Summary

إجراء اختبار موضوعي واستنساخه من التعلم حاسة الشم والتمييز في الفئران

Published: March 22, 2018
doi:

Summary

وهنا، نقوم بتدريب الفئران على مهمة تعلم النقابي لاختبار تمييز رائحة. كما يسمح هذا البروتوكول للدراسات المتعلقة بالتغييرات الهيكلية الناجمة عن التعلم في الدماغ.

Abstract

أولفاكشن هو الطريقة الحسية الغالبة في الفئران، ويؤثر على العديد من المشكلات الهامة، بما في ذلك جمع العلف، كشف المفترس والتزاوج، والأبوة والأمومة. الأهم من ذلك، يمكن أن يكون تدريب الفئران لإقران روائح الرواية بالاستجابات السلوكية محددة لتوفير نظرة ثاقبة وظيفة الدائرة حاسة الشم. هذا البروتوكول تفاصيل الإجراءات المتعلقة بتدريب الفئران على مهمة تعلم استثابي انتقال/عدم الانتقال. في هذا النهج، الفئران مدربون على مئات تجارب الآلي يوميا لمدة 2-4 أسابيع ويمكن اختبار ثم على رواية الانتقال/عدم الانتقال رائحة أزواج لتقييم التمييز حاسة الشم، أو استخدامها لإجراء دراسات عن كيفية التعلم رائحة يغير هيكل أو وظيفة لحاسة الشم الدائرة. بالإضافة إلى ذلك، يضم لمبة شمي الماوس (OB) التكامل الجارية ولد بالغ الخلايا العصبية. من المثير للاهتمام، يزيد حاسة الشم التعلم كل من البقاء على قيد الحياة واتصالات متشابك من هذه الخلايا العصبية ولد الكبار. ولذلك، يمكن الجمع بين هذا البروتوكول مع تقنيات أخرى البيوكيميائية والكهربية، والتصوير لدراسة عوامل التعلم وتعتمد على نشاط التوسط من أجل بقاء الخلايا العصبية واللدونه.

Introduction

الماوس المكشوف، حيث يدخل المعلومات رائحة أولاً الجهاز العصبي المركزي (CNS)، يقدم نموذجا ممتازا لدراسة التغيرات الهيكلية المعتمدة على الخبرة. الدوائر OB يتكامل باستمرار ولد بالغ من الخلايا العصبية بطريقة تعتمد على النشاط. تقسيم السلائف العصبية ولد بالغ قبالة من أجداد هذا الخط في منطقة سوبفينتريكولار المجاورة إلى البطينات الجانبية1. عند ترحيل إلى المكشوف، هذه السلائف العصبية البقاء على قيد الحياة، والتفريق، ودمج الخلايا الحبيبية المثبطة أو الخضوع للمبرمج2. التحديد لمصير الخلية تتأثر بالنشاط حاسة الشم، بما في ذلك التعلم حاسة الشم3،4،،من56. بعد الاندماج، تحدث التغييرات متشابك المستحثة بالتعلم في الخلايا الحبيبية خلال أسبوعين حرجة فترة7،8. وهكذا، معبراً للتعلم حاسة الشم مفيدة لدراسة كيف تعتمد على خبرة اللدونة التأثيرات الهيكلية والوظيفية إعادة تنظيم الدائرة الدماغ ناضجة.

ويوفر هذا البروتوكول نهج واحد لتدريب حاسة الشم باستخدام نموذج تكييف هواء فعال. في هذه المهمة، يتم تدريب الفئران المحرومين من المياه ليتم اقترانه عقاب مهلة محاكمة رائحة واحدة (رائحة “الذهاب”) مع مكافأة مياه ورائحة أخرى (رائحة “المحظورة”). الفئران في التقدم من خلال سلسلة متدرجة من مراحل التدريب على مدى 2-4 أسابيع. عند الانتهاء من التدريب، الفئران تستجيب لرائحة الذهاب أو عدم الذهاب مع السلوكيات المنفصلة، والمقابلة (تسعى إلى مكافأة مياه في محاكمات الذهاب ولا تسعى إلى مكافأة المياه في محاكمات المحظورة) (الشكل 1أ). بعد تدريب كاملة، يمكن كذلك الطعن الفئران مع أزواج رائحة مشابهة كيميائيا لاختبار التمييز أو تصبح انتقلت إلى دراسات التعلم كيف حاسة الشم التحقيق يغير هيكل أو وظيفة جراحات على الرغم من أن رائحة تمييز المهام قد وصفت سابقا، آخر تعتمد على قياسات موضوعية مثل عدد من الشمة بين اثنين أودورانتس9،10. وعلاوة على ذلك، الحاجة إلى سجل البشرية من هذه المهام أيضا وقت كثيفة. ويوفر التعلم حاسة الشم الانتقال/عدم الانتقال المهمة المبينة في هذا البروتوكول قياس المباشر غير منحازة، ورائحة التمييز والتعلم حاسة الشم.

Protocol

واستخدمت جميع الفئران تحت بروتوكول أقرته بايلور كلية الطب المؤسسية الحيوان الرعاية واستخدام اللجنة وفقا لمعايير المعاهد الوطنية للصحة. كانت الفئران المستخدمة في هذا البروتوكول جميع الفئران الكبار (> 6 أسابيع عمر) في C57BL6/ي الخلفية وشملت الفئران الذكور والإناث على حد سواء. بعد التدريب/التد?…

Representative Results

متى تعلمنا الفئران مهمة التعلم حاسة الشم، أنهم الآن إقران أزواج رائحة الرواية بالثواب والعقاب. عادة ما تبدأ هذه الفئران المدربة مع حوالي 50% دقة في مهمة الانتقال/عدم الانتقال. يمكن رسم النسبة المئوية الصحيحة من كتلة المحاكمة كمنحنى التعلم لأزواج رائحة رواية (ا?…

Discussion

ويوفر النظام حاسة الشم القوارض نموذجا فريداً لدراسة اللدونة تعتمد الحسية. نقدم هنا نموذج تعلم حاسة الشم لتدريب الفئران ليتم اقترانه أزواج الرائحة أما الثواب أو العقاب. من خلال هذه المهمة التعلم، يمكن دراسة التغييرات الدائرة المصب في التجارب اللاحقة (الكهربية، في فيفو تصوير الخلايا ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

هذا البروتوكول مقتبس من الأعمال السابقة داخل لدينا مختبر (هوانغ et al. 8)-وافقت جميع الأساليب الموصوفة هنا “العناية بالحيوان” واستخدام اللجنة (أكوك) من “كلية بايلور للطب”. معتمد من قبل المعهد الطبي ماكنير، منحة نيندس R01NS078294 إلى B.R.A.، إيدرك المعاهد الوطنية للصحة منح U54HD083092، ومنحة نيدك F30DK112571 لأحزاب اللقاء المشترك، ومنحة نيندس F31NS092435 إلى CKM.

Materials

Glass vial Qorpak GLC-01016
Silicon Tubing Thermo Scientific 86000030
18 gauge needles BD 305196
1-Butanol Sigma Aldrich 437603
Propionic Acid Sigma Aldrich 402907
Mouse Chamber Med Associates ENV-307W
Chamber Floor Med Associates ENV-307W-GFW
Water Port Med Associates ENV-313W Need two
Odor stimulus Med Associates ENV-275 Contain 2 valves to gate odor delivery 
Odor Port Med Associates ENV-375W-NPP
USB Interface Med Associates DIG-703A-USB
Desktop Computer with Windows 2000, XP, Vista, or 7
Flow meter VWR 97004-952
Behavioral software Med Associates SOF-735 This software, which runs each training stage, has now been replaced with Med-PC V
Data Transfer software Med Associates SOF-731 This software formats the data to Excel
Training Software Med Associates DIG-703A-USB This software is used to program each training stage
Water Valve Neptune Research 225P012-11 This valve is used to gate the water delivery. Need Two
Odor Valve Neptune Research 360P012-42 This valve is used to gate the odor delivery. Need Two

References

  1. Carleton, A., Petreanu, L. T., Lansford, R., Alvarez-Buylla, A., Lledo, P. M. Becoming a new neuron in the adult olfactory bulb. Nat Neurosci. 6 (5), 507-518 (2003).
  2. Petreanu, L., Alvarez-Buylla, A. Maturation and death of adult-born olfactory bulb granule neurons: role of olfaction. J Neurosci. 22 (14), 6106-6113 (2002).
  3. Yamaguchi, M., Mori, K. Critical period for sensory experience-dependent survival of newly generated granule cells in the adult mouse olfactory bulb. PNAS. 102 (27), 9697-9702 (2005).
  4. Rochefort, C., Gheusi, G., Vincent, J. D., Lledo, P. M. Enriched odor exposure increases the number of newborn neurons in the adult olfactory bulb and improves odor memory. J Neurosci. 22 (7), 2679-2689 (2002).
  5. Arenkiel, B. R., et al. Activity-induced remodeling of olfactory bulb microcircuits revealed by monosynaptic tracing. PloS one. 6 (12), 29423 (2011).
  6. Alonso, M., Viollet, C., Gabellec, M. M., Meas-Yedid, V., Olivo-Marin, J. C., Lledo, P. M. Olfactory discrimination learning increases the survival of adult-born neurons in the olfactory bulb. J Neurosci. 26 (41), 10508-10513 (2006).
  7. Quast, K. B., et al. Developmental broadening of inhibitory sensory maps. Nat Neurosci. 20 (2), 189 (2017).
  8. Huang, L., et al. Task learning promotes plasticity of interneuron connectivity maps in the olfactory bulb. J Neurosci. 36 (34), 8856-8871 (2016).
  9. Arbuckle, E. P., Smith, G. D., Gomez, M. C., Lugo, J. N. Testing for odor discrimination and habituation in mice. J Vis Sci. (99), e52615 (2015).
  10. Zou, J., Wang, W., Pan, Y. W., Lu, S., Xia, Z. Methods to measure olfactory behavior in mice. Curr Protoc Toxicol. , 11-18 (2015).
  11. Uchida, N., Takahashi, Y. K., Tanifuji, M., Mori, K. Odor maps in the mammalian olfactory bulb: domain organization and odorant structural features. Nat Neurosci. 3 (10), 1035 (2000).
  12. Cang, J., Isaacson, J. S. In vivo whole-cell recording of odor-evoked synaptic transmission in the rat olfactory bulb. J Neurosci. 23 (10), 4108-4116 (2003).
  13. Parthasarathy, K., Bhalla, U. S. Laterality and symmetry in rat olfactory behavior and in physiology of olfactory input. J Neurosci. 33 (13), 5750-5760 (2013).
  14. Rajan, R., Clement, J. P., Bhalla, U. S. Rats smell in stereo. Science. 311 (5761), 666-670 (2006).
  15. Batista-Brito, R., Close, J., Machold, R., Fishell, G. The distinct temporal origins of olfactory bulb interneuron subtypes. J Neurosci. 28 (15), 3966-3975 (2008).
  16. Sakamoto, M., et al. Continuous postnatal neurogenesis contributes to formation of the olfactory bulb neural circuits and flexible olfactory associative learning. J Neurosci. 34 (17), 5788-5799 (2014).
  17. Resendez, S. L., Jennings, J. H., Ung, R. L., Namboodiri, V. M. K., Zhou, Z. C., Otis, J. M., Stuber, G. D. Visualization of cortical, subcortical, and deep brain neural circuit dynamics during naturalistic mammalian behavior with head-mounted microscopes and chronically implanted lenses. Nat Protoc. 11 (3), 566 (2016).
  18. Park, S., et al. One-step optogenetics with multifunctional flexible polymer fibers. Nat Neurosci. 20 (4), 612 (2017).

Play Video

Cite This Article
Liu, G., Patel, J. M., Tepe, B., McClard, C. K., Swanson, J., Quast, K. B., Arenkiel, B. R. An Objective and Reproducible Test of Olfactory Learning and Discrimination in Mice. J. Vis. Exp. (133), e57142, doi:10.3791/57142 (2018).

View Video