Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Developmental Biology
Click here for the English version

Developmental Biology

İnce Film kompozit silikon elastomer hücre kültürü ve cilt uygulamaları için: üretim ve karakterizasyonu

Published: July 3, 2018 doi: 10.3791/57573
Automatic Translation
*1,2, *1,2, 1,3, 1, 1,2, 1
1INM - Leibniz Institute for New Materials, 2Department of Materials Science and Engineering, Saarland University, 3University of Applied Sciences Kaiserslautern
* These authors contributed equally

Summary

Polimer ince film Kompozit yapıların farklı Young'un dönmeler ya da kalınlıkları sahip üretim süreci için bir protokol sunulmuştur. Filmler için Gelişmiş hücre kültür çalışmaları veya deri yapıştırıcı olarak üretilmektedir.

Abstract

Bu protokol için biz ince elastomer bileşik filmleri Gelişmiş hücre kültür uygulamaları için ve cilt yapıştırıcılar gelişimi için imal etmek yöntemleri mevcut. İki farklı poly-(dimethyl siloxanes) (PDMS ve yumuşak deri yapıştırıcı (SSA)), kullanılmıştır için biyolojik etkileri ve yapışkanlı özellikleri derinlik soruşturmada. Bileşik filmleri esnek destek katmanı ve yapışkan bir üst kaplama oluşur. Her iki katmanı Doktor blade uygulama tekniği ile imal edilmiştir. Mevcut araştırmada, katman kalınlığı bir fonksiyonu veya Young katsayısı üst tabaka bir varyasyon olarak kompozit filmleri yapışkanlı davranışını soruşturma. Young katsayısı PDMS in Bankası crosslinker karıştırma oranı değişen tarafından değiştirildi. Buna ek olarak, SSA film kalınlığı yaklaşık 320 µm. taramalı elektron mikroskobu için (SEM) yaklaşık 16 µm çeşitli ve optik mikroskobu kalınlığı ölçümleri için kullanılan. Elastomer filmlerin yapışkanlı Özellikler güçlü film kalınlığı, Young katsayısı polimerler ve yüzey özelliklerine bağlıdır. Bu nedenle, yumuşak ve sert yüzeyler sergileyen cam yüzeyler üzerinde bu filmlerin normal yapışma araştırıldı. Çekme-off stres ve iş ayrılık silikon elastomer karıştırma oranına bağlıdır.

Ayrıca, üzerinde bir destekleyici destek katmanı yerleştirilen yumuşak deri yapıştırıcı kalınlığı cilt uygulamaları için yamalar üretmek için çeşitli. Sitotoksisite, yayılmasını önleme ve hücresel yapışma L929 fare fibroblastlar (karıştırma oranı 10:1) PDMS ve (karıştırma oranı 50: 50) SSA filmleri üzerinde yapılmıştır. Biz burada, ilk kez yan yana karşılaştırma iki polimerler üretilen ince bileşik filmlerin göstermiştir ve biyolojik ve yapışkan özelliklerinin incelenmesi mevcut.

Introduction

Bu protokol için üretim ince elastomer filmlerin detaylı yöntemleri sunulmaktadır. Yaygın olarak kullanılan Doktor blade tekniği ince bileşik film üretimi için kullanılmaktadır. İmalat tekniği polyethylenterephtalate (PET) folyo, büyük ölçekte bu filmlerin sonraki üretim etkinleştirme üzerinde yapıldı. Vurgu bu protokol tekrarlanabilirlik, üretim kompozit filmlerin farklı katmanları ve bileşik yama final biyolojik ve yapışma özelliklerinin belirlenmesi hassas bir değerlendirme olduğunu. Silikon elastomer poly-(dimethylsiloxane) (PDMS) yoğun üretim cilt yapıştırıcılar, havacilik uygulamalar ve ek araştırma alanları1,2,3 de dahil olmak üzere Biyomedikal teknolojisinde kullanılan ,4. Son zamanlarda, yumuşak cilt yapıştırıcılar (SSAs) sözde PDMS, başka bir alt sınıfı olmuştur tanıttı, bağ ve de-bağ nazik cilt için belirli.

Silikon SSAs functionalized vinil elastomerler, benzer polimerler silis5takviye devamsızlık göre farklı vardır. Diğer PDMS, SSA'ın Barcelona'da Young katsayısı geniş bir alanda modülasyonlu cross-linker konsantrasyon veya kuruma süresi6,7,8tarafından adapte edilebilir. Bu değişikliği Young katsayısı silikonlu elastomerler, malzemenin yapışkanlı özellikleri önemli ölçüde etkiler ve ayrıca üstünde yüzey9,10 kültürlü prokaryotik ve ökaryotik hücrelerde derin sonuçları vardır , 11. biyolojik hücresel düzeyde, bu gösterildi, ökaryotik hücreleri sinyal iletim düzeyde bir modülasyon matris esneklik veya kalınlığı yüzey9,10,12 yanıt ,13,14. Bu yüzden, hücre kültür uygulamaları ayarlanabilir mekanik özelliklere sahip polimerlerin geniş bir ilgi var. Önemlisi, özünde düşük yüzey enerji Silikon esaslı elastomerler ökaryotik hücrelerin hücre kültürü için optimal koşullar sağlamaz. Oksijen Plazma tedavidir çekme-off gücünü bir donanım için önde gelen PDMS düşük yüzey enerji geçici olarak artırmak için yaygın olarak kullanılan bir teknik eki, yayılmasını teşvik paralel iken moleküllerin yüzey adsorpsiyon azalma ve Ökaryotik hücreler15,16,17,18yayılması.

Malzeme özelliklerine ek olarak, yüzey topografyası hücresel yapışma ve yapışkanlı etkileşim iki malzeme19,20,21,22arasında büyük ölçüde etkiler. Yüzey pürüzlülüğü iki yüzey arasında iletişim oluşumu üzerinde çeşitli etkileri vardır: azaltma iletişim alanının yüksek elastik enerji etkisi çatlamak yaymayı yapıştırıcı gücü23, değiştirebilirsiniz yanı sıra asperities çevreleyen depolanan 24. İnsan derisi için kendi yapışkan filimler yapışma gelişmekte olan uygulama alanı, Örneğin, yara sosları, ECG elektrotlar fiksasyonu veya diğer taşınabilir elektronik cihazlar25,26,27olduğunu, 28. Öz-yapıştırıcılar ile ilgili olarak yüzey topografyası yapışkanlı performansını ölçmek için normal yapışma ölçümleri8,21' pürüzlülük değişen derecelerde ile cam yüzeylerde kullanılabilir. Burada, iki cam yüzeylerde yapıştırıcı polimer filmler özelliklerini araştırmak için seçilmiştir. İlk, bileşik filmler PDMS destek katman karıştırma oranında PDMS tarafından farklı karıştırma oranı ile kaplı 10-1 ağırlık parçaların ile karakterize. İkinci adımda yapışkanlı bir SSA katman her iki bileşenin miktarda eşit ağırlık ve destekleyici bir PDMS film üstüne film kalınlığı değişen hazırlanmıştır.

Protocol

Dikkat: Lütfen ilgili tüm malzeme güvenlik bilgi formları (MSDS) kullanmadan önce danışın. Bazı bu protokol için kullanılan kimyasal tahriş edici, akut toksik ve/veya kanserojen vardır. Lütfen tüm uygun güvenlik uygulamaları bu kimyasalların işlerken kullanın. Bu mühendislik (kimyasal dolap) ve kişisel kullanımı içerir koruma araçlar (koruyucu gözlük, eldiven, önlük, tam uzunlukta pantolon ve kapalı-toe ayakkabı). Aşağıdaki yordamlar bölümlerini bir hayvan hücre kültürünü kültürünü içerir. Bu nedenle, belirli Biyogüvenlik yönetmelikleri takip edin. Kimyasal ve biyolojik atık özel ulusal ve kurumsal kurallar ve öneriler göre tasfiye edilmesi gerekiyor.

1. silikon elastomerik ince Film Kompozit yapıların hazırlanması

  1. Polimerler hazırlanması
    1. PDMS 1.1 g 10:1 oranında hazırlamak için 1.0 g bileşik a bileşik B. 0.1 g ile karıştırın
    2. Mix ve daha degase hızlı karıştırıcı altında 2350 rpm'de öncesi polimerler 3 dakikadır.
    3. Bileşik A ve bileşik B arasında kitle oranları 45:1 ve 70:1 olarak değiştirin. 1.1.2 içinde açıklanan yöntemi benzer onları hazırlamak.
    4. 50: 50 oranında yumuşak deri yapıştırıcı (SSA) 1 g hazırlayın. Bu nedenle 0.5 g bileşik a ve bileşik b 0.5 g 1.1.2 içinde açıklandığı gibi karıştırın.
  2. Poly-(vinyl alcohol) (PVA) hazırlanması evde beslenen hayvan folyo kaplı
    1. PVA deiyonize su ekleyerek bir % 18 (w/w) PVA çözümde su hazırlamak ve bir gecede bir manyetik karıştırıcı ile karıştırın. Bu çözüm 4 ° C'de depolayın
    2. İnce filmleri 15 µm etkili bir kalınlığı 100 µm boşluğu Blade ve hızı yaklaşık 2.0 mm/s kullanarak doktor blade uygulama makine, sergilenmesi hazır olun.
    3. Filmleri 15dk için 95 ° c fırında yerleştirin.
  3. PDMS 10:1 karıştırma oranı Doktor blade tekniği ile destek tabakası hazırlanması
    1. Bir otomatik olarak kontrollü Doktor blade uygulama makine ince filmlerin hazırlanması için kullanın.
    2. Evde beslenen hayvan folyo ile % 100 isopropanol temiz ve Doktor blade uygulama alanını bir yüzeye yerleştirin.
    3. Doktor blade folyo üzerine yerleştirin ve vidalar konumlandırma ile mikro kalınlığını ayarla. İçin üretim ıslak tabakalarının kalınlıkları 60 µm, 100 µm, 200 µm ve 500 µm uygulanır.
    4. Tek Kişilik Kullanım şırıngayla Doktor blade rezervuar içine adım 1.1 hazırlanan PDMS 10:1 polimer doldurun. Bıçak hareketin hızı yaklaşık 2.0 mm/s ile başlayın.
    5. Evde beslenen hayvan film ile uygulanan 10:1 kat makineden çıkarın ve 1 h arasında % 40 ve % 65 nem sergileyen bir odada bulunan 95 ° C'de bir fırında yerleştirin.
    6. İsopropanol ve kağıt havlu ile doktor bıçak temiz.
    7. Tüm gerekli kalınlıkları için bu yordamı yineleyin.
  4. PDMS üst tabakası içinde farklı karışım oranları Doktor blade tekniği ile hazırlanması
    1. Bir bistüri veya jilet yerleşim izin vermek için temel alınan film uzunluğu iki ve Doktor bıçağına evde beslenen hayvan folyoyu sürgülü ince çizgili kaldırın.
    2. İletişim kuralı 1.3.3 1.3.6 adımları. Film için uygulanan ıslak kalınlığı 160 µm olduğunu.
    3. Başka bir karıştırma oranı PDMS bileşenleri (45:1 ve 70:1) her iki bağımsız filmlerin üretim için bu yordamı yineleyin. Filmler, oda sıcaklığında saklamak (yaklaşık 22 ° C ve 40 ve % 65 arasında bir nem) kare Petri yemeklerinde onları kirlenme ve toz önlemek için.
  5. SSA 50: 50 katman farklı kalınlıkları sergileyerek ince bileşik filmleri hazırlanması
    1. PDMS 10:1 filmleri destek katmanı gibi önce 1.3. adımda açıklandığı şekilde hazırlayın.
    2. 1.4.1 ve bu filmler üretmek için 1.4.2 Protokolü adımları izleyin. SSA 50: 50 karıştırma oranı kullanın ve bir film ıslak kalınlığı 40 µm ile imalatı.
    3. Ek ıslak kalınlıkları için yordamı yineleyin: 120 µm, 300 µm, 500 µm.

2. normal yapışma ölçümleri ile farklı yüzey pürüzlülüğü yüzeylerde kullanarak

  1. Hazırlık ve cam yüzeylerde farklı yüzey pürüzlülük ile karakterizasyonu
    1. Bir cam silindir 2 mm çapında bir 'düz yüzey' kullanın.
    2. Bir cam kesici ile 'kaba substrat' ten bir parça yaklaşık 4 x 4 mm bir buzlu cam slayttan boyut ile üretimi için. Yaklaşık 3 mm çapında dairesel bir alan elde etmek için bir aşındırıcı elmas el takımını kullanın.
    3. Cam alüminyum koni UV tutkal ile ekleyin ve 3 dak için UV aydınlatma odasında aydınlatmak.
    4. Yüzey yüzey alanı yarıçapında bir optik mikroskopla belirlemek. Alan formül A göre hesaplamak = πr2.
    5. Pürüzlülük parametresi Rbir ve Rz belirlemek (göre: DIN EN ISO 4287, ASME B46.1) ile bir ekran kalemi profilometer.
    6. Substrat profilometer örnek sahnede yapıştırmayın ve ucunu getirmek (elmas, standart: 2 µm/60 °) örnek temas.
    7. Pürüzlülük profil hızı 0.3 mm/s ve 1 mm uzunluğu ile kaydedin.
    8. Yüzey topografyası analiz etmek için tam olarak 1 mm2 ile ilişkili yazılım tarafından işletilen bir stylus profilometer yüzölçümü ölçmek.
      Not: Profilometer dış bir bilgisayar tarafından işletilmektedir. Bir deplasman 1 mm x ulaşıldıktan sonra sahibi tarafından 0,001 mm y yönde değiştirdi yön. Kaydedilmiş. RS3 dosya 3D görüntüler oluşturmak için Surfcom harita uzman yazılım alınır.
  2. Normal yapışma ölçüm PDMS SSA üretilen ince filmlerin
    1. Bir tıraş bıçağı filmleri evde beslenen hayvan folyo yaklaşık 4,0 cm2 ve onlara bir cam slayt UV yapıştırıcı ile bir alanı ile küçük parçalara kesmek için kullanın. UV ışık 3 dakikadır aydınlatmak.
    2. Polimer örnek örnek sahibi bağlayın.
    3. Yavaşça etanol ile yüzey ve azot gazı ile Kuru yüzey temiz.
    4. Yük hücresi için alüminyum koni monte cam alt katman ekleyin.
    5. •İdeal tablo (Gonyometre) yüzeyler tam belgili tanımlık substrate polimer film yaklaşan tilt açısını ayarlama ile hizalamak için kullanın. Bunu yapabilmek için el ile temas film substrat getir. Her iki yüzeyler birbirine, kamera görüntüleri tarafından görüntülenmiştir tamamen paralel bir hizalamasını elde edilir kadar tilt açısını değiştirin.
      Not: Yük hücresi •ideal tabloya bağlanır. Bir cam prizma iki kamera ile temas bölgesinin görselleştirme sağlar ve substrat polimer film hizalamasını sağlayan Şekil 4, gösterildiği gibi örnek yer almaktadır.
    6. Polimer film yüzeye gelene kadar 13 ± 5 kPa önceden yüklemesi bir stres substrat (Şekil 4) elde taşımak.
    7. LabVIEW içinde denetim için gerekli ölçüm parametreleri zaman ve yaklaşım/geri çekme hızı tutun yazılı özel programlanmış yazılım paketi başlatın. Tutun zaman ttutun 1 ikinci, yaklaşım ve dekolmanı hız 30 µm/s ve 10 µm/s anılan sıraya göre.
    8. Yapışma ölçümleri üç bağımsız imal edilmiş örnek ve her film yüzeyindeki altı farklı konumlarda gerçekleştirin.
  3. Veri analizi ve anahtar mekanik faktörler hesaplanmasında: çekme-off stres ve iş ayrılması.
    1. Stres hesaplamak Equation 1 bölünmesi ile kaydedilen yüzey alanına göre birSzorlamak.
      Equation 2
    2. Normal stres maksimum değeri olarak anlatılan çekme-off stres, belirler.
      Equation 3
    3. Deplasman Δs de-bağ nerede tamamlanmış olan başlangıç konumunu örnek pozisyon sson çekme dayanımı rejimis0 çıkarma tarafından elde etmek. Çekme dayanımı rejimi başlangıcı s0 tanımlamak = 0.
      Equation 4
    4. Aşağıdaki denklemi göre sistem uyumluluğu C tarafından örnek pozisyon ölçüm değerleri düzeltin:
      Equation 5
    5. S0 ve sson arasında stres-deplasman eğrisi ayrılık çalışmalarını hesaplamak için entegre.
      Equation 6
  4. Matematiksel bilgi işlem yazılım kaynağı kullanarak anahtar mekanik faktörler hesaplanmasında.
    1. Kaydedilen .dat dosyası bir kaynak tablosundaki tek yapışma ölçüm içe aktarın. Kaydedilen zaman, örnek pozisyon ve güç parametreleridir. Bu parametreler A sütunları (zaman), B (örnek pozisyon) ve C (kuvvet) yerleştirin.
    2. Boş değeri belirlemek için polimer film başvurmadan önce yaklaşık 20 ölçüm değerlerini gücü'nün ortalama. Bu ortalama değer FMahsup hesabı adını ve sütun d yapıştırın
    3. Düzeltilmiş arka plan hesapla kuvvet F * göre aşağıdaki denklemi
      Equation 7
      ve aşağıda, E. sütuna gösterildiği gibi bu Denklem Ekle
      Equation 8
    4. Çekme dayanımı rejimi başlangıcını tanımlamak sıfır motor hacmi, yani, s0 = 0. Bu nedenle, s0 belirlemek ve yer değiştirme sütun B'deki değerden çıkarmak ve sütun F: kaydedin
      Equation 9
    5. Ayrıca, örnek konum tarafından makine uyumluluk düzeltin. Bu düzeltme sütununda G. Insert aşağıdaki denklemi içine sütun G gerçekleştirilir
      Equation 10
    6. Bir sonraki sütunda H. stres hesaplamak Bu nedenle, yüzey alanı zorla bölün. Aşağıdaki Denklem Ekle
      Equation 11
      A (2.1 saptanır) mm2 cam yüzeylerde yüzey alanı olduğu yerde.
    7. Stres ve yer değiştirme değerleri ayrılması çalışmalarını hesaplayın. Bu nedenle, x ekseni boyunca deplasman ve y ekseni boyunca stres arsa. S0 bu grafikten sson gerilmesi sıfır olarak dönen deplasman olarak tanımlandığı sson entegre, yani tam dekolmanı gerçekleşti. Grafik tümleştirmek için entegre işlevi seçin. Ben ve J. sütunlara eklemek hesaplanan değerler

3. elektron mikroskobu (SEM) ve optik mikroskobu tarama filmler karakterizasyonu

  1. Optik mikroskobu
    1. Bir tıraş bıçağı ile polimer film (yaklaşık 0.25 cm2) küçük parçalar halinde kesilmiş ve bir cam slayt kenarına ekleyebilirsiniz. Yerde cam slayt dikey olarak dik bir mikroskop altında odaklı ve film kesit kalınlığını ölçmek.
      Not: 20 X objektif kullanın (NA = 0.45, teorik 800 çözünürlükte 1.1 µm, nm) yaklaşık ≤ 20 µm film kalınlığı değerleri ölçmek için. İçin bir film kalınlığı 50 µm kadar 20 µm aralığında 10 X objektif kullanın (NA = 0,30, teorik 800 çözünürlükte 1.6 µm, nm) ve bir film için kalınlık ≥ 50 µm kullanmak 5 X amaç (NA = 0,15, teorik 800 çözünürlükte 3.3 µm, nm).
  2. SEM soruşturma
    1. Evde beslenen hayvan folyo kesim ve yaklaşık 2 cm2 örneği bir cam slayt eklemek ve sıkma mekanizması içinde örnek sahibi ≤ 2 mm sahibinin üst yüzeyinin altında dikey olarak yerleştirin.
    2. Seçin bir ivme gerilim 10 kV, backscattered elektron dedektörü (BSD) ve düşük vakum koşullarında (60 Pa).
    3. Odak, büyütme, parlaklık ve kontrast görüntülerin ayarlayın.
    4. Bir görüntü alma süresi 28 seçin s 1024 x 2048 piksel çözünürlüğe sahip.
    5. Örnek sahibi SEM kaldırmak

4. biyolojik araştırma

  1. Rutin hücre kültür L929 hücreleri
    1. Fare fibroblast hücre kültürünü L929 soruşturma için kullanın. Rosewell Park Memorial Enstitüsü (RPMI) 1640 bazal orta, hücrelerde kültür % 10 fetal Sığır serum ve penisilin und streptomisin 37 ° C'de ile takıma, % 5 CO2 ' T75 hücre kültür şişeler. Hücreleri bir izdiham, yaklaşık % 70 ila % 80, geçiş.
    2. Hücre passaging, orta aspirasyon tarafından kaldırmak ve yıkama ile kalsiyum ve magnezyum ücretsiz fosfat tampon (DPBS- / -) 30 s laminar akış Kabin altında. Daha sonra Accutase, proteolitik bir enzim çözüm 2 mL hücrelerle kuluçkaya ve collagenolytic etkinliği için 5 dakikaya kadar 37 ° c, % 5 CO2.
    3. Dekolmanı faz kontrast mikroskop ile hücre kültür şişesi yüzeyinden hücrelerinin doğrulayın.
    4. 8 mL serum içeren ekleyin şişesi ve transfer hücre süspansiyon 15 mL tepki tüp içine orta.
    5. Hücre süspansiyon 10 µL örnek alıp Trypan mavi 10 µL ile karıştırın.
    6. Aradığınız numara Neubauer odası ile belirlemek ve hücrelerin toplam sayısını hesaplamak.
      Dikkat: Trypan mavi MSDS içinde açıklanan zorunlu prosedürleri aşağıdaki MSDS, bu nedenle danışmanlık, zehirlidir, uygun kişisel güvenlik koruması giyen ve kimyasal bir kabine altında işleme gereklidir. Atık kimyasal atık birikimi için toplamak.
      Not: Trypan mavi pozitif hücrelerinin sağlam olmayan hücresel zarları gösteren mavi renkte görünür.
    7. Sonraki geçiş kültür 5 x 105 hücreleri yeni bir steril hücre kültür şişesi ile yeni orta 10 mL. Deneysel koşullar, kültür 3 x 105 6 iyi plakaları hücrelerde ve 6 x 104 hücreleri polimer örnekleri (iletişim kuralı adım 4.2) içeren 24 iyi plaka her şey için.
  2. Hücre kültürü deneyleri için hazırlık bileşik filmlerin.
    1. Tüketim tek filmleri cımbız cam kapak çapı 12 mm. sergilenmesi kâğıdını yüzeyine Protokolü adım 1.4 ve 1.5'evde beslenen hayvan destekleyici katman bir neşter ve yer ile tutulabilen istenilen boyutlarda örnekleri 2 wells alin 4 de plaka.
    2. Sitotoksisite belirlenmesi ve hücre sayımı için film--dan evde beslenen hayvan folyo kaldırmaz. Dairesel alanları yaklaşık 9,4 cm2kesmek, düzgünce 6 iyi tabağı, filmleri tek kuyu içine sığdırma 1.4 ve 1.5 üretilen ve bir hücre kültür plaka kuyu koyun.
    3. Deiyonize H2O ≥ için polimer örneklerinde bırakın 30 dak.
      Not: Polimer örnekleri tarafından ısıyla sterilize. Bu nedenle, tüm polimer içeren örnekleri hücre kültür yemeklerini kaldırmak ve içinde bir cam Petri kabına koyun. Sterilizasyon için 121 ° c sıcaklıkta 20 dk 2.05 Bar'da bir Otoklav içinde gerçekleştirilir
  3. Polimerler tedavisinde plazma
    1. Eklenen filmleri evde beslenen hayvan folyo veya yuvarlak cam kapak (4.2.1 imal) paket fişi plazma cihazın tepki TMMOB içine yerleştirin.
    2. Kapağı kapatın ve 1.6 x 10-2 mbar basınç ulaşılana kadar tahliye edin.
    3. Plazma tedavisi 3 dakikadır gerçekleştirin.
    4. Reaksiyon odası havalandırın ve 24 iyi ya da daha fazla hücre kültür araştırmalar için 6 iyi yemekler örnekleri yer.
    5. Bir örnek su temas açısı belirlenmesi için bir Gonyometre ile kullanın. Bu nedenle, yazılım paketi kullanılarak polimer yüzeye yakın şırınga taşımak ve bir damla 3 µL su yüzey üzerine yerleştirin. Statik su temas açısı Gonyometre yazılımı ile hesaplayın.
  4. Boyama ve mikroskopi
    1. Hücrelerin içinde adım 4.1.7 ve kültür 37 ° C ve % 5 CO23 d için açıklandığı şekilde hazırlayın.
    2. Faz kontrast resimler üzerinde bozulmamış üç gündür kültürlü hücre yakalama- ve plazma tedavi filmler kısa bir süre önce fiksasyon.
    3. %0,2 ile desteklenmiş PBS hazırlamak Triton-X-100. Yavaş yavaş hisse senedi çözüm 200 µL PBS (PBS-T) 100 mL pipet.
    4. %4 paraformaldehyde/PBS çözeltisi (PFA/PBS-T) hazırlayın.
      Dikkat: Paraformaldehyde bu nedenle MSDS içinde açıklanan zorunlu prosedürleri aşağıdaki MSDS, danışmanlık, zehirlidir ve uygun kişisel güvenlik koruması giyen ve kimyasal bir kabine altında işleme gereklidir.
    5. %5 BSA/PBS-T çözüm hazırlamak.
    6. Orta lamina akışı Kabin altında aspirasyon çıkarın. PBS orta artıkları kaldırmak için kuyu ekleyin.
    7. Plaka için kimyasal bir kabine aktarmak ve PBS oda sıcaklığında 25 dakika PFA/PBS çözüm 400 µL ile değiştirin.
    8. İngiltere'de yılın/PBS çözüm tek kuyulardan PBS ile dikkatli bir şekilde yıkama kaldırmak dört kez. Her yıkama adım arasında 3 dk. bekleyin ve kimyasal atık bertaraf için çözümler toplamak. Plaka doğrudan kullanabilir veya 4 ° C'de depolayın
    9. %5 Sığır serum albumin (BSA) eklemek / PBS-T kuyuları için ve 60 dk az belirsiz bağlayıcı siteleri engellemek için RT için kuluçkaya.
    10. Çözüm Aspire edin ve bunun için Alexa 488 (1:160 seyreltme) Birleşik bir phalloidin yerine / PBS-T çözüm takviye ile % 0,2 Triton-X-100.
      Dikkat: Phalloidin-488 bu nedenle MSDS içinde açıklanan zorunlu prosedürleri aşağıdaki MSDS, danışmanlık, zehirlidir ve uygun kişisel güvenlik koruması giyen ve kimyasal bir kabine altında işleme gereklidir.
    11. Alüminyum folyo ile plaka kapak ve RT, 3 h için kuluçkaya veya bir gece 4 ° C'de
    12. Çözüm Aspire edin ve üç kez PBS ile yıkayın. Her yıkama adım arasında 3 dk. bekleyin. Kimyasal atık bertaraf için çözümler toplamak.
    13. Höchst boya 33342 1 µL çözeltisi hazırlamak (stok çözüm 1 mg/mL). 1: 1000 seyreltme için Höchst pipet 1 µL 3334-1 mL PBS-t boya ve iyice karıştırın. Höchst boya 33342 çözüm 300 µL wells için ekleyin ve karanlıkta RT, 10 min için kuluçkaya.
      Dikkat: Höchst boya 33342 bir DNA intercalating reaktif olduğunu ve bu nedenle potansiyel olarak mutajenik, bu nedenle danışmanlık zorunlu prosedürleri aşağıdaki MSDS, açıklanan MSDS ve uygun kişisel güvenlik koruması giyen ve altında işleme bir kimyasal dolap gereklidir.
    14. Çözüm Aspire edin ve örnekleri dört kez PBS ile yıkayın. Her yıkama adım arasında 3 dakika bekleyin. Kimyasal atık bertarafı için çözüm toplamak.
    15. Yerleştirme, dikkatle kültür yüzeyden filmi çýkarýn ve mikroskop cam slayt üzerinde koyun. 20-40 µL su çözünür gömme Orta video eklemek ve hafif basınç kullanarak üst ilgili yeni bir dairesel cam kapak formu ekleyin.
    16. Görüntüleme floresan mikroskop ile gerçekleştirin. Aydınlatma için gerekli filtreleri: Alexa 488 vardır bir uyarma maksimum 496 nm ve maksimum emisyon oluşur 519 nm. Bu nedenle, emisyon rengi yeşildir. Höchst boya 33342 trihydrochlorid trihidrat DNA'sını complexed sahip bir uyarma 355 nm ve maksimum maksimum DNA karmaşık emisyon 465 oluşur nm.
  5. Sitotoksisite belirlenmesi ve hücre sayısı tayini
    1. 6 iyi tabakalar 4.3 adımda hazırlanan ve hücreleri 4.1.7 adımda hazırlanan yetiştirilen hücrelerle deneme gerçekleştirin. 37 ° C ve % 5 CO23 gündür hücreler kültür. Pozitif kontrol için hiçbir polimer filmler içeren bir hücre kültür tedavi polistren zemine yetiştirilmiştir hücreler kullanın. Arka plan belirlenmesi (olumsuz durumu), orta hücreleri olmadan bir kuyudan elde edilir.
      Not: Orta da hücre kültür tedavi polistren yüzeyinde kültürlü de içeren hücrelerden alınabilir.
    2. Deneysel örnek sayısına göre 15 mL tüpler etiketleyin.
    3. 40 µL % 0,9 Triton X-100 içeren PBS çözüm olumlu denetimine ekleyin ve kuvvetle 1000 µL bahşiş ile karıştırın. Yaklaşık 3 dakika bekleyin.
    4. Yüzeye bağlı hücreleri çıkarmadan, orta 4.5.3 içinde hazırlanan örnekleri de dahil olmak üzere tüm örneklerinden Aspire edin ve orta 15 mL tüpler için transfer. DPBS- / - 3 mL tek kuyu ekleyin ve tabakalar laminar akış 4.5.9 içinde açıklandığı gibi kabine Aradığınız numara belirlenmesi için altında saklayın.
    5. De 200 x g için 3 dakika santrifüj kapasitesi ve süpernatant karaciğer aktivite tayini için 1 mL kaldırın. Hücreleri içeren ve orta dolap laminar akış altında kalan 15 mL tüpler saklayın.
    6. Tahlil için bir siyah 96 iyi pilakalar ve düz dipli kullanılır. CytoTox-bir reaktif 50 µL 50 µL örnek orta ve 30 için de karışımı ekleyin s.
    7. Alüminyum folyo ile plaka kapak ve 10 dk RT. az saklamak
    8. Her şey durmak eriyik 25 µL ekleyin ve floresan yoğunluğu bir floresan plaka okuyucu ile kayıt. 10 plaka shake s ve floresan sinyali ile bir uyarma dalga boyu 520 nm ve emisyon dalga boyu 560 nm. Hava kabarcıkları kaçının.
    9. Hücre sayı aspiratı DPBS- / - protokol kültür plaka kuyulardan tespiti için 4.5.4 adım ve protokol adım numarası 4.5.5 toplanan supernatants içeren 15 mL tepki tüpler için çözümler ekleyin.
    10. 15 mL tepki tüp vasıl 200 x g 3 dk santrifüj kapasitesi ve süpernatant Aspire edin. Tripsin/EDTA 0.5 mL ekleyin ve 37 ° C'de 10 dakika için kuluçkaya
    11. Tripsin/EDTA 2 mL plaka wells için ekleyin ve yaklaşık 10 dakika 37 ° C'de hücreler polimer filmlerden ayırmak için kuluçkaya.
    12. Hücre süspansiyon 15 mL tepki tüp için adım sayısını 4.6.10 aktarılır. Ayrıca, tabakaların şiddetle orta içeren serum ile yıkayın.
    13. 200 x g 3 dk de örnekler santrifüj kapasitesi, süpernatant Aspire edin ve tüp ortamına içeren serum ekleyin.
    14. 4.1.5 ve 4.1.6 adımlarda açıklandığı hücresel numarasını belirleyin.

Representative Results

İlk denemelerinde PDMS filmleri değişik kalınlık ve sabit 10:1 oranı karıştırma ile PET filimler (Şekil 1) imal edilmiştir. Destek katman kalınlığı önemli ölçüde etkileyebilir çünkü sertliği ve özellikler tüm bileşik filmlerin, tek filmleri 13 ± 2 µm ve 296 ± 13 µm arasında ilk deneyler işleme (Şekil 1) üretilmiştir. İyi bilinen, polimer filmler Kavurma işlemi büzülme sırasında oluşur. En ince filmler için biz %3.1 ıslak ve tedavi koşulları arasındaki fark % 78 ± gözlenen. En kalın filmler için büzülme %40.9 ± % 2.6 olmuştur (Şekil 1) algıladı.

Bu protokol için sunulan uygulamalarda filmleri--dan evde beslenen hayvan folyo el ile kaldırılması gerekir. Biz özellikle ince film forseps ile başa zordur ve bu işlem sırasında genellikle yok edilir tanıdı. Bu nedenle, biz bir ince poli destekleyici bir katman olarak kaplama-(vinil alkol) etkisini araştırdık. PVA sahip bir yüksek sertlik ve downstream uygulamalarında kendi su çözünürlük nedeniyle kolayca kaldırılabilir. Uygulamalı PVA kaplama yaklaşık 17 µm kalınlığında sahiptir ve bu nedenle üzerinde bu katmanı kaplı PDMS filmler biraz daha ince filmler PVA kaplama (veri gösterilmez) olmadan karşılaştırılır. Özellikle işleme özelliklerini üzerinde odaklanarak, biz sonucuna, yalnızca en ince film evde beslenen hayvan folyo kaldırılması için destekleyici bir PVA film gerektirir.

Yaklaşık 40 µm etkili film kalınlığı tüm diğer deneyler için seçildi. Bileşik film üretimi için PDMS karıştırma oranı 10: 1'den çeşitli 45:1 ve 70:1 ve Doktor blade tekniği (Şekil 2A) ile daha önce polimerli PDMS film üstüne uygulanır. 10:1 oranı dışında farklı filmler açıkça uygun hassas optik mikroskobu tarafından ayırt edilebilir. Mikroskopik analiz için filmler neşterle kes ve bir cam slayt kenarına ekli. Üst tabaka daha yüksek karışım oranları görsel olarak daha parlak destek katmanı (Şekil 2B) 10:1 oranı için karşılaştırıldığında mikroskobik görüntüleri ortaya çıktı. Buna ek olarak, elektron mikroskobu tarama örnekleri yaklaşık 860 X (Şekil 2C) bir büyütmede görüntü için kullanıldı. Aksine 10:1 oranı daha yüksek karışım oranları üretilen iki PDMS film arasında parlaklık açıkça gözlemlenebilir bir fark tanındı. Kesme yordamı işaretleri, SEM resimler (Şekil 2B) görünür bırakır. Bu sonuçlara dayanarak, bileşik filmleri genel ortalama kalınlığı 112 µm ± 5.0 µm (Şekil 2B) yapıldı.

Başka deneylerde bu filmlerin yapışma özellikleri iki farklı cam yüzeylerde (Şekil 3) kullanarak normal kuvvet yapışma ölçüleri ile tespit edilmiştir. 'Pürüzsüz yüzey' bir aritmetik ortalama pürüzlülük R ilebir 0,013 ± 0.0002 µm, bir kaba tepe vadi Rz 0,12 ± 0,004 µm (Şekil 3A), yüzey dokusu sahiptir. Alt katman 2 (GS2, kaba belirlenmiş) 0.338 ± 0.021 (Rbir) µm ve 2.055 ± 0.017 µm (Rz) pürüzlülük değerleri sergilenen (Şekil 3B). Ortalama ile 'yumuşak' yüzey yüzey alanı 'kaba' substrat 6,07 mm2 bir yüzey alanı için 3,2 mm2 süre oldu 2.1.4 elde RADIUS hesapladığı.

Bu iki yüzeylerde ile farklı filmler yapışkanlı davranışını belirledi. İki parametre filmleri yapışkanlı özelliklerini tanımlamak için seçilir: çekme-off stres σmax ve ayrılık WEylülçalışmalarını. Bağlama ve örnek pozisyon de-yapıştırma tüm süreci sırasında s ve normal kuvvet F kaydedilir. Sonuçları bir stres-deplasman eğrisini (Şekil 4) temsil edilir.

Deneysel sonuçlar doğru yorumlanması için belgili tanımlık substrate polimer film yüzeyine doğru hizalamak için önem taşıyor. Ayrıca, ölçüm cihazı makine uyumluluk yerinden düzeltmek için dikkate alınması gerekir. Ölçüm sırasında değil yalnızca örnek, aynı zamanda test cihazın diğer bölgelerinde uygulanan kuvvet davranır. Bu nedenle, her iki yüzeylerde bir cam slayt 13 ± 5 kPa basınç bir stres ile karşı basıldığında. Uyum ölçmek için yük eğrisi dikkate, Yani, kuvvet-deplasman eğri parçası iki yüzeyler nerede tam önyükleme kuvvet ulaşıldığında örnek konuma kadar temas nereden alınır. Karşılıklı eğrinin eğimini makine uygunluk C. eşittir C için hesaplanan değer 0,12 µm/mN olur.

İlk denemede filmleri PDMS farklı karışım oranları ile analiz edildi (Şekil 5). Bileşik filmler için kalınlık ve PDMS 10:1 üretilen destek katmanın karıştırma oranı tutuldu sabit. Üst tabaka kalınlığı da 65 µm değeri ile sabit tutuldu. 109 ± 27,6 kPa en yüksek çekme-off stres düz cam alt katman PDMS 10:1 Film (5A rakam) ile tespit edilmiştir. Karıştırma oranı artış 76.7 ± 17 kPa 45:1 karıştırma oranı için çekme-off stres, bir düşüş ve 41.4 ± 17 kPa 70:1 oranı için yol açar. 22 ± kaba cam yüzey bir çekme-off stres ile 2.2 kPa PDMS 10:1 film tespit edilmiştir. Genel olarak, ayırma çalışmaları arasında her iki cam yüzeylerde, Örneğinkarşılaştırılabilir., 1.4 ± 0,6 J/m2 en ince film elde pürüzsüz yüzey ve 1,84 ± 0.7 J/m2 en ince film ile elde edilen kaba substrat ( ile Şekil 5B).

Ardından, üretim uygulamaları olmuştur hücre kültürü ve cilt uygulamaları için ince filmlerin (Şekil 6) araştırdı. SSA 50: 50 bileşik filmleri üst tabaka üretimi için kullanılmaktadır. 1:10 oranı yaklaşık 40 µm kalınlığında ile karıştırma PDMS destek katmanı olarak kullanılmıştır. Karıştırma oranı sabit tutarken Şekil 5' te tasvir önceki deneyler aksine, üst tabaka kalınlığı, çeşitli (Şekil 6A). SSA, karıştırma oranı 50: 505,8üreticileri öneri kullanarak yapışkanlı özelliklerinde ek yüzeyler için yüksek yüzey pürüzlülüğü, özellikle insan derisi, içeren uygulamalar nedeniyle seçildi. İnsan epidermis yüksek yüzey pürüzlülüğü sahiptir. Yaş bağlı olarak ve anatomik bölge 48 µm ve 71 µm arasında ortalama yüzey pürüzlülüğü Derinlik (RZ) oldu29bildirdi. Güvenli ve yumuşak bir cilt yapışma önemlidir özelliği ventilasyon ya da çok az hassas ciltler için cilt yaşlı yeniden oluşturuluyor. 40 µm, 120 µm, 300 µm için 500 µm arasında değişen farklı ıslak kalınlıklarda uygulanmıştır (Şekil 6A). Islak kalınlığına bağlı olarak, bileşik filmlerin toplam kalınlığı 51 µm ve 344 µm (Şekil 6B) arasında değişir. Sonra kür, kompozit bağlı bir gönüllünün el (Şekil 6C) arkasına doğru. Farklı filmlerin kalınlıkları açıkça cilt (Şekil 6C) pürüzlülüğü adaptasyon özellikleri farklılıklar gösteriyor. İnce filmler (50 µm ve toplam 100 µm kalınlık) kalın film (220 µm ve toplam 340 µm kalınlık) göre cilt kırışıklıkları için adaptasyon yüksek orandaki görüntüleyin. Bu sonuçları, geniş bir yelpazede kalınlıkları bileşik filmleri tam olarak uygulanan Doktor blade tekniği ile üretilebilir gösterir.

Yapışma deneyler Bu bileşik Filmler (Şekil 7) ile yapıldı. SSA en iyi film kalınlığına bağlı olarak, artan film kalınlığı ile çekme-off stres bir azalma gözlemledik. 133 ± 36.6 kPa en yüksek çekme-off kuvvet pürüzsüz yüzey (Şekil 7A) ölçüldü. En düşük çekme-kapalı-stres 18 ± 4 kPa kalın film sert yüzey ile elde edildi. İlginçtir ki her iki yüzeylerde arasında bir karşılaştırma en ince filmler (Şekil 7A) üzerinde 2,7 kat fark ortaya koymaktadır. Artan film kalınlığı ile özellikle kalın filmleri üzerinde dikkat çekici bir fark yoktur observable (Şekil 7A) yapıldı. Pürüzsüz yüzey ile 1.8 ± 0,8 J/m2 toplam kalınlığı yaklaşık 100 µm, sergilenmesi filmde algılandığı ayrılması çalışmalarını izledi tarafından bir film kalınlığı bağımlı düşüş (220 µm kalınlık: 1,6 ± 0,6 J/m2 ve 330 µm: 1.3 ± 0,4 J/m2 (Şekil 7B)). Kaba yüzeyler ile ölçülen ayırma çalışmaları genel olarak biraz kıyasla daha düşük pürüzsüz yüzey (100 µm kalınlık: 1.63 ± 0,6 J/m2; 220 µm kalınlık: 1,1 ± 0,6 J/m2 ve 330 µm: 1.0 ± 0.2 J/m2 (Şekil 7B )).

Ayrıca, dekolmanı mekanizması (Şekil 7C) ölçümleri sırasında kaydedildi. Parmak çatlaklar gibi görünümünü observable kalın filmlerde (Şekil 7C) iken küçük kavitasyon en ince filmde gözlendi.

Ölçümler üretim filmlerinden sonra bir ay içinde gerçekleştirilmiş. Ancak, istikrar ve mekanik özellikleri elastik filmlerin korunması sıcaklık ve nem gibi çevresel faktörler tarafından etkilenebilir. 1.4.3 Protokolü adımda anlatıldığı gibi filmleri Oda sıcaklığı ve nem oranı % 40-65 depolanmıştır. Önlemek için kirlenme ve toz, filmler onlardan plastik Petri yemeklerinde karanlıkta saklanan. Uzun vadeli istikrar, yapışma ölçümleri ve kalınlık tayini SSA araştırmak için 50: 50 filmler yaklaşık dört ay sonra üretim gerçekleştirilmiş. Film kalınlığı, çekme-off stres ve iş ayrılma büyük etkisi sonra saklama algıladı. Örneğin, çekme-off stres bileşik 120 µm SSA ıslak kalınlığı ve 100 µm PDMS ıslak kalınlığı ile üretilen SSA filmlerin 46.6 ± 6 kPa ve ayrılık 1627 ± 592 mJ/m2 çalışmalarını imalat sonra oldu. Yaklaşık dört ay sonra üretim, 48,8 ± 5,4 kPa bir çekme-off stres ve 1666 ± 723 mJ/m2 ayrılması çalışmalarını tespit edilmiştir. Buna ek olarak, kısa bir süre sonra üretim, bu filmlerin toplam kalınlığı 103.3 ± 13,9 µm ve sonra depolama 98,1 ± 9.1 µm.

Daha fazla PDMS 10:1 deneyleri ve toplam kalınlığı yaklaşık 105 µm ile SSA 50: 50 bileşik filmleri kültür yüzeylerde (Şekil 8) hücre olarak kullanılmıştır. Protokol adım numarası 1 üretilen kompozit filmleri kolayca--dan evde beslenen hayvan folyo kaldırıldı ve gerekli boyutları ve geometrik formlar kesti. Ayrıca, ne zaman filmler için bir katı kalarak yüzey için örnek cam, farklı Young'un dönmeler görüntüleme birden çok film yan yana eklenebilir ve hücre kültür plaka tek bir kuyunun yerleştirilmiş. Filmler doğrudan doğruya ezelî bir ek coverslip polistren yüzeye bağlı. Ayrıca, filmler farklı yüzeyler ve tüpler veya yüzük, daha ileri çalışmalar değil geleneksel hücre kültür malzemeleri ile ulaşılabilir etkinleştirme gibi geometrik yapısı adapte olabilir. Şekil 8 ' de tasvir gerçekleştirilen deneylerde bileşik filmleri evde beslenen hayvan folyo üzerinde doğrudan hücre kültür kalıplara yerleştirilmiş veya film--dan evde beslenen hayvan folyo kaldırıldı ve cam kapak fişleri üzerinde yerleştirilir. Deneysel koşullar için bazı polimerler ücretsiz yüzey enerjilerini artırmak için hava plazma ile tedavi edilmiştir. Genel olarak, PDMS plazma tedavi öncesi yaklaşık 115 ° su temas açısı sahip ve yüksek hidrofilik olur (su temas açısı < 30°) arıtması8. Plazma tedavi yüzey biyouyumlu işler ve ökaryotik hücre eki kolaylaştırır. Tedavi süresi ve yoğunluğu bağlı olarak polimer yüzey, pürüzlülük daha yüksek bir düzeyde görüntüleme değişir ve aynı zamanda çatlamak görünebilir. Tedaviden hemen sonra bir hidrofobik kurtarma işlemi görülmektedir. İletişim kuralı adım 4.3.5 altında açıklandığı gibi bir Gonyometre statik su kişi açıları belirlemek için kullanıldı. Bu nedenle, GKD2O için 1 h hava plazma tedaviden sonra verildiğinde polimerler daha sonra analiz edildi. Plazma tedavi su temas açısı önemli ölçüde azaltılmış (PDMS bozulmamış: 117.0 ± 2.2°; SSA bozulmamış: 127.9 ± 5.6°; PDMS plazma: 18.0 ± 7.2°; SSA plazma: 29,3 ± 11,5 °).

Sulu bir montaj katıştırma örnek için orta uygulanmıştır. Herhangi bir zaman noktada tekrar kaldırılacak örnekleri gerekiyorsa, numuneler Petri kabına gecede içeren bir suda yerleştirilebilir. Sonunda, kapak paket fişi ek analiz için kaldırılabilir.

Ek davranışı ve morfoloji PDMS ve SSA 50: 50 bileşik filmlerde 3 gündür tohumlari L929 hücrelerinin belirledi faz kontrast mikroskobu ve Birleşik floresan phalloidin-488 ve Höchst boya 33342 (Şekil 8) ile boyama sonra. Resim alma faz kontrast mikroskobu ile özellikle plazma ile tedavi değil polimerler için önerilir. Bu polimer yüzeyler için zayıf hücresel yapışma nedeniyle tek hücreler veya toplamları kolayca, daha sonraki analiz yöntemleri doğru yorumlanması karmaşık hale getiren ayrılır.

Zavallı ek hücreleri üzerinde bozulmamış polimerler seribaşı görüntülenen ve davranış (8A1 anlamaya ve C1) konfluent monolayer yayılan hücresel tedavi plazma yüzeylerde (8B1 anlamaya ve D1) kültürlü hücreler için gözlenmiştir . Hücresel toplamları ve dekolmanı yüzeyinden daha bozulmamış yüzeylerde öldüğü ilan edildi. Fiksasyon %4 paraformaldehyde ile hücresel toplamları çevre ve sızıntı lamellipodia çıkıntılar bozulmamış PDMS ve SSA 50: 50 bileşik filmlerde (Şekil 8A2 geçiş kaç hücreler olduğu ortaya çıktı sonra aktin filamentleri görselleştirme ve C2, oklar). Hiçbir büyük niteliksel farklılıklar her iki polimer malzemeler karşılaştırma sırasında gözlenen. Bir yan not olarak, görünür bir hücresel toplamları daha az miktarda vardı için PDMS karşılaştırıldığında SSA 50: 50 tarihinde. Ayrıca, SSA 50: 50 yüzeylerde bağlı toplamları (Şekil 8 c 1) daha fazla basık yer aldı. Beklendiği gibi geliştirilmiş hava plazma ile tedavi hücresel eki ve her iki yüzeylerde önemli ölçüde yayılan, dikkat çekici lamellipodia çıkıntılar ve konfluent monolayer (8B rakam2 ve 8D 2) oluşumu için lider.

Karaciğer serbest kültür 3 gün sonra bir göstergesi olarak sitotoksik efekt (Þekil 9A) belirlemek için kullanıldı. Genel olarak, karaciğer düzeyleri % 5 daha az ile her iki polimer malzemeler üzerinde kültürlü hücreler için karşılaştırılabilir olduğunu sitotoksisite (bozulmamış PDMS: 2.8 ± %2.0; bozulmamış SSA 50: 50: 4.5 ± % 3.6; plazma tedavi PDMS: %1,5 3.4 ±; plazma tedavi SSA 50: 50: 3.4 ± % 1.6). Bu sonuçlar her iki elastomerler soruşturma üzerinde odaklanarak daha önce yayımlanmış çalışma sunulan veri için karşılaştırılabilir. 8 daha fazla karaciğer tahlil sonuçlarını doğrulamak için bir trypan mavi dışlama testi gerçekleştirildi. Ayrıca, tüm hücre nüfus nükleer silahların yayılmasına karşı etkinlik (Şekil 9B) farklılıkları görüntülemek için tespit edilmiştir. Genel olarak % 5 daha az Trypan mavi pozitif hücrelerinin sayıldı (bozulmamış PDMS: 2.4 ± %0,3; bozulmamış SSA 50: 50: 3,8 ± %2,5; plazma tedavi PDMS: 0,74 ± % 1.3 plazma tedavi SSA 50: 50: 0.95 ± % 1.6).

Figure 1
Şekil 1: hazırlık poly-(vinyl alcohol) (PVA) PDMS filmleri evde beslenen hayvan folyo kaplı: Evde beslenen hayvan folyo üzerinde değişen kalınlı¤ında PDMS filmleri üretim sürecini tekrarlanabilirlik ve performans(a)işleme belirlemek için uygulandı. Kalınlıkları PDMS filmlerin optik mikroskobu ile 95 ° C'de (B) kür sonra analiz edildi. N = 3 bağımsız olarak üretilen filmler analiz edildi. Her film, üç farklı yerlerde seçilmiş olup, kesme ve her örnek 3 pozisyonlar analiz (k = 27). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2: Kompozit PDMS farklı karışım oranları hazırlanan filmlerin hazırlanması: Bileşik Filmler (bileşen A) tabanının farklı karışım oranları PDMS crosslinker (bileşen B) sergilenmesi Doktor blade tekniği ile imal edilmiştir. PDMS oranları 10:1 (bileşen A:B) oluşan üst tabaka, daha önce tedavi PDMS 10:1 film(a)üstünde tepe-in 45:1 ve 70:1 uygulandı. Sonraki 95 ° C'de kür sonra kalınlık bileşik filmlerin optik mikroskobu (B) ve Tarama elektron mikroskobu (C) tarafından analiz edildi. N = 3 bağımsız deneyler gerçekleştirilen ve optik mikroskobu (D) ile analiz edildi. Her bağımsız imal edilmiş film oluşturmak, üç farklı konumlara seçildi, kesim ve her örnekleri 3 pozisyonlar analiz (k = 27). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: topografik yüzey pürüzlülüğü adezyon ölçümleri için kullanılan iki yüzeylerde belirlenmesi: Farklı yüzey pürüzlülüğü sahip iki cam yüzeylerde karakterize. Yüzeyinin üç boyutlu profilometric analiz 'yumuşak' substrat GS (A1) ve 'zor' substrat GR (B1) gerçekleştirildi. İlgili tek satır eğrileri A2 ve B2 tasvir edilir). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: normal yapışma ölçüm prensibi: Özel yapı Kur polimer örnekleri yapışma özelliklerini tanımlamak için kullanıldı. Ölçüm Kur (A) tasvir ve ayrıntıları (B) gösterilir. Ölçüm analiz için stres stres zaman eğrisi (C) tespit edilmiştir. Ayrılık iş sson ve s0 (D) arasında stres-deplasman eğrisi bir entegrasyon tarafından tespit edilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: bileşik filmleri yapışma özellikleri PDMS farklı karışım oranları ile belirlenmesi: Çekme-off(a)stres ve iş karıştırma oranları 10:1, 45:1 ve 70:1 PDMS üretilen kompozit Filmler (B) ayrılığı ölçüldü. Analiz için 'yumuşak' bir cam bir Ra sergilenmesi substrat (GS) = 0,013 µm ve bir 'kaba' cam alt katman (GR) ile Rbir µm kullanılmıştır 0.338 =. N = 3 bağımsız olarak üretilen filmler analiz edildi. Her film, iki adet seçilmiş ve her örnek üç farklı pozisyonlar analiz (k = 18). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6: SSA bileşik filmleri ile değişik kalınlık hazırlanması: SSA 50: 50(a)daha önce tedavi PDMS 10:1 film üstüne uygulandı. Bu tabaka 40 500 µm arasında değişen farklı ıslak kalınlıklarda uygulandı ve kür sonra kalınlık optik mikroskobu (B) ile araştırıldı. El ile toplam kalınlığı yaklaşık 100 µm (film #2) filmleri de (C) cilt pürüzlülük için standartlarla uyumlu görüntülenen bir gönüllü arkasına eki filmlerin. Tek katman kalınlığı ve bileşik filmlerin toplam kalınlığı Şekil 6Bgösterilir. Analiz n = 3 bağımsız olarak imal edilmiş örnekleri optik mikroskobu ile ölçülen. Her film, üç farklı yerlerde seçilmiş olup, kesme ve her örnek 3 pozisyonlar analiz (k = 27). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. Ölçek çubuğu 6C olarak tasvir yaklaşık 1 cm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 7
Şekil 7: yumuşak deri yapıştırıcı bileşik filmlerin yapışma özelliklerinin belirlenmesi: SSA ince bileşik filmlerin bir üst tabaka ve PDMS 10: destek katmanı olarak 1 olarak üretildi. İş ayrılık (B) iki farklı cam yüzeylerde ile ölçülen bileşik filmlerin analiz ve üst tabaka kalınlığı 50 ve 330 µm. çekme-off stres arasında(a)çeşitli (bir Rsergileyen bir 'düz' cam alt katman (GS) bir = 0,013 µm ve bir 'kaba' cam alt katman (GR) ile Rbir 0.338 µm =). Örnek resimler dekolmanı mekanizmaları Ciçinde görüntülenir. Veri Analizi n = 3 bağımsız olarak imal edilmiş deneyler analiz. Her film, iki adet seçilmiş ve her örnek üç farklı pozisyonlar analiz (k = 18). Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. 7C barlarda ölçek tasvir 0.5 mm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 8
Şekil 8: ince filmler kültürlü L929 fibroblastlar hücresel Morfoloji: L929 fare fibroblastlar PDMS (A1, A2, B1, B2) SSA (C1, C2, D1, D2) üretilen ince filmlerde 3 gündür kültürlü. Hydrophilicity hava plazma tedavisi yapıldı yüzeylerin artırmak için (B1, B2, D1, D2) yapılır. D1 ve D2 ölçek barlarda tasvir 100 µm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 9
Şekil 9: sitotoksisite ve hücresel proliferasyonu belirlenmesi: Sitotoksik efekt ve hücresel proliferasyonu belirlenmesi için PDMS 10:1 ve SSA 50: 50 bileşik filmleri üç gündür L929 hücreleri seribaşı. Laktat dehidrogenaz (karaciğer) sürümü bir karaciğer etkinliği tahlil tarafından tespit edildi ve % 5 daha az ortaya sitotoksisite(a). Toplam cep numarasını yetiştirme dönemi nden sonra Neubauer odası (B) tek hücrelerle sayma Kılavuzu sonra değerlendirildi. N = 3 bağımsız olarak gerçekleştirilen deneyler analiz edildi. Hata çubukları standart sapmayı temsil eder. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Kompozit yapıların tasarım Young katsayısı veya örnekleri kalınlığı gibi malzeme özelliklerine basit ayarlama sağlar. Young katsayısı PDMS, iki bileşenler arasındaki karıştırma oranı değiştirme veya karışımları farklı silikon elastomer30,31kullanarak üretim geniş bir alanda etkin bir şekilde değiştirilebilir. Açıklanan yöntemleri geçerli araştırmada kullanılan PDMS'ın sınırlı değildir, ama özellikle yapışkanlı performans güçlü kullanılan belirli türüne göre değişir. Bu iletişim kuralı içinde önemli bir adım bileşik filimler (Şekil 1) üretim sürecidir. Bu film kalınlığı önemli ölçüde farklı yüzeylerde (Şekil 5 ve Şekil 6) deri de dahil olmak üzere, tarih filmleri yapışma davranışını etkiler gösterilmiştir. Film kalınlığı yanı sıra zaman ve sıcaklık kür işlemi sırasında malzeme özellikleri32etkiler. Bu nedenle, parametre olarak polimer katman kalınlığı dikkatli bir şekilde uyarlanmıştır ve doğrulanmadı gerekir.

İnce filmlerin yapışkanlı özelliklerinin çözümlemenin Ra kadar farklı yüzey pürüzlülük ile iki cam yüzeylerde kullanarak normal kuvvet yapışma ölçüleri ile 0.338 µm (Şekil 3) =. Genel olarak, pürüzlülük yapışma yüzeylerinin, elastik malzeme33,34özellikle önemli ölçüde etkiler. Cam pürüzlülüğü farklı sertliklerin boyutlarda, bu nedenle daha yüksek pürüzlülük değerleri21sergilenmesi yüzeylerde imalatı izin zımpara taşlama tarafından kolayca değiştirilebilir. Buna ek olarak, diğer malzemeler, örneğin epoksi reçine yüzeylerde15,35üretim için kullanılabilir. Bu sunulan Protokolü'nün bir önemli değişiklik strateji olabilir. Örneğin, Eğer farklı yüzey serbest enerji sergilenmesi yüzeylerde gerekli veya belirli Topografyaları gereklidir. Burada, çekme-off stres ve iş ayrılık PDMS ve SSA üretilen ince filmlerin özel olarak oluşturulmuş bir kurulum (makroskopik yapışma ölçüm cihazı (MAD, Şekil 4)) ile analiz edildi. 36 optik uyum substrat ve uç ölçüm sonuçlarının analizi için kritik bir adımdır. Bu nedenle, tilt açı düzeltilmesi mümkün olduğunca kesin Gonyometre ile yapılması gerekiyor. Bu el ile yatay bir kişi elde kadar film yüzeyine temas substrat getirerek yeterli hassasiyetle elde edilebilir.

Geçerli protokol tutun zaman bir saniye (Şekil 5 ve Şekil 7) sabit tutuldu. Özellikle yapışkanlı elastik bir filmi bir kaba substrat yüzey ile performansını incelenmesi için uzantı tutun zaman ek bilgi sağlar. Örneğin, bildirilen8tutun zaman artan stres çekme-off bir artış olmuştur. Geçerli protokol, diğer yöntemlerle gerçekleştirilen ölçümler yanı sıra örneğin kabuğu testleri, yapışma performansı37daha kapsamlı bir soruşturma izin yerine olabilir.

Bileşik Filmler (Şekil 7) farklı film yumuşak deri yapıştırıcı kalınlıkları belirlendi sergilenmesi yapışkanlı özellikleri. Bu film kalınlığı çekme-off stres artış müşteri adayına, bir düşüş gösteren hapsi, yani, substrat çapı ve film kalınlığı, artar38,39 arasındaki oran olarak yayımlanmış veri doğrultusunda bizim sonuçları. . Bu sonuçlar ve Şekil 7' de tasvir veri dayalı, biz yaklaşık 100 µm (yaklaşık 60 µm PDMS film için yaklaşık 40 µm kalınlığında ile uygulanan SSA tabakası kalınlığı) toplam kalınlığı ile bileşik filmleri olumlu yapışma p sergi sonucuna zellikleri pürüzlü yüzeylerde.

Daha sonra biyolojik karakterizasyonu ile ilgili deneyler bozulmamış bileşik filmler gerçekleştirilmiş ve plazma bileşik Filmler (Şekil 8) tedavi. Silikon elastomer tedavisinde plazma yüzeyler ve hücresel eki ve hücresel40,41yayılmasını teşvik hidrofilik özelliklerini artırmak için sık sık uygulanan, çok yönlü bir tekniktir. Silikonlar kendi düşük toksisite ve yüksek biostability için bilinen ama artık monomerleri veya fizyolojik süreçler, ayrıca sitotoksisite42,43için önde gelen etkileyen katalizörler içerebilir. Yapılan deneyler biz gözlemledim daha az içinde karaciğer kullanan bir göstergesi ve bir Trypan mavi dışlama tahlil %5 sitotoksisite. Sunulan protokolü, tüm hücresel nüfus ilişkisi kesildi yüzeye yayılması Analizi (Şekil 9B) analiz formu hücresel toplamları dahil olmak üzere. Bir değişiklik Protokolü'nün daha farklı sonuçlar üretebilir. Her örnek için müstakil hücresel toplamları içeren süpernatant olabilir bir ayrı tepki tüp transfer ve enzimatik polimer yüzeyden kaldırıldı hücreleri ile birlikte değil. Bu yüzeye bağlı hücre tam değerlendirme izin ve sonunda polimerler etkisi hücre adezyon işlemiyle ilgili daha ayrıntılı bir kararlılık ortaya koyuyor. Burada sunulan immunocytochemical yöntemlere ek olarak, hücrelerin protein ifade detaylı bir kantitatif değerlendirilmesi sağlayan immunoblot yöntemlerini ile soruşturma için hasat.

Özet olarak, üretim koşulları uygulamalar Gelişmiş hücre kültür araştırma için ince elastomerik bileşik filmlerin üretimi için kurduk. Ayrıca, bu ince filmler yüksek adaptasyon pürüzlülük, cilt yapıştırıcıların sofistike tasarımı etkinleştirme cilde sahip.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Martin Danner örnekleri ve hücre kültür yordamlar kurulması hazırlarken onun yardımını kabul edilmektedir. Yazarlar Biesterfeld Spezialchemie GmbH (Hamburg, Almanya), özellikle Robert Radsziwill sürekli destek ve sohbet için teşekkür etmek istiyorum. Bu sonuçlar için önde gelen araştırma Avrupa Araştırma Konseyi Avrupa Birliği'nin yedinci çerçeve programı (FP/2007-2013) ERC Hibe Sözleşmesi n. 340929 altında fon aldı.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
2-Propanol, 97% Stockmeier Chemie 1000452610000 Isopropanol
Abrasive diamnod hand pad Bohle MO 5007522 Grit: 220
Accutase Capricorn Scientific ACC-1B
Albumin Fraktion V Roth 0163.2 BSA
Alexa Fluor 488 Phalloidin ThermoFischer Scientific A12379 highly toxic
Aquamount Polysciences 18606-20 water soluble mounting medium
CytoTox-ONE Homogeneous Membrane Integrity Assay Promega G7890
DPBS, without Ca2+, Mg2+ ThermoFischer Scientific 14190094
Fetal bovine serum gold GE Health Care Life Science A15-151 FBS
Goniometer OCA35 Dataphysics for the determination of the static water contact angle
Hoechst Dye 33342 Sigma-Aldrich B1155-100MG bisBenzimide H 33342 trihydrochloride, highly toxic
Microscope Axiovert 25 Zeiss Microscope used for cell culture documentation
Microscope Eclipse LV100ND Nikon Microscope used for film thickness determination
Paraformaldehyde, aqueous solution 16% Electron Microscopy Sciences RT 15710 electron microscopy grade
penicillin und streptomycin solution Sigma-Aldrich P4333-100ML
Phenom XL Scanning Electron Microscope (SEM) Phenom
Poly-(vinyl alcohol) 4-88, MW 31000 Sigma-Aldrich 81381-1KG Mowiol 4-88
Poly-dimethyl siloxanes, Sylgard 184 Dow Corning (400)000108351397 PDMS
RPMI 1640 basal medium ThermoFischer Scientific 21875034
soft skin adhesive (SSA) Dow Corning (400)000108251792 MG 7-9800 Soft Skin Adhesive (SSA)
speed mixer DAC 600.2 VAC-P Hauschild
stylus profilomter Zeiss Model: SURFCOM 1500SD3
Tecan Infinite M200 pro Tecan fluorescence plate reader
Triton X 100 Calbiochem 648466
Trypan Blue solution Sigma-Aldrich T8154-100ML highly toxic
Trypsin/EDTA solution PAN-Biotech P10-023500 0.05% Trypsin, 0.02% EDTA in PBS
UV glue Bohle BO MV76002 medium viscosity

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lloyd, A. W., Faragher, R. G. A., Denyer, S. P. Ocular biomaterials and implants. Biomaterials. 22, 769-785 (2001).
  2. Zhang, M., Wu, J., Wang, L., Xiao, K., Wen, W. A simple method for fabricating multi-layer PDMS structures for 3D microfluidic chips. Lab Chip. 10, 1199-1203 (2010).
  3. Kwak, M. K., Jeong, H. E., Suh, K. Y. Rational design and enhanced biocompatibility of a dry adhesive medical skin patch. Adv. Mater. 23, 3949-3953 (2011).
  4. Gun Park, D., Chul Shin, S., Won Kang, S., Tae Kim, Y. Development of flexible self adhesive patch for professional heat stress monitoring service. Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. 4, 3789-3792 (2005).
  5. Thomas, X. Silicone Adhesives in Healthcare Applications. Dow corning Lit. , (2013).
  6. Fuard, D., Tzvetkova-Chevolleau, T., Decossas, S., Tracqui, P., Schiavone, P. Optimization of poly-di-methyl-siloxane (PDMS) substrates for studying cellular adhesion and motility. Microelectron. Eng. 85, 1289-1293 (2008).
  7. Wang, Z., Volinsky, A. A., Gallant, N. D. Crosslinking effect on polydimethylsiloxane elastic modulus measured by custom-built compression instrument. J. Appl. Polym. Sci. 131, 41050 (2014).
  8. Fischer, S. C. L., Kruttwig, K., Bandmann, V., Hensel, R., Arzt, E. Adhesion and cellular compatibility of silicone-based skin adhesives. Macromol. Mater. Eng. , 1-11 (2017).
  9. Martina, D., Creton, C., Damman, P., Jeusette, M., Lindner, A. Adhesion of soft viscoelastic adhesives on periodic rough surfaces. Soft Matter. 8, 5350-5357 (2012).
  10. Brown, X. Q., Ookawa, K., Wong, J. Y. Evaluation of polydimethylsiloxane scaffolds with physiologically-relevant elastic moduli: Interplay of substrate mechanics and surface chemistry effects on vascular smooth muscle cell response. Biomaterials. 26, 3123-3129 (2005).
  11. Song, F., Ren, D. Stiffness of cross-linked poly(dimethylsiloxane) affects bacterial adhesion and antibiotic susceptibility of attached cells. Langmuir. 30, 10354-10362 (2014).
  12. Buxboim, A., Rajagopal, K., Brown, A. E. X., Discher, D. E. How deeply cells feel: methods for thin gels. J. Phys. Condens. Matter. 22, 194116 (2010).
  13. Discher, D. E., Janmey, P., Wang, Y. -L. Tissue cells feel and respond to the stiffness of their substrate. Science. 310, 1139-1143 (2005).
  14. Engler, A. J., Sen, S., Sweeney, H. L., Discher, D. E. Matrix Elasticity Directs Stem Cell Lineage Specification. Cell. 126, 677-689 (2006).
  15. Roth, J., et al. Surface functionalization of silicone rubber for permanent adhesion improvement. Langmuir. 24, 12603-12611 (2008).
  16. Thiébaud, P., Lauer, L., Knoll, W., Offenhäusser, A. PDMS device for patterned application of microfluids to neuronal cells arranged by microcontact printing. Biosens. Bioelectron. 17, 87-93 (2002).
  17. Tourovskaia, A., Figueroa-Masot, X., Folch, A. Differentiation-on-a-chip: a microfluidic platform for long-term cell culture studies. Lab Chip. 5, 14-19 (2005).
  18. Peterson, S. L., McDonald, A., Gourley, P. L., Sasaki, D. Y. Poly(dimethylsiloxane) thin films as biocompatible coatings for microfluidic devices: Cell culture and flow studies with glial cells. J. Biomed. Mater. Res. - Part A. 72, 10-18 (2005).
  19. Wan, Y., et al. Nanotextured substrates with immobilized aptamers for cancer cell isolation and cytology. Cancer. 118, 1145-1154 (2012).
  20. Ross, A. M., Jiang, Z., Bastmeyer, M., Lahann, J. Physical aspects of cell culture substrates: Topography, roughness, and elasticity. Small. 8, 336-355 (2012).
  21. Barreau, V., et al. Fibrillar Elastomeric Micropatterns Create Tunable Adhesion Even to Rough Surfaces. Adv. Funct. Mater. 26, 4687-4694 (2016).
  22. Briggs, G. A. D., Briscoe, B. J. The effect of surface topography on the adhesion of elastic solids. J. Phys. D. Appl. Phys. 10, 2453-2466 (1977).
  23. Dapp, W. B., Lücke, A., Persson, B. N. J., Müser, M. H. Self-affine elastic contacts: Percolation and leakage. Phys. Rev. Lett. 108, 1-4 (2012).
  24. Putignano, C., Carbone, G., Dini, D. Mechanics of rough contacts in elastic and viscoelastic thin layers. Int. J. Solids Struct. 69, 507-517 (2015).
  25. Laulicht, B., Langer, R., Karp, J. M. Quick-release medical tape. Proc. Natl. Acad. Sci. 109, 18803-18808 (2012).
  26. Kim, T., Park, J., Sohn, J., Cho, D., Jeon, S. Bioinspired, Highly Stretchable, and Conductive Dry Adhesives Based on 1D-2D Hybrid Carbon Nanocomposites for All-in-One ECG Electrodes. ACS Nano. 10, 4770-4778 (2016).
  27. Adamietz, I. A., et al. Effect of self-adhesive, silicone-coated polyamide net dressing on irradiated human skin. Radiat. Oncol. Investig. 2, 277-282 (1994).
  28. White, R. Evidence for atraumatic soft silicone wound dressing use. Wounds UK. 1, 104-109 (2005).
  29. Quan, M. B., Edwards, C., Marks, R. Non-invasive in vivo techniques to differentiate photodamage and ageing in human skin. Acta Derm. Venereol. 77, 416-419 (1997).
  30. Brown, X. Q., Ookawa, K., Wong, J. Y. Evaluation of polydimethylsiloxane scaffolds with physiologically-relevant elastic moduli: Interplay of substrate mechanics and surface chemistry effects on vascular smooth muscle cell response. Biomaterials. 26, 3123-3129 (2005).
  31. Palchesko, R. N., Zhang, L., Sun, Y., Feinberg, A. W. Development of Polydimethylsiloxane Substrates with Tunable Elastic Modulus to Study Cell Mechanobiology in Muscle and Nerve. PLoS One. 7, e51499 (2012).
  32. Johnston, I. D., McCluskey, D. K., Tan, C. K. L., Tracey, M. C. Mechanical characterization of bulk Sylgard 184 for microfluidics and microengineering. J. Micromechanics Microengineering. 24, 35017 (2014).
  33. Persson, B. N. J., Gorb, S. The effect of surface roughness on the adhesion of elastic plates with application to biological systems. J. Chem. Phys. 119, 11437 (2003).
  34. Peressadko, A. G., Hosoda, N., Persson, B. N. J. Influence of surface roughness on adhesion between elastic bodies. Phys. Rev. Lett. 95, 1-4 (2005).
  35. Purtov, J., et al. Measuring of the hardly measurable: adhesion properties of anti-adhesive surfaces. Appl Phys A. 111, 183-189 (2013).
  36. Kroner, E., Blau, J., Arzt, E. Note: An adhesion measurement setup for bioinspired fibrillar surfaces using flat probes. Rev. Sci. Instrum. 83, 16101 (2012).
  37. Sun, S., Li, M., Liu, A. A review on mechanical properties of pressure sensitive adhesives. Int. J. Adhes. Adhes. 41, 98-106 (2013).
  38. Webber, R. E., Shull, K. R., Roos, A., Creton, C. Effects of geometric confinement on the adhesive debonding of soft elastic solids. Phys. Rev. E. 68, 21805 (2003).
  39. Creton, C., Lakrout, H. Micromechanics of flat-probe adhesion tests of soft viscoelastic polymer films. J. Polym. Sci. Part B Polym. Phys. 38, 965-979 (2000).
  40. Tan, S. H., Nguyen, N. -T., Chua, Y. C., Kang, T. G. Oxygen plasma treatment for reducing hydrophobicity of a sealed polydimethylsiloxane microchannel. Biomicrofluidics. 4, 32204 (2010).
  41. Kim, B., Peterson, E. T. K., Papautsky, I. Long-term stability of plasma oxidized PDMS surfaces. Conf. Proc. IEEE Eng. Med. Biol. Soc. 7, 5013-5016 (2004).
  42. Briganti, E., et al. Silicone based polyurethane materials: A promising biocompatible elastomeric formulation for cardiovascular applications. J. Mater. Sci. Mater. Med. 17, 259-266 (2006).
  43. Regehr, K. J., et al. Biological implications of polydimethylsiloxane-based microfluidic cell culture. Lab Chip. 9, 2132 (2009).

Tags

Gelişim biyolojisi sayı: 137 poly(di-methylsiloxane) ince film kompozit elastomerler cilt yapıştırıcılar adezyon hücre kültürü
İnce Film kompozit silikon elastomer hücre kültürü ve cilt uygulamaları için: üretim ve karakterizasyonu
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Boyadzhieva, S., Fischer, S. C. L.,… More

Boyadzhieva, S., Fischer, S. C. L., Lösch, S., Rutz, A., Arzt, E., Kruttwig, K. Thin Film Composite Silicon Elastomers for Cell Culture and Skin Applications: Manufacturing and Characterization. J. Vis. Exp. (137), e57573, doi:10.3791/57573 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter