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युवा मीठे पानी मोती Mussels के लिए धारा पर्यावरण उपयुक्तता का उपयोग करने के लिए

Published: September 5, 2018 doi: 10.3791/57446
Automatic Translation
1, 1, 1,2, 3, 1, 1
1Faculty of Environmental Sciences, Czech University of Life Sciences Prague, 2T. G. Masaryk Water Research Institute, 3Department of Zoology and Fisheries, Faculty of Agrobiology, Food and Natural Resources, Czech University of Life Sciences Prague

Summary

सीटू में विलुप्तप्राय कौड़ी प्रजातियों के लिए एक पर्यावरण की उपयुक्तता का निर्धारण सक्षम करें । हम oligotrophic नदी के निवास के लिए पिंजरों में मीठे पानी पर्ल mussels के किशोर जोखिम पर आधारित दो तरीकों का वर्णन । दोनों तरीकों को खुले पानी और hyporheic पानी के वातावरण के लिए वेरिएंट में लागू कर रहे हैं ।

Abstract

मीठे पानी mussels के लिए आवास उपयुक्तता का ज्ञान इस लुप्तप्राय प्रजातियों के समूह के संरक्षण में एक महत्वपूर्ण कदम है । हम एक महीने और तीन महीने के अंतराल पर oligotrophic नदी पकड़ने के भीतर सीटू किशोर जोखिम परीक्षणों में प्रदर्शन के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन । दो तरीकों (दोनों संशोधनों में) को किशोर विकास और जीवित रहने की दर का मूल्यांकन प्रस्तुत कर रहे हैं । तरीकों और संशोधनों के स्थानीयकरण के संकेत के लिए मूल्य में अलग है और प्रत्येक के रूप में अच्छी तरह के रूप में सीमाओं के अपने लाभ है । रेतीले पिंजरे विधि व्यक्तियों का एक बड़ा सेट के साथ काम करता है, लेकिन केवल व्यक्तियों में से कुछ और मापा परिणाम थोक में मूल्यांकन कर रहे हैं । मेष पिंजरे विधि में, व्यक्तियों रखा और अलग से मापा जाता है, लेकिन एक कम व्यक्तिगत संख्या का मूल्यांकन किया है । ओपन वॉटर एक्सपोजर संशोधन को लागू करने के लिए अपेक्षाकृत आसान है; यह साइटों की किशोर विकास क्षमता से पता चलता है और यह भी पानी विषाक्तता परीक्षण के लिए प्रभावी हो सकता है । भीतर बिस्तर जोखिम संशोधन एक उच्च कार्यभार की जरूरत है, लेकिन एक प्राकृतिक किशोर पर्यावरण की स्थिति के करीब है और यह इलाकों की असली उपयुक्तता रिपोर्टिंग के लिए बेहतर है । दूसरी ओर, अधिक प्रतिकृतियां अपने उच्च hyporheic वातावरण परिवर्तनशीलता के कारण इस संशोधन में की जरूरत है ।

Introduction

उनकी हालत के बाद के मूल्यांकन के साथ सीटू में प्रयोगात्मक जीवों के जोखिम पर्यावरण की गुणवत्ता और (विशेष रूप से) एक प्रजाति के लिए साइट उपयुक्तता के बारे में जानकारी प्राप्त करने के लिए एक संभव तरीका है । जानवरों के भीतर, इस तरह के एक संकेत मुख्य रूप से छोटे अकशेरूकीय जो एक सीमित बंधे अंतरिक्ष में रहने के लिए सक्षम है के लिए लागू होता है । bivalves (Bivalvia) के युवा चरणों एक ऐसे उपयुक्त जीव समूह1हैं ।

परिवार Unionidae के Bivalves जलीय पारिस्थितिकी प्रणालियों के एक बहुत ही महत्वपूर्ण घटक हैं2. हालांकि, इन प्रजातियों अक्सर गंभीर रूप से खतरे में हैं, विशेष रूप से धाराओं और नदियों में । उनमें से कुछ ' के रूप में छाता प्रजातियों ' जिसका संरक्षण बारीकी से पूरी धारा biotope के संरक्षण से संबंधित है और जो एक व्यापक दृष्टिकोण3की आवश्यकता होती है विशेषता है । इन जानवरों के एक जीवन चक्र कई पर्यावरण घटकों के साथ जुड़ा हुआ है, जल रसायन विज्ञान से4,5 मछली जो कौड़ी लार्वा के रूप में सेवा की आबादी में परिवर्तन करने के लिए6मेजबान । क्योंकि कौड़ी किशोर अक्सर कौड़ी जीवन चक्र के एक महत्वपूर्ण चरण का प्रतिनिधित्व करते हैं, इस स्तर पर उनके विकास के लिए साइट उपयुक्तता एक सफल प्रजातियों एक इलाके में जनसंख्या विकास के लिए महत्वपूर्ण है ।

मीठे पानी मोती कौड़ी (FWPM, Margaritifera Margaritifera; Unionida, Bivalvia) एक गंभीर लुप्तप्राय bivalve oligotrophic यूरोपीय धाराओं में होने वाली है । उनकी संख्या काफी घटना क्षेत्र में 20वीं सदी के दौरान गिर गए हैं । ऐसा लगता है कि मध्य यूरोपीय आबादी के बहुमत में प्रजातियों के प्रजनन में मौजूदा गिरावट मुख्यतः उनके जीवन के पहले कुछ वर्षों के दौरान किशोरों की अस्तित्व शूंय करने के लिए बहुत कम की वजह से है । यह माना जाता है कि किशोर FWPMs उथले hyporheic क्षेत्र में कई वर्षों के लिए रहते है7, जिनमें से शर्तों और उनकी परिवर्तनशीलता अभी भी अच्छी तरह से वर्णित नहीं हैं । इसके अलावा, उनके जीवन के दूसरे वर्ष तक, किशोर केवल के बारे में 1 मिमी तक का एक आयाम है, तो वे बहुत प्राकृतिक स्थितियों8के तहत तलछट की बड़ी मात्रा में खोजने के लिए मुश्किल हैं । इसलिए, बंदी किशोर के साथ प्रयोग उनके पारिस्थितिकी के अध्ययन के लिए आवश्यक हैं ।

मीठे पानी पर्ल कौड़ी9के लिए चेक कार्य योजना के भीतर, वहां एक अर्द्ध प्राकृतिक प्रजनन कार्यक्रम से हर साल बढ़ किशोरों के हजारों रहे हैं । फिर भी, वहां एक सवाल है जिसमें से स्थानीय लोगों और निवास इन किशोरों या अंतिम प्रजातियों के पुनर्परिचय के लिए द्वारा सफल जनसंख्या समर्थन के लिए उपयुक्त हैं । में सीटू का जवाब खोजने का एक तरीका मौजूद है.

तथ्य यह है कि असंगत जोखिम पिंजरों में किशोर mussels के जीवित रहने की दर के बावजूद कुछ पहले काम करता है कि mussels10, हाल के कई अध्ययनों की पुष्टि की है के रूप में किशोर की उपयुक्तता पूछताछ में मनाया गया पानी की गुणवत्ता के परीक्षण के लिए किशोर जोखिम तरीकों की प्रयोज्यता11,12,13। इसके अतिरिक्त, यह प्रदर्शित किया गया है कि कई कारकों पर विचार किया जब इन विशेष अध्ययन के परिणामों की व्याख्या की जरूरत है, ऐसे शेयर मूल14 और लार्वा शर्तों15के निरंतर प्रभाव के रूप में ।

सवाल कैसे परीक्षण किया इलाकों में प्रयोगात्मक किशोरों स्थापित करने के लिए और कैसे सबसे प्रभावी ढंग से उनकी हालत का मूल्यांकन करने के लिए उठता है । किशोर FWPMs के साथ सीटू एक्सपोजर तरीकों में से पहला कठोर आवेदन Buddensiek16द्वारा प्रकाशित किया गया था । किशोर FWPM व्यक्तियों चादर पिंजरों में रखा, मुक्त नदियों के पानी बह में उजागर किया गया है, और उनके अस्तित्व और विकास के जोखिम के कई हफ्तों के बाद quantified थे । दृष्टिकोण मूलतः एक अर्द्ध कृत्रिम प्रजनन पद्धति के रूप में विकसित किया गया था, लेकिन लेखक भी निवास आवश्यकताओं और पानी की गुणवत्ता के आकलन के लिए अपनी प्रयोज्यता पर प्रकाश डाला । हालांकि FWPM किशोर अस्तित्व एक महीने के पैमाने पर स्वाभाविक रूप से बहुत कम है/साल और जानवरों की केवल एक बहुत छोटी संख्या बच जाएगा, जीवित रहने की दर कई सप्ताह16के पैमाने पर पर्यावरण प्रभाव का एक अच्छा मार्कर हो सकता है । अनुसंधान के वर्षों में, जोखिम के तरीकों के लिए प्रयोगात्मक किशोर कौड़ी पकड़ में धारा निवास और उनके विकास और जीवित रहने की दर का मूल्यांकन करने के लिए विकसित किया गया; ये सैंडी बक्से17, कौड़ी एक उमड़ने सिद्धांत18पर आधारित silos, और विभिंन अंय जोखिम पिंजरों शामिल है (गम और सहयोगियों द्वारा संक्षेप)11। क्योंकि किशोर उथले hyporheic क्षेत्र7में स्वाभाविक रूप से होते हैं, धारा नीचे के भीतर प्रयोगात्मक उपकरणों के आवेदन बहुत वांछनीय है ।

हमारे लेख में, हम FWPMs के लिए दो जोखिम उपकरणों के उपयोग का वर्णन: मैं) संशोधित Buddensiek शीट पिंजरों ("जाल पिंजरों") भी hyporheal परिस्थितियों में अधिक संकेत परीक्षण को सक्षम करने; और द्वितीय) Hruška रेतीले बक्से ("रेतीले पिंजरों") । प्रोटोकॉल खुले पानी और hyporheic स्थितियों में दोनों तरीकों के आवेदन का वर्णन (यानी, जोखिम के चार वेरिएंट वर्णित हैं) । तरीकों को धीरे से संशोधित किया गया और अधिक से अधिक 15 वर्षों के आवेदन के भीतर मीठे पानी पर्ल कौड़ी9 के लिए चेक कार्रवाई योजना और प्रयोगों का एक सेट द्वारा सत्यापित का विस्तार ।

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Protocol

1. मेष पिंजरे

नोट: चित्र 1देखें ।

  1. सामग्री तैयार
    1. प्रयोग के प्रयोगशाला में भाग के लिए सामग्री तैयार: ~ 1-2 जाल पिंजरे, जाल पिंजरों (1 मुख्य प्लास्टिक शरीर, 2 प्लास्टिक कवर, के साथ विशेष तकनीकी छलनी के 2 चादरें ३४० µm pores, 4 बोल्ट और पिंजरे प्रति 4 नट), चिमटा प्रति नदी जल के एल , एक अड़ंगा, पाश्चर पिपेट, एक छलनी, एक डिजिटल कैमरा, एक trinocular विदारक ज़ूम स्टीरियो माइक्रोस्कोप, एक अंशांकन ग्रिड (माइक्रोस्कोप उपकरण), ५० mm व्यास के 5 पेट्री व्यंजन, यूरिन, 2 प्लास्टिक व्यंजन (~ 25 cm x 15 cm x 3-5 cm), और एक प्लास्टिक बॉक्स ।
    2. hyporheal स्थापना करने के लिए, एक रबर की नली और एक १००-µm-ताकना जाल, और एक धार बोतल तैयार करते हैं । डिवाइस के निर्माण के लिए, अनुपूरक फ़ाइल 1: S .1 देखें । मेष पिंजरों निर्माण।
  2. नीचे और जाल पिंजरों के मध्य भाग को इकट्ठा । पिंजरे कि व्यक्तियों रखती का हिस्सा इकट्ठा । डालें एक प्लास्टिक कवर पहले, तो प्लास्टिक की छलनी की एक चादर, और अंत में शीर्ष पर मुख्य शरीर । इसे सुरक्षित करने के लिए चार बोल्ट का इस्तेमाल करें ।
  3. जैविक सामग्री तैयार करें
    1. नदी के पानी युक्त प्लास्टिक डिश में मेष पिंजरे रखो । सुनिश्चित करें कि चैंबर आधे भरे हुए हैं । FWPM किशोर ले लो ( अनुपूरक फ़ाइल 1: एस 6 देखें । जैविक सामग्री) को थर्मल के बाहर से अछूता डिब्बा और पेट्री डिश में डाल दिया ।
      नोट: सुनिश्चित करें कि अचानक तापमान परिवर्तन ~ 2 ° c से अधिक नहीं है ।
    2. एक धार बोतल और छलनी का उपयोग कर, कतरे स्पष्ट करने के लिए किशोरों के माध्यम से झारना ।
  4. माइक्रोस्कोप और कैमरा सेट करें । उपकरणों की एक अंशांकन प्रदर्शन ( अनुपूरक File1 देखें: एस 5 । माइक्रोस्कोप और phototechnics) । एक पेट्री डिश को माइक्रोस्कोप के नीचे थोड़ा पानी युक्त रखें ।
  5. पिंजरों में किशोर रखो (प्रायोगिक प्रयोगशाला काम)
    1. एक पेट्री डिश से एक व्यक्ति को हटाने और ध्यान से यह माइक्रोस्कोप के तहत पेट्री डिश में जगह के लिए एक पाश्चर पिपेट का प्रयोग करें ।
    2. ऐपिस (~ 40X आवर्धन) में देख कर व्यक्ति की फिटनेस की जांच करें ।
      नोट: "अच्छा" फिटनेस का प्रतीक है कि व्यक्तिगत चाल, पक्ष की ओर से घुमाता है, पैर खोल के बाहर धक्का, आदि एक पाश्चर पिपेट के साथ मृत या कम फिटनेस व्यक्तियों को हटा दें और उंहें एक अलग पेट्री डिश में जगह (एक खोला के साथ FWPM किशोर शैल, कोई आंदोलन, पैर बाहर निकाला नहीं है, एक खंडित खोल, किशोरों जो पानी में बेकाबू नाव, खोल के एक दृश्य अपघटन, आंशिक decalcification) । ।
    3. एक FWPM के दो तस्वीरें ले अच्छा फिटनेस दिखा ~ 80X के एक निरंतर इज़ाफ़ा का उपयोग कर व्यक्ति । अनुपूरक फाइल 1 देखें: एस .5 । माइक्रोस्कोप और phototechnics। फ़ोटो सहेजें ।
      नोट: इसकी लंबाई का एक अच्छा माप के लिए, जुवेनाइल लंबाई (पार्श्व दृश्य) रखी जानी चाहिए. मुख्य लक्ष्य के लिए अधिकतम खोल लंबाई के एक उच्च गुणवत्ता वाले चित्र लेने के लिए काफी अच्छा एक तस्वीर विश्लेषण के बाद सक्षम है ।
    4. जैसे ही तस्वीरें ले रहे है पिंजरे में उपयुक्त कक्ष में जुवेनाइल डालें । चित्रों और चैंबर के नंबर रिकॉर्ड करें ।
    5. दोहराएं जाल पिंजरे में सभी प्रयुक्त कक्षों के लिए प्रत्येक व्यक्ति के साथ इस कदम ।
      नोट: देखें अनुपूरक फाइल 1: S .1. मेष पिंजरों निर्माण।
    6. एक बार सभी का इस्तेमाल किया कक्षों मोती mussels है, पिंजरे पर प्लास्टिक छलनी डाल दिया है, तो धीरे पर प्लास्टिक कवर डाल और पागल के साथ सभी भागों को सुरक्षित ।
    7. एक hyporheic क्षेत्र में एक अधिष्ठापन के मामले में, नली में से एक के पास कक्षों में से एक के माध्यम से समाप्त होता है और यह इस स्थिति में ठीक है, तो विरोधी कॉलेस्ट्रॉल मेष ले और इसे नीचे छोर पर बांध ( अनुपूरक फ़ाइल 1 देखें: एस .1 । मेष पिंजरों निर्माण) ।
  6. स्टोर किशोर
    1. पिंजरे को नदी के पानी के साथ प्लास्टिक के डब्बे में रखें, ताकि किशोर पूरी तरह डूबे रहें, और thermobox में रखें । स्थापना से पहले, किशोरों की स्थापना के स्थान पर सीटू नदी के पानी के तापमान में करने के लिए अनुकूल है (क्रमिक ठंडा, अधिकतम .5 ° c 24 में).
  7. मेष पिंजरों स्थापित करें
    1. किशोर, इस्पात spikes, बोल्ट और धातु पागल, एक अड़ंगा, क्षेत्र के तापमान dataloggers के साथ जाल पिंजरों सहित क्षेत्र सामग्री तैयार ( सामग्री की तालिका देखें और अनुपूरक फ़ाइल 1: S. 4.2 । पानी माप), एक स्ट्रिंग, एक कैमरा, क्षेत्र प्रोटोकॉल, एक हथौड़ा, और एक कुदाल.
    2. एक क्षेत्र thermobox (अछूता बॉक्स) में साइट के लिए FWPM किशोरों परिवहन, बदलाव < ~ 2 डिग्री सेल्सियस के साथ एक स्थिर पानी का तापमान रखते हुए । साइट पर नदी में जाल पिंजरों के साथ thermobox रखो किशोरों स्थानीय पर्यावरण की स्थिति (पीएच, चालकता, आदि) के लिए अनुकूल है ।
    3. मेष पिंजरे स्थापित करें ।
      1. क्षेत्र thermobox से मेष पिंजरे निकालें । यह दो स्टील spikes के साथ प्रदान करें और क्षेत्र डेटा लकड़हारा जकड़ना । अध्ययन क्षेत्र में FWPMs के लिए विशिष्ट शर्तों के साथ एक आवास में पिंजरे लंगर (जैसे, मुख्य धारा के प्रवाह के किनारे पर नहीं, सीधे पानी के प्रवाह में नहीं, खड़े पानी में नहीं, सीधे धूप में) ।
        1. खुले पानी के लिए, इस्पात spikes के एक जोड़ी का उपयोग कर, नदी के नीचे करने के लिए पिंजरे को ठीक; नदी के नीचे नदी के प्रवाह के लिए ४५ ° के कोण पर, बहाव के साथ अपने पक्ष और स्तर पर यह करना निचली क्षैतिज बढ़त नदी के नीचे की सतह के ऊपर 10-15 सेमी होनी चाहिए । एक इलाके में प्रत्येक पिंजरे के बीच 2 मीटर की एक ंयूनतम दूरी बनाए रखने ( अनुपूरक फ़ाइल 1: एस 4 देखें । पिंजरों रखरखाव) ।
        2. hyporheic क्षेत्र के लिए, एक सीधा परिदृश्य स्थिति में नदी के नीचे में पिंजरों खुदाई, सीधा पानी की धारा के लिए, ताकि पिंजरे के ऊपरी क्षैतिज किनारे नदी के नीचे की सतह के समानांतर है और कक्षों में स्थित है hyporheic गहराई जिसका परीक्षण किया जाना चाहिए । प्रयोग के दौरान पानी के नमूने की संभावना के लिए नीचे की सतह के ऊपर रबड़ नली के ऊपरी छोर बाहर ले ( अनुपूरक फ़ाइल 1: S. 4.2 देखें । जल मापन).
          नोट: यह पिंजरों पर नियमित रूप से जांच और रखरखाव करने की सिफारिश की है ( अनुपूरक फ़ाइल देखें 1: S .4 । पिंजरों रखरखाव) ।
  8. पिंजरों की स्थापना रद्द करें और जोखिम के बाद किशोरों के परिवहन । इस के लिए, पिंजरों पानी से बाहर खींच, उंहें ठीक तलछट के रूप में अच्छी तरह से बहती सामग्री के रूप में स्पष्ट है और उंहें नदी के पानी से भर thermobox क्षेत्र में डाल दिया । पिंजरों को तुरंत प्रयोगशाला में पहुँचाया जाए और मृत्यु दर और वृद्धि की दरें मूल्यांकन प्रारंभ करें.
    नोट: देखें अनुपूरक फाइल 1: S .3 । एक्सपोज़र अवधि। पिंजरों और प्रयोगशाला वातावरण के बीच 5 से अधिक डिग्री सेल्सियस के तापमान के अंतर के मामले में, यह पहले तापमान बराबर जाने के लिए आवश्यक है ।
  9. प्रत्येक जुवेनाइल के जीवन की जांच करके प्रयोग का मूल्यांकन करें (स्टेप्स 1.5.2 और 1.5.3 देखें) और एक पेट्री डिश में प्रत्येक लाइव जुवेनाइल की 2 छवियां ले कर एक निरंतर आवर्धन का उपयोग कर ~ 80X. फिटनेस और चित्रों और कक्षों की संख्या रिकॉर्ड करें ।
  10. प्रयोग पूरा करें (सभी तरीकों के लिए आम)
    1. छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर में माप करते हैं । दोनों इनपुट छवियों (step 1.5.3) पर और आउटपुट छवियों (चरण १.९) पर हर मूल्यांकित जुवेनाइल के शरीर के आकार निर्धारण के लिए छवि विश्लेषण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें । दोनों इनपुट और आउटपुट में शरीर का आकार मूल्यों के रूप में दोनों तस्वीरों में दर्ज अधिकतम कुल खोल लंबाई का उपयोग करें ।
    2. तालिका प्रोसेसर में मापा मूल्यों डालें और प्रत्येक जीवित जुवेनाइल के लिए वृद्धि वेतन वृद्धि (%) ।
    3. जाल पिंजरे में सभी प्रयोगात्मक व्यक्तियों के लिए जीवित व्यक्तियों की संख्या के अनुपात का उपयोग करने के लिए जीवित रहने की दर प्रति मेष पिंजरे (प्रतिशत) का अनुमान है ।
      नोट: प्रयोग के बाद, वापसी के प्रजनन कार्यक्रम के लिए बचे
      ( अनुपूरक फाइल 1 देखें: एस .6 । जैविक सामग्री) ।

2. रेतीले पिंजरे

नोट: चित्र 2देखें.

  1. सामग्री तैयार
    1. प्रयोग के इन-लेबोरेटरी भाग के लिए सामग्री तैयार करें: 2 पेट्री व्यंजन (व्यास ~ ८.५ सेमी), पाश्चर पिपेट, एक छलनी, 25 नदी के पानी के एल, एक प्लास्टिक बॉक्स, छलनी (जाल आकार 1 और 2 मिमी), एक बड़ा प्लास्टिक बॉक्स (25 एल), एक रेतीले पिंजरे ( अनुपूरक फ़ाइल देखें 1 : एस .2 । सैंडी पिंजरों निर्माण), एक डिजिटल कैमरा, एक trinocular विदारक स्टीरियो माइक्रोस्कोप, एक अंशांकन ग्रिड (माइक्रोस्कोप उपकरण), अध्ययन क्षेत्र से नदी रेत हल (2.1.3 कदम देखें), और प्रोटोकॉल । सामग्री की तालिका देखें और अनुपूरक फाइल 1: एस .2 । रेतीले पिंजरों निर्माण।
    2. अलगाव की प्रक्रिया के लिए सामग्री तैयार: गोल कंटेनरों (प्रत्येक पिंजरे के अलावा 1 अतिरिक्त के लिए 1), 2 पेट्री व्यंजन (व्यास ~ 14 सेमी), एक पाश्चर पिपेट, शीशा चश्मा, और नदी के पानी के 1 एल ।
    3. एक 2 मिमी चलनी के माध्यम से और फिर एक 1 मिमी चलनी के माध्यम से 1-2 मिमी की एक अनाज आकार पाने के लिए नदी रेत झारना । रेत सूखी और यह एक सूखी रूप में आवश्यक जब तक बचाने के लिए ।
  2. किशोर ले लो (देखें अनुपूरक फ़ाइल 1: S .6 । जैविक सामग्री) बाहर thermobox और पेट्री डिश में डाल दिया । एक धार बोतल और छलनी का उपयोग कर, कतरे स्पष्ट करने के लिए किशोरों के माध्यम से झारना ।
  3. माइक्रोस्कोप और कैमरा सेट ( अनुपूरक फाइल 1 देखें: एस 5 । माइक्रोस्कोप और phototechnics) ।
  4. पिंजरों में किशोर रखो (प्रायोगिक प्रयोगशाला काम)
    1. रेतीले पिंजरे प्लास्टिक बॉक्स में रखें । क्रमबद्ध रेत तितर बितर (चरण 2.1.3 देखें) रेतीले पिंजरे की ऊंचाई के एक तिहाई तक । बॉक्स में पानी डालो । सुनिश्चित करें कि पानी के स्तर से करीब 10 मिमी नीचे रेत की सतह है । नदी के पानी के 25 एल बॉक्स में रेतीले पिंजरे डालें और यह किशोर FWPMs के रूप में एक ही तापमान को बेनकाब ( अनुपूरक फ़ाइल 1: S. 6.2 देखें । जैविक सामग्री के भंडारणके लिए) 12 ज. धूप के लिए रेत के किसी भी जोखिम से बचें ।
    2. तैयार FWPM किशोरों के साथ पेट्री डिश लें ।
    3. ऐपिस में देख कर व्यक्तियों के स्वास्थ्य की जांच (कदम 1.5.2 देखें) ।
    4. इस प्रकार के रूप में फोटोग्राफ प्रलेखन करते हैं । सभी व्यक्तियों की खोज की एक तस्वीर ले लो (कदम 1.5.3 देखें) और सबसे बड़े व्यक्तियों में से 10 का चयन करें । वैकल्पिक रूप से, एक थोक मूल्यांकन के लिए कम इज़ाफ़ा (~ 40X) के साथ सभी किशोरों की तस्वीरें ले लो और 10 सबसे बड़े व्यक्तियों का चयन करें । सभी तस्वीरें सहेजें और उनकी संख्या रिकॉर्ड ।
    5. एक धार बोतल का प्रयोग, तैयार रेतीले पिंजरे में FWPM किशोरों चाल ।
  5. स्टोर किशोर
    1. पिंजरे को नदी के पानी से बड़े प्लास्टिक के डब्बे में रख दें ताकि पिंजरे में पूरी तरह डूब जाए और उसे thermobox में रखें । किशोरों को सीटू नदी के पानी के तापमान (क्रमिक शीतलक, अधिकतम .5 ° c 24 घंटे के लिए) की स्थापना से पहले करने के लिए अनुकूल हैं ।
  6. रेतीले पिंजरों स्थापित
    1. क्षेत्र स्थापना के लिए सामग्री तैयार: रेतीले पिंजरों, एक ~ 25-एल क्षेत्र thermobox, एक फ्लैट स्टोन (ंयूनतम वजन 1 किलो), एक शुद्ध (मेष आकार 10 x 10 मिमी), एक धार बोतल, क्षेत्र तापमान dataloggers (देखें सामग्री की तालिका और अनुपूरक फ़ाइल 1: एस 4.2. पानी माप), एक कुदाल, और क्षेत्र प्रोटोकॉल ।
    2. क्षेत्र thermobox में साइट के लिए किशोरों के साथ पिंजरों परिवहन, एक स्थिर पानी के तापमान (~ 2 डिग्री सेल्सियस परिवर्तन) रखते हुए । क्षेत्र स्थल पर नदी में रेतीले पिंजरों के साथ क्षेत्र thermobox रखो FWPM किशोरों स्थानीय पर्यावरण की स्थिति (पीएच, चालकता, आदि) के लिए अनुकूल है ।
    3. FWPMs के लिए विशिष्ट शर्तों के साथ निवास में रेतीले पिंजरों स्थापित (उदाहरणके लिए, एक बल में मुख्य धारा के प्रवाह के किनारे पर, सीधे पानी के प्रवाह में नहीं, खड़े पानी में नहीं, सीधे धूप में नहीं) ।
      1. खुले पानी के लिए, एक फ्लैट एक शुद्ध का उपयोग कर पत्थर को रेतीले पिंजरों जकड़ना और यह नदी के तल पर जगह है । सुनिश्चित करें कि पिंजरे के बड़े पक्ष के प्रवाह के साथ ४५ डिग्री का एक कोण रूपों ।
      2. Hyporheal के लिए, नदी के नीचे सीधा पानी के प्रवाह के लिए पिंजरों खुदाई इतना है कि पिंजरे ढक्कन नदी के नीचे की सतह के साथ स्तर है ।
        नोट: यह पिंजरों पर नियमित रूप से जांच और रखरखाव करने की सिफारिश की है ( अनुपूरक फ़ाइल देखें 1: S .4 । 1. साइट चेक) ।
  7. निवेश के बाद पिंजरों और परिवहन किशोरों की स्थापना रद्द करें
    नोट: देखें अनुपूरक फाइल 1: S .3 । एक्सपोज़र अवधि।
    1. पिंजरों पानी से बाहर खींच, उंहें बहती सामग्री के स्पष्ट और उंहें नदी के पानी से भर thermobox क्षेत्र में डाल दिया ।
    2. पिंजरों परिवहन प्रयोगशाला के लिए और मृत्यु दर और वृद्धि की मूल्यांकन शुरू करते हैं ।
      नोट: पिंजरों और प्रयोगशाला वातावरण के बीच 5 से अधिक डिग्री सेल्सियस के तापमान के अंतर के मामले में, यह तापमान बराबर जाने के लिए आवश्यक है ।
  8. रेत से अलग FWPM किशोर
    1. ५० मिमी (प्रत्येक पिंजरे के लिए अलग से) और एक अतिरिक्त गोल कंटेनर के एक पानी की गहराई के साथ एक गोल कंटेनर तैयार करें । पिंजरे से रेत को गोल कंटेनर में ट्रांसफर कर । एक अतिरिक्त कंटेनर में हल्का कणों को धोने के लिए एक घूमता गति का उपयोग करें ।
    2. एक पाश्चर पिपेट और एक आवर्धक कांच का उपयोग कर कदम-दर-कदम किशोरों के लिए इस कंटेनर धीरे से सामग्री का नमूना और खोज । पाश्चर पिपेट का उपयोग करते हुए पेट्री डिश में किशोरों को रखें । पिछले जुवेनाइल पाया गया है जब तक इस कदम को दोहराएँ और फिर पहले नकारात्मक खोजने के बाद एक और 10x. प्रत्येक धोने के कदम के बाद, रेत के साथ मूल कंटेनर के लिए स्वच्छ नदी के पानी जोड़ें ।
      नोट: विशेष रूप से पहली धोने के बाद बाहर, ठीक से सामग्री की जांच और गिट्टी की यह ऐसी ठीक तलछट और अंय alluvia के रूप में साफ ।
  9. प्रयोग का मूल्यांकन करें
    1. प्रत्येक किशोर की फिटनेस की जांच करें (कदम 2.4.3 और 1.5.2 देखें) और बचे की संख्या की गणना ।
    2. एक तस्वीर ले लो (देखें चरण 2.4.4.) प्रत्येक व्यक्ति के अलग से, हालांकि इस का मतलब है कि प्रत्येक व्यक्ति की कोई स्पष्ट पहचान नहीं है । वैकल्पिक रूप से, थोक तस्वीरें ले लो और अंतिम परिणाम से 10 सबसे बड़े व्यक्तियों के एक सबसेट का चयन करें ।
      नोट: दोनों संभावनाओं को एक समान रिपोर्टिंग मान है । संभावना 1 एक उच्च कार्यभार की कमी है, लेकिन यह भी उच्चतम फोटो आवर्धन के लाभ और इस प्रकार भी अधिक सटीकता है ।
  10. प्रयोग पूरा
    1. छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर में माप करते हैं । पूरा प्रयोग के रूप में जाल पिंजरों में किया (१.१० कदम देखें) निंनलिखित अपवाद के साथ: विकास दर (%) प्रत्येक किशोर का मूल्यांकन नहीं है लेकिन रेतीले पिंजरे प्रयोग में एक पूरे के रूप में समूह का मूल्यांकन ।
      नोट: प्रयोग के बाद बचे हुए प्रजनन कार्यक्रम को लौटाया जाना चाहिए
      ( अनुपूरक फाइल एस 6.1 देखें । एसईएक जैविक सामग्री के lection) ।

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Representative Results

चार उच्च संकेत तरीकों (खुले पानी रेतीले पिंजरों, भीतर बिस्तर रेतीले पिंजरों, खुले पानी जाल पिंजरों, और भीतर बिस्तर जाल पिंजरों) को ऊपरी Vltava नदी बेसिन में FWPMs के लिए पर्यावरण की स्थिति उपयुक्तता की जांच लागू किया गया (बोहेनिया वन, चेक गणराज्य) । इस नदी के मध्य यूरोप19के भीतर एक FWPM अवशिष्ट इलाके का प्रतिनिधित्व करता है । यहां, हम चार तरीकों में से सबसे महत्वपूर्ण पहलुओं illustrating परिणामों के एक विशेष रूप से चयनित सेट प्रस्तुत करते हैं । अधिक जानकारी के Černá एट अल द्वारा एक व्यापक अध्ययन में वर्णित हैं । 13.

नदी का वातावरण दो स्तरों पर अध्ययन किया गया:

(I) एक अनुदैर्ध्य नदी प्रोफ़ाइल मुख्य स्ट्रीम इलाकों (साइटों ए ई) और विभिंन प्रदूषण चरणों के सहायक नदियों (साइटें आर और वी) द्वारा प्रतिनिधित्व किया गया था । इलाकों दोनों रेतीले पिंजरों द्वारा और जाल मुक्त बह पानी में स्थापित पिंजरों द्वारा परीक्षण किया गया । इसके अलावा, एक बजरी hyporheic क्षेत्र के भीतर बिस्तर सैंडी पिंजरों द्वारा परीक्षण किया गया इलाकों बी, सी, और डी ।

(२) चयनित स्थानीयता सी में एक hyporheic वातावरण का परीक्षण किया गया. विभिंन सब्सट्रेट (रेत, बजरी, पत्थर) की उपयुक्तता के भीतर बिस्तर जाल पिंजरों द्वारा परीक्षण किया गया ।

विकास दर और > 1 वर्षीय किशोर की जीवित रहने की दर ( अनुपूरक फाइल 1 देखें: एस .6 । जैविक सामग्री) का परीक्षण किया गया । प्रयोग २०१४ की गर्मियों में अपनी पूरी हद तक बाहर किया गया था और २०१५ की गर्मियों में कुछ इलाकों में एक छोटे हद तक दोहराया गया था । स्तर के भीतर (I), 2-6 सैंडी पिंजरों १०० किशोरों और 6 (२०१४) या 4 (२०१५) 6 किशोरों के साथ जाल पिंजरों की एक ंयूनतम के साथ प्रत्येक उपयुक्त विधि द्वारा परीक्षण इलाके में लागू किया गया । स्तर के भीतर (द्वितीय), 7 6 किशोरों के साथ मेष पिंजरों हर परीक्षण वातावरण में स्थापित किया गया । जोखिम समय जाल पिंजरों और रेतीले पिंजरों के लिए तीन महीने के लिए एक महीने था ।

सांख्यिकीय विश्लेषण आर, संस्करण 3.1.020में आयोजित किया गया । Kruskal-वालिस, Kruskal-Nemenyi, और Wilcoxon-मान-Whitney परीक्षणों का प्रयोग किया गया । सामान्य वितरण के साथ डेटा के लिए, रेखीय या द्विघात प्रतीपगमन किया गया था ।

इलाकों स्पष्ट रूप से उच्च भीतर पिंजरे परिवर्तनशीलता के बावजूद खुले पानी मेष पिंजरों में वृद्धि दर के आधार पर प्रतिष्ठित किया जा सकता है, यहां तक कि विभिंन विकास में अनुकूल समय (आंकड़ा 3) । २०१५ में अधिक वृद्धि-अनुकूल जोखिम में (विकास दर १९.३-४१.८%), एक महत्वपूर्ण प्रवृत्ति अनुदैर्ध्य प्रोफ़ाइल में खोज की थी जहां वृद्धि दर (Kruskal-वालिस परीक्षण, पी < ०.००१) की वृद्धि हुई । महत्वपूर्ण बात, जीवित रहने की दर दोनों सत्रों में समकक्ष रूप से अधिक थी (८३%) (चित्रा 4a) ।

दूसरी ओर, खुले पानी रेतीले पिंजरों २०१४ में मुख्य धारा इलाकों के बीच एक अलग प्रवृत्ति दिखाई: विकास दर स्थानीयता एक (५२%) मध्य इलाके के माध्यम से (१५३%), और बाद में फिर से कमी हुई स्थानीयता ई (४६%) (निरपेक्ष वृद्धि मान का एक द्विघात प्रतीपगमन: r2adj = ०.७७, F2, 13 = २५.६६, d.f. = 16, p < ०.००१) । यह प्रवृत्ति भी २०१५ में पुष्टि की थी जब सबसे बड़ी वृद्धि दर मध्य इलाके सी में फिर से दर्ज किया गया था । इसके अलावा, निरपेक्ष विकास दर मूल्यों बहुत २०१४ और २०१५ के बीच अलग नहीं किया । दूसरी ओर, जीवित रहने की दर साल के बीच अलग, २०१५ में बहुत अधिक जा रहा है (४८% से ७२%) से २०१४ में (के बारे में 25%) (चित्रा 4B).

दो अलग जोखिम तरीकों का एक प्रभाव भी प्रदूषित उपनदी (स्थानीयता वी) में स्पष्ट रूप से दिखाई दे रहा है । रेतीले तीन महीनों के दौरान यहां उजागर पिंजरों 0% अस्तित्व दिखाया, जबकि कुछ विकास के साथ एक ८३% जीवित रहने की दर 30 दिनों के दौरान यहां खुले पानी जाल पिंजरों जोखिम से दर्ज की गई थी ।

भीतर बिस्तर रेतीले पिंजरों से परिणाम hyporheic वातावरण में प्रासंगिक इलाकों में खुले पानी की तुलना में विभिंन स्थितियों को वर्णन । विकास दर हमेशा खुले पानी की तुलना में hyporheal साइटों में कम था, और जीवित रहने की दर (लगभग ५०% से 0%, चित्रा 4B) बहुत अधिक चर रहा था ।

hyporheic microhabitats का एक अध्ययन के भीतर बिस्तर जाल पिंजरों का उपयोग कर किशोर अस्तित्व पर सब्सट्रेट संरचना का एक महत्वपूर्ण प्रभाव दिखाई दिया । सबसे अच्छी स्थिति ऑक्सीजन से दर्ज किए गए-संतृप्त पथरीले नीचे (एक जीवित रहने की दर १००% के करीब) जबकि सबसे खराब (एक < ४०% जीवित रहने की दर) खराब oxygenated रेत में संकेत दिया गया था जहां जीवित होने में एक बहुत उच्च परिवर्तनशीलता भी पाया गया था । Hyporheic पानी की ऑक्सीजन है, जो प्रयोग के दौरान लगातार मापा गया था, इस प्रवृत्ति (चित्रा 5) बताते हैं ।

Figure 1
चित्र 1. व्यक्तिगत कक्षों के साथ विसंकेत मेष पिंजरे । अधिक जानकारी के लिए अनुपूरक फ़ाइल 1 देखें । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 2
चित्र 2. संकेत रेतीले पिंजरे । अधिक जानकारी के लिए अनुपूरक फ़ाइल 1 देखें। कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 3
चित्र 3. दो सत्रों के दौरान इलाकों बी और ई में खुले पानी मेष पिंजरों द्वारा दर्ज किशोर विकास दर में व्यक्तिगत परिवर्तनशीलता। मतलब और मानक विचलन हर जाल पिंजरे के लिए वर्णित हैं । मान 6 किशोर (या 4-5 किशोर अगर मृत्यु दर > 0%) हर जाल पिंजरे में की माप पर आधारित हैं ।

Figure 4
चित्र 4. मेष और रेतीले पिंजरों के साथ एक क्षेत्र से अधिक संकेत प्रयोग उदाहरण के परिणाम । (क) इस पैनल मेष पिंजरों के साथ एक क्षेत्र से अधिक संकेत प्रयोग से उदाहरण के परिणाम से पता चलता है । Vltava नदी के जलग्रहण के भीतर 6 इलाकों (बी, सी, डी, ई, आर, और वी) की कुल 2 अलग अवसरों पर परीक्षण किया गया (२०१४ और २०१५ में) । जोखिम समय गर्मी के मौसम के दौरान 30 दिन था । इलाकों बी ई का प्रतिनिधित्व करते है (क्रम में) एक लगभग 20 के एक अनुदैर्ध्य प्रोफ़ाइल नदी की मुख्य धारा के किमी खिंचाव । इलाके आर और वी 2 सहायक नदियों की प्रोफाइल का प्रतिनिधित्व करते हैं । राजधानियों दोनों पैनल में एक ही इलाके के निशान (क) और (ख) । सभी इलाकों खुले पानी मेष पिंजरों के साथ परीक्षण किया गया । इसके अलावा, इलाके सी भी अंदर बिस्तर जाल नदी बिस्तर के 3 विभिंन प्रकार में स्थापित पिंजरों का उपयोग कर परीक्षण किया गया था (सीएस = रेत, तटरक्षक = बजरी, सीएसटी = पत्थर) २०१४ में । पिंजरों हर साइट पर 4-7 प्रतिकृतियों में स्थापित किया गया । 6 मीठे पानी मोती कौड़ी 1 + वर्ष पुराने के किशोर मेष पिंजरे प्रति इस्तेमाल किया गया । औसत वृद्धि दर के लिए चिह्नित कर रहे हैं 3 सबसे बड़ी व्यक्तियों (3 मैक्स) से हर परीक्षण जाल पिंजरे (कॉलम, बाएँ अक्ष) और मेष पिंजरे के प्रति औसत जीवित रहने की दर (नीला अंक, दाएँ अक्ष). (ख) इस पैनल के रेतीले पिंजरों के साथ एक क्षेत्र का संकेत प्रयोग से उदाहरण के परिणाम से पता चलता है । Vltava नदी के जलग्रहण के भीतर एक कुल of7 इलाकों (ए, बी, सी, डी, ई, आर, और वी) पर 2 अलग अवसरों पर परीक्षण किया गया (२०१४ और २०१५ में) । जोखिम समय गर्मी के मौसम के दौरान 3 महीने था । साइटों a-E का प्रतिनिधित्व करते है (क्रम में) एक लगभग 30 किमी लंबी नदी की मुख्य धारा के खंड के एक अनुदैर्ध्य प्रोफ़ाइल । साइटें आर और वी 2 सहायक नदियों की प्रोफाइल का प्रतिनिधित्व करते हैं । राजधानियों दोनों इस में और पिछले पैनल में एक ही इलाके के निशान । सभी इलाकों खुले पानी रेतीले पिंजरों के साथ परीक्षण किया गया । इसके अलावा, इलाकों बी, सी, और डी भी २०१४ में gavel नदी बिस्तर सब्सट्रेट (बीजी, तटरक्षक, और डीजी) में स्थापित भीतर बिस्तर रेतीले पिंजरों का उपयोग कर परीक्षण किया गया । पिंजरों हर साइट पर 2-4 प्रतिकृतियों में स्थापित किया गया । सबसे कम १०० मीठे पानी मोती कौड़ी किशोर हर रेतीले पिंजरे में मौजूद थे । हर परीक्षण रेतीले पिंजरे (कॉलम, बाएं अक्ष) और रेतीले पिंजरे (नीले अंक, सही धुरी) प्रति औसत जीवित रहने की दर से 10 सबसे बड़े व्यक्तियों (10 अधिकतम) के लिए औसत वृद्धि दर चिह्नित कर रहे हैं । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

Figure 5
चित्रा 5. ऑक्सीजन संतृप्ति । इस पैनल के जाल पिंजरों जोखिम के 30 दिनों से अधिक ऑक्सीजन संतृप्ति की ंयूनतम मूल्यों के बीच संबंध से पता चलता है और पिंजरे में प्रति जीवित की दर के भीतर बिस्तर जाल २०१४ में अलग बिस्तर microhabitats में उजागर पिंजरों । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

२०१४ २०१५
इलाके रेतीले पिंजरों के 3 महीने के जोखिम मेष पिंजरों के 1 महीने के जोखिम रेतीले पिंजरों के 3 महीने के जोखिम मेष पिंजरों के 1 महीने के जोखिम
ए १३.९ - - -
बी १४.४ १३.४ १३.९ १७.५
सी 15 १३.८ १४.४ १८.३
डी 15 १३.८ १४.३ १८.३
ई १५.५ 14 - १८.७
आर १३.५ १२.८ - -
वी 14 १३.२ - -

तालिका 1. औसत सतह जल तापमान (° c) २०१४ और २०१५ में जोखिम के दौरान इलाकों में ।

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Discussion

एक्सपोज़र समय:

यहां तक कि एक महीने में उजागर जाल पिंजरों एक दिखाई विकास (चित्रा 3) इलाकों के बीच मतभेद को दर्शाती है, तो वे एक इलाके के लक्षण वर्णन के त्वरित और आसान पता लगाने के लिए बहुत उपयोगी होते है दिखा । फिर भी, परिणामों की प्रासंगिकता शर्तों की अल्पकालिक स्थिति पर निर्भर करता है, जो दोलन कर सकते हैं । विशेष रूप से, अल्प वर्षा की घटनाओं में भूमिका निभा सकते हैं । इसके विपरीत, अप्रत्याशित प्रासंगिक प्रदूषण हमेशा दर्ज नहीं किया जा सकता है । इलाके में वी (चित्रा 4a), जल रसायन विज्ञान विश्लेषण मजबूत अमोनियम वृद्धि की एक छोटी लहर13का पता चला । यह शायद तीन महीने उजागर रेतीले पिंजरों में मृत्यु दर के लिए जिंमेदार था, लेकिन 30 दिन उजागर जाल पिंजरों को प्रभावित नहीं किया ।

तापमान में उतार चढ़ाव भी अल्पकालिक जोखिम परिणाम को प्रभावित कर सकते हैं । मेष पिंजरे जोखिम के दौरान एक महीने के औसत तापमान साल (तालिका 1) के बीच अलग है । वृद्धि दर भी भिंन होती है जहां उच्च तापमान वृद्धि दर (Kruskal-वालिस test p < ०.००१) के साथ होता था । दूसरी ओर, तीन महीने के रेतीले पिंजरे जोखिम के दौरान एक ही इलाके में औसत पानी का तापमान दोनों वर्षों में बहुत समान था (तालिका 1) और विकास दर काफी अलग नहीं किया (चित्रा 4B) ।

वर्णित विधियों के लाभ और असफलताओं:

एक खुले पानी जोखिम अपेक्षाकृत प्रदर्शन करने के लिए आसान है, लेकिन आवास के लिए सीमित मूल्य की है संकेत । खुले पानी मेष पिंजरों की विधि अपेक्षाकृत पुराने है16 और बार किया गया है मामूली संशोधनों के साथ इस्तेमाल10,11,12,13,21,22 , 23. फिर भी, इन पिंजरों ऑक्सीजन द्वारा सीमित नहीं हैं, जिनकी कमी hyporheic स्थितियों में कई किशोर मौतों के लिए शायद जिंमेदार है । इस प्रकार, खुले पानी मेष पिंजरों वृद्धि हुई मृत्यु दर और खुले पानी रेतीले पिंजरों (स्थानीयता ई) या भीतर बिस्तर रेतीले पिंजरों में एक १००% मृत्यु दर में गिरावट के साथ इलाकों में भी अच्छा विकास दिखा सकते हैं, २०१४ (चित्रा 4B) में स्थानीयता डी के रूप में । जाहिर है, खुले पानी मेष पिंजरों इलाके में वृद्धि की क्षमता दिखाने के लिए, लेकिन यह यथार्थवादी नहीं हो सकता है क्योंकि यह एक इलाके के भीतर hyporheic microhabitats की वास्तविक उपलब्धता पर निर्भर है । क्योंकि खुले पानी मेष पिंजरों उच्च उत्तरजीविता (चित्रा 4a) की क्षमता है, यहां तक कि एक १००% जीवित रहने की दर13करने के लिए, वे जीर्ण विषाक्तता (या तीव्र विषाक्तता के अपने संकेत के लिए अच्छी तरह से सेवा कर सकते है अगर यह एक निश्चित समय पर उंमीद है) । इसके अलावा, वे कुछ हद तक एक उपयोगी खाद्य स्रोत उपस्थिति परीक्षण किया जा सकता है ।

एक नए और असामांय विधि के रूप में, खुले पानी रेतीले पिंजरों बेहतर hyporheic वास की स्थिति अनुकरण । रेत अनाज के बीच किशोरों की आवाजाही इस उपकरण में संभव है, जो किशोर कवच पर फिल्म विकास को कम करने में मदद करता है । एक hyporheic ऑक्सीजन की कमी रेत अनाज बस्तियां रोगाणुओं की गतिविधि के कारण हो सकता है; यह प्रभाव भी आंशिक रूप से एक नदी के ऊपर नीचे रखा पिंजरों में हो सकता है । फिर भी, एक पिंजरे से कॉलेस्ट्रॉल बहती सामग्री की आवश्यक आवधिक सफाई की वजह से, ठीक तलछटों को हटा रहे है और इस प्रकार की शर्तों प्राकृतिक hyporheic निवास स्थान की तुलना में बदल रहे हैं । इसलिए, विकास दर को खुले पानी रेतीले पिंजरों में स्थानीयता वृद्धि की क्षमता के रूप में भी माना जा सकता है । हालांकि, इस खुले पानी मेष पिंजरों की तुलना में वास्तविक इलाके उपयुक्तता के करीब है । इसलिए, अनुदैर्ध्य विकास दर रेतीले पिंजरों (चित्रा 4B) द्वारा दर्ज की ढाल भी अधिक प्रशंसनीय प्रतीत होता है और एक और अधिक उपयुक्त नदी खिंचाव संकेत मिलता है । इसके अलावा, रेतीले पिंजरों में, किशोरों और यौन परिपक्वता के लिए प्रजनन वयस्क की संभावना9सत्यापित है, तो रेतीले पिंजरों एक सुरक्षित प्रजनन और एक साथ निगरानी विधि के रूप में सेवा कर सकते हैं ।

रेतीले पिंजरों और जाल के भीतर बिस्तर की स्थिति में रखा पिंजरों एक उथले hyporheal में वास्तविक परिस्थितियों के निकटतम हैं । विशेष रूप से एक किशोर आंदोलन, रेतीले पिंजरों की अनुमति देकर, उन दोनों के पैमाने में कई सेंटीमीटर की एक ऊर्ध्वाधर और क्षैतिज ढाल प्रदान करते हैं । इस क्षमता को स्थानांतरित करने के लिए अस्थाई ऑक्सीजन की कमी माइक्रो क्षेत्रों से बचने के लिए बहुत महत्वपूर्ण हो सकता है । इस संभावना के भीतर बिस्तर जाल पिंजरों में अनुपस्थित है । इसलिए, संकेत इकाइयों की एक अपेक्षाकृत उच्च संख्या आवश्यक है, क्योंकि hyporheic स्थितियों बहुत चर रहे है13,24 (चित्रा 5) और एक अनुपयुक्त स्थान के कारण नुकसान आम हैं ।

संक्षेप में, इस शोध में प्रयुक्त होने वाले संकेत विधियां निंनलिखित क्रम में माना किशोर प्राकृतिक परिस्थितियों के साथ मेल खाती हैं:
1. खुले पानी मेष पिंजरों,
2. खुले पानी रेतीले पिंजरों,
3. भीतर बिस्तर जाल पिंजरों,
4. भीतर बिस्तर रेतीले पिंजरों ।

प्रति यूनिट का कार्यभार इसी क्रम में बढ़ जाता है. इसके अलावा, किशोरों के एक सांख्यिकीय परीक्षण के लिए आवश्यक संख्या प्राप्त परिणामों के भीतर बिस्तर जोखिम में भी बढ़ जाती है । ऐसा लगता है कि भीतर बिस्तर रेतीले पिंजरों एक और अधिक महंगी लेकिन सटीक संकेत विधि का प्रतिनिधित्व करते हैं । इस नई पद्धति में भविष्य में और अधिक परीक्षण की जरूरत है और piezometer माप के आधार पर अन्य प्रकार के hyporheic अध्ययनों के साथ तुलना25,26. विशेष रूप से, पिंजरों में और आसपास के hyporheic वातावरण में भौतिक शर्तों को मापने के लिए एक सीधी जांच का उपयोग समानता की डिग्री का अध्ययन करने की जरूरत है ।

एक पिंजरे में मापा व्यक्तियों की संख्या:

मेष पिंजरों की तुलना में, यह संभव रेतीले पिंजरों में विशिष्ट किशोरों के विकास वेतन वृद्धि को मापने के रूप में वहां कोई जानकारी नहीं है जिस पर इनपुट सेट से व्यक्ति के उत्पादन में एक है । यह एक औसत मूल्य के साथ काम करने के लिए आवश्यक है । यदि सभी व्यक्तियों के लिए गिना, यह मूल्य बहुत धीरे बढ़ते नमूनों की एक संख्या के कारण बहुत कम हो सकता है; हालांकि, व्यक्तियों के एक जोड़े बहुत जल्दी (विकास जंपर) विकसित कर सकते हैं । इस तरह की असमान वृद्धि27mussels के लिए ठेठ है । किशोरों के बीच वृद्धि परिवर्तनशीलता बढ़ती जोखिम समय और बड़े मतभेदों के साथ उगता है, विशेष रूप से विकास के अनुकूल मौसम में हो सकता है । इसके अलावा, एक लंबे समय से जोखिम जाल पिंजरों में प्रमुख मृत्यु दर की ओर जाता है (एक समीक्षा देखने के लिए Lavictoire, Moorkens, रैमसे, सिंक्लेयर, और मीठा28), तो हम प्रयोग के अंत में व्यक्तियों की एक काफी कम संख्या के साथ काम कर सकते है की तुलना में इनपुट ' किशोरों सेट । केवल कई सबसे अच्छा बढ़ रही किशोरों को मापने के लिए एक संभव तरीका है ।

मीठे पानी पर्ल कौड़ी9,29, के लिए चेक कार्य योजना के भीतर FWPM प्रजनन के अनुभव के रूप में अच्छी तरह से समुद्र bivalves30,31पर प्रयोगों से परिणाम, पता चलता है कि विकास की कमी किशोर bivalves एक उच्च मृत्यु दर है, और वहां केवल परिपक्वता के लिए उनके जीवन का एक नगण्य मौका है । इसके विपरीत, विकास जंपर एक उच्च जीवित रहने की दर है और वे एक जनसंख्या वसूली के लिए महत्वपूर्ण हैं । पैरामीटर 10 मैक्स (10 सबसे जल्दी बढ़ती व्यक्तियों) खाते में विकास जंपर लेता है और प्रयोग के जानकारीपूर्ण मूल्य में वृद्धि कर सकते हैं, भले ही उच्च मृत्यु दर जगह लेता है (चित्रा 4B, मौसम २०१४) । यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इस विधि द्वारा प्राप्त वृद्धि अनुमान एक झूठी सकारात्मक नहीं हो सकता । यह केवल थोड़ा कम आंका जा सकता है क्योंकि प्रयोग के अंत में सबसे बड़े किशोरों के कई इस मामले में थोड़ा और अधिक हो गया होता । इसके अलावा, कार्यभार कम है अगर केवल 10 व्यक्तियों का मूल्यांकन कर रहे हैं । इसी तरह, तीन अधिक से अधिक बढ़ती व्यक्तियों की एक माप (3 मैक्स) को जाल पिंजरों में उपयुक्त साबित, धीरे बढ़ के प्रभाव को नष्ट करने, गैर परिप्रेक्ष्य व्यक्तियों, जो साइट विकास क्षमता की वास्तविक छवि पूर्वाग्रह सकता है ।

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

मीकल Bílý और Ondřej पी शमौन जीवन विज्ञान के चेक विश्वविद्यालय से अनुदान द्वारा समर्थित थे [आंतरिक अनुदान एजेंसी के संकाय के पर्यावरण विज्ञान, CULS प्राग (४२११० १३१२ ३१७५ (२०१६४२३६))] । कैरेल Douda के लिए सहायता चेक साइंस फाउंडेशन (13-05872S) से आया है । मोती mussels के और वर्तमान घटना पर डेटा मीठे पानी पर्ल mussels चेक गणराज्य, जो की सरकार द्वारा वित्त पोषित है की प्रकृति संरक्षण एजेंसी द्वारा प्रबंधित के लिए चेक कार्रवाई योजना के कार्यांवयन के दौरान एकत्र किए गए थे चेक गणराज्य और पर उपलब्ध है

Materials

Name Company Catalog Number Comments
biological material maintenance and care
Freshwater pearl mussel juveniles any NA from a FWPM breeding programme
plastic boxes any NA
thermobox MERCI 212,070,600,030 There are many possibilities. This is one example only.
field thermobox (ca25 l) any NA cold box (insulated box) commonly used for food transport
river water any NA
Petri dishes any NA
plastic Pasteur pipettes with balloon bulb (droppers) any NA hole diameter 1 mm
hydrogen peroxide any NA
plastic container (ca 50 l) for river water any NA
plastic tea strainer any NA commonly used in kitchen
mesh cages construction
main plastic bodies any NA
plactic covers any NA
special technical sieves 340 µm Silk &Progress UHELON 20 T
special technical sieves 100 µm Silk &Progress UHELON 67 M
rubber hose (diameter 5.5 mm) any NA
steel bolts any NA
steel nuts any NA
spanner any NA
steel spikes any NA
pliers any NA
beakers any NA
plastic dishes (ca. 25x15x3-5cm) any NA
squirt bottle any NA
field protocols any NA
stationery any NA
plastic container any NA
string any NA
hammer any NA
sandy cages construction and use
sieve 1 mm any NA
sieve 2 mm any NA
special technical sieves 340 µm Silk &Progress UHELON 20 T
plastic boxes with tight-fitting lid any NA
hot melt adhesive any NA
plastic box (ca 250 x 150 x 100 cm)
big plastic box (ca 25 l) any NA
flat stone any NA
net any NA
river sand any NA
round containers any NA
magnifying glasses Carson Carson CP 60 There ar many possibilities. This is one example only
cages installation and maintenance
field temperature dataloggers ONSET UA-001-64 http://www.onsetcomp.com/products/data-loggers/ua-001-64
spade any NA
toothbrush any NA
experiment evaluation
trinocular dissecting zoom stereo microscope Bresser optic ICD 10x-160x There are many possibilities. This is one example only.
digital camera/ electronic eyepiece Bresser optic MikroCamLab 5M There are many possibilities. This is one example only.
Calibration gird Am Scope SKU: MR100 There are many possibilities. This is one example only.
external power source with two movable light guides Arsenal K1309010150021 There are many possibilities. This is one example only.
Image software ImageJ software There are many possibilities. This is one example only.
table processor MS excel There are many possibilities. This is one example only.

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पर्यावरण विज्ञान अंक १३९ मीठे पानी मोती कौड़ी Margaritifera Margaritifera जैव संकेत सीटू में विकास दर जीवित रहने की दर युवा mussels hyporheic oligotrophic
युवा मीठे पानी मोती Mussels के लिए धारा पर्यावरण उपयुक्तता का उपयोग करने <em></em> के लिए
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Bílý, M., Němčíková, S., Simon, O. P., Douda, K., Barák, V., Dort, B. Bioindication Testing of Stream Environment Suitability for Young Freshwater Pearl Mussels Using In Situ Exposure Methods. J. Vis. Exp. (139), e57446, doi:10.3791/57446 (2018).

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