تعمل خلية نائمة ونشط سرطان اتسمت استخدام تصوير المرحلة الكمية. خلية انتشار، والهجرة، ومورفولوجيا فحوصات متكاملة وتحليلها بأسلوب بسيط واحد.
الحصول على النمط الظاهري الأوعية عنصر أساسي من الهروب من السكون الورم. على الرغم من أن قد وضعت الكلاسيكية في المختبر فحوصات (مثلاً، والانتشار، والهجرة، وغيرها) و في فيفو نماذج عديدة للتحقيق وتميز تعمل الخلية الأوعية وغير الأوعية، هذه الأساليب هي الوقت والعمل المكثف، وغالباً ما تتطلب الكواشف باهظة الثمن والصكوك، فضلا عن خبرة كبيرة. في دراسة أجريت مؤخرا، استخدمنا مرحلة كمية رواية التصوير تقنية (كبي) إجراء الأوصاف الوقت الفاصل بين وخالية من العلامات للأوعية وغير الأوعية خلايا كوس أوستيوساركوما البشرية. فريق معلمات الخلوية، بما في ذلك مورفولوجيا الخلايا وانتشارها، وحركية، تم قياسها كمياً وتحليلها باستخدام كبي. هذه الرواية والنهج الكمي يوفر الفرصة للدراسة بشكل مستمر وغير إينفاسيفيلي العمليات الخلوية ذات الصلة والسلوكيات، وخصائص الخلايا السرطانية وغيرها من أنواع الخلايا بطريقة بسيطة ومتكاملة. ويصف هذا التقرير لدينا بروتوكول تجريبية، بما في ذلك إعداد الخلية واقتناء قبي وتحليل البيانات.
إحدى نقاط التفتيش أقرب في التنمية والتقدم من ورم صلبة هو اقتناء الأوعية النمط الظاهري، من السمات مميزة للسرطان. ويشمل هذا التقدم مجموعة متنوعة من العمليات الكيميائية الحيوية والجزيئية1،،من23. تحديا تقنيا في دراسة هذه الخطوة الرئيسية في تطور الورم هو عدم وجود أدوات كمياً بشكل مستمر وتميز وتفرق بين الأوعية والأوعية غير تعمل الخلايا السرطانية الحية بطريقة غير متحيزة. تتطلب فحوصات التقليدية المستخدمة للتحقيق في سلوك الخلوية لخلايا الأوعية والأوعية غير عادة الكواشف باهظة الثمن والصكوك، على سبيل المثال، الخلية الانتشار والهجرة فحوصات،،من45 6،،من78،9،10،11،12،،من1314 أو تكميلية في فيفو تقييمات4،5،،من68،15،16، فضلا عن التي تتطلب خبرة كبيرة ومكثفة استهلاك الوقت والعمل.
في الآونة الأخيرة، برز الكمية المرحلة التصوير (كبي) كأسلوب رواية التي تمكن من تقييم الوقت الفاصل بين وخالية من العلامات لمجموعة متنوعة من الخلية مورفولوجيا والسلوك معلمات17،،من1819، 20 , 21 , 22-خلافا للفحص المجهري الضوئي التقليدية، قبي يوضحها الاختلافات في مرحلة التحول بكسل بكسل بعد الضوء يمر من خلال كائن بصري، ويعيد بناء القرص مع سمك الضوئية المحولة ووحدة التخزين، مما مكن المباشرة تحليل الخلايا الحية والميزات التالية: التصوير (1) الكمية، (2) غير الغازية والوقت الفاصل بين التصوير والتصوير (3) خالية من التسمية وتصوير المعلمة متعددة (4) المتزامنة. هذه الميزات تجعل قبي أداة قوية لتقييم وفهم العمليات المرضية على المستوى الخلوي.
في دراسة أجريت مؤخرا، ونحن تستخدم قبي كمياً تميز وتفرق بين الأوعية خوس-أ وغير الأوعية خوس ن تعمل الخلايا البشرية أوستيوساركوما بطريقة منهجية والكمية، يجمع بين تحليلات مورفولوجيا الخلايا، الانتشار، وحركية23. استخدام برنامج تحليل الصور، فريق خلية المورفولوجية والسلوك قورنت معلمات كمياً بين الخلايا البشرية osteosarcoma الأوعية وغير الأوعية وحددت خمسة الفروق المميزة بين هذين تعمل. هذا النهج المبتكر يوفر منصة متكاملة والكمية لتقييم مجموعة متنوعة من الخصائص الخلوية البيولوجية ذات الصلة.
في هذه الدراسة، يصف لنا في المختبر، غير الغازية، وخالية من تسمية أسلوب استخدام كبي كمياً تميز تعمل الأوعية والأوعية غير الخلايا البشرية osteosarcoma. قد تم تحليلها معلمات الخلوية متعددة في نفس الوقت بهذه الطريقة المتكاملة، والإنتاجية العالية، بما في ذلك منطقة الخلية، سمك الخلية، حجم الخل…
The authors have nothing to disclose.
امتنان يعترف الكتاب الدعم من مؤسسة أبحاث سرطان الثدي ومؤسسة البحوث الطبية المتقدمة.
T75 flask | Corning, NY, USA | 353136 | |
6-well plates | Corning, NY, USA | 3506 | |
Dulbecco’s modified Eagle medium (DMEM) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 11965092 | |
Fetal bovine serum (FBS) | Atlanta Biologicals, GA, USA | S11550 | |
Penicillin Streptomycin | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 15140122 | |
Phosphate buffered saline (PBS) | Thermo Fisher Scientific, MA, USA | 10010023 | |
Beckman Z1 Coulter counter | Beckman Coulter, IN, USA | Z1 | |
HoloMonitor M4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | M4 | Microscope |
Hololid | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | PHI 8020 | |
HStudioM4 | Phase Holographic Imaging Phi AB, Lund, Sweden | HStudioM4 | Software |