Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

Esenlik farelerde sistematik değerlendirilmesi için genel anestezi yordamları

Published: March 20, 2018 doi: 10.3791/57046
Automatic Translation
1,2, 2,3, 2, 4, 2, 1
1Institute of Animal Welfare, Animal Behavior and Laboratory Animal Science, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 2Institute of Pharmacology and Toxicology, Department of Veterinary Medicine, Freie Universität Berlin, 3German Federal Institute for Risk Assessment (BfR), 4Unit of Physiology, Pathophysiology and Experimental Endocrinology, Department of Biomedical Sciences, University of Veterinary Medicine

Summary

Biz refah farelerde genel anestezi kullanılarak işlemler sırasında değerlendirmek için bir iletişim kuralı geliştirilmiştir. Davranış parametreleri glukokortikoid metabolitleri analiz edildi yanı sıra refah düzeyini gösteren bir dizi. Protokol bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde önem derecesini tahmin etmek için genel bir yardım olarak hizmet verebilir.

Abstract

İlke (değiştirme, azaltma, arıtma) geliştirilen 3R doğrultusunda Russel ve Burch, bilimsel araştırma seçimli-e doğru hayvan deneme mümkün olduğunda kullanmalısınız. Hayvan deney için hiçbir alternatif olduğunda kullanılan Laboratuvar hayvanlarının toplam sayısı değerli veri almak için gerekli en az olmalıdır. Ayrıca, ağrı, acı ve sıkıntı deneysel işlemin eşlik eden en aza indirmek için uygun arıtma tedbirleri uygulanmalıdır. Ağrı, acı ve sıkıntı derecesini sınıflandırmak için kullanılan olmayan-kurtarma, hafif, orta veya şiddetli (Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63) kategorilerdir. Özel durumlarda hangi Kategoriler uygulamak belirlemek için bilimsel olarak ses araçları kullanmak çok önemli.

Burada sunulan iyi being değerlendirme protokolü genel anestezi sırasında kullanılan yordamlar için tasarlanmıştır. Protokol tavşan çukuru ve davranış refah göstergeleri olarak bina yuva gibi eve kafes etkinlik, fare yüz buruşturma ölçek ve lüks davranışları üzerinde duruluyor. Ayrıca ücretsiz keşif paradigma için özellik anksiyete ile ilgili davranışı kullanır. Fekal corticosterone metabolitleri akut stres belirtileri olarak 24 saat sonrası anestezik süre içinde ölçülür.

İletişim kuralı iyi olmak genel anestezi takip fareler üzerinde bilimsel olarak sağlam bilgi sağlar. Basitliği nedeniyle protokol kolayca adapte ve planlı bir çalışma entegre. Kategorilerine göre Avrupa Birliği yönetmeliği uyarınca 2010/63 tehlikede sınıflandırmak için bir ölçek sağlamasa da, araştırmacılar bilimsel olarak ses verileri kullanarak bir yordam önem derecesini tahmin yardımcı olabilir. Su kuyusu-varlık değerlendirilmesi bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde geliştirmek için bir yol sağlar.

Introduction

AB yönergesi 2010/631 Russel ve Burch2 tarafından geliştirilen 3R prensibi (yerine, azaltma, arıtma) hayvan deney gerekli olduğunda uygulanacak olması öngörülüyor. AB direktifi, nihai hedefi tüm hayvan aşama için ama şu an için bazı hayvan deneyleri hala insan ve hayvan sağlığını korumak araştırma yapmak üzere ihtiyaç vardır, Direktifin kabul eder. Böylece, bir hayvan deney alternatif herhangi bir yöntemle değiştirilemez, laboratuvar hayvanlarının yalnızca az sayıda güvenilir sonuçlar elde etmek için kullanılacak tek. Ayrıca, ağrı, acı ve sıkıntı deneysel prosedürler eşlik eden miktarı uygun arıtma yöntemlerle indirilmelidir. AB yönergesi 2010/63 bir yordam şiddeti prospektif kurtarma olmayan, hafif, orta veya şiddetli1sınıflandırılmış gerekir öngörülüyor. Önem derecesi sınıflandırma bir harf tarafından ayrı ayrı karar verdi gibi belirli bir yordamı şiddetini tahmin etmek için bilimsel olarak ses araçları olması önemlidir.

Skor yaprak3 Morton ve Griffith tarafından önerilen olarak normal durum, su kuyusu-varlık4üzerinde olumsuz etkileri de dahil olmak üzere herhangi bir sapma tespit gerekli bir araç vardır. Skor çarşaf geriye dönük olarak ağrı, acı, belirlemek için kullanılır ve sıkıntı neden tarafından bir deney ve odak üstünde görünür değişiklikleri (örneğin, vücut ağırlığı, kürk, yürüyüş) bireysel hayvanın fiziksel durumda. Rağmen ek VIII ve AB direktifi 2010/63 her önem Kategori örnekleri sağlar, veri tabanlı araştırmacılar hala eksikliği araçları bilimsel olarak kullanarak belirli bir yordamı önem derecesini tahmin etmek için.

Devamsızlığın göstergelerin olumsuz refahını gösterilen hayvan durumunu belirlemek için tek yol değildir; Göstergeler olumlu esenlik işaret varlığı da önemli5,6,7,8' dir. Örneğin, hayvan tavşan çukuru gibi lüks davranışları görüntülemek ve tüm önemli ihtiyaçlarını karşılandığında bina davranış iç içe. Su kuyusu-varlık azalır, lüks davranışları ilk5,7düşüş vardır. Su kuyusu-varlık değerlendirmede kullanılacak iletişim kurallarını göstergeleri fiziksel, fizyolojik/biyokimyasal ve psikolojik durumlarını hayvan için onların refahını detaylı ve kapsamlı bir şekilde9değerlendirmek için işaret içermelidir.

Arıtma bağlamı içinde bir protokol fareler10refahı üzerinde genel anestezi içeren bir yordam etkilerini değerlendirmek için ve bu gereksinimleri karşılamak için geliştirilmiştir. Aynı zamanda, belirli bir deney kolay entegrasyon iletişim kuralı etkinleştirmek için herhangi bir ek yük en aza indirmek için hedefi oldu. Protokol davranış, etkinlik, gıda alımı ve iç içe geçirme gibi eve kafes davranış ve özellik anksiyete ile ilgili davranışı burrowing dikkate alır. Buna ek olarak, bu fare yüz buruşturma ölçek (MGS) ve non-invaziv analizi corticosterone metabolitleri, dışkı içerir. Protokol Refah değerlendirilmesi bilimsel ve hayvan-merkezci bir şekilde kolaylaştırmak için ve önem derecesi sınıflandırılması destekler refahı üzerinde bilgi sağlamak için tasarlanmıştır. Skor sayfalarını ek olarak, bir yordam önem sınıflandırılması için yararlı bilgiler sağlayabilir. Protokol yapmak kolaydır ve kapsamlı ekipman gerektirmez gibi bu devam eden bir deney bir çalışmanın sonuçlarını etkileyen olmadan entegre edilebilir. Bu unutulmamalıdır bu hayvan araştırma: Raporlama, In Vivo deneyler (varış) kılavuz11 yaşında hayvan deneyleri, tasarım, analiz, iyileştirilmesi ve raporlama amacı ile ilgili tüm çalışmalarda dikkat edilmelidir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Çalışma Alman hayvan refah Yasası tarafından ortaya konan esaslarına göre gerçekleştirilmiş ve Berlin Devlet yetkilisi tarafından kabul edildi ("Landesamt für Gesundheit und Soziales", izni numarası: G0053/15).

Not: Ana amacı bu iletişim kuralı, glukokortikoid metabolitleri tekrarlanan Anestezi etkisini araştırmak için yapıldı. Bir örnek boyutu hesaplama kullanılmak üzere hayvan sayısını belirlemek için gerçekleştirildi: n ≥ 2 × (s/μ1- μ2)2 × (zα + zβ)2. µ1- μ2 hangi güç ve örnek boyutu hesaplamalar yapılır popülasyon ortalamaları arasındaki fark nedir (α = %5, β = %80); zα 1,96 ve zβ = = 0,84 çoğu standart normal dağılım quantil. Bu iletişim kuralı time line şekil 1 gösterir. Bir parametre iletişim kuralı Denetim düzeyi ile bir fark gösteriyorsa, hayvan yakından izlenmeli ve parametre daha uygun bir süre sonra ölçülmelidir. Özellik anksiyete ile ilgili davranışı arttırılırsa, örneğin, bu davranış daha bir hafta sonra zamanına kadar tam kurtarma belirlemenize yardımcı olması için test edilmelidir. Zaman puan ve bu iletişim kuralında tanımlanan dönemleri ile diğer yordamları kullanmak için adapte edilebilir. Zaman Puan değiştirirken, habituation dönemleri iletişim kuralında tanımlandığı gibi tutulmalıdır. Fareler'ın davranışlarını etkilemek faktörler azaltmak için daha fazla düzenleme gerektiren testleri farelerin normal bir davranış rahatsız etmeyin testlerden sonra yapılmalıdır. Şekil 2 bir Özet puanlama sayfasını kullanarak iletişim kuralının tüm testleri özetlenmiştir. Şekil 3 test sonuçlarını yorumlamak bakış Basitleştirilmiş ölçekler refah, notu sağlar.

1. habituating fareler deneyci tarafından işleme için

  1. Fareler başka bir tesis veya satıcı alındıktan sonra en az 2 hafta için hayvan tesisine alıştırmak izin.
  2. Fareler gruplar halinde ev ve standart koşullar altında (Oda sıcaklığı 22 ± 2 ° C; bağıl nem 55 ± % 10) 12:12 saat ışık: karanlık döngüsünü proje.
  3. Tüm grupları olarak standart zenginleştirme, tünel ve pamuk nestlets sağlamak ve yiyecek sağlamak ve ad libitumsu.
  4. Bütün fareler tünel ve/veya en az bir hafta12test önce işleme Kupası alıştırmak.
    Not: stres veya kaygı, hangi sırayla su kuyusu-varlık etkiler ve ayrıca bu protokolü12sonuçları üzerinde etkisi vardır fareler kadar kuyruk tarafından toplama tetikleyebilir.

2. davranışsal test Oda ve çizgisel hazırlanması

Not: test, ideal bir konuma sahip hayvanlar saklandığı Oda için ayrı bir oda sağlar. Yordamı yürütülen önce test Oda en az 60 dk ev onların kafes farelerde taşıma. Mümkünse, bu protokol aynı test odada nereye yordamı yürütülen tüm testler yapmak.

  1. Bir gözlem kafes tavşan çukuru davranış8 sınamak ve MGS13 ' te (şekil 4) kullanmak için fotoğraf çekmek için hazırlayın.
    1. Kullanım alanı yaklaşık 220 mm × 290 mm ve yükseklik 390 mm cam kutusunu kullanın.
    2. Bu kutuyu yere malzeme yatak takımları yaklaşık 0.5 cm ile kapak.
    3. Bir avuç yeni çevre tarafından neden sıkıntı azaltmak için yeni yatak malzemesi üstüne ev kafes malzemeden kullanılmış yatak dağılım.
    4. Besin, normal diyet ve su sağlanan aynı tür içerir.
      Not: Eğer mümkün, çünkü fareler malzeme yatak takımları ile su yuvarlak kase doldurmak olabilir su şişeleri, kullanın.
  2. Bir kafes hazırlamak (III yazın: 420 mm × 260 mm × 150 mm) kendisi için fareler yer alan tek tek 24 saat gözlem döneminin (şekil 5).
    Not: bireysel konut süresini en aza indirmek için davranış, eve kafes aktivite, gıda alımı ve fekal corticosterone metabolitleri (FCM) bu dönemde bina yuva için veri toplamak.
    1. Yeni kafes (yaklaşık 0.5 cm derin) ve dağılım bir avuç kullanılmış yatak malzemesi olmadan eve kafes yeni malzeme, üzerine gelen dışkı malzeme sıkıntı azaltmak için yatak takımları yer.
    2. Çevre zenginleştirme tek (bkz: tablo malzemelerin)14olarak tanımlanmış bir ağırlık, bir standart kare pamuk nestlet sağlar.
      Not: Ticari nestlets ağırlık farklılık gösterebilir. Bu nedenle, Deacon tarafından açıklanan nestlet ağırlığını değiştirilebilir ve 2.7 g14yerine 2.0 g kullandık.
    3. Kızılötesi sensör ev kafes etkinliği ölçmek için kullanırken Infrared duyumsal üstünde belgili tanımlık kafes monte ( malzemelerin tabloyabakın).
    4. Ad libitumsu ve yiyecek, normal diyet olarak sağlanan aynı tür sağlar.

3. fare yüz buruşturma ölçek

Not: MGS gözlem kafes üç saat noktalarda alınır için Fotoğraflar: (i) 2 gün önce kayıt temel MGS düzeyleri, (ii) 30 dakika sonra prosedür ve (iii) 150 dk sonra yordamı yordam. Su kuyusu-varlık Engelli olduğunu, MGS puanları artırmak. Eğer artan MGS puanları hala 150 dk sonra izlenmektedir, daha sonraki bir aşamada ek fotoğraf çekmek.

  1. Bir yüksek-tanım fotoğraf makinesi fotoğrafçılık için kullanın.
  2. Yavaşça fare gözlem kafesin içine aktarmak ve en az 30 dakika için yeni ortama alıştırmak için fareyi izin.
  3. Sürekli hakkında almak için her zaman 30-40 fotoğrafları gelin 1-2 dk içinde.
  4. Keskin ön veya yan fotoğrafları seçerek ve bulanık fotoğraflar veya fare ön veya yan görünüm daha başka açılardan göster Fotoğraf atarak tüm fotoğrafları sıralamak.
  5. Rastgele her zaman bir nokta, (Yani 2 gün önce yordamı, 30 dakika sonra prosedür ve prosedür sonra 150 dk) için her fare bir fotoğraf seçin.
  6. Vücut pozisyonu görünür13bile değil sadece fare başkanı görüntülemek amacıyla fotoğraf kırpma.
  7. Her fotoğraf için bir levha ile bir elektronik tablo dosyası oluşturup MGS her sayfasına beş yüz eylem birimleri dahil olmak üzere bir tablo ekleyin.
    Not: Dosyayı temel fotoğraf yanı sıra fotoğraf sonrası yordam içerir.
  8. Çarşafları sırasını rastgele.
  9. Daha önce Langford vd tarafından geliştirilen MGS kullanın ve onları 3 nokta bir ölçek kullanarak yüz eylem birimlerini Puan edinildi eğitilmiştir üç bağımsız kişiler için bir bilgisayar ekranında dosya mevcut (0 = yok, 1 = orta mevcut, 2 belli ki = mevcut).
    Not: Puanlama parametreleri13takip bağlıdır: Orbital sıkma ("sıkıca kapalı bir göz kapağı veya bir göz sıkmak ile yörünge alanın daralması"); burun çıkıntı ("uzantısı deri burun köprüsü üzerinde görünür yuvarlak"); yanak çıkıntı ("konveks görünümü yanak kas"); kulak pozisyon ("kulak") dışında çekti ve onların temel konumdan geri veya geri çizilmiş olması kulak ipuçları sayesinde bu formu dikey sırtlar featuring; Bıyık değişiklik ("bıyık onların taban çizgisinden hareketin getirin ya da geri, yüz veya ileri, karşı sanki diken; diken Bıyık da birlikte yığın ").
  10. (Uyarlama Langford vd aşağıdaki gibi puanları, analiz 13).
    1. MGS puanı üretmek için tüm yüz eylem birimler her fotoğraf için ortalama.
      Not: Eğer bir yüz eylem birim attı değil, kalan yüz eylem birimleri ortalama.
    2. Her fare için bir MGS fark puan elde etmek fotoğraf sonrası yordamı için ortalama temel fotoğraflardan için ortalama çıkarma.
    3. MGS fark puanları (ilgili örnekleri için parametrik olmayan test) kişiler arasındaki farkları sınayın.
      Not: önemli bir fark (p < 0,05) ise, tüm fotoğrafları puanları veya sadece bir kaç fotoğraf puanları kişiler arasında farklılık olup olmadığını belirlemek. İkinci doğruysa bu fotoğraflarını puanlama yineleyin. Aksi takdirde, kişilerin MGS eğitim yineleyin ve fotoğrafları tekrar Puan edinildi.
    4. Sonuçları tüm kişilerin önemli ölçüde farklı değildir Eğer ortalama MGS fark puanları her fare için farklı kralları elde.
    5. Parametrik olmayan istatistik test çalışma grupları arasında ortalama olarak MGS fark puanları karşılaştırmak için kullanın.

4. burrowing davranış8,15,16

  1. Burrows 140 ± 2 g gıda granül normalde standart opak plastik su şişesi (250 mL, 150 mm Uzunluk, 55 mm çap, şişe boyun 45 mm çapı)8diyet olarak sağlanan koyarak hazırlamak.
    Not: fare geniş tüpler tercih olarak, burrows 68 mm çapında Deacon16tarafından açıklandığı gibi kullanılabilir.
  2. Yerde yuva iklimlendirme için önceki yordamı 5 gün gıda granül ev kafeste dolu.
    Not: İçinde belgili tanımlık kafes düzenli gıda dağıtım ünitesi değil boşaltılması ama fareler kullanılan olarak da yiyecek parçaları ile dolu kalması gereken bu.
  3. Yürütmek testi iki kez, iki gün önce yordamı (temel); son 30 dk sonrası yordamı de gerçekleştirmek.
    1. MGS için fotoğraflar nerede çekildi gözlem kafes için en az 30 dk için alıştırmak fare izin.
    2. Gıda granül gözlem kafes arka duvarına paralel yer plastik su şişesi dolu.
    3. 2 h sonra yuva içinde kalan yemek parçaları (g) tartmak.
  4. İlk oranı (%) göre fareler tarafından yuva kaldırıldı gıda granül ağırlığını hesaplayın.

5. 24 saat gözlem süresi

Not: Fareler tek tek, 2.2 içinde açıklandığı gibi yerleştirilmiştir. (Şekil 5), bir 24 saat boyunca yiyecek ölçmek amacıyla alımı, eve kafes etkinlik, iç içe bina davranış ve FCM düzeyleri. 24 saat gözlem iki kez gerçekleşir: (i) 2 gün önce yordamı temel seviyeler (II) üzerinde işlem yapıldığı gün.

  1. Gıda alımı
    1. Fareler vücut ağırlığı (skor sayfası parçası) herhangi bir değişiklik değerlendirmek için (örneğin 2 gün öncesine anestezi, anestezi, 2 gün sonra anestezi ve haftalık anestezi sonra hemen önce), düzenli aralıklarla tartın.
      Not: Vücut ağırlığı gıda alımı vücut ağırlığının gram başına hesaplamak için gereklidir. Su alımı da 24 saat gözlem süresince ölçülebilir. Gıda alımı azalır, su kuyusu-varlık bozulmuş olabilir.
    2. Kafes (yaklaşık 100 gr) gıda birimi cinsinden sağlanan standart gıda diyet (gram) ilk ağırlığını belirlemek.
    3. Standart gıda diyet kilo 24 saat gözlem dönemin sonunda belirlemek.
    4. Kafes yan dikkatle gıda dökülme için gıda birimi altında inceden inceye gözden geçirmek ve gıda biriminde kalan yemek parçaları ağırlığını bulundu herhangi bir ek gıda parçaları ekleyin.
    5. Gıda alımı birim vücut ağırlığı başına hesaplayın.
  2. Eve kafes etkinliği
    Not: Kızılötesi sensör kullanımı için aşağıdaki talimatlara bakın ( malzemelerin tabloyabakın), ama eve kafes etkinlik-de var değerlendirildi ile alternatif programlar. Sapma eve kafes faaliyet denetimi düzeylerinden (örneğin hypoactivity, hiperaktivite) Engelli su kuyusu-varlık belirtisi olabilir.
    1. Programı başlatın.
    2. 1 dk bir örnek Aralık ve 24 saat darbeleri her dakika için 24 saat kaydedilir anlamı, bir satın alma saati seçin.
      Not: kayıt başladıktan sonra deneyci Oda birkaç kez girerse, yalnızca veri ne zaman fare rahatsız değildi dönemlere ait kullanın (Yani karanlık dönemde).
    3. 10-min aralığı impulslarinin toplamı.
    4. (Darbeleri × min) zaman eğri altındaki alan hesaplamak.
  3. Yuva bina davranışı
    Not: Karmaşık ve yüksek yuvalarını su kuyusu-varlık bir göstergesi olarak hizmet verebilir.
    1. Bir kare pamuk nestlet yerleştirin (bkz. Tablo reçetesi) kafesin ortasında tanımlanmış ağırlığı (örneğin 2.0 g).
    2. Deacon14 göre 5 puanlık bir ölçekteki (aşağıya bakın) üzerinde yuva ertesi sabah, yaklaşık 2 h ışığı yanar sonra puan. İlk nestlet ağırlığının en az % 5 herhangi bir dönen nestlet adet tartın. 14 aşağıdaki gibi yuva Puan edinildi
      1. Skor "1" Eğer sağlam nestlet % 90'ı atayın.
      2. % 50-90 olduğu gibi "2" puanı atayın.
      3. Ata nestlet % 50-90'ı parçalanmış "3" puanı.
      4. Atama "4" daha--dan %90 paramparça olmuş ama yuva ise düz ve onun çevresi % 50'den az kıvrılıp zaman fare vücut yüksekliği daha yüksek puan edinildi.
      5. Atama "5" daha fazla alırsanız daha % 90 nestlet paramparça olmuş ve yuva yüksek ise onun çevresi fazla % 50 yukarıya kıvrılmış bir fare vücut yüksekliği yüksek puan.
  4. Fekal Corticosterone metabolitleri
    Not: Denetim seviyesinden FCM artar akut stres seviyeleri 24-h postanesthetic döneminde yansıtır.
    1. 24 saat gözlem dönemin sonunda forseps kullanarak kafes tüm kuru dışkı parçaları toplamak ve ıslak granül idrar ile kontamine ortadan kaldırmak.
    2. FCM Palme vd göre ayıklamak 17, aşağıdaki gibi.
      1. 60-70 ° c sıcaklıkta kuru dışkı örnekleri
      2. Dışkı örnekleri bir harçla lunaparkçı.
      3. 0,05 g bir aliquot 1 mL % 80 metanol ile bir santrifüj tüpü 30 dk için çok bir vortex Tarih sallamak.
      4. 2500 x g 15dk için de örnekler santrifüj kapasitesi.
      5. 0.5 mL süpernatant başka bir santrifüj tüpüne pipet.
      6. Dışkı örnekleri (ve özleri)-18 ° c en azından depolamak
      7. FCM 5α-pregnane-3b,11b,21-triol-20-one enzim immunoassay (ÇED)18,19 veya başka bir tam olarak doğrulanmış ÇED kullanarak analiz.
    3. FCM konsantrasyonları temel FCM konsantrasyonları göre yüzde değişim hesaplayın.

6. ücretsiz keşif paradigma

  1. Raf ev kafesten alıp 24 saat gözlem dönemin sonunda bir masa yüzeyine yerleştirin.
  2. Bir gridded kafes (olmadan yiyecek ya da su şişeleri) içinde belgili tanımlık kafes kafes uzun kenarına 45 ° açılı yerleştirin.
    Not: fare için saklanacak bir yer olarak hizmet vermektedir, yuva yok etmez ama kafes çapraz üzerinde yuvası yerleştirin.
  3. Monitör veya video kaydı fareler için yaklaşık 1,5 m mesafeden 10 dak.
    1. Sayacı başlatmak.
    2. Ne zaman fare (ile tüm dört paws üstünde belgili tanımlık kafes tepe) kafes üst üzerine tırmanıyor ya da kafes üst (bir veya daha fazla pençeleri kafes katta) yaprak her zaman unutmayın.
      Not: Bazı fareler kafesi yukarı tırmanmak ve kafes kenarı boyunca yürümek için bırakın. Bazı fareler kafesi üstte de arka. Fareler hâlâ kafesin üstündeki olsaydı bu gibi durumlarda tedavi.
  4. Bert vd. aşağıdaki parametreleri değerlendirmek 20.
    1. Gecikme süresi (saniye cinsinden) ilk keşif için analiz.
    2. Keşifler sayısı analiz.
    3. Toplam süre (saniye) keşif analiz.
      Not: Yüksek oranda gecikme süreleri ilk keşif az sayıda keşifler ve düşük toplam süre keşif için daha yüksek bir özellik anksiyete düzeyleri belirtebilirsiniz.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Bu protokol was orijinal gelişmiş-esenlik isoflurane anestezi bir deneyimi takip C57BL/6JRj farelerin değerlendirmek için (bir 45 dk anestezi oturum, n = 13 kadın) veya tekrarlanan isoflurane anestezi (altı 45 dk anestezi oturumlarıyla 3-4 gün n anestezi oturumları arasında 13 kadın =) refah kontrol fare ile karşılaştırıldığında (n = 6 kadın)10hangi anestezi aldı ama aynı önlemler göre test edildi,. Biz bir deneyimi isoflurane anestezi ve iyi tedavi edilmeyen kontrol fare ile karşılaştırıldığında C57BL/6JRj fareler olmak tekrarlanan isoflurane anestezi etkisi değerlendirildi. Burada, temsilcisi sonuçlarını kadın C57BL/6JRj fareler, bazı veriler de dahil olmak üzere daha önce Hohlbaum vd. yayınladı 10yanı sıra daha önce yayımlanmamış sonuçları gösterilir.

İstatistiksel analiz

Yönler veri analizi ve testler normal olmak için her parametre için yapıldı. (Yani kontrol, tek isoflurane anestezi, şekil efsanelerde belirtildiği gibi isoflurane anestezi analiz kullanarak ilgili test tekrar. çalışma grupları arasındaki farklar Veri normal dağılım varsayımlar tanıştığımda, 1 yönlü ANOVA gerçekleştirildi. Sigara-dağıtılmış veri istimal Kruskal-Wallis-test fark analiz edildi normal kabul p < 0,05 önemli.

Temel değerler

Temel değerlerini, yordamı yürütülen önce toplanan tedavi grupları ilgili parametresinde farklı olup olmadığını belirlemek önemlidir. Şekil 6, Şekil 7, şekil 8, Şekil 9 ve şekil 10gösterildiği MGS temel düzeyde Puan edinildi (p = 0.762, Kruskal Wallis testi), tavşan çukuru gibi lüks davranışlar (p = 0.896, Kruskal Wallis testi) ve iç içe geçirme (p 0.723, Kruskal Wallis testi =), gıda alımı (p = 0.398, 1 yönlü ANOVA) ve eve kafes etkinlik (p 0.208, Kruskal Wallis testi =) önemli ölçüde grupları arasında farklı değil. Ayrıca, hiçbir önemli farklılıklar temel FCM konsantrasyonlarda bulundu (Medyan, interquartile aralığı ayraç [ng/50 mg]: kontrol: 123.01 (82.70-193.46); tek anestezi: 118.31 (101.73-153.54); tekrarlanan anestezi: 129.55 (92.58-139.48)) (p «««=) 0.904, Kruskal Wallis testi. Temel düzey farklılıkları ortaya çıkarsa, delta değerleri hesaplanır.

Fare yüz buruşturma ölçek

Ortalama MGS puanları karşılaştırıldığında, denetimin karşı önemli daha yüksek puanları anestezi tek deneyiminden sonra bulundu (p 0,001 =) ve son anestezi oturum tekrarlanan sonra (p = 0.021) 30 dk sonra son anestezi (şekil 6A) neden . Son anestezi sonra 150 dk artık gruplar arasındaki farklar vardı (p 0,910 =).

Temel MGS puanları her zaman 0'a eşit değildir aslında dikkate almak, MGS fark puanı, iletişim kuralında tanımlandığı gibi hesaplanır. Her iki tek bir deneyim anestezi (p = 0,002) ve tekrarlanan anestezi (p 0.008 =) MGS fark puanları karşı denetim 30 dk sonra anestezi arttı. Son anestezi sonra 150 dk tüm fareler denetim seviyelere döndü (p 0.617 =) (şekil 6B)10.

Tavşan çukuru davranış

Anestezi gıda ağırlık yüzdesi azaltılacağını tekrarlanan denetimin karşı yuva kaldırıldı fare yemi (p = 0.036, Kruksal Wallis testi) (Şekil 7)10.

Yuva bina davranışı

Anestezi, tekrarlanan anestezi ve denetimin tek bir deneyim arasında yuva puanlarında önemli farklılıkları yoktur edildi (p = 0.240, Kruksal Wallis testi) (şekil 8)10.

Gıda alımı

1 gün sonra son anestezi, tekrarlanan anestezi önemli ölçüde gösterdi geçirmiş farelerin tek anestezi deneyimli vardı fareler ile karşılaştırıldığında gıda alımı azalır (p = 0.047, 1 yönlü ANOVA). Buna ek olarak, bir hafta sonra anestezi tüketilen önemli ölçüde daha fazla gıda denetimleri daha almıştı fareler tekrarlanan (p 0.012, = 1 yönlü ANOVA) veya tek bir anestezi almıştı fareler (p = 0.001, 1 yönlü ANOVA) (Şekil 9)10.

Eve kafes etkinliği

1 gün sonra son anestezi, karanlık dönemde eve kafes aktivite aktivite eğri altındaki alan tarafından belirtilen önemli ölçüde tek anestezi, tekrarlanan anestezi veya denetim tedavi almıştı fareler arasında olmayan farklı (p = 0.498, Kruskal-Wallis-Test) (şekil 10)10.

Ücretsiz keşif paradigma

Ne zaman test gerçekleştirildiği tüm fareler kafesi üst araştırdı. Ancak, 1 gün sonra son anestezi anestezi almıştı fareler tekrarlanan (Medyan, interquartile aralığı ayraç [s]: 78,00 (55,00-89.00)) denetimleri daha önemli ölçüde daha sonra zaman içinde kafes üst araştırılmalıdır (31,00 (18.25-42.75); p 0,009, = Kruskal-Wallis-Test) ve tek bir anestezi almıştı fareler (27,00 (21.00-45.50); p = 0.001, Kruskal Wallis testi), daha önce10yayınlandı. Keşif (şekil 11A) ve keşifler (şekil 11B) sayısı parametreleri toplam süresi gecikme süresi ilk keşif için benzer. Anestezi keşifler karşı denetim sayısı azaltılmış anlamlı tekrarlanan (p = 0.023, Kruskal Wallis testi) ve keşif toplam süresi (p 0.032, Kruskal Wallis testi =) 1 gün sonra son anestezi tek bir anestezi karşı. Sonra son anestezi, tüm parametreler, Yani ilk keşif gecikme süresi 8 gün itibariyle (Denetim: 27,50 (13,50-47.25); tek anestezi: 18.00 (9,50-38,50); tekrarlanan anestezi: 20,00 (12,50-42,00); p = 0.722, Kruskal Wallis testi), sayı keşifler (p = 0.057), ve toplam süre keşif (p = 0,579), artık çalışma grupları (Şekil 11) arasında farklılık.

Fekal corticosterone metabolitleri

Temel değerleri elde, yüzde değişim göreceli olarak dikkate almak için temel hesaplanır ve gruplar arasında önemli bir fark yoktur bulundu (p = 0.119, Kruskal Wallis testi) (şekil 12)10.

Figure 1
Resim 1 : Zaman hat Protokolü'nün. Gri ve beyaz renkli alanlara karanlık sembolize ve bir gün, bir süre sırasıyla ışık. Yordama bağlı olarak, bu iletişim kuralı adapte olabilir. "Habituation yuva için" fareler tavşan çukuru testi yapılır önce onların ev kafeste bir yuva olarak plastik su şişesi kullanmaya acclimatized olduğu anlamına gelir. B, temel değeri; FCM, fekal corticosterone metabolitleri. Bu rakam Hohlbaum ve ark. değiştirildi 10. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2 : Özet skor levha. Bu sayfa ve tüm testleri içerir için tek tek her fare dolu. Testi yapılır zaman tarih ve saat eklenmelidir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3 : Su kuyusu-varlık sınıf ölçekleri. "Su kuyusu-varlık zarar görmemiş" ölçekler aralığı (yeşil) "Engelliler refah" (kırmızı) ve express test sonuçlarını Basitleştirilmiş bir şekilde anlamını. Bu aşamada bilgi göstergeleri iyi olmak için biz refah her test, sadece genel bir açıklama için nitelikte kesin bir açıklama yapamaz. MGS, fare yüz buruşturma ölçek. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4 : Gözlem kafes. Bu kafes test davranış tavşan çukuru ve fare yüz buruşturma ölçek (MGS) göre çözümlenmesi için fotoğraf çekmek için kullanılır. Kafes önü açıktır ve fareler kürk renkleri bağlı olarak, diğer üç duvar ya siyah ya da beyaz fareler ile kontrast renkli. Cam kutusu katında yaklaşık 0.5 cm eve kafes kullanılmış yatak malzeme dahil yatak malzeme ile kaplıdır. Standart gıda ve su temin edilmektedir. Fareler malzeme yatak takımları ile kase doldurmak olabilir çünkü eğer olanaklı, kase yerine su şişeleri, kullanılmalıdır. En az 30 dk habituation süre sonra yuva eklenir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5 : 24 saat gözlem dönemi. Bina davranışı, eve kafes etkinlik ve gıda alımı yuva değerlendirmek ve hangi fekal corticosterone metabolitleri (FCM) ölçmek dışkı örnekleri toplamak için fareler için ayrı ayrı 24 h yerleştirilmiştir (Tip III kafes: 420 mm × 260 mm × 150 mm; malzeme yatak takımları yaklaşık 0.5 cm ile kullanılan derin ev kafes malzemeden yatak takımları üzerine dağılmış, bir pamuk nestlet, musluk suyu ve standart gıda ad libitumdiyet). Kızılötesi sensör kafes üstüne monte edilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6 : Fare yüz buruşturma ölçek (MGS). Kutuyu interquartile aralığı (IQR) temsil eder, 25inci ve 75inci DÖRTTEBİRLİK kutusu kenarları vardır. Bıyık 1.5 × IQR büyük olan değerleri temsil eder. Nokta aykırı 1,5-3,0 × IQR arasındaki değerleri ile vardır. Renkli yıldız işareti outliers 3.0 × IQR büyük değerler ile vardır. (A)demek MGS Puan edinildi. (B) demek MGS puan fark. p değerleri hesaplanan Kruskal Wallis testi kullanarak: * p < 0,05; ** p < 0,01. Bir teknik arıza nedeniyle (kamera, ölçek), dört tek anestezi grubu farelerde istatistiklerinden dışlanacak vardı. Bu rakam Hohlbaum ve ark. değiştirildi 10. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7 : Davranış burrowing. Kutuyu interquartile aralığı (IQR) temsil eder, 25inci ve 75inci DÖRTTEBİRLİK kutusu kenarları vardır. Bıyık 1.5 × IQR büyük olan değerleri temsil eder. Renkli yıldız işareti outliers 3.0 × IQR büyük değerler ile vardır. p değerleri hesaplanan Kruskal Wallis testi kullanarak: * p < 0,05. Bir teknik arıza nedeniyle (kamera, ölçek), istatistiksel analiz dışlanacak tek anestezi grubunda dört fareler vardı. Bu rakam Hohlbaum ve ark. değiştirildi 10. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 8
Şekil 8 : Davranış bina yuva. Kutuyu interquartile aralığı (IQR) temsil eder, 25inci ve 75inci DÖRTTEBİRLİK kutusu kenarları vardır. Bıyık 1.5 × IQR büyük olan değerleri temsil eder. Nokta aykırı 1,5-3,0 × IQR arasındaki değerleri ile vardır. p değerleri Kruskal Wallis testi kullanılarak hesaplanmıştır; d, gün. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 9
Şekil 9 : Gıda alımı. Ortalama ± standart sapma verilerdir. p değerleri 1 yönlü ANOVA (post-hoc Tukey HSD) kullanarak hesaplanan: * p < 0,05; ** p < 0,01. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 10
Şekil 10 : Anasayfa kafes etkinlik. Kutuyu interquartile aralığı (IQR) temsil eder, 25inci ve 75inci DÖRTTEBİRLİK kutusu kenarları vardır. Bıyık 1.5 × IQR büyük olan değerleri temsil eder. Nokta aykırı 1,5-3,0 × IQR arasındaki değerleri ile vardır. p değerleri hesaplanan Kruskal-Wallis-testini kullanarak Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 11
Şekil 11 : Ücretsiz keşif paradigma. Kutuyu interquartile aralığı (IQR) temsil eder, 25inci ve 75inci DÖRTTEBİRLİK kutusu kenarları vardır. Bıyık 1.5 × IQR büyük olan değerleri temsil eder. Nokta aykırı 1,5-3,0 × IQR arasındaki değerleri ile vardır. Renkli yıldız işareti outliers 3.0 × IQR büyük değerler ile vardır. (A) keşif toplam süresi. (B) keşifler sayısı. p değerleri hesaplanan Kruskal Wallis testi kullanarak: * p < 0,05. Bu rakam Hohlbaum ve ark. değiştirildi 10. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 12
Şekil 12 : Fekal corticosterone metabolitleri (FCM). Kutuyu interquartile aralığı (IQR) temsil eder, 25inci ve 75inci DÖRTTEBİRLİK kutusu kenarları vardır. Bıyık 1.5 × IQR büyük olan değerleri temsil eder. Renkli yıldız işareti outliers 3.0 × IQR büyük değerler ile vardır. FCM düzeyleri 2 gün önce ve 1 gün prosedür sonrası ölçüldü. FCM konsantrasyonları ilgili temel değer göre yüzde değişim [%] hesaplanır. Veriler analiz Kruskal-Wallis-testini kullanarak Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Protokol was orijinal gelişmiş-esenlik bir tek anestezi veya tekrarlanan isoflurane anestezi alınan C57BL/6JRj farelerin değerlendirmek için. Sonuçları esenlik değerlendirmek için hassas yöntemleri vardı bu testleri lüks davranışların yanı sıra diğer önlemler (örneğin ücretsiz keşif paradigma, MGS, tavşan çukuru gıda alımı) onaylayın. Tekrarlanan isoflurane anestezi özellik anksiyete ile ilgili davranışı, MGS ve tavşan çukuru davranış kısa vadeli etkileri nedeniyle. Ayrıca, tekrarlanan isoflurane anestezi gıda alımı10etkilemek için ortaya çıktı.

Ücretsiz keşif paradigma azaltılmış keşif davranış belirtilen ve sonuç olarak, tekrar tekrar anestezi farelerde anksiyete Düzeyler özelliği yalnızca bir kez anestezi fareler ve kontrolleri ile karşılaştırıldığında. Ancak, tüm gruplarının fareler gridded kafes en iyi10,20araştırdı. Anksiyete ile ilgili davranışı soruşturma arasında özellik ve durum anksiyete21,22ayırt etmek önemlidir. Yabancı bir ortamda fareyi yerleştirerek devlet anksiyete neden olmaktadır. Buna ek olarak, ücretsiz keşif paradigma hayvanlar onların ev kafeslerde kalmak sağlar ve böylece, özellik anksiyete inceler.

Azaltma, sonra tekrarlanan anestezi tarafından açıklanamaz fare keşif davranışı motor aktivite azaldı. Eve kafes aktivite karanlık dönemi sırasında önemli ölçüde çalışma grupları arasında farklı değil. Bu ücretsiz keşif paradigma test gerçekleştirildiğinde fareler zaten fiziksel olarak anesteziden kurtarıldı gösterir.

MGS aslında ağrı değerlendirmek için geliştirilmiş, ancak yüz ifadeleri de stres ve olumlu duygular13,23tarafından değiştirilmiş kanıt. Fare yüzler fotoğraflarını her iki tek ve tekrarlanan isoflurane anestezi puanları MGS kısa vadede hemen sonrası anestezik süre üzerinde artış göstermiştir. MGS fark puanı 1 kaldı gibi stres düzeyini hafif10olduğu ortaya çıktı. Sonuçları Miller vd. son gözlemleri ile katılıyorum 24 , 25 ve düzey 150 dk denetlemek için döndürülen fareler anestezi10mesaj gösterdi.

Tavşan çukuru ve davranış bina yuva gibi lüks davranışlar species-specific ve su kuyusu-varlık7 ve fareler26iyi genel sağlık göstergeleri olarak hizmet verebilir. Tüm önemli ihtiyaçlarını gerçekleştiğinde fareler sadece lüks davranışlar göstermektedir. Su kuyusu-varlık azalır, lüks davranışları ilk Engelli5,7olacak vardır. Önceki çalışmalar tavşan çukuru ve yuva bina acı ve sıkıntı6tarafından,8, Engelli ama aynı zamanda Hipokampal lezyonlar bu iki davranışları15,27 etkileyebilir kanıtlar olduğunu göstermiştir , 28 , 29 , 30 , 31.

Lüks davranışlar (davranış burrowing) erken post anestezik dönemde ve ertesi gün (davranış bina yuva) sabah tarafından araştırıldı. Deacon ve ark. tarafından geliştirilmiş ve Jirkof ve ark tarafından kabul davranış burrowing için test iklimlendirme (grup konut bireysel konut yerine) ve davranışsal ölçüm (sadece 2 h 24 h yerine) süresi ile ilgili olarak güncellenmiştir 8 , 15 , 16.

Su kuyusu-varlık bir bozulma hemen nakletmek anestezi10da Jirkof vd tarafından rapor edildi, olduğunu mu ima anestezi tavşan çukuru davranış, azaltılmış tekrarlanan kayda değer olduğunu 8. ama ne zaman fare anesteziden kurtarmak için daha fazla zaman vardı, ertesi gün sabah su kuyusu-varlık10yaşadıkları inşa yüksek ve karmaşık yuva belirtti. Bu bulgular daha önceki bir zaman32yuva attı önceki raporlarından farklıdır. Bu nedenle, protokol uyum ve yuva daha önce zamanında skor yararlı olabilir. Fareler yuvalarına karanlık faz32sonundaki hazırlamak eğilimi olarak ancak, davranış bina yuva sirkadiyen ritim hala, dikkate alınmalıdır.

Gıda alımı marjinal 1 gün sonra tekrarlanan anestezi azalma, ama bir hafta sonra artış olmuştur. Fareler vücut ağırlığı kaybetmek değil gibi (bkz: Hohlbaum vd. 10) tazminat mekanizması meydana olabilir ve esenlik gıda alımı ile ilgili olarak bozulma hafif10sınıflandırılmış. Gıda alımı ameliyat sonrası sıkıntı, su kuyusu-varlık ve iştah farelerde, Postoperatif bulantı26 ve ameliyat sonrası stres27tarafından Engelliler sağlar.

FCM güvenilir fareler33,34,35stres gösteriyor. Tepe FCM konsantrasyonları genellikle 8-10 h bir tetikleyici sonra ortaya ama bağırsak transit zamanı18tarihinde bağlı. Bu nedenle, bu protokol için dahil olarak da ev kafes etkinliğini izlemek çok önemlidir. Atılan FCM18sirkadiyen ritim etkisi nedeniyle 24 h FCM konsantrasyonları yansıyan akut stres 24-h sonrası anestezik süre içinde bir süre içinde dışkı örnekleri toplamak için tavsiye edilir. FCM düzeyleri kişiden kişiye farklılık gibi değiştirir FCM düzeyleri temel göre hesaplanır. Mevcut soruşturma FCM sonuçlarını ne anestezi bir deneyim ne de tekrarlanan anestezi önemli ölçüde hipotalamik-hipofiz-adrenal (HPA) eksen aktivite10artış göstermiştir.

Bütün olarak, bulgular isoflurane anestezi kısa vadeli hafif sıkıntı neden ve su kuyusu-varlık erken postanesthetic döneminde isoflurane anestezi10bir deneyimi daha biraz daha fazla Engelli tekrar ortaya koydu.

Su kuyusu-varlık değerlendirmek için bir protokol hayvanlar üzerinde ek sıkıntı empoze. Bir sınırlama mevcut Protokolü'nün plazma corticosterone düzeyleri36artırmak için bilinmektedir 24 saat gözlem süresi içinde bireysel konut kapsamaktadir. Ancak, bireysel konut ev kafes etkinlik, gıda alımı, yuva bina davranış ve FCM düzeyleri ile ilgili olarak bireyler için geçerli veri toplamak gereklidir. Bireysel konut süresi (Yani 24 saat gözlem süresi boyunca) aynı zamanda bu dört parametre inceleyerek en aza. Tarafından bireysel konut önyargılı sonuçları önlemek için kontrol fareler aynı testleri yapıldı ve sonuçları dikkate alınmıştır. Bu parametreler bir grup-konut ortamda ölçmek yöntemleri yoksa, kullanılan (örneğinbir otomatik ev-kafes analiz sistemi ev kafes etkinlik37 için ve gıda alımı için) olmalılar. Ancak, otomatik ev kafes analiz sistemleri mevcut olmayabilir ek donanım gerektirir. Çalışmalar, bireyler yerine hayvan grupları odaklanan eve kafes etkinlik, gıda alımı, iç içe yapı davranış ve FCM düzeyleri de fareler grubu için değerlendirilecek. Sadece onlar ayırt edici olabilir böylece gözle görülür işaretlenmesi için fare gerektirir ücretsiz keşif paradigma için aynı geçerlidir. Su kuyusu-varlık bir grupta azalır Eğer grubunda tüm fareler dikkatle kontrol edilmelidir (skor levha ve klinik muayene kullanarak) fare veya fare tanımlamak için söz konusu. Daha fazla gözlem grubu düzeyinde grup değerlerini duyarlılığını belirlemek için gereklidir.

Arıtma ile ilgili olarak, bu iletişim kuralı için uyarlanmış ve farelerin refahı üzerinde belirli bir yordamın etkisini değerlendirmek için devam eden çalışmalar içine entegre. Belirli yordam ve çalışma tasarımına bağlı olarak bu protokolden en uygun testler seçilmelidir. Burada, tavşan çukuru ve test, MGS, ücretsiz keşif paradigma ve gıda alımının ölçüm bina yuva özellikle yararlı olacağı ortaya çıktı. Sirkadiyen ritim38farelerin davranış aşağıdaki gibi tanımlanmış zamanda noktada tüm gruplarının farelerde davranış testleri gerçekleştirmek için tavsiye edilir. Fareler daha öğleden sonra38sabah daha etkindir. Ancak, çalışma tasarım sabah test etmek için izin vermiyorsa, test başka bir zamanda yapılabilir. Her tek testi tüm gruplar için aynı zaman noktalarda yapılır emin olmak önemlidir. Aksi takdirde, parametrelerin sirkadiyen ritim etkisini Intra - veya Intergroup farklılıklar ile sonuçlanabilir. Ayrıca, böylece tedavi fareler ve fareler denetim sonuçları karşılaştırıldığında kontrol fareler çalışmada, dahil edilmelidir. Denetim fare tedavi fareler aynı zamanda noktada test edilmelidir. Protokol o su kuyusu-varlık Engelli olduğunu gösteriyorsa, prosedür rafine olmalıdır ve protokol tekrarladı. Bu yaklaşım çabaları prosedür rafine için etkin olup olmadığını gösterir.

Mevcut iletişim kuralı bir yordam tarafından neden önem derecesini tahmin etmek için genel bir yardım olarak hizmet verebilir. Bu nedenle, bu yordam bilimsel ve hayvan-merkezli bir düzeyde önem sınıflandırmak için yardımcı olur. Ancak, protokol bir prosedür hafif, orta veya şiddetli olarak sınıflandırmak için bir ölçek sağlamaz. Bir yordam şiddeti sınıflandırmak için örnekler içinde ek VIII ve AB direktifi 2010/63 başvurmak gereklidir.

Sonuç olarak, mevcut protokol refah sistematik bir değerlendirme farelerde bilimsel, hayvan-merkezci bir şekilde genel anestezi sırasında kullanıldığı prosedürleri aşağıdaki destekler.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Sabine örnek derlemesiyle, Edith Klobetz-Rassam FCM, çözümlenmesi için yardım için Jacobs sayesinde PD Dr. med. veteriner. Habil. Roswitha istatistiksel analizi ile yardım için Merle ve Wiebke için el yazması yazım denetleme Gentner. Çalışma, Berlin-Brandenburg araştırma platformu BB3R (www.bb3r.de) bir parçasıdır ve Alman Federal Bakanlığı Eğitim ve araştırma tarafından finanse edildi (sayı vermek: 031A262A) (www.bmbf.de/en/index.html).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Isofluran CP-Pharma Handelsgesellschaft mbH 1214
InfraMot - Sensore Units TSE Systems 302015-SENS
InfraMot - Control Units TSE Systems 302015-C/16
InfraMot - Software TSE Systems 302015-S
Nestlet N Ancare - Plexx NES3600
Camera EOS 350D Canon

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. 2010 EU. Directive 2010/63/EU. Official Journal of the European Union. , L276/33-L276/29 (2010).
  2. Russell, W. M. S., Burch, R. The principles of humane experimental technique. , London: Methuen. (1959).
  3. Morton, D. B., Griffiths, P. H. Guidelines on the recognition of pain, distress and discomfort in experimental animals and an hypothesis for assessment. Vet Rec. 116 (16), 431-436 (1985).
  4. Bugnon, P., Heimann, M., Thallmair, M. What the literature tells us about score sheet design. Lab Anim. 50 (6), 414-417 (2016).
  5. Boissy, A., et al. Assessment of positive emotions in animals to improve their welfare. Physiol Behav. 92 (3), 375-397 (2007).
  6. Arras, M., Rettich, A., Cinelli, P., Kasermann, H. P., Burki, K. Assessment of post-laparotomy pain in laboratory mice by telemetric recording of heart rate and heart rate variability. BMC Vet Res. 3, 16 (2007).
  7. Jirkof, P. Burrowing and nest building behavior as indicators of well-being in mice. J Neurosci Methods. 234, 139-146 (2014).
  8. Jirkof, P., et al. Burrowing behavior as an indicator of post-laparotomy pain in mice. Front Behav Neurosci. 4, 165 (2010).
  9. Hawkins, P., et al. A guide to defining and implementing protocols for the welfare assessment of laboratory animals: eleventh report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Lab Anim. 45 (1), 1-13 (2011).
  10. Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Severity classification of repeated isoflurane anesthesia in C57BL/6JRj mice-Assessing the degree of distress. PLoS ONE. 12 (6), e0179588 (2017).
  11. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: the ARRIVE guidelines for reporting animal research. PLoS Biol. 8 (6), e1000412 (2010).
  12. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat Methods. 7 (10), 825-826 (2010).
  13. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nat Methods. 7 (6), 447-449 (2010).
  14. Deacon, R. M. Assessing nest building in mice. Nat Protoc. 1 (3), 1117-1119 (2006).
  15. Deacon, R. M., Raley, J. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Burrowing into prion disease. Neuroreport. 12 (9), 2053-2057 (2001).
  16. Deacon, R. M. Burrowing in rodents: a sensitive method for detecting behavioral dysfunction. Nat Protoc. 1 (1), 118-121 (2006).
  17. Palme, R., Touma, C., Arias, N., Dominchin, M. F., Lepschy, M. Steroid extraction: get the best out of faecal samples. Wien Tierarz Monats. 100 (9-10), 238-246 (2013).
  18. Touma, C., Palme, R., Sachser, N. Analyzing corticosterone metabolites in fecal samples of mice: a noninvasive technique to monitor stress hormones. Horm Behav. 45 (1), 10-22 (2004).
  19. Touma, C., Sachser, N., Mostl, E., Palme, R. Effects of sex and time of day on metabolism and excretion of corticosterone in urine and feces of mice. Gen Comp Endocrinol. 130 (3), 267-278 (2003).
  20. Bert, B., Schmidt, N., Voigt, J. P., Fink, H., Rex, A. Evaluation of cage leaving behaviour in rats as a free choice paradigm. J Pharmacol Toxicol Methods. 68 (2), 240-249 (2013).
  21. Lister, R. G. Ethologically-based animal models of anxiety disorders. Pharmacol Ther. 46 (3), 321-340 (1990).
  22. Belzung, C., Berton, F. Further pharmacological validation of the BALB/c neophobia in the free exploratory paradigm as an animal model of trait anxiety. Behav Pharmacol. 8 (6-7), 541-548 (1997).
  23. Finlayson, K., Lampe, J. F., Hintze, S., Wurbel, H., Melotti, L. Facial indicators of positive emotions in rats. PLoS ONE. 11 (11), e0166446 (2016).
  24. Miller, A., Kitson, G., Skalkoyannis, B., Leach, M. The effect of isoflurane anaesthesia and buprenorphine on the mouse grimace scale and behaviour in CBA and DBA/2 mice. Appl Anim Behav Sci. 172, 58-62 (2015).
  25. Miller, A. L., Golledge, H. D., Leach, M. C. The influence of isoflurane anaesthesia on the rat grimace scale. PLoS ONE. 11 (11), e0166652 (2016).
  26. Deacon, R. Assessing burrowing, nest construction, and hoarding in mice. J Vis Exp. (59), e2607 (2012).
  27. Felton, L. M., Cunningham, C., Rankine, E. L., Waters, S., Boche, D., Perry, V. H. MCP-1 and murine prion disease: separation of early behavioural dysfunction from overt clinical disease. Neurobiol Dis. 20 (2), 283-295 (2005).
  28. Deacon, R. M., Croucher, A., Rawlins, J. N. Hippocampal cytotoxic lesion effects on species-typical behaviours in mice. Behav Brain Res. 132 (2), 203-213 (2002).
  29. Filali, M., Lalonde, R., Rivest, S. Subchronic memantine administration on spatial learning, exploratory activity, and nest-building in an APP/PS1 mouse model of Alzheimer's disease. Neuropharmacology. 60 (6), 930-936 (2011).
  30. Guenther, K., Deacon, R. M., Perry, V. H., Rawlins, J. N. Early behavioural changes in scrapie-affected mice and the influence of dapsone. Eur J Neurosci. 14 (2), 401-409 (2001).
  31. Deacon, R. M., Reisel, D., Perry, V. H., Nicholas, J., Rawlins, P. Hippocampal scrapie infection impairs operant DRL performance in mice. Behav Brain Res. 157 (1), 99-105 (2005).
  32. Jirkof, P., et al. Assessment of postsurgical distress and pain in laboratory mice by nest complexity scoring. Lab Anim. 47 (3), 153-161 (2013).
  33. Atanasov, N. A., Sargent, J. L., Parmigiani, J. P., Palme, R., Diggs, H. E. Characterization of train-induced vibration and its effect on fecal corticosterone metabolites in mice. J Am Assoc Lab Anim Sci. 54 (6), 737-744 (2015).
  34. Voigt, C. C., et al. Hormonal stress response of laboratory mice to conventional and minimally invasive bleeding techniques. Anim Welf. 22 (4), 449-455 (2013).
  35. Walker, M. K., et al. A less stressful alternative to oral gavage for pharmacological and toxicological studies in mice. Toxicol Appl Pharmacol. 260 (1), 65-69 (2012).
  36. Miyashita, T., et al. Social stress increases biopyrrins, oxidative metabolites of bilirubin, in mouse urine. Biochem Biophys Res Commun. 349 (2), 775-780 (2006).
  37. Bains, R. S., et al. Analysis of individual mouse activity in group housed animals of different inbred strains using a novel automated home cage analysis system. Front Behav Neurosci. 10 (106), (2016).
  38. Saibaba, P., Sales, G. D., Stodulski, G., Hau, J. Behaviour of rats in their home cages: daytime variations and effects of routine husbandry procedures analysed by time sampling techniques. Lab Anim. 30 (1), 13-21 (1996).

Tags

Davranış sayı: 133 refah refah sıkıntı önem sınıflandırma önem derecesi değerlendirmesi dışkı glukokortikoid metabolitleri fareler arıtma davranış testi lüks davranış 3R anestezi fare yüz buruşturma ölçek
Esenlik farelerde sistematik değerlendirilmesi için genel anestezi yordamları
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S.,… More

Hohlbaum, K., Bert, B., Dietze, S., Palme, R., Fink, H., Thöne-Reineke, C. Systematic Assessment of Well-Being in Mice for Procedures Using General Anesthesia. J. Vis. Exp. (133), e57046, doi:10.3791/57046 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter