Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Bioengineering

بيرفوسابل شبكة الأوعية الدموية مع نموذج أنسجة في جهاز موائع جزيئية

doi: 10.3791/57242 Published: April 4, 2018

Summary

البروتوكول يصف كيفية مهندس شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل في كروي. هو استنباط المكروية المحيطة كروي للحث على الأوعية والاتصال كروي ميكروتشانيلس في جهاز موائع جزيئية. الأسلوب يسمح نضح كروي، وأسلوب الذي طال انتظاره في الثقافات ثلاثي الأبعاد.

Abstract

كروي (إجمالي متعددة الخلايا) يعتبر نموذجا جيدا للأنسجة الحية في جسم الإنسان. وعلى الرغم من التقدم الكبير في الثقافات كروي، تظل شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل في الماغنيسيوم تحديا حاسما للثقافة الطويلة الأجل اللازمة لصيانة وتطوير وظائفها، مثل التعبيرات البروتين و morphogenesis. ويقدم البروتوكول بطريقة جديدة لدمج شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل داخل كروي في جهاز موائع جزيئية. للحث على شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل في كروي، تسترشد براعم الأوعية متصلة ميكروتشانيلس إلى كروي باستخدام عوامل الأوعية من الليفية الرئة البشرية المستزرعة في كروي. براعم الأوعية بلغ كروي، اندمجت مع خلايا البطانية مثقف شارك في كروي، وشكلت شبكة الأوعية الدموية مستمرة. ويمكن أن نتخلل شبكة الأوعية الدموية الداخلية كروي دون أي تسرب. يمكن استخدام شبكة الأوعية الدموية شيدت كذلك كطريق للإمداد بالمواد المغذية، وإزالة النفايات، ومحاكاة دوران الدم في الجسم الحي. الأسلوب الذي يوفر منصة جديدة في ثقافة كروي نحو خلاصة أفضل من الأنسجة الحية.

Introduction

التحول من ثقافة (ثنائي الأبعاد) أحادي الطبقة إلى ثقافة ثلاثي الأبعاد هو بدافع الحاجة إلى العمل مع نماذج الثقافة التي تحاكي مهام الخلوية الحية الأنسجة1،،من23. ركائز بلاستيكية مسطحة والصلب يشيع استخدامها في خلية ثقافة لا يشبه معظم بيئات خارج الخلية في جسم الإنسان. وفي الواقع، تبين العديد من الدراسات أن هندسة الأنسجة على حدة إعادة إنشاء ثقافة ثلاثي الأبعاد والرموز الميكانيكية والكيميائية الحيوية والاتصالات خلية خلية، التي لم تحترم في الثقافة التقليدية ثنائية الأبعاد4، 5،6،،من78.

الكلية متعددة الخلايا أو كروي، واحد من التقنيات الواعدة لتحقيق هذه الثقافة ثلاثي الأبعاد9،10. خلايا تفرز المصفوفة خارج الخلية (ECM)، ويمكن أن تتفاعل مع الآخرين في كروي. على الرغم من أن بعض الهندسة الحيوية الأخرى النهج11،12،،من1314، مثل خلية التراص، بنجاح إجراء نسخ متماثل تعقيد المكانية للجسم البشري، وهذه النهج فقط اثنين أو ثلاثة أنواع الخلايا لسهولة التحليل والتركيز على وظيفة واحدة فقط من الأجهزة المستهدفة. على النقيض من ذلك، يتعرض لبيئات ثقافة مختلفة اعتماداً على مواقعها في كروي بسبب العرض غير متجانسة من المواد المغذية والأكسجين، وباراكريني و autocrine إشارات الجزيئات في كروي الخلايا في الماغنيسيوم. هذه الميزة من الماغنيسيوم يحاكي جزئيا في فيفو شرط الثقافة وتمكين الخلايا في الماغنيسيوم لإنشاء أنسجة أكثر تعقيداً بكثير، وتنظيم هيكل في المختبر من تلك المزروعة في التراص الأنسجة9، 15 , 16-لاحظ أن وظيفة الخلايا في كروي ليست موحدة بسبب البيئة غير متجانسة في كروي إذا كروي يتكون من نوع واحد من الخلايا،. في السنوات القليلة الماضية، يسمح الثقافات كروي الخلايا الجذعية pluripotent الخلايا الجذعية الجنينية (بتوليدا)، التي يسببها (إيبسكس) أو الخلايا الجذعية المقيم في الأنسجة تقليد في فيفو متواليات الإنمائية وإعادة إنشاء أجهزة مصغرة مثل الدماغ17، الكبد18والكلى19،20.

وعلى الرغم من التقدم الكبير في تقنيات ثقافة كروي، استزراع الماغنيسيوم كبيرة لفترة طويلة لا يزال يمثل مشكلة. في نسيج ثلاثي الأبعاد، تحتاج الخلايا يكون مقره داخل 150-200 ميكرون من الأوعية الدموية بسبب العرض المحدود من الأوكسجين والمواد المغذية21. شبكات الأوعية الدموية داخل كروي ضرورية لإيجاز تبادل المواد بين الدم والأنسجة في الجسم الحي. ولتحقيق ذلك، شارك مثقف خلايا بطانية مع هدف خلايا22،،من2324 المجموعات الأخرى أو الناجمين عن التفريق بين الخلايا pluripotent في CD31-إيجابية الخلايا20. ومع ذلك، لا تملك هياكل شبيهة بسفينة المبلغ عنها نهايات مفتوحة لومينا إمدادات الأوكسجين والمواد المغذية إلى مركز كروي. لتقليد دور الأوعية الدموية لتغذية الخلايا في ثقافة ثلاثي الأبعاد، يجب تطوير شبكة الأوعية الدموية مفتوحة وبيرفوسابل في كروي.

وخلال السنوات القليلة الماضية، ذكرت بعض المجموعات البحثية في ميدان ميكرونجينيرينج أساليب بناء شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل، تشكلت عفويا في جهاز موائع جزيئية باستخدام عوامل الأوعية من الخلايا كوكولتوريد تنتجها الخلايا الليفية25 ،26. هذه الشبكات والأوعية الدموية مورفولوجيا مماثلة لنظرائهم في فيفو ويمكن تشكيلها بالعوامل البيئية، وجعلها مناسبة لمحاكاة وظائف الأوعية الدموية في ثقافة كروي. والغرض من هذا البروتوكول بناء شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل في كروي استخدام منصة موائع جزيئية27. يتم تعديل الجهاز موائع جزيئية من الجهاز تم الإبلاغ عنها سابقا25 حيث يمكن إدراجها كروي. طريق توجيه إفراز الأوعية من الخلايا تنتجها الخلايا الليفية في كروي إلى خلايا بطانية في ميكروتشانيلس، براعم من ميكروتشانيلس أناستوموسيد مع كروي الأوعية وشكلت شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل. هذا الأسلوب يسمح تسليم مباشر لمجموعة واسعة من المواد، مثل الجزيئات الفلورسنت والخرز مقياس ميكرومتر في المناطق الداخلية من كروي، الذي يوفر الإطار لثقافة الأنسجة الطويلة الأمد مع شبكات الأوعية الدموية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1-تلفيق العفن الجهاز موائع جزيئية

  1. تصميم نمط الجهاز موائع جزيئية باستخدام البرمجيات المتاحة تجارياً (Clewin5 أو 2016 أوتوكاد، إلخ.). للحصول على وظيفة Clewin5، راجع دليل المستخدم (http://manualzz.com/doc/7159150/clewin-user-s-manual).
    ملاحظة: يتوفر ملف التصميم في التكميلية الملف 1.
  2. قم بنقل ملف تصميم لمولد نمط مايكرو وتحميل الأداة مع قناع كروم مغلفة بمقاوم الضوء الإيجابية.
  3. كشف مقاوم الضوء الإيجابية في مجال نمط استخدام مولد نمط مايكرو.
  4. وضع الواقي الضوئي إيجابيا باستخدام المطور (جدول المواد) وشطف القناع بالمياه (دي).
  5. استخدام تنميش الكروم (جدول المواد)، أحفر الكروم في منطقة مكشوفة حيث تمت إزالة الواقي الضوئي إيجابية. شطف القناع بالماء دي.
  6. إزالة المتبقية مقاوم الضوء على قناع باستخدام الأسيتون.
    ملاحظة: قناع الشفافية يمكن أن تكون بديلاً لقناع Cr.
  7. تعد رقاقة سيليكون نظيفة (4 بوصة، و P(100))، وتدور معطف هيكساميثيلديسيلازاني (همدس) في 3000 دورة في الدقيقة لمدة 30 ثانية.
  8. سوفتباكي همدس لمدة 5 دقائق في 120 درجة مئوية وباردة الرقاقة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  9. سبينكوات مقاوم الضوء السلبية (جدول المواد) في 500 لفة في الدقيقة ل 10 s و 1,200 لفة في الدقيقة لمدة 30 ثانية.
    ملاحظة: حالة طلاء تدور ينبغي أن تسفر عن الطبقات مقاوم الضوء مع سماكة حوالي 100 ميكرومتر في الرقائق بعد الطباعة التصويرية.
  10. بريبكي مقاوم الضوء السلبية لمدة 45 دقيقة في 95 درجة مئوية وباردة ويفر لمدة 60 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  11. تحقق من شدة الضوء الأشعة فوق البنفسجية في كل تجربة وحساب وقت التعرض لجرعة تعرض إجمالي الطاقة في 250 ميغاواط/سم2. ضع النبائط (الخطوة 1، 1، 1-6) على يفر وتعرضها لضوء الأشعة فوق البنفسجية.
  12. بوستباكي مقاوم الضوء السلبية لمدة 1 دقيقة عند 65 درجة مئوية و 5 دقائق عند 95 درجة مئوية. السماح ليفر تهدئة لمدة 1 دقيقة في درجة حرارة الغرفة.
  13. وضع الطبقة مقاوم الضوء السلبية لمدة 15 دقيقة في حمام المطور (جدول المواد) الأولى و 2 دقيقة في الحمام الثاني. شطف يفر في حمام الايزوبروبانول (IPA) أول 10 s وفي حمام أصد الثانية لمدة 10 ق.
  14. هاردباكي مقاوم الضوء السلبية لمدة 30 دقيقة في 200 درجة مئوية وباردة الرقاقة لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة.
  15. قياس سمك طبقة سلبي مقاوم الضوء باستخدام التعريف سطحية.
  16. مكان يفر في مجفف متصلاً بمضخة فراغ وإضافة 200 ميليلتر من silane (trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane). قم بتشغيل المضخة لمدة 10 دقائق، ثم إيقاف تشغيله والحفاظ يفر في مجففة ح 4.

2-الخطوات تصنيع وتجميع طبقات PDMS

  1. يلقي البوليمر بولي دايمثيل سيلوكسان (PDMS) قبل (قاعدة PDMS: علاج عامل = 10:1 (w/w)) وديغا في فراغ غرفة ح 2.
  2. علاج PDMS عند 80 درجة مئوية في فرن تنفيس الهواء بين عشية وضحاها.
  3. تقشر PDMS من رقاقة السيليكون.
  4. لكمه ثقوب 1A-3B (الشكل 1) وثقافة كروي جيدا. استخدام لكمه قطرها 2 مم الثقوب 1A--3B، ويبلغ قطرها 1 ملم لكمه كروي جيد.
  5. تنظيف لوح PDMS وزلة غطاء زجاج (24 ملم × 24 مم) مع شريط لاصق، مرارا وتكرارا الشائكة وتقشير قبالة الشريط. ثم علاج لوح PDMS مع الهواء بلازما 40 s (40 ميغاواط، 50 sccm).
  6. السندات لوح PDMS على كشف غطاء الزجاج بطرد أي فقاعات الهواء من السطح بين لوح PDMS وكشف الغطاء وعلاج عند 80 درجة مئوية على الأقل 12 ح.

3. إعداد كروي

ملاحظة: في الدراسة، والبروتين الفلورسنت الأحمر الإعراب عن السرة البشرية الوريد خلايا بطانية (RFP-هوفيكس) وإذ تعرب عن البروتينات الفلورية الخضراء هوفيكس (التجارة والنقل-هوفيكس) تستخدم في كروي وميكروتشانيلس، على التوالي، للتمييز بين أصل هوفيكس بعد تشييد شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل. إذا ليس هناك حاجة إلى أصل هوفيكس، هوفيكس غير مسمى بما فيه الكفاية للتجربة.

  1. ذوبان الجليد في طلب تقديم العروض-هوفيكس (3.0 × 105 خلايا/فيال) والرئة البشرية تنتجها الخلايا الليفية (حلف) (6 × 10 1.0 خلايا/فيال) وإضافتها إلى 10 مل متوسطة لخلايا تنتجها الخلايا الليفية، وخلايا بطانية على التوالي (جدول المواد). الثقافة لهم في طبق 100 ملم في 37 درجة مئوية و 5% CO2 لمدة 2-3 أيام دون المتلاقية RFP-هوفيكس وهلفس. وسيؤدي هذا الإعداد الماغنيسيوم ~ 200.
  2. فصل في طلب تقديم العروض-هوفيكس وهلفس من الأطباق مع 2 مل من 0.05% التربسين-يدتا والتوقف عن رد فعل التربسين مع 4 مل دميم المحتوية على مصل الدم البقري الجنين 10% (v/v) (FBS) والبنسلين/ستربتوميسين 1% (v/v).
  3. بعد الطرد المركزي في ز x 220 لمدة 3 دقائق، إزالة المادة طافية، وريسوسبيند بطلب تقديم العروض-هوفيكس وهلفس في المتوسط بطانية إلى تركيزات الخلية النهائية عند 2.5 × 104 و 1.0 × 105 خلايا/مل، على التوالي.
  4. بلطف إضافة 200 ميليلتر من تعليق خلية (خلايا 5,000 لطلب تقديم العروض-هوفيكس) وخلايا 20,000 هلفس كل بئر في صفيحة 96-جيدا مع سطح ملزمة منخفضة للغاية.
  5. احتضان لوحة 96-جيدا في 37 درجة مئوية و 5% CO2 لمدة 2-4 أيام.
    ملاحظة: نظراً للقطر كروي يعتمد على الفترة الثقافة وعدد الخلايا الأولية في لوحة 96، حسنا، فإنه يمكن التحكم بهذين المعيارين.

4-خلية البذر في الجهاز موائع جزيئية

ملاحظة: اصطلاح تسمية الثقوب والقنوات وكروي جيدا وأثبتت في الشكل 1. نحدد اليوم 0 يوما عند الانتهاء من حصاد خلية في الجهاز موائع جزيئية. ويرد في الشكل 2التخطيطي للجداول الزمنية التجريبية.

  1. تحميل كروي 1 يوم)
    ملاحظة: ينبغي إجراء الخطوة التالية على الجليد لمنع جيليشن من الكولاجين وألياف.
    1. حل الفيبرينوجين في الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) لتركيز نهائي 2.80 ملغ/مل.
    2. إعداد الكولاجين معادلتها (3.0 مغ/مل في برنامج تلفزيوني) وفقا للبروتوكول الخاص بالشركة المصنعة.
    3. تجمع ميليلتر 107.2 الفيبرينوجين الحل (2.80 مغ/مل) وميليلتر 8.0 معادلتها الكولاجين (3.0 مغ/مل) و 3.6 ميليلتر من أبروتينين (5 U/mL) كل فعل في أنبوب. هذا الحل هو المسمى "الحل مزيج الرئيسي" (مللي ثانية).
      ملاحظة: الحجم ما يكفي لتحميل كروي واحد. إذا كان هناك أكثر من واحد كروي، مضاعفة حجم كل عدد من الماغنيسيوم.
    4. حل ثرومبين في برنامج تلفزيوني لتركيز نهائي من 50 يو/مليلتر.
      ملاحظة: مختبرين من 50 ثرومبين يو/مليلتر (20 ميليلتر في الأنبوب) يتم تخزينها في −30 درجة مئوية وهي إذابة قبل كل تجربة.
    5. ضع لوحة 96-جيدا التي تحتوي على الماغنيسيوم داخل مجلس الوزراء السلامة الأحيائية.
    6. إعداد أطباق بتري 35 ملم اثنين داخل مجلس الوزراء، مع صحن واحد على الجليد (طبق 1) وطبق أخرى في benchtop (طبق 2) السلامة الأحيائية. بيبيت 99 ميليلتر من مرض التصلب العصبي المتعدد في وسط صحن 1 (الشكل 3a) تشكل معالجة تجميعية.
    7. تقليم نصائح 2 أصفر (10-100 ميليلتر) ومسح 3 نصائح ماصة (1-100 ميليلتر) لجمع الماغنيسيوم من لوحة 96، حسنا، خلط ثرومبين مع مرض التصلب العصبي المتعدد، مجموعة دقيقة من الماغنيسيوم، حقن الماغنيسيوم في الجهاز، وحقن الوسائط في الجهاز ، على التوالي. يجب أن يكون حجم المسام من الطرف أكبر قليلاً من القطر من ثقوب 1A-3B القنوات 1 و 3 أو تناسب كروي جيدا في القناة 2 دافئ.
      ملاحظة: فيما يلي، ما لم يذكر خلاف ذلك، استخدم التلميحات ماصة قص في هذه الخطوة. تتوفر صورة نصائح قطع في الشكل 4.
    8. جمع كروي مع 100 ميليلتر من المتوسطة من لوحة 96-جيدا وإضافتها إلى طبق 2 (الشكل 3a).
    9. التقاط كروي بحجم الحد الأدنى من وسائل الإعلام من صحن 2. أثناء الضغط بيبيتور تستقيم، كروي ينبغي التحرك نحو الجزء السفلي من طرف بيبيت بالجاذبية. إخراج كروي بلمس طرف بيبيت على غضروف الحبرية مرض التصلب العصبي المتعدد في صحن 1 (الشكل 3a).
      ملاحظة: ينبغي إجراء الخطوات التالية 4.1.10 و 4.1.11 بسرعة.
    10. إضافة 1 ميليلتر من ثرومبين (50 U/mL) وتخلط بلطف مع تلميح بيبيت الأصفر.
    11. مع ماصة تعيين إلى 7 ميليلتر، تلتقط كروي ووضعه ببطء في البئر كروي (الشكل 3b).
    12. احتضان لمدة 15 دقيقة في 37 درجة مئوية جيليشن الفيبرين.
    13. حقن ببطء المتوسطة غشائي من ثقوب 1A و 3A وملء القنوات 1 و 3 مع وسائل الإعلام (20 ~ 30 ميليلتر/القناة).
    14. ضع الجهاز في طبق 100 ملم مع كيمويبي رطب لمنع تبخر وسائط من الجهاز (الشكل 3 ج).
    15. ضع الجهاز في 37 درجة مئوية و 5% CO2 ل 24 ساعة لإزالة الفقاعات في التفاعل بين وسائط الإعلام وفيبرينوجين.
  2. هوفيكس يوم 0) تحميل
    1. ذوبان الجليد بروتينات فلورية خضراء-هوفيكس (3.0 × 105 خلايا/فيال) وإضافتها إلى 10 مل الوسط بطانية. الثقافة لهم في طبق 100 ملم في 37 درجة مئوية و 5% CO2 ل 2-3 أيام للوصول إلى كونفلوينسي الفرعية. صحن واحد من هوفيكس التجارة والنقل الفرعي المتلاقية ما يكفي لإعداد الأجهزة 8-10.
    2. فصل بروتينات فلورية خضراء-هوفيكس من الأطباق مع 2 مل من 0.05% التربسين-يدتا والتوقف عن رد فعل التربسين مع 4 مل دميم المحتوية على مصل الدم البقري الجنين 10% (v/v) (FBS) والبنسلين/ستربتوميسين 1% (v/v).
    3. بعد الطرد المركزي في ز x 220 لمدة 3 دقائق، ريسوسبيند التجارة والنقل-هوفيكس في المتوسط غشائي في 5.0 × 106 خلايا/مل.
    4. حقن هوفيكس تعليق خلية في القناة الأولى من خلال ثقب 1B (20 ميليلتر في القناة).
    5. إمالة الجهاز موائع جزيئية 90°، ووضعه على الجانب واحتضان في 37 درجة مئوية مدة 30 دقيقة التأكد من أن هوفيكس تلتزم فيبرينوجين في القناة الثانية.
      1. تأكيد تمسك هوفيكس على فيبرينوجين. عند عدد هوفيكس التي تعلق في الواجهة بين جل والمتوسطة ليست كافية، قد قطع المفرج في جذر الأوعية الدموية بعد أيام قليلة من جهاز الثقافة (الشكل 5). في البروتوكول، ومعدل نجاح نضح > 50%.
    6. كرر الخطوتين 4-2-4 و 4.2.5 للقناة 3.
    7. خلايا الثقافة في طبق 100 ملم مع كيمويبي رطبة في 37 درجة مئوية و 5% CO2 لمدة 7-14 يوما.
  3. 1 اليوم ~) تبادل الوسائط
    1. تبادل نصف وسائل الإعلام في القنوات 1 و 3 كل يوم.

5-نوى تلطيخ

  1. إعداد بارافورمالدهيد 4% (PFA) في برنامج تلفزيوني.
  2. قم بإزالة الوسائط من القنوات 1 و 3 وإضافة ميليلتر 20% 4 منهاج العمل كل قناة. ليحل محل الحل في 4% منهاج عمل بيجين، وتكرار إزالة الحل من الجهاز وإضافة 4% منهاج العمل ثلاث مرات.
  3. احتضان الجهاز عند 4 درجة مئوية بين عشية وضحاها.
  4. إزالة 4% منهاج العمل من الجهاز وغسل قنوات ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني.
  5. إضافة 20 ميليلتر من 10 ميكروغرام/مل صبغة الفلورسنت (جدول المواد) كل قناة وصمة عار النواة الخلوية. تبادل الحل في الجهاز، كرر إزالة الحل من الجهاز وإضافة 10 ميكروغرام/مل صبغة الفلورسنت ثلاث مرات.
  6. تخزين الجهاز في 4 درجات مئوية عن 24 ساعة.

6-السوائل نضح من كروي

  1. إعداد كروي بعد استزراع أكثر من 7 أيام في الجهاز على 37 درجة مئوية و 5% CO2 لاستكمال مسار الأوعية الدموية المستمرة.
  2. إزالة المتوسطة من ثقوب 1A، 1B، 3A و 3B.
  3. إدخال 10 ميليلتر من 10 ميكرون حل fluorescein isothiocyanate (فيتك)-ديكستران في برنامج تلفزيوني في الثقوب 1A و 1B.
  4. رصد تدفق ميكروبيدس أو صبغ فيتك تحت مجهر مقلوب.

7-التحديد الكمي لطول برعم

ملاحظة: يتم استخدام البرمجيات 1.49 ver. إيماجيج لكل من تحليل الصورة في هذه الدراسة.

  1. وتتداخل صور أيام التجارة والنقل-هوفيكس 0، 1، 3، 5 و 7.
  2. طرح موقف نصيحة المفرج اليوم 0 من نفس الموضع في الصور التي التقطت في أيام 1 و 3, 5 و 7.
  3. تحديد نمو الأوعية الدموية غيض من موقف الجذر (الشكل 6). تم تعريف المسافة بين الحافة والأوعية الدموية والجذر كطول تنبت في هذه الدراسة (الشكل 7).

8-التحديد الكمي لزوايا الأوعية الدموية

ملاحظة: تم تعريف زاوية الأوعية الدموية كالزاوية تتألف من زاوية الأوعية الدموية والجذر ومركز كروي (الشكل 7 ج).

  1. بيناريزي صور الفلورسنت كروي كوكولتوري التي تحتوي على طلب تقديم العروض-هوفيكس وقياس موقف "centroid" بوظيفة التحليل في إيماجيج. في هذه الدراسة، يتم تعريف موقف مدروس "centroid" كمركز كروي (الشكل 6).
  2. تحديد موضع نصائح الأوعية الدموية والجذور بنفس الطريقة في الخطوة 7.
  3. قياس الزوايا والأوعية الدموية باستخدام وظيفة التحليل في برنامج إيماجيج.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ويبين الشكل 1 التصميم والصور من الجهاز موائع جزيئية. ويضم ثلاث قنوات موازية، في القناة التي يتضمن 2 كروي جيدا. تستخدم القنوات 1 و 3 لثقافة هوفيك والقناة 2 كروي. يتم فصل كل قناة microposts المنحرف مصممة على نمط PDMS. Microposts الحيلولة دون تسرب إلى القنوات 1 و 3 من التوتر السطحي المائية في القناة 2 والسماح بتبادل المواد بين كروي وهوفيكس في ميكروتشانيلس28.

يبين الشكل 7 ألف مركز جهاز موائع جزيئية بعد البذر الخلية. حقل مشرق ونيون الصور التي التقطت في اليوم 0 تظهر أن جل فيبرينوجين شغل القناة 2 فقط دون أي تسرب إلى القنوات 1 و 3، وإرفاق هوفيكس بجدار جل فيبرينوجين بنجاح. صورة مشرقة الحقل في التركيز على كلا محمل كروي و microposts، مما يشير إلى أن كروي تسويتها على نحو مناسب في الجزء السفلي من الجهاز. ولوحظت براعم الأوعية يوم 1 وطول الزيادات براعم مع الوقت (الشكل 7). في يوم 3، برعم أطول التوصل إلى كروي وفي يوم 7، بلغت أكثر من براعم الأوعية كروي (متوسط المسافة من القنوات 1 و 3 إلى كروي < 500 ميكرومتر). في أفضل الأحوال، يمكن ملاحظة التدفق من خلال لومن الأوعية الدموية بعد 4 أيام في الثقافة، والجهاز. عرف أنه زاوية الأوعية الدموية اتجاهات طرف الأوعية الدموية ومركز كروي من جذر الأوعية الدموية. ويبين الشكل 7 ج زاوية الأوعية الدموية كمياً خلال 7 أيام في ثقافة الجهاز. انخفض زوايا الأوعية الدموية بطريقة تعتمد على الوقت، مشيراً إلى أن براعم الأوعية هاجر نحو كروي.

الرقم 8 يشير إلى المقطع شبكة الأوعية الدموية التي اندمجت فيها هوفيكس طلب تقديم العروض والتجارة والنقل-هوفيكس. هوفيكس طلب تقديم العروض والتجارة والنقل-هوفيكس كورديناتيلي شكلت تجويف الأوعية الدموية واحدة كما هو موضح برؤوس الأسهم، التي تشير إلى براعم الأوعية من القنوات 1 و 3 أناستوموسيد لطلب تقديم العروض-هوفيكس في كروي وضوح وشكلت شبكة الأوعية الدموية مستمرة. للتأكد من بيرفوسابيليتي لشبكة الأوعية الدموية، تم حقن فيتك-ديكستران في القناة 1. تدفقت إلى شيدت شبكة الأوعية الدموية والداخلية من كروي فيتك-ديكستران في القناة 1 والذي تم التوصل إليه أخيرا للقناة 3 (الشكل 9). خلال نضح لحل فيتك-ديكستران، هناك لا تسرب من شبكة الأوعية الدموية في الفضاء اكسترافاسكولار. فقد ظهر سابقا أن الجزيئات الصغيرة التي ضخت في التجويف الأوعية الدموية تمر عبر جدار الأوعية الدموية، وتتفاعل مع الخلايا الموجودة في منطقة اكسترافاسكولار. وبالإضافة إلى ذلك، تبين أن معامل النفاذية لشبكة الأوعية الدموية تكون قريبة من ذلك في فيفو27. هذه النتائج تعني أن الشبكة المتكاملة للأوعية الدموية ويمكن توريد المواد الغذائية إلى كروي وإزالة منتج النفايات.

Figure 1
الشكل 1 : تصميم وصورة للجهاز موائع جزيئية. (أ) نظرة عامة على تصميم الجهاز موائع جزيئية. المنطقة الرمادية تشير إلى ثلاث قنوات موائع جزيئية مفصولة microposts المنحرف. وقد القناة 2 بئر لثقافة كروي. يظهر الشكل الصحيح العرض الموسع في المستطيل الأحمر في اليسار. (ب) صورة فوتوغرافية للجهاز موائع جزيئية القنوات التي تملأ بالحبر الأحمر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
الشكل 2 : الوقت التجريبية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 3
الشكل 3 : طريقة لتحميل من كروي إلى الجهاز موائع جزيئية. (أ) جعل قطره من مرض التصلب العصبي المتعدد، ووسائل الإعلام مع كروي في أطباق منفصلة اثنين. ثم نقل كروي في مرض التصلب العصبي المتعدد مع ثرومبين. (ب) التخطيطي عرض الأقسام من الجهاز أثناء حقن كروي. الكمية الزائدة من جل تدفقات خارجاً عن طريق ثقوب 2 ألف و 2 باء. ومع ذلك، يبقى كروي في الجزء السفلي من الجهاز بسبب الولادة الجسدية. (ج) التخطيطي للأجهزة عندما يكونون في حاضنة. وضعت كيمويبي الرطب في صحن 100 ملم ووضعت اثنين من الأطباق 35 ملم مع الجهاز على كيمويبي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 4
الشكل 4 : قص الصور فوتوغرافية نصائح ماصة للخلية البذر للجهاز- تلميح أبيض الأيسر ثقوب 1A، 1B، 3A وج 3 وكروي نقل إلى قطره فيبرينوجين هلام (الخطوات 4.1.9 و 4.2.4 و 4.1.13 4.2.6). نصيحة الأصفر الأوسط لجمع كروي من 96-جيدا (الخطوة 4.1.7). تلميح الصحيح الأبيض للبئر كروي (الخطوة 4.1.11). النصائح قبل قص كما تظهر في الصورة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 5
الشكل 5 : المفرج غير بيرفوسابل- لم يتم الاتصال بالافتتاح بين microposts براعم الأوعية من ميكروتشانيلس وقد فقدت الاتصال بها بين التجويف وميكروتشانيلس (الأسهم السوداء). أنه بسبب هوفيكس عدم كفاية تبذر في القنوات 1 و 3. الأحمر: هوفيكس طلب تقديم العروض في كروي، الأخضر: التجارة والنقل-هوفيكس من ميكروتشانيلس. تم استزراع الخلايا في الجهاز لمدة 14 يوما. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 6
الرقم 6 : تعريف جذر الأوعية الدموية وتلميح ومركز كروي. (أ) طريقة لتحديد موقع جذر الأوعية الدموية وتلميح لقياس طول تنبت. بعد مواءمة الوقت الفاصل بين الصور الفلورية، يتم طرح الصورة الفلورية اتخاذ بضعة أيام بعد استزراع في الجهاز بالصورة في اليوم 0. قمنا بقياس طول براعم بعد الطرح بالبرنامج إيماجيج. (ب) تعريف مركز كروي. الصور الفلورية لطلب تقديم العروض-هوفيكس بيناريزيد وتقاس في ما centroid البرمجيات إيماجيج. نحدد centroid كمركز كروي. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 7
الشكل 7 : تكوين شبكة الأوعية الدموية في الجهاز موائع جزيئية. (أ) الوقت الفاصل بين الصور مركز جهاز موائع جزيئية بعد البذر الخلية. الأحمر: طلب تقديم العروض-هوفيكس المستزرعة في كروي، الأخضر: التجارة والنقل-هوفيكس تحصد في القنوات 1 و 3. التحليل الكمي لطول برعم (ب) وزاوية الأوعية الدموية (ج) (n = براعم 42 في 3 أجهزة أشرطة الخطأ تشير إلى الأخطاء المعيارية (جنوب شرق)). عرف طول تنبت كالمسافة من موقف هوفيكس في اليوم 0 إلى الحافة والأوعية الدموية (ب، أعلى). الزاوية (∠TRS) عرف بجذر الأوعية الدموية (R) ونصيحة (T) ومركز كروي (S) (ج، أعلى). انظر الشكل 6 لتعريف جذر الأوعية الدموية وتلميح ومركز كروي. تم الحصول على هذه البيانات باستخدام البرمجيات إيماجيج. يتم تعديل الخطط شرح تعريف تنبت طول وزاوية الأوعية الدموية من ناشيموتو، يوسف وآخرون 27- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 8
الشكل 8 : تشكيل التجويف الأوعية الدموية التي هوفيكس من ميكروتشانيلس وكروي. (أ) الفلورسنت الصورة من نظرة عامة على العينة بعد 14 يوما في ثقافة الجهاز. المستطيل الأصفر يشير إلى الموضع س ص قسم الضوئية المبين في الفقرة (ب). (ب) x-y, y-z و x-z قسم الضوئية شيدت شبكة الأوعية الدموية. وتشير الأسهم البيضاء إلى التجويف الأوعية الدموية. الأحمر: طلب تقديم العروض-هوفيكس المستزرعة في كروي، الأخضر: التجارة والنقل-هوفيكس في ميكروتشانيلس، الأزرق: النواة الخلوية. (أ) يظهر لا الأسفار الأزرق لأن (أ) هو الصورة قبل تثبيت البرنامج. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 9
الرقم 9 : نضح كروي استخدام شبكة الأوعية الدموية شيدت. ميدان مشرق (أ) ونيون (ب) صور كروي بعد 7 أيام في ثقافة الجهاز. (ج) الفلورسنت صورة كروي نفسه بعد فيتك-ديكستران (كاتشين 70) تحميل. الأحمر: هوفيكس طلب تقديم العروض في كروي والقنوات 1 و 3، الأخضر: فيتك-ديكستران، الأزرق: النواة الخلوية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

التكميلية ملف 1: تصميم الجهاز موائع جزيئية. الملف بتنسيق dxf. اضغط هنا لتحميل هذا الملف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وتظهر التقارير السابقة أن تفرز هلفس مزيج من عدة عوامل الأوعية، مثل أنجيوبويتين-1، أنجيوجينين، وعامل النمو تتمثل، تحويل عامل النمو-α وعامل نخر الورم وبعض المصفوفة خارج الخلية البروتينات29، 30. يعتمد هذا التحليل على إفراز الأوعية من هلفس في كروي كوكولتوري، وهو الحد من هذه التقنية. ولذلك، من الأهمية بمكان لتشكيل الأوعية الدموية مستقرة تعيين كروي كوكولتوري في قاع بئر بحيث يمكن أن تختصر المسافة بين كروي كوكولتوري وهوفيكس في القنوات 1 و 3. وكان طول الأوعية الدموية من الخلايا الليفية تناسبا عكسيا مع المسافة بين الخلايا البطانية والليفية31، حيث أن المسافة أقصر مفيد لتكوين الأوعية الدموية مستقرة. ومع ذلك، فتح ثقب كروي (قطرها 1 ملم) بدون قنوات مدمرة 1 و 3، كان الحد الأدنى لعرض القناة 2 1.5 مم.

على الرغم من أن يستقر كروي في أسفل البئر، كانت أحياناً قطع جذور الأوعية الدموية microposts أو ميكروتشانيلس (الشكل 5). وفي هذه الحالة، يمكن أن تصل إلى لا كاشف التجويف الأوعية الدموية عن طريق ميكروتشانيلس (القنوات 1 أو 3). على الرغم من أننا يمكن أن لا تحل هذه المشكلة تماما، ونحن نفترض أن المشكلة بسبب عدم كفاية عدد هوفيكس في سطح جل فيبرينوجين (الخطوة 4.2.1-4.2.6). تأكد من هوفيكس ستابلي إرفاق الجدار الجانبي للقناة الثانية.

نحو نجاح حقن كروي في البئر، الاستفادة المثلى القطر الداخلي والخارجي من نصائح ميكروبيبيتي في الخطوة 4.1.7 المهم: 1) ينبغي أن يكون القطر الداخلي أكبر من كروي. 2 وينبغي أن تناسب) ديميتر الخارجي إلى حافة البئر حيث أن حدوث لا تسرب من الجل في الجزء العلوي من البئر أثناء الحقن، ويمكن بسهولة إزالة التلميح بعد حقن جل. في هذا البروتوكول (φ1 مم من كروي جيدا)، هو حوالي 700 مكم القطر الأقصى كروي القابلة للحقن. إذا تم تصميم قطر جيدا أكبر من ذلك في هذا البروتوكول، يمكن حقن الماغنيسيوم أكبر لأنه يمكن خفض الحافة بأقطار داخلية أكبر. يمكن التحكم بأقطار كروي بسهولة عن طريق تغيير عدد الخلايا تحصد في لوحة 96-جيدا.

ويبين هذا البروتوكول أولاً رواية موائع جزيئية منصة بناء شبكة الأوعية الدموية بيرفوسابل في كروي. على الرغم من أن كوكولتوري مع هوفيكس يسمح تشكيل هياكل شبيهة بسفينة في كروي18،،من2324، ولم تكن هذه بيرفوسابل بسبب نهايات ميتة لومينا. لأنه يمكن توقع تنتجها الخلايا الليفية خلايا موجودة في أنسجة متعددة الاستخدامات (العظام، adipocyte والسرطان، إلخ)، بإضافة بعض الخلايا الأخرى تستهدف كروي كوكولتوري، الأوعية الدموية نوع مختلف من الماغنيسيوم، التي يمكن أن تحاكي في في فيفو البيئة أفضل من الثقافة التقليدية كروي. للتوسع في تطبيق هذه التقنية، العمل في المستقبل تشمل الأوعية الدموية الماغنيسيوم دون إضافة خلايا تنتجها الخلايا الليفية. يمكن أن تحدث بعض الأخيرة يعمل تقرير نخاع العظام الخلايا اللحمية32 والعضلات خلايا33 تولد الأوعية في أجهزة موائع جزيئية. تستخدم الخلايا اللحمية أو العضلات بدلاً من الخلايا تنتجها الخلايا الليفية سيزيد عدد الأنسجة التي يمكن أن فاسكولاريزيد في الجهاز موائع جزيئية. يوفر هذا البروتوكول منصة أساسية لانسجة الأوعية الدموية، وأسلوب الذي طال انتظاره في مجال الثقافات الأبعاد الثلاثة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

يعلن مقدم البلاغ أن لديهم لا تضارب المصالح المالية.

Acknowledgments

هذا العمل كان يدعمها كريست JST (رقم المنحة JPMJCR14W4)، المجتمع لتعزيز للعلوم (JSPS) كاكينهي (رقم المنحة 25600060، 16386 ك 16)، "مركز برنامج الابتكار" من يأمرون و JST، "ركز المشروع" على "تطوير التكنولوجيا التقييم الرئيسية" من اليابان وكالة التنمية، AMED، مؤسسة ميزوهو للنهوض بالعلوم والبحوث الطبية. وأيد ميكروفابريكيشن "مركز تكنولوجيا النانو جامعة كيوتو".

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AutoCAD 2017 Autodesk AutoCAD 2017
A chromium mask coated with AZP 1350. CLEAN SURFACE TECHNOLOGY CBL2506Bu-AZP
Micro pattern generator Heidelberg uPG101
MF CD-26 developer Rohm and haas electronic materials - Developer in protocol 1.4
S-Clean Sasaki Chemical S-24 Chromium etchant in protocol 1.5
Aceton Wako 012-00343
Silicon Wafer Canosis SiJ-4
Spin Coater MIKASA 1H-D7
Hexamethyldisilazane (HMDS) Tokyo Ohka Kogyo H0089
SU-8 3050 MicroChem - Negative photoresist in protocol 1.9
UV Exposure Nanometric Technology Inc LA310s
SU-8 Developer MicroChem Y020100 Developer for the negative photoresist in protocol 1.13
2-propanol Wako 163-04841
Surface profiler Veeco Veeco Dektak XT-S
(Trichloro (1H, 1H, 2H, 2H-perfluorooctyl) silane Sigma 448931
Polydimethylsiloxane (PDMS) Dow Corning Toray 184W/C
Biopsy Punch (1.0mm)  Kai Industries BP-10F
Biopsy Punch (2.0mm)  Kai Industries BP-20F
Plasma System Femto Science COVANCE
Cover glass MATSUNAMI GLASS C024241
Culture Dishes Iwaki 1000-035
RFP Expressing Human Umbilical Vein Endothelial Cell Angio Proteomie cAP-0001RFP
Normal Human Lung Fibroblasts Lonza CC-2512
Endothelial Cell Growth Medium Lonza CC-3162
Fibroblast Growth Media Kits Lonza CC-3132
DMEM Thermo Fisher Scientific 11965092
Fetal Bovine Serum Thermo Fisher Scientific 26140079
Penicillin-Streptomycin Solution Wako 168-23191
0.05w/v% Trypsin-0.53mmol/l EDTA• 4Na Solution with Phenol Red Wako 204-16935
PBS (Phosphate Buffered Salts) Takara bio T900
96-well plate Sumitomo bakelite 631-21031
1000ul Chip NIPPON Genetics FG-402
200ul  Chip NIPPON Genetics FG-301
10ul Chip NIPPON Genetics 37650
CO2 incubator Thermo Fisher Scientific Model 370
GFP Expressing Human Umbilical Vein Endothelial Cell Angio Proteomie cAP-0001GFP
Fibrinogen from bovine plasma Sigma F8630
Aprotinin from bovine lung Sigma A6279
Collagen I Corning 354236
Thrombin from bovine plasma Sigma T4648
Hoechst 33342 Invitrogen H21492 Fluorescent dye to stain nuclei in protocol 5.5
Paraformaldehyde Solution Wako 163-25983
Inverted Fluorescence Microscope OLYMPUS IX71
Degital CCD Camera OLYMPUS ORCA-R2
Confocal Laser Scanning Biological Microscope OLYMPUS FV1000
Inverted Fluorescence Microscope OLYMPUS IX-83
Fluorescein isothiocyanate-dextran Sigma FD70S

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Abbott, A. Cell culture: Biology's new dimension. Nature. 424, (6951), 870-872 (2003).
  2. Pampaloni, F., Reynaud, E. G., Stelzer, E. H. K. The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 8, (10), 839-845 (2007).
  3. Shamir, E. R., Ewald, A. J. Three-dimensional organotypic culture: experimental models of mammalian biology and disease. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 15, (10), 647-664 (2014).
  4. Abu-Absi, S. F., Friend, J. R., Hansen, L. K., Hu, W. S. Structural polarity and functional bile canaliculi in rat hepatocyte spheroids. Experimental Cell Research. 274, (1), 56-67 (2002).
  5. Bissell, M. J., Radisky, D. C., Rizki, A., Weaver, V. M., Petersen, O. W. The organizing principle: microenvironmental influences in the normal and malignant breast. Differentiation. 70, (9-10), 537-546 (2002).
  6. Liu, Y., et al. Novel role for netrins in regulating epithelial behavior during lung branching morphogenesis. Current Biology. 14, (10), 897-905 (2004).
  7. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459, (7244), 262-U147 (2009).
  8. Torisawa, Y. S., Shiku, H., Kasai, S., Nishizawa, M., Matsue, T. Proliferation assay on a silicon chip applicable for tumors extirpated from mammalians. International Journal of Cancer. 109, (2), 302-308 (2004).
  9. Fennema, E., Rivron, N., Rouwkema, J., van Blitterswijk, C., de Boer, J. Spheroid culture as a tool for creating 3D complex tissues. Trends in Biotechnology. 31, (2), 108-115 (2013).
  10. Sutherland, R. M. Cell And Environment Interactions In Tumor Microregions - The Multicell Spheroid Model. Science. 240, (4849), 177-184 (1988).
  11. Rothbauer, M., Zirath, H., Ertl, P. Recent advances in microfluidic technologies for cell-to-cell interaction studies. Lab on a Chip. (2017).
  12. Matsuura, K., Utoh, R., Nagase, K., Okano, T. Cell sheet approach for tissue engineering and regenerative medicine. Journal of Controlled Release. 190, 228-239 (2014).
  13. Esch, E. W., Bahinski, A., Huh, D. Organs-on-chips at the frontiers of drug discovery. Nature Reviews Drug Discovery. 14, (4), 248-260 (2015).
  14. Bhatia, S. N., Ingber, D. E. Microfluidic organs-on-chips. Nature Biotechnology. 32, (8), 760-772 (2014).
  15. Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies. Science. 345, (6194), (2014).
  16. Hirschhaeuser, F., et al. Multicellular tumor spheroids: An underestimated tool is catching up again. Journal of Biotechnology. 148, (1), 3-15 (2010).
  17. Lancaster, M. A., et al. Cerebral organoids model human brain development and microcephaly. Nature. 501, (7467), 373 (2013).
  18. Takebe, T., et al. Vascularized and functional human liver from an iPSC-derived organ bud transplant. Nature. 499, (7459), 481 (2013).
  19. Taguchi, A., et al. Redefining the In Vivo Origin of Metanephric Nephron Progenitors Enables Generation of Complex Kidney Structures from Pluripotent Stem Cells. Cell Stem Cell. 14, (1), 53-67 (2014).
  20. Takasato, M., et al. Kidney organoids from human iPS cells contain multiple lineages and model human nephrogenesis. Nature. 526, (7574), 564-568 (2015).
  21. Auger, F. A., Gibot, L., Lacroix, D. Annual Review of Biomedical Engineering. Yarmush, M. L. 15, 177-200 (2013).
  22. Inamori, M., Mizumoto, H., Kajiwara, T. An Approach for Formation of Vascularized Liver Tissue by Endothelial Cell-Covered Hepatocyte Spheroid Integration. Tissue Engineering Part A. 15, (8), 2029-2037 (2009).
  23. Kunz-Schughart, L. A., et al. Potential of fibroblasts to regulate the formation of three-dimensional vessel-like structures from endothelial cells in vitro. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 290, (5), C1385-C1398 (2006).
  24. Rouwkema, J., De Boer, J., Van Blitterswijk, C. A. Endothelial cells assemble into a 3-dimensional prevascular network in a bone tissue engineering construct. Tissue Engineering. 12, (9), 2685-2693 (2006).
  25. Kim, S., Lee, H., Chung, M., Jeon, N. L. Engineering of functional, perfusable 3D microvascular networks on a chip. Lab on a Chip. 13, (8), 1489-1500 (2013).
  26. Moya, M. L., Hsu, Y. H., Lee, A. P., Hughes, C. C. W., George, S. C. In Vitro Perfused Human Capillary Networks. Tissue Engineering Part C-Methods. 19, (9), 730-737 (2013).
  27. Nashimoto, Y., et al. Integrating perfusable vascular networks with a three-dimensional tissue in a microfluidic device. Integrative Biology. 9, (6), 506-518 (2017).
  28. Huang, C. P., et al. Engineering microscale cellular niches for three-dimensional multicellular co-cultures. Lab on a Chip. 9, (12), 1740-1748 (2009).
  29. Newman, A. C., et al. Analysis of Stromal Cell Secretomes Reveals a Critical Role for Stromal Cell-Derived Hepatocyte Growth Factor and Fibronectin in Angiogenesis. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology. 33, (3), 513 (2013).
  30. Newman, A. C., Nakatsu, M. N., Chou, W., Gershon, P. D., Hughes, C. C. W. The requirement for fibroblasts in angiogenesis: fibroblast-derived matrix proteins are essential for endothelial cell lumen formation. Molecular Biology of the Cell. 22, (20), 3791-3800 (2011).
  31. Griffith, C. K., et al. Diffusion limits of an in vitro thick prevascularized tissue. Tissue Engineering. 11, (1-2), 257-266 (2005).
  32. Zheng, Y., et al. Angiogenesis in Liquid Tumors: An In Vitro Assay for Leukemic-Cell-Induced Bone Marrow Angiogenesis. Advanced Healthcare Materials. 5, (9), 1014-1024 (2016).
  33. Osaki, T., Sivathanu, V., Kamm, R. D. Crosstalk between developing vasculature and optogenetically engineered skeletal muscle improves muscle contraction and angiogenesis. Biomaterials. 156, 65-76 (2018).
بيرفوسابل شبكة الأوعية الدموية مع نموذج أنسجة في جهاز موائع جزيئية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Nashimoto, Y., Teraoka, Y., Banan Sadeghian, R., Nakamasu, A., Arima, Y., Hanada, S., Kotera, H., Nishiyama, K., Miura, T., Yokokawa, R. Perfusable Vascular Network with a Tissue Model in a Microfluidic Device. J. Vis. Exp. (134), e57242, doi:10.3791/57242 (2018).More

Nashimoto, Y., Teraoka, Y., Banan Sadeghian, R., Nakamasu, A., Arima, Y., Hanada, S., Kotera, H., Nishiyama, K., Miura, T., Yokokawa, R. Perfusable Vascular Network with a Tissue Model in a Microfluidic Device. J. Vis. Exp. (134), e57242, doi:10.3791/57242 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter