعها من عام 1985 إلى عام 2012، وتصنف وفقا لمنظمة الصحة العالمية (WHO) تصنيف "أورام العنق" والرأس. أننا نختار لتحليلها من خلال تحليل PCR وإيمونوهيستوتشيميستري في الوقت الحقيقي ونحن تقييم التعبير OTX1 و OTX2 لتحديد إذا كان يمكن اعتبار المؤشرات الجزيئية لهذه الأنواع من الأورام.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

جميع الدراسات التي أجريت وفقا لإعلان هلسنكي (1975) كتب الموافقة عن علم، ووافقت عليها "اللجنة الأخلاقية" جامعة إينسوبريا في فاريزي.

1-جمع العينات

  1. جمع وتقسيم جميع العينات البشرية Formalin-Fixed Paraffin-Embedded (فب) إلى مجموعات فرعية مختلفة وفقا لتصنيف منظمة الصحة العالمية ل الرأس والرقبة الأورام14.
    ملاحظة: هنا استخدمنا العينات التالية: الغشاء المخاطي سينوناسال الطبيعي كعنصر تحكم (10 عينات)؛ الورم الحليمي مقلوب (IP, رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8121/1)؛ سينوناسال إيتاك (رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8144/3، عينات 32)؛ نيتاك (رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8140/3، عينات 12)؛ سرطان غدانيه كيسية (لجنة التنسيق الإدارية، رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8200/3)؛ الورم الحميد بليومورفيك (السلطة الفلسطينية، رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8941/3)؛ على (رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 9522/3، 13 عينة)؛ سيئة "سرطان الغدد الصم العصبية متباينة" (بدنيك، رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8041/3، عينات 19)؛ ورم الجهاز الهرموني (صافي، رمز التصنيف الدولي للأمراض-O 8041/3).

2-إيمونوتشيميستري

  1. ديبارافينيزيشن والإماهة من أقسام
    1. حرارة شرائح العينة في فرن عند 60 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة وترطيب 3 ميكرومتر سميكة FFPE الأقسام باستخدام سلسلة الكحول إلى الماء.
    2. بإيجاز، يغسل الشرائح في زيلين نفط لمدة 10 دقائق وكرر هذه الخطوة؛ يغسل الشرائح لمدة 5 دقائق في الكحول 100% وكرر هذه الخطوة باستخدام الكحول 95%، 85%، و 75% متسلسل. شطف الشرائح لمدة 5 دقائق في الماء المقطر.
  2. حظر نشاط الذاتية
    1. حظر نشاط الذاتية عن طريق وضع الشرائح في 3% فوق أكسيد الهيدروجين مائي لمدة 12 دقيقة.
  3. استرجاع مستضد
    1. إجراء استرداد مستضد بالتعامل مع 10 ملم سترات المخزن المؤقت (الرقم الهيدروجيني 6) لمدة 10 دقائق في علاج ميكروويف.
  4. الحضانة مع جسم الأولية
    1. أغسل المقاطع في تبس المخزن المؤقت (درجة الحموضة 7.4)، ثم إضافة حل حظر لمدة 10 دقائق.
    2. أغسل المقاطع في تبس المخزن المؤقت (درجة الحموضة 7.4)، ثم إضافة 0.2% X تريتون.
    3. تبني بين عشية وضحاها في 4 درجات مئوية مع الماعز الإنسان المضادة OTX2 جسم المخفف 1: 100.
  5. الحضانة مع الجسم المضاد الثانوي
    1. احتضان الفروع ح 1 في درجة حرارة الغرفة مع بيوتينيلاتيد أرنب جسم الماعز المضادة الثانوية المخفف 1: 200 متبوعاً بمجمع ABC-البيروكسيديز (انظر الجداول من المواد).
  6. وضع في إيمونوريكشن
    1. وضع إيمونوريكشن استخدام 3، 3 '--ديامينوبينزيديني تيتراهيدروتشلوريدي وكونتيرستين الأنوية مع هاريس الهيماتوكسيلين.
  7. التركيب والتصوير
    1. يذوي الأقسام استخدام مقياس الكحول هلال وتوضيح لهم باستخدام مادة إزالة المنشأ تربين (انظر الجدول للمواد). تضمين المقاطع في تصاعد المتوسطة ووضع المقاطع على شريحة مجهر ومراقبة الأقسام من خلال مجهر ضوئي.

3. رنا الاستخراج والنسخ العكسي

  1. استخراج الحمض النووي الريبي
    1. استخراج الحمض النووي الريبي من الفروع بتنفيذ الخطوة الأولى من بروتوكول إيمونوبريسيبيتيشن (انظر الفرع 2-1)، وتبقى الشرائح في ماء مقطر. تداخل الأقسام أونستينيد مع المقابلة ثم توضع الملون الفروع بغية تحديد الأجزاء ذات الأهمية.
    2. القيام باستخراج الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة أدوات استخراج الحمض النووي الريبي تجارية لعينات FFPE (انظر الجدول للمواد) وإرشادات الشركة المصنعة التالية.
  2. الجيش الملكي النيبالي عكس-النسخ
    1. استخدام مجموعة أدوات تجارية للرجعية-نسخ الحمض النووي الريبي إلى كدنا (انظر الجدول للمواد) يتبع البروتوكول. الرجعية-نسخ على الأقل 1,000 نانوغرام من مجموع الحمض النووي الريبي لإجراء تحليلات عدة.

4. بكر في الوقت الحقيقي وتحليل البيانات

  1. بكر في الوقت الحقيقي
    1. إجراء تحاليل PCR الكمي في الوقت الحقيقي (قرة-PCR) مع التكنولوجيا القائمة على التحقيق (انظر الجدول للمواد) و cycler حرارية.
  2. إعداد مزيج تفاعل PCR
    1. إعداد مزيج تفاعل PCR استخدام 12.5 ميليلتر من مزيج الرئيسي القائم على التحقيق، ويَسْبِر ميليلتر 1.25 كل من OTX1 و OTX2 وأكتب (انظر الجدول للمواد)، 50 نانوغرام من كدنا، وخالية من نوكلاس المياه تصل إلى 25 ميليلتر من الحجم الإجمالي.
    2. أداء جميع ردود الفعل في ثلاث نسخ باستخدام الجينات أكتب كالرقابة الذاتية لتطبيع مستويات التعبير الجيني.
    3. الطرد المركزي اللوحة في س 1,109 ز لمدة 3 دقائق وتخزين لوحة محمية من الضوء في 4 درجات مئوية حتى التجربة.
  3. إعداد cycler الحرارية
    1. تعيين التشكيل الجانبي cycler الحرارية مع بداية ساخنة أولى دورة على 50 درجة مئوية لمدة 2 دقيقة و 95 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، تليها دورات 40 في 95 درجة مئوية لمدة 15 ثانية ودورة نهائي في 60 درجة مئوية لمدة 1 دقيقة.
  4. تحليلات مستوى التعبير الجيني
    1. تطبيع مستويات التعبير الجيني من خلال طريقة العتبة (ΔCt) دورة مقارنة باستخدام الجينات أكتب كالرقابة الذاتية.
    2. تقييم مستويات التعبير الجيني باستخدام الأسلوب 2-ΔCt والأرض النتائج.
  5. التحليلات الإحصائية
    1. إجراء التحليلات الإحصائية باستخدام الطالب تي--اختبار، والنظر في نتائج يعتد بها إحصائيا مع ف < 0.05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

لقد لاحظنا في الغشاء المخاطي الطبيعي مفاعليه نووية قوية ومتجانسة للجينات أوتكس في ظهارة تنفسية من نوع بسيودوستراتيفيد عضو وفي الخلايا الغدية submucosal (الشكل 1A). وجدنا أن أبرز تعبير النووية ل OTX1 في جميع عينات نيتاكس (الشكل 1B)، بينما يذكر أو تغيب إيمونوريكتيفيتي في إيتاكس (الشكل 1). إيمونوريكتيفيتي مكثفة كان حاضرا في جميع الوظائف (الشكل 1)؛ بدنيكس، أوتكس التعبير تفاوتاً كبيرا في كثافة والنسبة المئوية للخلايا إيجابية (الشكل 1E). إجراء التحليل الإحصائي مع تشي مربع و/أو اختبار فيشر الدقيق المناعي أظهرت أن غياب الجينات أوتكس في عينات إيتاك معتدا به إحصائيا (n = 23, ف < 0.01).

وأكدت تحاليل PCR الوقت الحقيقي الجينات OTX1 و OTX2 في عينات مراقبة (الشكل 2Aب)؛ وأعرب عن OTX1 ولكن لا OTX2 في عينات نيتاك وكلا الجينات تماما دوونريجولاتيد في إيتاكس (الشكل 2Aب). في عينات وجدنا فقط التعبير عن الجينات OTX2 بينما كان OTX1 دوونريجولاتيد، وتفاوتا نماذج بدنيك كلا الجينات (الشكل 2Aب).

أكد الاختبار t للطالب على بكر في الوقت الحقيقي البيانات إحصائيا ل OTX1 في الضوابط مقابل إيتاكس (n = 9، ف < 0.05)، الضوابط مقابل الوظائف (n = 6، ف < 0.05)، الضوابط مقابل بدنيكس (n = 8، ف < 0.05)، و OTX2 في عنصر التحكم مقابل نيتاكس (n = 5، ف < 0.05)، الضوابط مقابل إيتاكس (ن = 9، ف < 0.05)، الضوابط مقابل الوظائف (n = 6، ف < 0.05)، وضوابط مقابل بدنيكس (ن = 8، ف < 0.05).

Figure 1
الشكل 1 : صور الممثل أوتكس المناعي التعبير في عنصر التحكم والأنسجة الورمية. رد فعل البلدان المتقدمة النمو بالجسم المضاد الثانوي مترافق البيروكسيديز كشف الإشارة (بني داكن) كانت مرئية في 5 أقسام FFPE تحكم الغشاء المخاطي سينوناسال العادي (A)، 7 حالات من عدم-المعوية-نوع أدينوكارسينوماس (نيتاكس) (ب)، 7 الحالات neuroblastomas حاسة الشم (ONs) (د)، 11 حالة سيئة متباينة سرطانات الجهاز الهرموني (بدنيكس) (ه)، في حين يتم الكشف عن لا إيمونوريكتيفيتي في 23 حالة المعوية من نوع أدينوكارسينوماس (إيتاكس) تحليل (ج). الدأب-الهيماتوكسيلين؛ التكبير الأصلي: 200 x، شريط المقياس = 100 ميكرومتر.

Figure 2
الشكل 2 : تحليل PCR الوقت الحقيقي OTX1 (A) و OTX2 (باء) مرناً التعبير في أنسجة الآنف العادي والورميه. لتحليل PCR الوقت الحقيقي، استخدمت العينات التالية: 5 أقسام FFPE التحكم العادي الغشاء المخاطي، 9 حالات المعوية من نوع أدينوكارسينوماس (إيتاكس) 6 حالات neuroblastomas حاسة الشم (الوظائف)، 8، 5 حالات من عدم-المعوية-نوع أدينوكارسينوماس (نيتاكس) تختلف حالات سوء سرطانات الجهاز الهرموني (بدنيك). ويقال نوع العينة على المحور س، بينما يمثل المحور Y القيم-ΔCt 2. تم الحصول على بيانات يعتد به إحصائيا (p < 0.05) بين المراقبة والأورام من الطالب t-اختبار ويتم إبرازها بعلامات نجمية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وتبين هذه الدراسة لأول مرة أنه، استناداً إلى مستويات مرناً، يتم التعبير عن الجينات غبطة OTX1 و OTX2 في الغشاء المخاطي سينوناسال العادي والغدد سوبموكوسال، التهابات الزوائد الحليمية شنيديريان سينوناسال، وفي مختلف الظهارية ونيوروكتوديرمال الأورام الخبيثة، بما في ذلك الأورام السرطانية صدفية، adenocarcinomas سينوناسال نوع غير المعوية وأورام الغدة اللعابية من نوع، والأورام الهرمونية العصبية وإضافات.

التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها:

لتجنب تدهور الجيش الملكي النيبالي، أجرينا في بروتوكول ديبارافينيزيشن في "مختبر علم الأمراض". بعد نحن خدش الشرائح، جميع العينات كانت سرعة تبريد والمخزنة في الثلج الجاف حتى استخدامها مرة أخرى. أجرينا كل التحاليل اللاحقة في غطاء سلامة الصفحي التدفق باستخدام مجموعة مخصصة من الماصات مع نصائح العقيمة للحفاظ على الظروف التجريبية العقيم وتجنب التلوث الجيش الملكي النيبالي.

القيود المفروضة على هذه التقنية:

القيد الرئيسي للتقنية تعتمد على توافر عينات منذ أورام تجويف سينوناسال غالباً ما تكون نادرة. كمية استخراج الحمض النووي الريبي مسألة هامة أخرى لاستخراج الحمض النووي الريبي من عينات FFPE النتائج في الجيش الملكي النيبالي المجزأة التي من الصعب تحليل.

أهمية فيما يتعلق بالأساليب القائمة:

تشخيص أورام تجويف الآنف وعادة ما تتألف التحاليل بالأشعة السينية، امتحان المنظار في تجويف الآنف والأشعة المقطعية والرنين المغناطيسي (البحرية الماليزية الملكية)، وخزعة. خلال السنوات الأخيرة، أدى التقدم المحرز الأجهزة الجراحية، والتقدم المحرز في تقنيات التصوير جراحة بالمنظار الاستراتيجية المفضلة للأورام سينوناسال. جدير بالذكر أن هذا الأسلوب قد أفيد قدر الإمكان لمختلف أنواع الأورام سينوناسال15حميدة أو خبيثة. لدينا تقنية تستند إلى بكر qRT يسمح تحديد المؤشرات الحيوية الجزيئية، التي يمكن أن تميز خلطات عينات أورام مختلفة: في الواقع، نحن نقدم أدلة على أن غياب كلا الجينات غبطة في إيتاكس يمكن استخدامها كالمؤشرات الجزيئية لهذا نوع الورم، فضلا عن عدم وجود OTX2 في نيتاكس. وعلاوة على ذلك، هذا الأسلوب يمكن تطبيقها فورا بعد الخزعة ويمكن أن تعطي نتائج نهائية في أقل من 6 ساعات فيما يتعلق بأيام أو أسابيع اللازمة للتقرير من المستشفى.

التطبيقات المستقبلية:

لدينا دراسات المستقبل تنطوي على تحليل الجينات ومستويات البروتين تعبير الجينات OTX1 وغبطة OTX2 باستخدام تحاليل PCR الوقت الحقيقي ولطخة غربية الفلورة مع أجسام مضادة محددة لكشف ليس فقط من OTX1 و OTX2، ولكن أيضا مستويات التعبير الأسرة p53. حيث سبق أثبتنا أن ينظم التعبير OTX1 p53 في سرطان الثدي7، سيكون من المثير للاهتمام أن نفهم إذا كان مثل هذا نظام موجود أيضا في أورام تجويف الآنف. مقايسة الفلورة ومقايسة "إيمونوبريسيبيتيشن الكروماتين" (رقاقة) يمكن أن تكشف، على التوالي، بروتين-بروتين وبروتين الحمض النووي تفاعل بين p53 وأوتكسس. إذا تم العثور على اتصال من هذا القبيل، إسكات المستهدفة p53 (أفراد الأسرة، p63 و p73)، سوف تكشف إذا كان تعبير الإفراط أو أسفل-تنظيم الجينات أوتكس يتوقف على p53.

p53 فقدان وظيفة، من خلال طفرة في p53 نفسها أو اضطرابات في مسارات إشارات إلى p53، وهو سمة مشتركة في معظم أنواع السرطان البشري16. معظم الكتلة الطفرات p53 ضمن المجال الحمض النووي ملزم؛ ولذلك، هو نشاط الحمض النووي ملزم الدالة الحرجة التي يتم تعديلها، مما يشير إلى أن التغيرات في الجينات النسخي يمكن أن يكون المفتاح ل نشاط p53 متحولة16. أبلغ عن الطفرات p53 كسمة مشتركة من سرطان سينوناسال، ولها ذبذبة عموما من 77 في المائة، وهي تظهر الرابطة غدية والتعرض للغبار وود17. هكذا، في لدينا عينات، سيكون من المثير للاهتمام لتقييم مستويات مرناً والبروتين (بواسطة PCR ريال قطري وتحليل لطخة الغربية) وإجراء تسلسل هذه الجينات، بغية تحديد أو استبعاد وجود الطفرات تفعيل أو تعطيل. أخيرا، إذا كانت طفرة متكررة محددة من نوع ورم وجدت، أنها جديرة بالذكر لإنتاج الخلايا المحورة والفئران (مع اليل متحولة واحد) التي تأوي هذه الطفرة، وفحص إذا كانت الطفرة يمكن أن الخص هذا المرض.

خطوات حاسمة:

خطوات حاسمة لهذه الدراسة تشمل الحصول على العينات المخزنة جيدا، أما خزعات المخزنة في المخزن المؤقت واقية للحمض النووي الريبي أو عينات فب من على الأقل 8 ميكرومتر سميكة، واستخراج مالا يقل عن 200 نانوغرام من الحمض النووي الريبي إجراء تحاليل PCR قرة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

Acknowledgments

هذا العمل كان يدعمها مركز غراندي سترومينتي جامعة dell'Insubria، مؤسسة التنسيق ديل فارستو، مؤسسة ديل مونتي دي لومبارديا، ومؤسسة Anna فيلا ه روسكوني فيليس.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RecoverAll Total Nucleic Acid Isolation Applied Biosystem AM1975
High-Capacity cDNA Reverse Transcription Kit Applied Biosystem 4368814
TaqMan Universal PCR Master Mix, no AmpErase UNG Applied Biosystem 4326614
ABI Prism 7000  Applied Biosystem 270001857
ACTB probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
OTX1 probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
OTX2 probe Applied Biosystem Out of production. Sequence protected by copyright
Acqueous Hydrogen Peroxide Merk 1072090250
Citrate Buffer Sigma-Aldrich 20276292
Triton Sigma-Aldrich 101473728
Tris Merk 108382
NaCl Merk 106404
Goat Anti-OTX2 Antibody Vector Laboratories Out of production. Catalog number not available
Rabbit Anti-Goat Antibody Vector Laboratories BA5000
ABC-Peroxidase Complex Vector Laboratories PK6100
3,3'-diaminobenzidine tetrahydrocloride (DAB) Sigma-Aldrich D5905
Harris Hematoxylin Bioptica 0506004/L
Pertek Kaltek SRL 1560
BioClear Bioptica W01030799

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Boncinelli, E., Simeone, A., Acampora, D., Gulisano, M. Homeobox genes in the developing central nervous system. Ann genet. 36, (1), 30-37 (1993).
  2. Omodei, D., et al. Expression of the Brain Transcription Factor OTX1 Occurs in a Subset of Normal Germinal-Center B Cells and in Aggressive Non-Hodgkin Lymphoma. American J. Pathol. 175, 2609-2617 (2009).
  3. Levantini, E., et al. Unsuspected role of the brain morphogenetic gene Otx1 in hematopoiesis. Proc. Natl. Acad. Sci USA. 100, (18), 10299-10303 (2003).
  4. Larsen, K. B., Lutterodt, M. C., Mollgard, K., Moller, M. Expression of the homeobox OTX2 and OTX1 in the early developing human brain. J. Histochem. Cytochem. 58, 669-678 (2010).
  5. Abate-Shen, C. Deregulated homeobox gene expression in cancer: cause or consequence? Nat. Rev. Cancer. 2, 777-785 (2002).
  6. de Haas, T., et al. OTX1 and OTX2 expression correlates with the clinicopathologic classification of medulloblastomas. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 65, 176-186 (2006).
  7. Terrinoni, A., et al. OTX1 expression in breast cancer is regulated by p53. Oncogene. 30, (27), 3096-3103 (2001).
  8. Yu, K., et al. OTX1 promotes colorectal cancer progression through epithelial-mesenchymal transition. Biochem. Biophys Res Commun. 44, (1), 1-5 (2014).
  9. Glubrecht, D. D., Kim, J. H., Russel, L., Bamforth, J. S., Godbout, R. Differential CRX and OTX2 expression in human retina and retinoblastoma. J. Neurochem. 111, (1), 250-263 (2009).
  10. Coletta, R. D., Jedlicka, P., Gutierrez-Hartamn, A., Ford, H. L. Transcriptional control of the cell cycle in mammary gland development and tumorigenesis. J. mammary gland Biol. Neoplasia. 9, 39-53 (2004).
  11. Cordes, B., et al. Molecular and phenotypic analysis of poorly differentiated sinonasal neoplasms: an integrated approach for early diagnosis and classification. Hum Pathol. 40, 283-292 (2009).
  12. Stelow, E. B., Bishop, J. A. Update from the 4th Edition of the World Health Organization Classification of Head and Neck Tumours: Tumors of the Nasal Cavity, Paranasal Sinuses and Skull Base. Head Neck Pathol. 11, (1), 3-15 (2017).
  13. Llorente, J. L., et al. Sinonasal carcinoma: clinical, pathological, genetic and therapeutic advances. Nat. Rev. Clin. Oncol. 11, (8), 460-472 (2014).
  14. Sidransky, D. World health organization classification of tumors. Pathology and genetics of head and neck tumors. 9, WHO Press. (2005).
  15. Radulesku, T., et al. Endoscopic surgery for sinonasal tumors: The transcribriform approach. J Stomatol Oral Maxillofac Surg. 118, (4), 248-250 (2017).
  16. Muller, P. A. J., Vousden, K. H. p53 mutations in cancer. Nature cell biology. 15, (1), 2-8 (2013).
  17. Holmila, R., et al. Profile of TP53 gene mutations in sinonasal cancer. Mutat Res. 686, (1-2), 9-14 (2010).
تحديد OTX1 و OTX2 كاثنين من المؤشرات الجزيئية المحتملة للأورام السرطانية سينوناسال و Neuroblastomas حاسة الشم
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Micheloni, G., Millefanti, G., Conti, A., Pirrone, C., Marando, A., Rainero, A., Tararà, L., Pistochini, A., Lo Curto, F., Pasquali, F., Castelnuovo, P., Acquati, F., Grimaldi, A., Valli, R., Porta, G. Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas. J. Vis. Exp. (144), e56880, doi:10.3791/56880 (2019).More

Micheloni, G., Millefanti, G., Conti, A., Pirrone, C., Marando, A., Rainero, A., Tararà, L., Pistochini, A., Lo Curto, F., Pasquali, F., Castelnuovo, P., Acquati, F., Grimaldi, A., Valli, R., Porta, G. Identification of OTX1 and OTX2 As Two Possible Molecular Markers for Sinonasal Carcinomas and Olfactory Neuroblastomas. J. Vis. Exp. (144), e56880, doi:10.3791/56880 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter