Summary
Den nuværende protokol præsenterer eksperimentelle procedurer for at stimulere kulturperler makrofager at være begavet med evnen til at frigive molekylære faktorer, der fremmer neurite udvækst. Behandling af cAMP til neuron-makrofag Co kulturer inducerer makrofager at producere konditioneret medium, der besidder stærke neurite udvækst aktivitet.
Abstract
Der er stærke beviser at makrofager kan deltage i regenerering eller reparation af tilskadekomne nervesystem. Her, beskriver vi en protokol, hvori makrofager er tilskyndet til at producere aircondition medium (CM), der fremmer neurite udvækst. Voksen dorsalrods ganglion (DRG) neuroner er akut adskilles og forgyldt. Efter neuronerne er stabilt fastgjort, er peritoneal makrofager Co kulturperler på en celle kultur indsætte overlejret på samme godt. Dibutyryl cykliske AMP (db-cAMP) anvendes på fælles kulturer i 24 timer, hvorefter cellekultur indsætte indeholdende makrofager er flyttet til en anden brønd at indsamle CM til 72 h. CM fra Co kulturer behandlet med db-lejren, når de påføres et separat voksen DRG neuron kultur, udstiller robust neurite udvækst aktivitet. CM fra db-cAMP-behandlede kulturer bestående af enkelt celletype alene, enten DRG neuron eller peritoneal makrofag, ikke udstille neurite udvækst aktivitet. Dette indikerer, at samspillet mellem neuroner og makrofager er uundværlig for aktiveringen af makrofager secernerende molekylære faktorer med neurite udvækst aktivitet i CM. Således, vores fælles kultur paradigme vil også være nyttigt at studere intercellulære signalering i neuron-makrofag interaktion at stimulere makrofager at være begavet med en pro-regenererende fænotype.
Introduction
En række undersøgelser har forsøgt at forbedre CNS axon regenerering efter skader på rygmarven eller hjernen. Inflammatoriske reaktioner, uundgåeligt ledsager skader på nervesystemet, er traditionelt tænkt til at deltage i sekundære patologiske processer, der fører til ødelæggende resultater1,2. Methylprednisolon, der kan undertrykke inflammatoriske reaktioner er faktisk den eneste godkendte behandling for akut rygmarv skade3. Nyere undersøgelser har imidlertid fremlagt beviser, makrofager, et repræsentativt inflammatoriske celletype, kan deltage i regenerering eller reparation af tilskadekomne nervesystem4,5,6. For eksempel, infiltrerer makrofager efter en objektiv skade producere pro-regenererende molekyler til at fremme regenerering af retinal ganglion neuroner7,8. Derudover øget transplanterede DRG neuroner axon vækst op regionen hvor makrofager blev aktiveret af zymosan9. Desuden kan makrofager på webstedet læsion skabe et vækst-eftergivende miljø for tilskadekomne perifere nerver10.
Vores arbejde også givet stærke beviser for, at makrofager kan bidrage til kapaciteten af axon regenerering i tilstødende neuroner. Vi har vist, at i aktiveringen af makrofager i dorsalrodsganglier (DRG) var afgørende i den forbedrede regenerative kapacitet af DRG sensoriske neuroner efter en forkonditionering perifere nerve skade11. Lignende forskning blev selvstændigt rapporteret fra et andet laboratorium12. Vi viste også, at intraganglionic injektion af dibutyryl cykliske AMP (db-cAMP), som er en velkendt molekyle til at øge kapaciteten i axon regenerering13, induceret aktiveringen af makrofager. Deaktivering af makrofager afskaffet virkningerne af db-lejren på neurite udvækst aktivitet. Efterfølgende værker identificeret skade-induceret udtryk for CCL2 i neuroner som et signal til at stimulere makrofager med en pro-regenererende fænotype14,15.
Baseret på de ovenstående eksperimentelle resultater, har vi etableret en in vitro- model ligner molekylære begivenheder, der opstår i DRG efter en forkonditionering skade model11,14. I denne model anvendes db-cAMP til neuron-makrofag Co kulturer fremkalde intercellulære signalering, der fører til aktivering af makrofager med en pro-regenererende fænotype. Her, beskriver vi detaljerede protokoller, som vi kan generere makrofager, der udskiller molekylære faktorer fremmer neurite udvækst (fig. 1). Denne eksperimentelle model illustrerer et koncept at makrofager kan stimuleres eller tilskyndet til at støtte axon regenerering efter skaderne på nervesystemet. Vores model vil også være nyttige i at studere mekanismer i intercellulære signalering, der fører til aktivering af pro-regenererende makrofager.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle eksperimenter, der involverer dyr blev godkendt af det institutionelle Animal Care og brug Udvalget af Ajou University School of Medicine.
1. kultur forberedelse af dissocierede voksen DRG Neuron
- Før du konfigurerer kulturen, pre pels 6-godt plade med poly-D-Lysin og laminin. Ruger en 6-godt plade med 0,01% poly-D-lysin ved 37° C i 2 timer eller ved 4° C natten over. Derefter vask plade to gange med destilleret vand.
- Inkuber pladen med laminin løsning ved en koncentration på 3 µg/mL i 2 timer ved stuetemperatur, og derefter vaske plade to gange med destilleret vand. Tør pladen ved stuetemperatur i det mindste i 1 h.
- Aflive en mus i en gennemsigtig CO2 kammeret tilsluttet en komprimeret CO2 gas cylinder. Incise huden overliggende rygsøjlen med en kirurgiske kniv og dissekere paravertebral musklerne bilateralt for at udsætte de vertebrale knogler. Fjerne de vertebrale knogler omhyggeligt ved hjælp af en smal spids kirurgisk rongeur, indtil DRG er fuldt eksponeret.
Bemærk: Voksen DRG neuroner er fremstillet af voksne C57BL6 mandlige mus alderen 8 uger til 12 uger gamle. - Fjerne DRG bilateralt fra S1 hele vejen op til C1 niveau ved hjælp af iridectomy saks og fine-tippet pincet under et dissekere mikroskop. Prøv at skære rødderne helt fra DRG for at minimere forurening af Schwann celler eller fibroblaster.
- Gemme de dissekerede DRG i en 60 mm petriskål der indeholder 5 mL af kolde Dulbecco ændret Eagle Medium (DMEM) på is indtil alle DRG er indsamlet.
Bemærk: Det er afgørende at dissekere DRG så hurtigt som muligt. Indsamling af alle DRG fra en mus bør ikke tage længere tid end 30 min. 30 min efter eutanasi, stoppe indsamlingen af DRG og gå videre til næste trin, selv om der stadig tilbageværende DRG. - Overføre DRG til en 1,5 mL Eppendorf rør ved hjælp af en blå pipette tip (1000 µL) med en cut-off ende. Fjerne DMEM efter en hurtig spin i flere sekunder ved hjælp af en mini centrifuge. Der tilsættes 1 mL af DMEM indeholdende 125 U/mL type XI collagenase og inkuberes røret i 90 min. med en blid rotation (35-40 rpm) ved hjælp af en twister shaker i et 37 ° C inkubator. Immobilisere røret på shaker gulvet ved hjælp af båndet.
- Kassér collagenase-holdige DMEM og tilsættes 1 mL af friske DMEM. Vent, indtil de flydende DRG helt synker til bunden, og fjern derefter DMEM med væv debris. Gentag trinnet vask mindst seks gange.
Bemærk: Forsøg ikke at supernatanten helt. Vær omhyggelig med ikke at fjerne enhver DRG med den supernatanten DMEM. - Overføre DRG til en 15 mL konisk slange ved hjælp af en blå pipette tip (1000 µL) med en cut-off ende. Derefter afpipetteres forsigtigt op og ned på mindst 15 gange ved hjælp af en blå spids (1000 µL) til at gøre en homogen cellesuspension. Undgå at komme bobler og forsøge ikke at røre bunden af koniske rør med pipette spids.
- Centrifugeres tube på 239 x g i 3 min og omhyggeligt supernatanten med flydende vragrester. Der tilsættes 1 mL Neurobasal medium suppleret med B27 (2,0% v/v) og resuspenderes celle af forsigtigt pipettering op og ned 5 til 10 gange.
- Passere cellesuspension gennem en 70 µm celle si overlejret på toppen af en 50 mL konisk slange. Vente 2 min, og derefter hælde Neurobasal/B-27 medium på sien ved hjælp af en pipette controller.
- Plade alle indsamlede DRG neuroner (i alt anslået 2 x 106 DRG neuroner fra en mus) på to brønde af 6-godt plade. DRG neuroner fra en voksen mus dække to brønde i en 6-godt plade. Placer derefter pladen i et CO2 inkubator ved 37 ° C, indtil makrofag Co kulturer.
2. fælles kultur af P sekundære Peritoneal makrofager på en celle kultur indsætte
Bemærk: Etablere Co kulturerne 4 h efter den indledende plating de dissocierede DRG neuroner
- Primære peritoneal makrofager er fremstillet af voksne C57BL6 mandlige mus alderen 8 uger til 12 uger gamle. Aflive et dyr i en CO2 sal. Incise abdominal huden forsigtigt, udsætte bughinden og undgå at skære bughinden for at forhindre en lækage af lavage væske.
- Punktere bughinden ved hjælp af en sprøjte med en 22G kanyle og injicere 10 mL iskold fosfatbufferet salin (PBS) i bughulen. Blidt massage bughinden for 1-2 min. Derefter, træk nålen og presse ud af PBS gennem webstedet nål punktur og indsamle lavage væske i en 50 mL konisk slange.
Bemærk: Før brug, sætte sprøjten på isen for at opretholde kulde af PBS. - Der centrifugeres lavage væske på 239 x g i 10 min. ved 4 ° C at sammenpresse de cellulære komponenter. Resuspenderes med 3 mL af røde blodlegemer (RBC) lysisbuffer for 3 min ved stuetemperatur. Derefter centrifugeres cellesuspension igen på 239 x g i 10 min. ved 4 ° C. Resuspenderes med 3 mL PBS og centrifugeres cellesuspension igen for at fjerne enhver resterende RBC lysisbuffer.
Bemærk: Sørg for RBC lysisbuffer er helt fjernet. Ellers kan resterende RBC lysisbuffer være giftige for de kulturperler makrofager. - Resuspend pelleted cellerne i 1 mL af Neurobasal/B-27 medium. Plade halvdelen af alle indsamlede makrofager (i alt 3 × 106 til 6 x 106 celler) på en cellekultur indsætte med det effektive areal af 4,2 cm2, som er placeret på toppen af brønden af dissocierede DRG.
Bemærk: I perioden Co kultur makrofager dyrkes i Neurobasal/B-27 neuron næringssubstratet. Passende overlevelse af makrofager under denne betingelse blev bekræftet.
3. behandling af Db-lejren og samling af makrofag CM
Bemærk: Start db-cAMP behandling 4 h efter neuron-makrofag Co kulturer.
- Tilføje 2 µL af 100 µM db-cAMP løsning til neuron-makrofag Co kulturer. Tilføje den samme mængde af PBS for et kontrol-eksperiment.
- Efter 24 timer, skal du udfylde en tom godt med 1 mL af makrofag næringssubstratet i samme 6-godt pladen. Overføre celle kultur Indsæt i neuron-makrofag Co kulturer til at Tom godt med makrofag næringssubstratet. Hold celler under den samme forudsætning for 72 h uden at ændre mediet.
Bemærk: Vi tilføje kun 1 mL af makrofag næringssubstratet under CM samling at gøre koncentreret CM. Under samlingen CM, hvis det er nødvendigt, tilføjet vi mere fuldstændig dækker makrofager inden for indsatsen. - Efter 72 h, der centrifugeres makrofag CM på 239 x g for 5 min at fjerne cellulære komponenter. Passere en 0,2 µm filter til at fjerne enhver resterende celleaffald supernatanten. Gemme de indsamlede CM ved-70 ° C indtil brug.
4. Neurite udvækst Assay med indsamlede CM
- Før du konfigurerer en separat voksen DRG neuron kultur, pre coat en 8-godt kammer dias efter samme procedure beskrevet i afsnit 1.1 og 1.2.
- Få dissocierede voksen DRG neuroner i Neurobasal medium suppleret med B27 efter de samme metoder beskrevet fra 1,3 til 1,10. Plade 5 x 104 celler pr. brønd i præ-coatede 8-godt kammer diaset.
- Sted kammer diaset i et 37 ° C inkubator for 2 h, giver cellerne til at vedhæfte til bunden. Derefter erstatte næringssubstratet med de optøede CM, der er forvarmet ved 37 ° C.
Bemærk: Pas på ikke at røre bunden af 8-godt kammer dias, når du fjerner næringssubstratet og tilføjer den indsamlede CM. - 15 h efter den indledende plating, fjerne medium og vaske cellerne med PBS endnu en gang. Derefter tilsættes 200 µL af iskold 4% PARAFORMALDEHYD løsning brønde, og Inkuber celler med PARAFORMALDEHYD løsning i 20 min. ved 4 ° C
Bemærk: DRG neuron kultur til neurite udvækst assay skal nøjagtigt begrænses til 15 h. På denne betingelse er der ingen mærkbar neurite udvækst. - Vaskes tre gange med iskold PBS og derefter udføre blokering med 10% normal ged serum (NGS) med 0,1% Triton-X i 30 min. Ruger de faste celler med primær antistof (anti-Tuj-1) løsning fortyndet med 10% NGS (ved en koncentration på 1 µg/mL) for 4 h på værelse temperatur eller natten over ved 4 ° C.
- Vaskes tre gange med PBS, og derefter inkuberes celler med sekundær antistof (gede-anti mus) løsning i 2 timer ved stuetemperatur. Derefter vaskes to gange med PBS og montere kultur dias med en coverslip (24 × 50 mm) ved hjælp af montering løsning.
- Tage billeder ved hjælp af et fluorescens mikroskop til at visualisere neurite udvækst.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi beskriver en protokol, der kan generere makrofager i stand til at udskille molekylære faktorer med neurite udvækst aktivitet. Makrofag CM fremstillet af fælles kulturer behandlet med db-cAMP resulterede i robust neurite udvækst når de påføres et separat DRG neuron kultur (figur 2A). I sammenligning, CM fra PBS-behandlede Co kulturer ikke fremkalde neurite udvækst i vores 15-h kultur varighed (figur 2B). Når db-cAMP er behandlet for kultur med makrofag alene, var CM fremstillet af denne betingelse ikke effektiv støtte neurite udvækst (fig. 2 c). Dette tyder på, at neuron-makrofag interaktion er uundværlig til at stimulere makrofager at være udstyret med en proregenerative kapacitet. Vi testede også hvis CM fremstillet af db-cAMP-behandlede kun neuron-kultur og fandt ingen neurite udvækst (figur 2D).
Figur 1: en skematisk diagram illustrerer procedurer at få aircondition medium indeholdende neurite udvækst aktivitet. Voksen DRG neuroner (2 x 106 celler pr. hver brønd) er kulturperler for 4 h. Derefter, peritoneal makrofager er kulturperler i Indsæt godt, placeret over brønden i hvilke DRG neuroner var kulturperler. 4 h efter plating, enten PBS eller dibutyryl cAMP er behandlet. Efter 24 timers inkubation, er Indsæt godt overført til en anden brønd fyldt med omkring 1 ml medium. Derefter, den overdragne godt inkuberes i 72 timer. Derefter, rugede konditioneret medium (CM) er indsamlet. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: repræsentative resultater af neurite udvækst assay bruger aircondition medium fremstillet af forskellige betingelser. (A, B) Voksen DRG neuroner var akut adskilles og kulturperler for præcis 15 h. 2 h efter plating, næringssubstrat blev erstattet med konditioneret medium (CM) fra neuron-makrofag Co kulturer behandlet med enten PBS (A) eller dibutyryl lejr (db-cAMP) (B). Kun CM behandlet med db-cAMP udstillet robust neurite udvækst aktivitet. (C, D) CM fra kulturer bestående af enten makrofag (C) eller en neuron (D) alene der blev behandlet med db-cAMP støttede ikke neurite udvækst. Skalaen angiver 200 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Der er flere kritiske trin for generation af dette fælles kultur system. Det er vigtigt at sikre, at musen DRG neuroner og peritoneal makrofager forberedt friske og sunde. Vi har oplevet formindsket neurite udvækst aktivitet af CM når dissektion af alle DRG tog mere end 30 min. Derudover kontaminering af blodkomponenter i peritoneal makrofager også ført til et fald på neurite udvækst aktivitet i CM. For at fremkalde robust neuron-makrofag interaktion af db-cAMP, grundig vask ville også være et afgørende skridt til at sikre fuldstændig fjernelse af væv debris og fjernelsen af potentielt resterende cytotoksiske komponenter, såsom collagenase eller RBC lysisbuffer. Et andet punkt at være gentog er at rødderne knyttet til DRG bør fjernes så meget som muligt. Resterende stubbe af rødderne ville øge forureningen af Schwann celler i DRG neuron kultur. Schwann celler kan producere høj mængde af neurotrope faktorer i kultur, der kan forvirre resultaterne.
I denne protokol, var dissocierede makrofager belagt på en celle kultur indsætte adskilt fra DRG neuroner belagt på bunden af den godt plade. Vores tidligere undersøgelse viste ikke signifikant forskel i omfanget af neurite udvækst aktivitet mellem CMs indsamlet fra direkte Co kulturer (tillader fysiske kontakter mellem to celletyper) og fælles kulturer med to celletyper adskilt af et cellekultur indsætte11. Dette resultat er angivet at neuroner og makrofager kommunikerer med hinanden via opløselige molekyler frigivet fra enten celletype, ikke af direkte fysisk kontakt. Det var vist, at CCL2, udskilles fra DRG neuroner, er ansvarligt for aktivering makrofager ind i en pro-regenererende fænotype i dette fælles kultur model14. Således, vores fælles kultur system vil tillade udredning af mere detaljerede intercellulære signalering, der medierer aktivering af pro-regenererende makrofager.
Kulturen blev netop begrænset til 15 h under neurite udvækst analysen i denne protokol. Pilotforsøg, vi undersøgt flere forskellige kultur tid og fundet, at med en minimal grad af neurite udvækst i kontrol tilstand (15 h), meget robust neurite udvækst blev opnået med CM behandlet med db-cAMP. Musen DRG neuroner, dyrker hvis ikke klargjort, ikke nogen betydelig neurites inden for denne tidsramme. Hvis DRG neuroner er kulturperler længere end 15 h, dog er de begynder at vise en vis grad af neurite udvækst selv i kontrol, ikke klargjort tilstand, hvilket ville forvanske enhver påvirkning af det db-cAMP-behandlede CM neurite udvækst. Lignende resultatet blev rapporteret i neurite resultat analysen ved hjælp af rotte DRG neuroner i en tidligere undersøgelse16.
Nogle tidligere undersøgelser anvendte zymosan, en gær cellevæg forberedelse, for at aktivere makrofager med en pro-regenererende fænotype7,9. Dog udgivet makrofager stimuleret af zymosan ikke kun pro-regenererende molekyler, men også cytotoksiske faktorer. Når proteinkomponenter i makrofag CM behandlet med zymosan var adskilt af gel-filtrering kromatografi, makrofag-afledte faktorer ≥ 30 kDa var cytotoksiske mens faktorer ≤ 30 kDa forfremmet axon regenerering7. Derudover kan zymosan injektion på rygmarven føre til åbenlys død af neuroner og axoner9. I sammenligning, vores protokol til at generere pro-regenererende makrofager har vist sig for at være mere fysiologisk end den foregående ved hjælp af zymosan. I virkeligheden, forbedret db-cAMP injektion til DRG neuroner deres kapacitet til vækst axoner efter en skade til den centrale afdeling uden nogen betænkning om cellulære skader17,18. Gennem en serie af vores eksperimenter, har vi aldrig observeret nogen betydelige fald i DRG neuron tæthed kultur efter anvendelse af det db-cAMP-behandlede CM. Vi spekulere, at vores protokollen tillader os at producere udelukkende pro-regenererende makrofager uden samtidige neurotoksicitet. Derfor, protokol og eksperimentel model rapporteret her ville være nyttigt at identificere molekylære signaturer af pro-regenererende makrofager og forstå ved hvilke mekanismer er udviklet sig pro-regenererende fænotype.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Denne protokol er støttet af en bevilling NRF-2015R1A2A1A01003410 fra ministeriet for videnskab, IKT og fremtidige planlægning, Republikken Korea.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell culture insert transparent PET membrane 0.4μm pore size | Corning,Falcon | 353090 | Transparent PET membrane with 0.4-μm pore size, for 6-well plate |
| 70-μm nylon cell strainer | Corning, Falcon | 352350 | |
| 8-well culture slide | Biocoat | 354632 | with a uniform application of Poly-D-Lysine |
| Red blood cell lysis buffer | Qiagen | 158904 | |
| Collagenase from Clostridium histolyticum | Sigma-Aldrich | C9407-100MG | |
| Neurobasal medium | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 21103-049 | Containing 1% glutamax and 1% penicilin-streptomycin |
| B-27 supplement, serum free | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 17504-044 | extracellular solution |
| Glutamax | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 35050-061 | |
| Penicillin-streptomycin | Thermo Fisher Scientific, Gibco | 15140-122 | |
| Poly-D-lysine Hydrobromide | Sigma-Aldrich | P6407-5MG | |
| Laminin | Thermo Fisher Scientific, Invitrogen | 23017-015 | |
| Adenosine 3', 5'-cyclic monophosphate, N6,O2'-dibutyryl-, sodium salt | Merck Millipore Corporation, Calbiochem | 28745 | |
| 10% Normal Goat Serum | Thermo Fisher Scientific | 16210072 | |
| Triton-X-100 | Daejung Chemical and Metal Co | 8566-4405 | |
| Anti β III tubulin (Tuj-1) | Promega Corporation | G7121 | Mouse monoclonal antibody |
| Goat anti-Mouse IgG (H+L) secondary antibody | Thermo Fisher Scientific, Invitrogen | A11005 | |
| Hemacytometer | Marienfeld-Superior | N/A | |
| Cell culture CO2 incubator | Panasonic | N/A | |
| Dissecting stereomicroscope | Carl Zeiss | Stemi DV4 | |
| Twist shaker | FINEPCR | Tw3t | |
| Tabletop centrifuge | Sorvall | N/A | |
| Confocal microscope | Olympus America Inc | IX71 | |
| FBS (Fetal Bovine Serum) | VWR International, Hyclone | SH30919.03 | |
| Friedman Pearson Rongeurs | FST (Fine Science Tools) | 16021-14 | Stainless steel, 14cm, curved, single joint action |
| Fine Scissors - Tungsten Carbide & ToughCut | FST (Fine Science Tools) | 14558-11 | sharp, serrated |
| Dumont #7 Forceps | FST (Fine Science Tools) | 11272-30 | Dumoxel, 0.07 x 0.04mm, curved |
| Vannas Spring Scissors | FST (Fine Science Tools) | 15000-00 | straight, 3mm cutting-edge, sharp |
| Qualitron DW-41 Micro-Centrifuge | Artisan Technology Group | DW-41 | Input Voltage: 115VAC |
References
- Donnelly, D. J., Popovich, P. G. Inflammation and its role in neuroprotection, axonal regeneration and functional recovery after spinal cord injury. Exp Neurol. 209 (2), 378-388 (2008).
- Festoff, B. W., et al. Minocycline neuroprotects, reduces microgliosis, and inhibits caspase protease expression early after spinal cord injury. J Neurochem. 97 (5), 1314-1326 (2006).
- Bowers, C. A., Kundu, B., Hawryluk, G. W. Methylprednisolone for acute spinal cord injury: an increasingly philosophical debate. Neural Regen Res. 11 (6), 882-885 (2016).
- Gensel, J. C., Kigerl, K. A., Mandrekar-Colucci, S. S., Gaudet, A. D., Popovich, P. G. Achieving CNS axon regeneration by manipulating convergent neuro-immune signaling. Cell Tissue Res. 349 (1), 201-213 (2012).
- DiSabato, D. J., Quan, N., Godbout, J. P.
- Jin, X., Yamashita, T. Microglia in central nervous system repair after injury. J Biochem. 159 (5), 491-496 (2016).
- Yin, Y., et al. Macrophage-derived factors stimulate optic nerve regeneration. J Neurosci. 23 (6), 2284-2293 (2003).
- Yin, Y., et al. Oncomodulin is a macrophage-derived signal for axon regeneration in retinal ganglion cells. Nat Neurosci. 9 (6), 843-852 (2006).
- Gensel, J. C., et al. Macrophages promote axon regeneration with concurrent neurotoxicity. J Neurosci. 29 (12), 3956-3968 (2009).
- Barrette, B., et al. Requirement of myeloid cells for axon regeneration. J Neurosci. 28 (38), 9363-9376 (2008).
- Kwon, M. J., et al. Contribution of macrophages to enhanced regenerative capacity of dorsal root ganglia sensory neurons by conditioning injury. J Neurosci. 33 (38), 15095-15108 (2013).
- Niemi, J. P., et al. A critical role for macrophages near axotomized neuronal cell bodies in stimulating nerve regeneration. J Neurosci. 33 (41), 16236-16248 (2013).
- Hannila, S. S., Filbin, M. T. The role of cyclic AMP signaling in promoting axonal regeneration after spinal cord injury. Exp Neurol. 209 (2), 321-332 (2008).
- Kwon, M. J., et al. CCL2 Mediates Neuron-Macrophage Interactions to Drive Proregenerative Macrophage Activation Following Preconditioning Injury. J Neurosci. 35 (48), 15934-15947 (2015).
- Niemi, J. P., DeFrancesco-Lisowitz, A., Cregg, J. M., Howarth, M., Zigmond, R. E. Overexpression of the monocyte chemokine CCL2 in dorsal root ganglion neurons causes a conditioning-like increase in neurite outgrowth and does so via a STAT3 dependent mechanism. Exp Neurol. 275 Pt 1, 25-37 (2016).
- Cafferty, W. B., et al. Conditioning injury-induced spinal axon regeneration fails in interleukin-6 knock-out mice. J Neurosci. 24 (18), 4432-4443 (2004).
- Cai, D., et al. Neuronal cyclic AMP controls the developmental loss in ability of axons to regenerate. J Neurosci. 21 (13), 4731-4739 (2001).
- Neumann, S., Woolf, C. J. Regeneration of dorsal column fibers into and beyond the lesion site following adult spinal cord injury. Neuron. 23 (1), 83-91 (1999).
