Summary
בחיי עיר bioindications מאפשרות קביעת ההתאמה של סביבת מאסל בסכנת הכחדה מינים. אנו מתארים שתי שיטות בהתבסס על החשיפה לנוער של צדפות פנינים מים מתוקים בתוך כלובים אל נהר oligotrophic בתי גידול. שתי השיטות מיושמות משתנים עבור מים פתוחים וסביבות מים hyporheic.
Abstract
ידיעת בית גידול התאמתם מולים מים מתוקים היא צעד חשוב בשימור של הקבוצה בסכנת הכחדה. נתאר פרוטוקול לביצוע בחיי עיר ילדותי חשיפה בדיקות בתוך נהר oligotrophic catchments על פני תקופות חודש אחד, שלושה חודשים. שתי שיטות (ב שני שינויים) מוצגים כדי להעריך את קצב הגדילה וההישרדות לנוער. השיטות ואת השינויים נבדלים ערך bioindication המקומיות, לכל אחד יש את היתרונות שלה, כמו גם מגבלות. השיטה כלוב החולי עובדת עם קבוצה גדולה של אנשים, אבל רק בחלק של האנשים נמדדים, התוצאות מוערכות בצובר. השיטה כלוב רשת, האנשים הם כל הזמן נמדד בנפרד, אך בודדים במספר נמוך מוערך. השינוי חשיפה מים פתוחים יחסית קל ליישם; זה פוטנציאל הגידול לנוער של אתרים, יכול להיות גם יעיל לבדיקת רעילות מים. השינוי חשיפה בתוך המיטה צריך עומס עבודה גבוה אבל קרוב יותר לתנאי סביבה טבעית לנוער, עדיף על דיווח אמיתי והתאמתו יישובים. מצד שני, שכפולי יותר יש צורך בשינוי זה עקב השתנות הסביבה שלה גבוהה-hyporheic.
Introduction
החשיפה של אורגניזמים ניסיוני בחיי עיר עם הערכת מצבם לאחר מכן היא דרך אפשרית. אחת כדי לקבל מידע על איכות הסביבה ועל (במיוחד) את התאמת האתר עבור זן. בתוך בעלי חיים, כגון bioindication ישימה בעיקר עבור חסרי חוליות קטנים אשר מסוגלים לחיות בחלל חסומה מוגבלת. שלבים צעירים של צדפות (צדפות) הם אחד כזה מתאים האורגניזם קבוצה1.
צדפות של משפחת Unionidae הם מרכיב חשוב מאוד של המערכת האקולוגית הימית2. עם זאת, מינים אלה לעיתים קרובות אנושות בסכנה, בפרט נחלים ונהרות. חלקם מאופיינים כמו 'מינים מטריה' שימור אשר קשורה קשר הדוק שימור ביוטופ זרם שלם, המחייבות מקיפה לגשת3. בעלי חיים אלה יש מחזור חיים הקשורים רכיבים רבים סביבה, מים כימיה4,5 שינויים באוכלוסיות של דגים אשר לשמש מאסל הזחלים מארחים6. כי קטינים מאסל מייצגים לעיתים קרובות שלב קריטי של מחזור חיי מאסל, התאמת האתר לפיתוח שלהם בשלב זה הוא קריטי עבור התפתחות האוכלוסייה מינים מוצלחים ביישוב.
גברת פנינים מים מתוקים (FWPM, Margaritifera margaritifera; Unionida, צדפות) הוא של ביואלו בסכנת הכחדה חמורה המתרחשים oligotrophic נחלים אירופי. המספרים שלהם ירדו באופן דרסטי ה-20המאה ה לאורך אזור התרחשות . נראה כי הירידה הנוכחית של הרבייה ברוב המכריע של אוכלוסיות האירופי המרכזי נגרמת בעיקר על ידי נמוך מאוד להישרדות אפס בני נוער במהלך השנים הראשונות של החיים שלהם. ההנחה היא כי FWPMs לנוער לחיות שנים רבות hyporheic רדוד אזור7, מהם התנאים ולשינויים שלהם מתוארים עדיין לא טוב. יתר על כן, עד השנה השנייה של החיים, קטינים יש רק מימד של עד 1 מ מ, ולכן הם מאוד קשה למצוא בכמויות גדולות של משקעים תחת תנאים טבעיים8. לכן, ניסויים עם קטינים בשבי נחוצים לחקר האקולוגיה שלהם.
בתוך הצ'כית תוכנית הפעולה מים מתוקים מאסל פנינה9, ישנם אלפי בני נוער עולה בכל שנה מתוך תוכנית גידול טבעי למחצה. עם זאת, ישנה שאלה אשר יישובים, בתי גידול מתאימים עבור האוכלוסייה מוצלחת תמיכה על ידי קטינים אלה או מינים בסופו של דבר השבת בעלי חיים לטבע. בחיי עיר bioindications מציגים דרך למצוא את התשובה.
למרות העובדה כי שיעורי ההישרדות לא עקבי של מולים לנוער בכלובים חשיפה נצפתה כמה עבודות קודמות שחקר את ההתאמה של מולים לנוער bioindicators10, מחקרים שנעשו לאחרונה מספר אישרו הישימות של שיטות חשיפה לקטינים איכות המים בדיקות11,12,13. בנוסף, זה הוכח כי כמה גורמים צריך להיחשב כאשר לפרש את התוצאות של מחקרים אלה מסוים, כגון מניות מקור14 והשפעת שמירת תנאים זחל15.
עולה השאלה כיצד להתקין נוער ניסיוני ביישובים שנבדקו וכיצד להעריך את מצבם בצורה היעילה ביותר. היישום הקפדני הראשון ב באתרו שיטות חשיפה עם FWPMs נעורים בהוצאת Buddensiek16. לנוער FWPM אנשים הוחזקו בכלובים גיליון, חשוף במים זורמים זרמי, הישרדות והצמיחה שלהם היו לכמת לאחר מספר שבועות של חשיפה. הגישה פותחה במקור כשיטה הרבייה חצי-מלאכותי, אך המחבר גם הדגיש את תחולתן להערכה של דרישות הגידול ואיכות המים. למרות ההישרדות לנוער FWPM נמוכה באופן טבעי מאוד בסולם של חודשים/שנים, רק מספר קטן מאוד של בעלי חיים ישרדו, שיעור ההישרדות יכול להיות סמן טוב של אפקט סביבתי בקנה מידה של שבועות מספר16. במהלך שנים של מחקר, פותחו שיטות חשיפה יותר להחזיק ניסיוני מאסל לנוער ב- stream בתי גידול, כדי להעריך את שיעורי הצמיחה והישרדות שלהן; אלה כוללות תיבות החולי17, ממגורות מאסל המבוסס על עיקרון של עליית מי העומק18ושונים אחרים חשיפה הכלובים (מסוכם על ידי מסטיק ועמיתיו)11. כי קטינים להתרחש באופן טבעי ב אזור רדוד hyporheic7, היישום של התקנים ניסיוני בתוך הנחל התחתון רצוי מאוד.
במאמר שלנו, אנו מתארים את השימוש שני התקנים חשיפה עבור FWPMs: אני) שונה Buddensiek גיליון הכלובים ("כלובי רשת") גם הפיכת בדיקות בתנאים hyporheal; bioindication ו- ii) החולי Hruška תיבות ("כלובים החולי"). הפרוטוקול מתאר את היישום של שתי השיטות בתנאים פתוח מים ו- hyporheic (כלומר, ארבע גרסאות של חשיפה מתוארים). בהדרגה, השיטות היו ששינה ו מורחבת במשך יותר מ 15 שנים של יישום בתוך תכנית הפעולה הצ'כית מים מתוקים מאסל פנינה9 , מאומת על ידי קבוצה של ניסויים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. כלוב רשת
הערה: ראה איור 1.
- להכין חומר
- להכין את החומר עבור החלק במעבדה של הניסוי: ~ 1-2 L של נהר מים לכל-כלוב רשת, כלובי רשת (1 גוף פלסטיק הראשי, כיסוי פלסטיק 2, 2 גיליונות של הנפות טכני מיוחד עם נקבוביות מיקרומטר 340, 4 ברגים ואומים 4 לכל כלוב), צבת , נודניק, פיפטות פסטר, מסננת, מצלמה דיגיטלית, של trinocular לנתח זום סטריאו מיקרוסקופ, רשת הכיול (מיקרוסקופ ציוד), 5 צלחות פטרי בקוטר 50 מ מ, ספלים, 2 מנות פלסטיק (~ 25 ס"מ על 15 ס"מ x 3 - 5 ס מ), ואת קופסת פלסטיק.
- כדי לבצע את ההתקנה hyporheal, להכין צינור גומי, רשת 100-מיקרומטר-נקבובית, ובקבוק מים. לבנייה של ההתקן, ראה 1 הקבצים המשלימים: S.1. רשת כלובים הבנייה.
- להרכיב את התחתון ואת חלק מרכזי הכלובים רשת. להרכיב את החלק של הכלוב שמחזיק את האנשים. הוספת כריכה פלסטיק קודם, גיליון אחד של הפלסטיק ניפוי, ואז סוף סוף הראשי גוף עליון. השתמש ארבעה ברגים לאבטח אותו.
- הכנת חומר ביולוגי
- מכניסים את כלוב רשת המנה פלסטיק המכיל מי הנהר. ודא כי התאים הינם חצי מלאה. . קח את נוער FWPM (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.6. חומר ביולוגי) מהקופסה בידודי תרמית ולהניח אותם צלחת פטרי.
הערה: ודא כי שינויי טמפרטורה פתאומי תחרוג ~ 2 ° C. - באמצעות בקבוק מים מסננת, לנפות נוער כדי לנקות את הפסולת.
- מכניסים את כלוב רשת המנה פלסטיק המכיל מי הנהר. ודא כי התאים הינם חצי מלאה. . קח את נוער FWPM (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.6. חומר ביולוגי) מהקופסה בידודי תרמית ולהניח אותם צלחת פטרי.
- להגדיר את המיקרוסקופ והמצלמה. לבצע כיול של המכשירים (ראה File1 משלים: ס' 5. מיקרוסקופ ו- phototechnics). מניחים צלחת פטרי המכילות מעט מים מתחת למיקרוסקופ.
- מכניסים את נוער הכלובים (עבודת מעבדה ניסויית)
- השתמש פיפטה של פסטר להסיר אדם אחד צלחת פטרי ולמקם אותו בקפידה בצלוחית הפטרי מתחת למיקרוסקופ.
- בדוק הכושר של הפרט על ידי להסתכל לתוך העינית (~ 40 X הגדלה).
הערה: כושר "טוב" מרמזת כי הפרט נע, סיבוב מצד לצד, ודוחף הרגל החוצה מעטפת, וכו ' להסיר את כושר נמוך או אנשים עם פסטר פיפטה ולמקם אותם בצלוחית נפרדת (FWPM כאן קטינים נפתח מעטפת, אין תנועה, כף הרגל הוא לא שלף, פגז מפוצלים, בני נוער אשר לצוף ללא שליטה במים, פירוק גלוי של המעטפת, decalcification חלקית). - קח שתי תמונות של FWPM הפרט מציג כושר טוב באמצעות של הגדלה מתמדת של ~ 80 X. לראות קובץ משלים 1: S.5. מיקרוסקופ, phototechnics. שמור את התמונות.
הערה: עבור יחידת מידה טובה אורכו, לנוער צריכות להיות. מונחות לאורכו (תצוגה לרוחב). המטרה העיקרית היא לקחת תמונה באיכות גבוהה של האורך המרבי של מעטפת מספיק טוב לאפשר ניתוח התמונות לאחר מכן. - הכנס את לנוער אל החדר המתאים בכלוב ברגע התמונות נלקחים. רשום את המספרים של התמונות, את התא.
- חזור על שלב זה עם כל יחיד עבור כל התאים בשימוש בכלוב רשת.
הערה: ראה 1 הקבצים המשלימים: S.1. רשת כלובים הבנייה. - ברגע כל התאים בשימוש מולים פנינה, לשים מסננת פלסטיק בכלוב ואז בעדינות לשים מכסה פלסטיק, לאבטח את כל החלקים יחד עם האגוזים.
- במקרה של התקנה לאזור hyporheic, לעבור באחד הקצוות צינור דרך באחד התאים, לתקן אותה במצב הזה, ואז לקחת את רשת השינוי אנטי clogging לאגד אותו בקצה התחתון (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.1. רשת כלובים בנייה).
- חנות קטינים
- לשים את. הכלוב לתוך תיבת פלסטיק עם המים בנהר, כך נוער שקועים לחלוטין, והוא לשמור על thermobox. לפני ההתקנה, תן את קטינים להסתגל בחיי עיר הנהר טמפרטורת המים במקום של ההתקנה (מקסימום קירור, הדרגתית 5 ° C ב- 24 שעות).
- התקנת רשת כלובים
- הכנת החומר השדה כולל את הכלובים רשת עם קטינים, קוצים פלדה, בריחים, אגוזים מתכת, נודניק, שדה אוגרי נתוני טמפרטורה (ראה טבלה של חומרים ו- 1 הקבצים המשלימים: S.4.2. מים מדידה), של מחרוזת, מצלמה, פרוטוקול שדה, פטיש, ו ספייד.
- להעביר את בעונשי FWPM באתר thermobox שדה (תיבת מבודד), שמירה על טמפרטורה יציבה מים עם וריאציות < ~ 2 ° C. מכניסים את thermobox עם הכלובים רשת הנהר באתר כדי לאפשר את קטינים להסתגל לתנאי הסביבה המקומית (pH, מוליכות, וכו ').
- התקן את כלוב רשת.
- הסר את כלוב רשת thermobox שדה. לספק לו שני קוצים פלדה והדקו את אוגר נתונים בשדה. לעגן את הכלוב לתוך גידול עם מצבים אופייניים עבור FWPMs באזור המחקר (למשל, בקצה הזרם העיקרי זרם, לא בזרימת מים ישירה, לא בתוך מים עומדים, לא באור שמש ישיר).
- עבור מים פתוחים, באמצעות זוג הקוצים פלדה, לתקן את הכלוב בתחתית הנהר; קדימה, הצד שלו ורמת עם הנהר, מטה בזווית של 45 מעלות זרימת הנהר, לכיוון המרכז של הנהר. הקצה האופקי התחתון צריך להיות בערך 10-15 ס מ מעל פני השטח התחתון של הנהר. לשמור על מרחק מינימלי של 2 מ' בין כל הכלוב-ממקום אחד (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.4. כלובים תחזוקה).
- עבור אזור hyporheic, לחפור את הכלובים לתוך הנהר בעמדה נוף בניצב, בניצב זרם המים, כך הקצה אופקי העליון של הכלוב, הוא מקביל מהמשטח התחתון נהר ולא התאים ממוקמים hyporheic עומק צריך להיבדק. להוציא את החלק העליון של הצינור גומי מעל פני השטח התחתון לאפשרות של מי שופכין במהלך הניסוי (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.4.2. מים מדידה).
הערה: מומלץ לבצע בדיקות סדירות ותחזוקה על הכלובים (ראה 1 הקבצים המשלימים: ס' 4. כלובים תחזוקה).
- הסר את כלוב רשת thermobox שדה. לספק לו שני קוצים פלדה והדקו את אוגר נתונים בשדה. לעגן את הכלוב לתוך גידול עם מצבים אופייניים עבור FWPMs באזור המחקר (למשל, בקצה הזרם העיקרי זרם, לא בזרימת מים ישירה, לא בתוך מים עומדים, לא באור שמש ישיר).
- להסיר את הכלובים ולהעביר את נוער לאחר החשיפה. בשביל זה, להוציא את הכלובים מהמים, לנקות אותם של משקעים בסדר גם כן החל חומר נסחף עם הזרם ולשים אותם לתוך thermobox שדה מלא במי הנהר. להעביר את הכלובים מיד למעבדה ולהתחיל הערכת שיעור התמותה וצמיחה.
הערה: ראה קובץ משלים 1: S.3. משך החשיפה. במקרה של שינוי טמפרטורה של יותר מ 5 ° C בין הכלובים לסביבה מעבדה, זה הכרחי הראשונה כדי לאפשר את הטמפרטורה להשוות. - להעריך את הניסוי על-ידי בדיקת הכושר/החיים של כל לנוער (ראה שלבים 1.5.2 ו 1.5.3) לקחת 2 תמונות של כל לנוער בשידור חי בצלחת פטרי באמצעות של הגדלה מתמדת של ~ 80 X. שיא הכושר והמספרים של תמונות, צ'יימברס.
- להשלים את הניסוי (משותף על כל אמצעי)
- ביצוע המדידות התמונה ניתוח תוכנה. השתמש בתוכנת ניתוח התמונה לקביעת גודל הגוף כל לנוער הערכה על שני הדימויים קלט (שלב 1.5.3) ועל הדימויים פלט (שלב 1.9). שימוש מהאורך המרבי מעטפת הכוללת רשמה בתצלומים שני ערכי גודל הגוף הקלט והפלט.
- להוסיף את הערכים נמדד לתוך המעבד טבלה ולחשב צמיחה תוספת (%) בשביל לשרוד את כל ילדותי.
- הערכת שיעור ההישרדות (%) לכל כלוב רשת שינוי באמצעות היחס בין מספר האנשים ששרדו ליחידים ניסיוני כל כלוב רשת.
הערה: לאחר הניסוי, לחזור הניצולים הרבייה לתוכנית
(ראה 1 הקבצים המשלימים: S.6. חומר ביולוגי).
2. סנדי הכלוב
הערה: ראה באיור 2.
- להכין חומר
- להכין את החומר עבור החלק במעבדה של הניסוי: 2 צלחות פטרי (קוטר ~8.5 ס מ), פיפטות פסטר, מסננת, 25 לליטר מים בנהר, קופסת פלסטיק, הנפות (רשת שינוי גודל 1 ו- 2 מ"מ), קופסת פלסטיק גדול (25 L), כלוב החולי (ראה 1 קובץ משלים : S.2. סנדי בכלובים בנייה), מצלמה דיגיטלית, trinocular לנתח זום סטריאו מיקרוסקופ, רשת הכיול (מיקרוסקופ ציוד), מיון חול הנהר מאזור המחקר (ראה שלב 2.1.3), והפרוטוקול. ראה קובץ משלים, הטבלה של חומרים , 1: ס' 2. סנדי בכלובים הבנייה.
- להכין את החומר עבור תהליך בידוד: סיבוב מכולות (1 עבור כל הכלוב ועוד 1 נוסף), 2 צלחות פטרי (קוטר ~ 14 ס מ), פיפטה פסטר זכוכית מגדלת, 1 ליטר של מים בנהר.
- לנפות את החול הנהר דרך מסננת 2-מ מ, ואז דרך מסננת 1 מ מ כדי לקבל גודל גרגרים של 1-2 מ מ. לייבש את החול ולשמור אותו בצורה יבשה עד הנדרש.
- . קח את נוער (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.6. חומר ביולוגי) מתוך thermobox ולהניח אותם צלחת פטרי. באמצעות בקבוק מים מסננת, לנפות נוער כדי לנקות את הפסולת.
- להגדיר את המיקרוסקופ והמצלמה (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.5. מיקרוסקופ ו- phototechnics).
- להכניס קטינים הכלובים (עבודת מעבדה ניסויית)
- למקם את הכלוב החולי בתיבת פלסטיק. פיזור החול ממוינת (ראה שלב 2.1.3) עד כדי שליש הגובה של הכלוב החולי. יוצקים מים לתוך התיבה. ודא כי המשטח חול כ 10 מ מ מתחת למפלס המים. להוסיף את הכלוב החולי לתוך התיבה 25 L מי הנהר ולחשוף אותו לטמפרטורה אותו כמו FWPMs לנוער (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.6.2. אחסון של חומר ביולוגי) עבור 12 ח להימנע מכל חשיפה של החול לאור השמש.
- קח את צלחת פטרי עם קטינים FWPM מוכן.
- בדוק כושר יחידים על-ידי בודקים העיינית של המצלמה (ראה שלב 1.5.2).
- לבצע בתיעוד צילומי כדלקמן. תמונה אחת של כל האנשים גילה (ראה שלב 1.5.3) ובחרו 10 אחד מהפרטים הגדולים. לחלופין, לצלם תמונות של קטינים כל יחד עם הגדלה נמוכה (~ 40 X) עבור הערכה בתפזורת ובחרו את האנשים הגדולים 10. להציל את כל התמונות והקלטה של המספרים שלהם.
- באמצעות בקבוק מים, להעביר את נוער FWPM לתוך הכלוב החולי מוכן.
- חנות קטינים
- לשים את הכלוב לתוך תיבת פלסטיק גדול עם נהר מים כך הכלוב הוא שקוע לחלוטין ולשמור אותו ב- thermobox. תן את קטינים להסתגל בחיי עיר הנהר טמפרטורת המים (מקסימום קירור, הדרגתית 5 מעלות צלזיוס במשך 24 שעות ביממה) לפני ההתקנה.
- להתקין את הכלובים החולי
- להכין את החומר עבור ההתקנה שדה: כלובים החולי, של thermobox ~ 25-L שדה, אבן שטוחה (מינימלי משקל 1 ק ג), רשת (רשת בגודל 10 x 10 מ מ), בקבוק מים, אוגרי נתוני טמפרטורה שדה (ראה טבלה של חומרים ו- 1 הקבצים המשלימים: מדידת מים S.4.2.), בשמו, והפרוטוקול שדה.
- מעבירים את הכלובים עם נוער לאתר thermobox שדה, שמירה על טמפרטורה יציבה מים (שינוי ~ 2 ° C). מכניסים את thermobox שדה עם הכלובים החולי הנהר באתר שדה לתת את FWPM קטינים להסתגל לתנאי הסביבה המקומית (pH, מוליכות, וכו ').
- התקן את הכלובים החולי לתוך בתי גידול עם מצבים אופייניים עבור FWPMs (למשל, בקצה הזרם העיקרי זרם ב בפיתול לא בזרימת מים ישירה, לא בתוך מים עומדים, לא באור שמש ישיר).
- מים פתוחים, הדקו את הכלובים החולי כדי אבן שטוחה באמצעות רשת ומניחים אותו על הנהר. ודא כי הצד גדול יותר של הכלוב יוצרת זווית של 45 מעלות עם הזרם.
- עבור Hyporheal, לחפור את הכלובים בתחתית הנהר בניצב זרימת המים כך המכסה את הכלוב היא רמת עם מהמשטח התחתון של הנהר.
הערה: מומלץ לבצע בדיקות סדירות ותחזוקה על הכלובים (ראה 1 הקבצים המשלימים: ס' 4. 1. אתר בדיקות).
- להסיר את הכלובים ונוער תחבורה לאחר חשיפה
הערה: ראה 1 הקבצים המשלימים: S.3. משך החשיפה.- להוציא את הכלובים מהמים, לנקות אותם חומר נסחף עם הזרם ולשים אותם לתוך thermobox שדה מלא במי הנהר.
- להעביר את הכלובים למעבדה ולהתחיל הערכת שיעור התמותה וצמיחה.
הערה: במקרה של שינוי טמפרטורה של יותר מ 5 ° C בין הכלובים לסביבה מעבדה, יש צורך תנו הטמפרטורות להשוות.
- נוער נפרדת FWPM מהחול
- להכין מיכל עגול עם עומק מים של 50 מ מ (עבור כל אחד בכלוב בנפרד), מיכל עגול נוסף אחד. להעביר את החול מן הכלוב לתוך המיכל עגול. השתמש תנועה מתערבל לשטוף את החלקיקים בהיר לתוך מכולה נוספת.
- לטעום את התוכן מתוך גורם מכיל זה בהדרגה ולחפש קטינים שלב אחר שלב באמצעות פיפטה של פסטר, זכוכית מגדלת. הכניסו את נוער הפטרי באמצעות פיפטה של פסטר. חזור על שלב זה עד לנוער שעבר נמצאה וועוד x 10 לאחר מציאת השלילי הראשון. לאחר כל שלב שטיפה, מוסיפים מים נקיים הנהר אל המיכל המקורי עם חול.
הערה: במיוחד לאחר הכביסה הראשונה, כמו שצריך לבחון את התוכן ולנקות את זה של באלאסט משקעים בסדר ו alluvia אחרים.
- להעריך את הניסוי
- בדוק את הכושר של כל לנוער (ראה שלבים 2.4.3 ו- 1.5.2), לספור את מספר הניצולים.
- צלם תמונה (ראה שלב 2.4.4.) של כל אדם בנפרד, למרות שפירוש זה אין זהות ברורה של כל יחיד. לחלופין, לצלם תמונות בתפזורת, לבחור תת-קבוצה של אנשים הכי מבוגר 10 התוצאות הסופיות.
הערה: בשתי אפשרויות יש ערך הדיווח דומה. אפשרות 1 יש מגבלה של עומס עבודה גבוה יותר, אך גם היתרון של ההגדלה צילום הגבוהה, דיוק וכך גם רב יותר.
- להשלים את הניסוי
- ביצוע מדידות התמונה ניתוח תוכנה. להשלים את הניסוי כפי שנעשה את כלובי רשת (ראה שלב 1.10) עם החריגה הבאה: לא להעריך את קצב הצמיחה (%) של כל לנוער אבל להעריך את הקבוצה בכללותה כלוב חולי לניסוי.
הערה: לאחר הניסוי, הניצולים יש להחזיר את תוכנית רבייה
(ראה S.6.1 הקבצים המשלימים. Selection של חומר ביולוגי).
- ביצוע מדידות התמונה ניתוח תוכנה. להשלים את הניסוי כפי שנעשה את כלובי רשת (ראה שלב 1.10) עם החריגה הבאה: לא להעריך את קצב הצמיחה (%) של כל לנוער אבל להעריך את הקבוצה בכללותה כלוב חולי לניסוי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
השיטות bioindication ארבע (מים פתוחים החולי הכלובים, בתוך מיטות כלובים החולי לפתוח כלובי רשת מים, כלובי רשת בתוך המיטה) הוחלו לחקור את התאמת תנאי הסביבה עבור FWPMs ב העליון (vltava) באגן הנהר (יער בוהמיה, צ'כית הרפובליקה). הנהר הזה מייצג ממקום אחד של משקעי FWPM בתוך אירופה המרכזית19. כאן, אנו מציגים ערכה שנבחרו במיוחד של תוצאות הממחישות את ההיבטים החשובים ביותר של ארבע שיטות. פרטים נוספים מתוארים מחקר מקיף על ידי Černá et al. 13.
הסביבה נהר נחקר בשני מישורים:
(I) פרופיל האורך הנהר היה מיוצג על ידי זרם ראשי יישובים (אתרים A - E), מיובליו של זיהום שונים שלבים (אתרים R ו- V). היישובים נבדקו הן על ידי חולי כלובים ועל ידי כלובי רשת מותקן במים זורמים. בנוסף, אזור hyporheic חצץ נבחנה ע י בתוך מיטת סנדי בכלובים ביישובים B, C ו- D
(II) סביבה hyporheic נבדקה ביישוב נבחרות ג ההתאמה של סובסטרטים (חול, חצץ, אבנים) נבחנה על ידי כלובי רשת בתוך המיטה.
שיעור הצמיחה, שיעור ההישרדות של > בת 1-נוער (ראה 1 הקבצים המשלימים: S.6. חומר ביולוגי) נבדקו. הניסוי בוצע כדי לתפוצה בקיץ של שנת 2014, חזר על עצמו במידה קטנה יותר-כמה יישובים בקיץ של 2015. בתוך רמת (I), 2-6 סנדי כלובים עם מינימום של קטינים 100 ו- 6 (2014) או 4 (2015) כלובי רשת עם קטינים 6 הוחלו על כל יישוב נבדק על ידי השיטה המתאימה. בתוך רמת (II), כלובי רשת 7 עם קטינים 6 הותקנו בכל סביבה שנבדקו. זמן החשיפה היה חודש אחד עבור רשת הכלובים שלושה חודשים הכלובים החולי.
ניתוח סטטיסטי נערך ב- R, גירסה 3.1.020. בדיקות Kruskal-איי ווליס Kruskal-Nemenyi, Wilcoxon-מאן-ויטני שימשו. עבור נתונים בעל התפלגות נורמלית, רגרסיה ליניארית או ריבועיות בוצע.
היישובים יכול להיות מבוסס על קצב הצמיחה בכלובים רשת מים פתוחים למרות ההשתנות הגבוהה בתוך כלוב, אפילו בתקופות שונות צמיחה חיובית (איור 3). בפרשת חשיפת יותר צמיחה חיובית בשנת 2015 (צמיחה קצב 19.3-41.8%), נתגלה מגמה משמעותית פרופיל האורך שבו גדל שיעור הצמיחה במורד הזרם (Kruskal-איי ווליס מבחן, p < 0.001). חשוב מכך, שיעור ההישרדות היה גבוה באופן שקול הן עונות (מתוך 83%) (איור 4A).
מצד שני, הכלובים בים הפתוח החולי הראו מגמה שונה בין היישובים זרם ראשי בשנת 2014: קצב הגידול גדל במורד הזרם של יישוב (% 52) דרך היישוב האמצעי C (153%), לאחר מכן ירד שוב עד במדינתך E (46%) (רגרסיה ריבועית של צמיחה מוחלט ערכים: r2שם תואר = 0.77, נשערים 2, 13 = 25.66, df. = 16, p < 0.001). מגמה זו גם אושרה בשנת 2015 כאשר קצב הגידול הגדול ביותר הוקלטה בשעה היישוב האמצעי C שוב. בנוסף, הערכים קצב הצמיחה מוחלט שונה הרבה בין 2014-2015. מצד שני, שיעור ההישרדות שונה בין השנים, להיות הרבה יותר גבוה בשנת 2015 (מתוך 48% ל- 72%) מאשר בשנת 2014 (כ-25%) (איור 4B).
אפקט של שתי שיטות חשיפה שונות הוא גם בבירור בציור יובל מזוהמים (יישוב V). הכלובים חוליים חשופים כאן במהלך שלושת החודשים הראה הישרדות 0%, בעוד שיעור הישרדות 83% עם קצת צמיחה הוקלט על ידי חשיפה כלובי רשת מים פתוחים כאן במהלך 30 הימים.
תוצאות מן המיטה בתוך כלובים החולי להמחיש מצבים שונים בסביבה hyporheic לעומת מים פתוחים בתוך היישובים הרלוונטיים. קצב הגידול היה תמיד נמוך בהאתרים hyporheal יותר בים הפתוח, שיעור ההישרדות היה משתנה הרבה יותר (מכמעט 50% ל- 0%, איור 4B).
מחקר של microhabitats hyporheic באמצעות הכלובים רשת בתוך מיטת הראו השפעה משמעותית של הרכב המצע הישרדות לנוער. התנאים הטובים ביותר נרשמו מלמטה רווי חמצן סטוני (שיעור הישרדות ל 100 אחוז) בזמן הכי גרוע (< 40% סיכויי הישרדות) היו המצוין לקוי מחומצן חול שבו זוהה גם השתנות גבוהה מאוד ב ששרדו. חמצון המים Hyporheic, אשר נמדדה שוב ושוב במהלך הניסוי, מסביר מגמה זו (איור 5).
איור 1. Bioindication כלוב רשת עם בודדים צ'יימברס. ראה קובץ משלים 1 לפרטים נוספים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
באיור 2. כלוב החולי Bioindication. ראו 1 קובץ משלים פרטים נוספים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 3. השתנות בודדים בשיעור הצמיחה לנוער שהוקלט על ידי כלובי רשת מים פתוחים ביישובים B ו- E במשך שתי עונות. האמצעים ואת סטיית תקן מתוארים עבור כל כלוב רשת. שהערכים מבוססים על המידה של קטינים 6 (או 4-5 קטינים אם שיעור התמותה > 0%) בכל כלוב רשת.
באיור 4. דוגמה נובע bioindication שדה הניסוי עם כלובי רשת השינוי, סנדי. (א) לוח זה מראה דוגמה תוצאות ניסוי שדה bioindication עם כלובי רשת. סכום כולל של 6 יישובים (B, C, D, E, R, ו- V) בתוך catchment הוולטאבה (Vltava) נבדקו 2 מקרים שונים (ב 2014 ו 2015). הפעם חשיפה הייתה 30 ימים במהלך עונת הקיץ. היישובים B - E מייצגים (לפי סדר) פרופיל האורך של רצועת כ 20 ק מ. הנחל המרכזי של הנהר. יישובים R ו- V מייצגים פרופילים של יובלים 2. ערי הבירה לסמן באותו יישוב שני בלוח (A) ו- (B). כל האיזורים נבדקו עם כלובי רשת מים פתוחים. בנוסף, יישוב C גם נבדקה באמצעות רשת בתוך מיטות כלובים המותקן 3 סוגים שונים של הנהר (Cs = חול, Cg = חצץ, Cst = אבנים) בשנת 2014. הכלובים הותקנו ב- 4-7 שכפולי בכל אתר. 6 קטינים מאסל פנינים מים מתוקים של 1 + בן שימשו לכל כלוב רשת. שיעור הגידול הממוצע מסומנים ליחידים הגדול 3 (מקסימום 3) בכל כלוב רשת שנבדקו (עמודות, ציר שמאלי), שיעור ההישרדות הממוצעת לכל כלוב רשת (כחול נקודות, ציר נכון). (B) דוגמה זו מראה לוח תוצאות bioindication שדה הניסוי עם כלובים החולי. יישובים הכולל of7 (A, B, C, D, E, R ו- V) בתוך catchment הוולטאבה (Vltava) נבדקו מעל 2 מקרים שונים (ב 2014 ו 2015). זמן החשיפה היה 3 חודשים במהלך עונת הקיץ. אתרי A - E מייצגים (לפי סדר) פרופיל האורך של הארוכה כ 30-ק מ של הנחל המרכזי של הנהר. אתרי R ו- V מייצגים פרופילים של יובלים 2. ערי הבירה לסמן היישוב אותו גם בזה וגם בחלונית ' הקודם '. כל האיזורים נבדקו עם כלובים בים הפתוח החולי. בנוסף, יישובים B, C ו- D נבדקו גם באמצעות בתוך מיטות כלובים החולי המותקן עם הפטיש המצע של המיטה הנהר (Bg Cg, די. ג'י) בשנת 2014. הכלובים הותקנו ב 2-4 שכפולי בכל אתר. לפחות 100 מאסל פנינים מים מתוקים קטינים נכחו בכלוב כל החולי. שיעור הצמיחה הממוצע של אנשים הגדול 10 (מקסימום 10) מהכלוב כל נבדק החולי (עמודות, ציר שמאלי), שיעור ההישרדות הממוצעת לכל חולי הכלוב (כחול נקודות, ציר נכון) מסומנים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 5. . רווית חמצן. לוח זה מציג את קשרי הגומלין בין ערכים מינימליים של חמצן מעל 30 ימים של חשיפה כלובי רשת ונחשף שיעור ששרד כלוב בכלובים רשת בתוך מיטה ב microhabitats מיטה שונה בשנת 2014. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
| 2014 | 2015 | |||
| במדינתך | 3 חודשים חשיפה של כלובי החולי | חשיפה 1-חודש של כלובי רשת | 3 חודשים חשיפה של כלובי החולי | חשיפה 1-חודש של כלובי רשת |
| A | 13.9 | - | - | - |
| B | 14.4 | 13.4 | 13.9 | 17.5 |
| C | 15 | 13.8 | 14.4 | 18.3 |
| D | 15 | 13.8 | 14.3 | 18.3 |
| E | 15.5 | 14 | - | 18.7 |
| R | 13.5 | 12.8 | - | - |
| V | 14 | 13.2 | - | - |
טבלה 1. מים עיליים ממוצע טמפרטורה (° C) היישובים במהלך החשיפה בין 2014-2015.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
זמן חשיפה:
אפילו חודש חשף רשת כלובים הצג גידול הגלויים משקפים הבדלים בין יישובים (איור 3), ולכן הם מאוד שמיש עבור גילוי מהיר וקל של אפיון במדינתך. למרות זאת, הרלוונטיות של התוצאות תלוי המדינה לטווח קצר של התנאים, אשר יכול נעים. בפרט, אירועי גשם קצר יכול לשחק תפקיד. לעומת זאת, לא צפויים אירועי זיהום לא תמיד ניתן להקליט. ביישוב V (איור 4A), בדיקות כימיה מים זיהה גל קצר של עלייה חזקה אמוניום13. זה היה כנראה אחראי על התמותה בכלובים חוליים חשופים שלושה חודשים אך לא השפיע על הכלובים רשת החשוף ל- 30 יום.
תנודות הטמפרטורה יכולה להשפיע גם על התוצאות חשיפה לטווח קצר. הטמפרטורה הממוצעת חודש במהלך החשיפה כלוב רשת שונה בין השנים (טבלה 1). הצמיחה משתנה גם איפה טמפרטורות גבוהות יותר היו מלוות שיעורי צמיחה גבוהים יותר (Kruskal-איי ווליס מבחן p < 0.001). מצד שני, טמפרטורת המים הממוצעת על היישובים אותו במהלך החשיפה כלוב החולי שלושה חודשים היה דומה מאוד בשנים בשני (טבלה 1), הצמיחה לא שונות באופן משמעותי (איור 4B).
היתרונות ואת החולשות השיטות המתואר:
חשיפה מים פתוחים יחסית קל לביצוע, אבל הוא בעל. ערך עבור בית גידול bioindication. השיטה של כלובי רשת מים פתוחים יחסית בת16 , נעשה שוב ושוב עם שינויים מזעריים10,11,12,13,21,22 , 23. בכל זאת, הכלובים האלו אינן מוגבלות על ידי חמצן, חוסר של מי הוא כנראה אחראי למותם לנוער רבים בתנאים hyporheic. לפיכך, כלובי רשת מים פתוחים יכול להראות טוב פיתוח אפילו ביישובים עם תמותה מוגברת, קצב צמיחה הפוחתת בכלובים בים הפתוח החולי (יישוב E) או שיעור המוות של 100% בתוך מיטה החולי בכלובים, ברגע במדינתך D בשנת 2014 (איור 4B). ככל הנראה, הכלובים רשת מים פתוחים להראות צמיחה במדינתך פוטנציאליים, אך זה עשוי לא להיות מציאותי כפי שהיא תלויה בזמינות האמיתי של hyporheic microhabitats בתוך החכומה. כי הכלובים רשת מים פתוחים בעלי יכולת הישרדות גבוהה (איור 4A), אפילו עד שיעור 100% הישרדות13, הם יכולים לשמש גם עבור bioindication של רעילות כרונית (או רעילות חריפה אם הוא צפוי בזמן נתון). בנוסף, הם יכולים להיות נוכחות מקור מזון שימושי בדיקות במידה מסוימת.
כמו שיטה חדשה ונדירות, הכלובים בים הפתוח החולי כדאי לדמות תנאי גידול hyporheic. תנועת נוער בין גרגרי חול אפשרי במנגנון זה, אשר מסייע להפחית את הצמיחה biofilm על המעטפת לנוער. מחסור בחמצן hyporheic יכולה להיגרם על ידי הפעילות של חיידקים colonizing את גרגרי החול; אפקט זה יכול להתרחש גם חלקית בכלובים הממוקמת מעל נהר תחתון. עם זאת, בשל הצורך בניקוי תקופתי של סתימת חומר נסחף מהכלוב, משקעים בסדר גם מוסרים, ובכך התנאים השתנו לעומת הגידול הטבעי hyporheic. אז, קצב הגידול יכול גם להיחשב במדינתך צמיחה פוטנציאליים בכלובים בים הפתוח החולי. עם זאת, זה קרוב יותר התאמה יישוב אמיתי מאשר בים הפתוח mesh כלובים. לכן, מעברי צבע קצב גידול האורך שהוקלט על ידי חולי הכלובים (איור 4B) גם נראה יותר מתקבל על הדעת, מצביעים על קטע הנהר מתאים יותר. יתר על כן, בכלובים החולי, האפשרות של קטינים ושל subadults רבייה עד בגרות מינית הוא מאומת9, כך הכלובים החולי יכול לשמש שיטה בטוחה הרבייה, אפידמיולוגיה סביבתית בו זמנית.
סנדי הכלובים, כלובי רשת להציב בעמדה בתוך מיטת קרובים אליך תנאי אמיתי hyporheal רדוד. בכך שהוא מאפשר התנועה של קטין, הכלובים החולי, בפרט, מציעים שניהם הדרגתי אופקיים ואנכיים של כמה סנטימטרים בקנה מידה. זו היכולת לנוע יכול להיות מאוד חשוב עבור בריחה מן זמני חמצן לקויה מיקרו-אזורי. אפשרות זו נעדר במיטה תוך-mesh כלובים. לכן, מספר גבוה יחסית של bioindication יחידות הוא נחוץ, כי התנאים hyporheic הם מאוד משתנה13,24 (איור 5), הפסדים בשל מיקום אינו מתאים והם נפוצים.
לסיכום, בין השיטות bioindication במחקר זה מתכתב עם בחזקת בתנאי הטבע לנוער לפי הסדר הבא:
1. פתח את כלובי רשת מים,
2. פתח את הכלובים מים חולי,
3. בתוך מיטת כלובי רשת,
4. בתוך מיטות כלובים החולי.
עומס העבודה ליחידת מגביר באותו סדר. יתר על כן, מספר הקטינים הנדרש עבור בדיקה סטטיסטית של התוצאות השיג העלאות חשיפות בתוך מיטה מדי. נראה כי הנתונים ייצגו הכלובים החולי בתוך המיטה יותר יקר, אבל שיטה מדויקת bioindication. שיטה חדשה צריך עוד בדיקות בעתיד, השוואה עם סוגים אחרים של מחקרים hyporheic המבוסס על piezometer מידות25,26. בפרט, יש צורך ללמוד את מידת הדמיון באמצעות בדיקה ישירה מדידה התנאים physicochemical בכלובים בתוך סביבתו hyporheic.
מספר האנשים נמדד בכלוב אחד:
לעומת רשת כלובים, אין אפשרות למדוד תוספת הצמיחה קטינים ספציפי בכלובים חולי כמו אין מידע על איזה פרט מערכת קלט הוא מי מהם בפלט. זה הכרחי לעבוד עם ערך ממוצע. אם ספרתי של כל המשתתפים, ערך זה יכול להיות נמוך מאוד במספר דגימות גדל מאוד לאט; עם זאת, כמה אנשים יכולים לגדול מהר מאוד (צמיחה צנחנים). גדילה לא אחידה כזו הוא אופייני מולים27. ההשתנות צמיחה בקרב נוער עולה עם הגדלת זמן החשיפה, ההבדלים גדולים עלולה להתרחש, במיוחד בעונות הצמיחה-חיובית. כמו כן, חשיפה ארוכה מוביל שיעורי התמותה העיקריים בכלובים רשת (עבור סקירה ראו Lavictoire, Moorkens, רמזי, סינקלייר ואת סוויטינג28), כדי שנוכל לעבוד עם מספר נמוך משמעותית של יחידים בסוף הניסוי בהשוואה קלט הסט של קטינים. מודדים רק את מספר קטינים גדל ביותר היא שיטה אפשרית.
החוויה של גידול FWPM בתוך תכנית הפעולה הצ'כית מים מתוקים פנינה מאסל9,29, כמו גם התוצאות של ניסויים על צדפות ים30,31, מרמז לנוער חשוכת-הצמיחה הזאת צדפות יש שיעור התמותה הגבוה, יש רק סיכוי זניח של החיים שלהם לפדיון. לעומת זאת, הצמיחה המגשרים בעלי שיעור הישרדות גבוה יותר והם קריטי להחלמה האוכלוסייה. הפרמטר 10 מקס (10 ביותר-במהירות גוברת יחידים) לוקח את הג'מפרים צמיחה בחשבון יכול להגדיל את ערך אינפורמטיבי של הניסוי, אפילו אם תמותה גבוהה מתקיים (איור 4B, עונת 2014). יצוין, כי אומדן הצמיחה המתקבלות בשיטה זו אינה יכולה להיות חיובי כוזב. זה יכול רק מעט לזלזל כי רבים קטינים הגדול בסוף הניסוי היה גדל קצת יותר במקרה הזה. גם, עומס העבודה הוא פחות אם רק 10 אנשים נבחנים. באופן דומה, מדידה של שלושה אנשים הגדלה מקסימאלית (מקסימום 3) הוכיח להיות מתאים בכלובים עם רשת שינוי, ביטול השפעת יחידים גדל לאט, הלא-פרספקטיבה, אשר יכולת הטיה תמונה אמיתית של האתר פוטנציאל צמיחה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
Bílý מיכל וסיימון עמ' Ondřej נתמכו על ידי מענקים של הצ'כית האוניברסיטה של החיים המדע [פנימי גרנט סוכנות של הפקולטה למדעי הסביבה, CULS פראג (3175 1312 42110 (20164236))]. תמיכה עבור צ ' רלי הגר הגיעה קרן המדע הצ'כית (13-05872S). נתונים על bioindication ועל המופע הנוכחי של מולים פנינה שנאספו במהלך היישום של תכנית הפעולה הצ'כית עבור מים מתוקים מולים פרל המנוהל על-ידי הסוכנות שימור הטבע של הרפובליקה הצ'כית, אשר ממומן על ידי הממשלה של הרפובליקה הצ'כית והוא זמין
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| biological material maintenance and care | |||
| Freshwater pearl mussel juveniles | any | NA | from a FWPM breeding programme |
| plastic boxes | any | NA | |
| thermobox | MERCI | 212,070,600,030 | There are many possibilities. This is one example only. |
| field thermobox (ca25 l) | any | NA | cold box (insulated box) commonly used for food transport |
| river water | any | NA | |
| Petri dishes | any | NA | |
| plastic Pasteur pipettes with balloon bulb (droppers) | any | NA | hole diameter 1 mm |
| hydrogen peroxide | any | NA | |
| plastic container (ca 50 l) for river water | any | NA | |
| plastic tea strainer | any | NA | commonly used in kitchen |
| mesh cages construction | |||
| main plastic bodies | any | NA | |
| plactic covers | any | NA | |
| special technical sieves 340 µm | Silk &Progress | UHELON 20 T | |
| special technical sieves 100 µm | Silk &Progress | UHELON 67 M | |
| rubber hose (diameter 5.5 mm) | any | NA | |
| steel bolts | any | NA | |
| steel nuts | any | NA | |
| spanner | any | NA | |
| steel spikes | any | NA | |
| pliers | any | NA | |
| beakers | any | NA | |
| plastic dishes (ca. 25x15x3-5cm) | any | NA | |
| squirt bottle | any | NA | |
| field protocols | any | NA | |
| stationery | any | NA | |
| plastic container | any | NA | |
| string | any | NA | |
| hammer | any | NA | |
| sandy cages construction and use | |||
| sieve 1 mm | any | NA | |
| sieve 2 mm | any | NA | |
| special technical sieves 340 µm | Silk &Progress | UHELON 20 T | |
| plastic boxes with tight-fitting lid | any | NA | |
| hot melt adhesive | any | NA | |
| plastic box (ca 250 x 150 x 100 cm) | |||
| big plastic box (ca 25 l) | any | NA | |
| flat stone | any | NA | |
| net | any | NA | |
| river sand | any | NA | |
| round containers | any | NA | |
| magnifying glasses | Carson | Carson CP 60 | There ar many possibilities. This is one example only |
| cages installation and maintenance | |||
| field temperature dataloggers | ONSET | UA-001-64 | http://www.onsetcomp.com/products/data-loggers/ua-001-64 |
| spade | any | NA | |
| toothbrush | any | NA | |
| experiment evaluation | |||
| trinocular dissecting zoom stereo microscope | Bresser optic | ICD 10x-160x | There are many possibilities. This is one example only. |
| digital camera/ electronic eyepiece | Bresser optic | MikroCamLab 5M | There are many possibilities. This is one example only. |
| Calibration gird | Am Scope | SKU: MR100 | There are many possibilities. This is one example only. |
| external power source with two movable light guides | Arsenal | K1309010150021 | There are many possibilities. This is one example only. |
| Image software | ImageJ software | There are many possibilities. This is one example only. | |
| table processor | MS excel | There are many possibilities. This is one example only. |
References
- Goldberg, E. D. The mussel watch-a first step in global marine monitoring. Marine Pollution Bulletin. 6 (7), 111-114 (1975).
- Vaughn, C. C. Ecosystem services provided by freshwater mussels. Hydrobiologia. , In Press (2017).
- Lopes-Lima, M., et al. Conservation status of freshwater mussels in Europe: state of the art and future challenges. Biological Reviews. 92 (1), 572-607 (2017).
- Strayer, D. L., Malcom, H. M. Causes of recruitment failure in freshwater mussel populations in southeastern New York. Ecological Applications. 22 (6), 1780-1790 (2012).
- Douda, K. Effects of nitrate nitrogen pollution on Central European unionid bivalves revealed by distributional data and acute toxicity testing. Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 20 (2), 189-197 (2010).
- Modesto, V., et al. Fish and mussels: importance of fish for freshwater mussel conservation. Fish and Fisheries. , In Press (2017).
- Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. Bauer, G., Wächtler, K. 145, Ecological Studies. 1-394 (2001).
- Neves, R. J., Widlak, J. C. Habitat ecology of juvenile fresh-water mussels (Bivalvia, Unionidae) in a headwater stream in Virginia. American Malacological Bulletin. 5, 1-7 (1987).
- Švanyga, J., Simon, O. P., Mináriková, T., Spisar, O., Bílý, M. Záchranný program pro perlorodku říční v ČR (Action plan for the endangered freshwater pearl mussel in the Czech Republic). , NCA CR. Prague, Czech Republic. (2013).
- Schmidt, C., Vandré, R. Ten years of experience in the rearing of young freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera). Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 20 (7), 735-747 (2010).
- Gum, B., Lange, M., Geist, J. A critical reflection on the success of rearing and culturing juvenile freshwater mussels with a focus on the endangered freshwater pearl mussel (Margaritifera margaritifera L.). Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 21 (7), 743-751 (2011).
- Denic, M., Taeubert, J. E., Lange, M., Thielen, F., Scheder, C., Gumpinger, C., Geist, J. Influence of stock origin and environmental conditions on the survival and growth of juvenile freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera) in a cross-exposure experiment. Limnologica. 50, 67-74 (2015).
- Černá, M., Simon, O. P., Bílý, M., Douda, K., Dort, B., Galová, M., Volfová, M. Within-river variation in growth and survival of juvenile freshwater pearl mussels assessed by in situ exposure methods. Hydrobiologia. , In Press (2017).
- Denic, M., Taeubert, J. E. Trophic relationships between the larvae of two freshwater mussels and their fish hosts. Invertebrate Biology. 134 (2), 129-135 (2015).
- Douda, K. Host-dependent vitality of juvenile freshwater mussels: implications for breeding programs and host evaluation. Aquaculture. 445, 5-10 (2015).
- Buddensiek, V. The culture of juvenile freshwater pearl mussels Margaritifera margaritifera L. in cages: a contribution to conservation programmes and the knowledge of habitat requirements. Biological Conservation. 74 (1), 33-40 (1995).
- Hruška, J. Experience of semi-natural breeding program of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmaßnahmen. , Albert-Ludwigs Universität: Freiburg. Kongressband. WWA Hof 69-75 (2001).
- Barnhart, M. C. Buckets of muckets: a compact system for rearing juvenile freshwater mussels. Aquaculture. 254 (1), 227-233 (2006).
- Simon, O. P., Vaníčková, I., Bílý, M., Douda, K., Patzenhauerová, H., Hruška, J., Peltánová, A. The status of freshwater pearl mussel in the Czech Republic: several successfully rejuvenated populations but the absence of natural reproduction. Limnologica. 50, 11-20 (2015).
- R Core Team. A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. Available from: https://www.r-project.org/ (2013).
- Hastie, L. C., Yang, M. R. Conservation of the freshwater pearl mussel I: captive breeding techniques. 2, Natural England. Peterborough, UK. Conserving Natura 2000 Rivers Conservation Techniques Series No. 2 (2003).
- Hruška, J. Nahrungsansprüche der Flußperlmuschel und deren halbnatürliche Aufzucht in der Tschechischen Republik. Heldia. 4 (6), 69-79 (1999).
- Scheder, C., Lerchegger, B., Jung, M., Csar, D., Gumpinger, C. Practical experience in the rearing of freshwater pearl mussels (Margaritifera margaritifera): advantages of a work-saving infection approach, survival, and growth of early life stages. Hydrobiologia. 735 (1), 203-212 (2014).
- Braun, A., Auerswald, K., Geist, J. Drivers and spatio-temporal extent of hyporheic patch variation: implications for sampling. PLoS ONE. 7 (7), e42046 (2012).
- Franken, R. J. M., Storey, R. G., Williams, D. D. Biological, chemical and physical characteristics of downwelling and upwelling zones in the hyporheic zone of a north-temperate stream. Hydrobiologia. , 183-195 (2001).
- Roley, S. S., Tank, J. L. Pore water physicochemical constraints on the endangered clubshell mussel (Pleurobema clava). Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 73 (12), 1712-1722 (2016).
- Larson, J. H., Eckert, N. L., Bartsch, M. R. Intrinsic variability in shell and soft tissue growth of the freshwater mussel Lampsilis siliquoidea. PLoS ONE. 9 (11), e112252 (2014).
- Lavictoire, L., Moorkens, E., Ramsey, A. D., Sinclair, W., Sweeting, R. A. Effects of substrate size and cleaning regime on growth and survival of captive-bred juvenile freshwater pearl mussels, Margaritifera (Linnaeus, 1758). Hydrobiologia. 766 (1), 89-102 (2015).
- Hruška, J. Experience of semi-natural breeding programme of freshwater pearl mussel in the Czech Republic. Die Flussperlmuschel in Europa: Bestandssituation und Schutzmassnahmen. , 69-75 (2000).
- Bayne, B. L. Physiological components of growth differences between individual oysters (Crassostrea gigas) and a comparison with Saccostrea commercialis. Physiological and Biochemical Zoology. 72 (6), 705-713 (1999).
- Tamayo, D., Azpeitia, K., Markaide, P., Navarro, E., Ibarrola, I. Food regime modulates physiological processes underlying size differentiation in juvenile intertidal mussels Mytilus galloprovincialis. Marine Biology. 163 (6), (2016).
