Summary
Her beskriver vi en protokoll som tillater histologiske og molekylære analyse av hud prøver etter Candida albicans intradermal injeksjon. Denne protokollen opprettholder den strukturelle integriteten til huden og gir lokaliseringen av vev-bosatt eller nylig rekruttert immunceller samt patogen fordelingen.
Abstract
Huden er en ekstremt utvidet organ i kroppen, og på grunn av denne stor overflate, det utsettes kontinuerlig for mikroorganismer. Skade huden kan lett føre til infeksjoner i huden som kan i sin tur føre formidling av patogener i blodet. Forstå hvordan immunsystemet bekjemper infeksjoner på et veldig tidlig stadium og hvordan verten kan eliminere patogener er et viktig skritt å sette grunnlaget for fremtidige terapeutisk intervensjon. Her beskriver vi en modell av Candida albicans infeksjon som kan visualisere prosessene som oppstår tidlig under en infeksjon, inkludert patogen gått epithelial barrieren, samt immunrespons brakt frem av C. albicans invasjon. Vi brukte denne infeksjon modellen for å utføre histologiske analyser som viser immunceller som infiltrere huden samt tilstedeværelse og lokalisering av patogen. Prøver samlet etter infeksjon kan behandles for RNA utvinning.
Introduction
Kroppen er dekket med et ekstremt høyt antall mikroorganismer. Hudoverflaten er tilholdssted for nesten en million bakterier per kvadratcentimeter1. Dette nummeret, men reflekterer ikke full rekke mikroorganismer som colonizes huden. I tillegg til bakterier, er menneskekroppen kolonisert av mange fungal arter, inkludert C. albicans, som er i stand til å overleve både på slimhinnene og huden nivå2.
I de senere årene har økt andelen av mennesker diagnostisert med soppinfeksjoner enormt. Dette er hovedsakelig på grunn av høyere antall immunsupprimerte personer, dvs, HIV-positive pasienter og pasienter som har gått gjennom kjemoterapi eller suppressive medikamenter etter transplantasjon3. I en overvåking studie utført i USA, viste Wisplinghoff et al. at 9.5% av nosokomiale blodbanen infeksjoner ble forårsaket av Candida arter4. På grunn av økte forekomsten fungal infeksjoner, og spesielt på grunn av opphøyet prosentandelen av Candida arter finnes i blodbanen infeksjoner, er forstå hvordan denne patogen unnslipper kontroll av immunsystemet ekstremt viktig.
C. albicans er en dekket av hvit sopp som vokser i morfologiske former som gjær, blastospores, pseudohyphae og hyfer avhengig av miljøforhold5. I sin hyphal form, C. albicans viser høyeste invasiveness kapasiteten og evnen til å trenge epitel6.
C. albicans infeksjoner har studert ved bruk av flere eksperimentelle tilnærminger. Den vanligste av infeksjon er intravenøs injeksjon av C. albicans gjær7. Men tar denne modellen ikke hensyn alle prosesser som skjer før soppen klarer å spre inn i blodbanen. En annen modell utnytter muligheten for C. albicans å invadere epitel. Denne metoden, også kjent som sand papir modell8, ble utviklet av Gaspari et al. i 19989, og består av å bruke sand papir for å Rue huden, dermed eliminere i stratum corneum før C. albicans. Denne prosedyren kan soppen å trenge epitel, dermed muliggjør analyse av invasiv evnene til denne patogen. Til slutt, andre modeller av infeksjoner for gastrointestinal10 og luftveier11 har vært brukt i forskjellige studier.
Dannelsen av en såret (som sand papir modell) forårsaker aktivering av flere veier, inkludert immun celle rekruttering og aktivisering, for å fremme den helbredende prosess12. Dette kan endre eller maske immunrespons spesielt skapte mot patogen, dermed fører til confounding resultater.
Her beskriver vi en metode for hudinfeksjon som unngår første såret dannelse og induksjon av en basal inflammatorisk miljø. For å opprettholde intakte epithelial strukturen, injisere vi direkte C. albicans i sin hyphal form i de dype derma. Selv om en enkelt injeksjon kan framprovosere mild betennelse, beløpet av inflammation er begrenset og begrenset sammenlignet med dannelsen av et åpent sår i sand papir modellen. Tilnærmingen som vi beskriver her kan studiet av immunforsvaret til soppinfeksjon og spredning og unngå overdreven og eksisterende inflammatorisk miljøendringer forårsaket av mekanisk skade.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle prosedyrer ble godkjent under institusjonelle Animal Care og bruk Committee (IACUC) og drives under oppsyn av Institutt for dyr ressurser på barn 's Hospital (ARCH) ved Boston Children's Hospital eller ble godkjent av italienske Helsedepartementet og utført under institusjonelle dyr omsorg komiteen på Universitetet i Milano-Bicocca.
1. C. albicans forberedelse
- Kultur C. albicans, belastning CAF3-113, i rør som inneholder rik medium (gjær ekstrakt pepton druesukker (YEPD), 1% (w/v) gjærekstrakt, 2% (w/v) av Bacto pepton, 2% (w/v) glukose) med uridine (50 mg/L) på 25 ° C. Under disse forholdene vokser C. albicans som en gjær.
Merk: Andre C. albicans stammer kan brukes som den kliniske isolere C. albicans belastning SC531413. Siden vi har nylig vist at ulcerøs prosessen er indusert av aktivering av det medfødte immunsystem14, teoretisk hver C. albicans stamme som opprettholder både cellevegg komponenter og struktur, samt evne å stamme hyphal anslag, kan brukes. - Overvåke kulturen ved å telle mobilnettet konsentrasjonen med en celle counter analysator.
- Høste kultur når en konsentrasjon av ca 8 x 106 celler/mL. Alternativt, bruk et spektrofotometer som måler OD600.
Merk: Vanligvis verdien OD600 = 1 tilsvarer en gjær konsentrasjon av 3 x 107 celler/mL, men titrering anbefales. - Resuspend kulturen i YEPD-uridine-mediet, bruker HEPES (50 mM, pH 7.5) som buffer agent og ruge kulturen på 37 ° C å skape hyfer. Sjekk hyphal formasjon under et mikroskop på 100 X forstørrelse. Hyphal formasjon er synlig 5t etter dyrking på 37 ° C; imidlertid bruke cellene 16 h etter inkubasjon på 37 ° C når ønsket hyphal når nesten 95% av den totale kulturen.
- For å berike forberedelse i hyphal konsentrasjon, sentrifuger dele kultur 3300 x g for 5 min. forkaste nedbryting og resuspend pellet i sterilt PBS i en konsentrasjon av 1 x 108 hyfer/mL.
2. dypt Dermal injeksjon
- 24 timer før infeksjon prosedyren, bedøve mus med en intraperitoneal injeksjon av ketamin (80-100 mg/kg) og xylazine (10 mg/kg), og deretter barbere flanken av mus ved hjelp av en elektrisk clipper.
Merk: Etter noen prosedyre som involverer anestesi, plasser musene under en varme lampe til de har effektivt gjenopprettet. - Hvile musene 24 h å unngå noen betennelse på grunn av barbering prosessen.
- 24 timer etter barbering prosedyren, bedøve mus med en intraperitoneal injeksjon av ketamin (80-100 mg/kg) og xylazine (10 mg/kg).
- Sjekk det pote refleks slik at mus er dypt anesthetized. Vurdere det pote refleks av fast knipe labben. Hvis anestesi er oppnådd, dyret føler ikke smerte og flytter ikke.
- Injisere C. albicans hyfer i den dype derma 0,3 mL insulinsprøyte med en 30 G x 8 p i et siste volum på 50 µL/injeksjon, tilsvarer 5 x 106 hyfer/injeksjon.
- Dra huden av barbert flanken stram med to fingre for å injisere volumet direkte i den dype derma. Sett inn nålen med vinkel av 10-15° med skråkant nålen grossist.
- Med denne vinkelen injiseres patogen med en dybde på ca 300-500 µm. For å sikre injeksjon er godt utført, absorbert sjekk at injisert volumet danner en kul som er et par minutter etter injeksjon.
Merk: Brak dannet etter injeksjon vil være ca 1 cm2. Dette er området som fjernes på angitt tidspunktet for molekylær eller histologiske analyse. - For tiden punkter på mindre enn 24 timer (anbefales) merke området av infeksjon med markør penn, siden bump med injeksjon vedvarer i noen minutter, etter som det er absorbert. For tiden poeng 24 timer eller mer er dette trinnet ikke nødvendig, fordi en ulcer eller en cyste blir synlig.
3. Prøv innsamling og forberedelse til histologiske flekker
- Euthanize musene i henhold til institusjonelle prosedyrer.
- Bruker kirurgisk tang, trekke huden på grensen av injisert nettstedet, tidligere merket med markør pennen. Bruker kirurgisk saks, avgiftsdirektoratet infiserte området ved å kutte huden etter merket linjen.
Merk: Pass på å skille huden fra peritoneum med spissen runden saks. - Fordype huden i en engangs basis mold fylt med optimal kutte temperatur (OCT) sammensatt, med den interne siden av huden opp.. Fryse prøven i flytende nitrogen til sammensatt blir hvite. Ikke la flytende nitrogen dekke prøven før det er helt frosset som dette vil skade prøven.
Merk: Advarsel! Bruk ansiktsskjerm for beskyttelse mot flytende nitrogen ved trinnet 3.3. - Hvis eksemplene ikke brukes umiddelbart for lysbildet forberedelse, raskt lagre dem på-80 ° C.
Merk: Utvalg kan lagres ved-80 ° C på ubestemt tid.
4. forberedelse av lysbilder
- Halvert prøven å forberede skiver histology fra midten av prøven.
- Skjær 5 µm tykke skiver med en kryostaten.
Merk: For hud prøver, temperaturen på kryostaten skal ikke være høyere enn-25 ° C. En høyere temperatur vil føre til delvis smelting av H-oktober og derfor prøvene ville ikke opprettholdes i riktig posisjon under kutte prosedyren. - Bruk positivt ladede objektglass samle skiver.
- Hvis samlet skiver ikke brukes etter utarbeidelse, lagre dem på 20 ° C. På dette punktet, kan skiver lagres på 20 ° C på ubestemt tid.
5. hematoxylin & Eosin flekker
- Stain lysbildene ved neddykkelse i Gill's hematoxylin for 4 min. vask lysbildene i rennende vann fra springen i 5 min.
- Stain lysbildene ved nedsenkning i Eosin Y løsning i 1 vask lysbildene i rennende vann fra springen i 5 min. skyll lysbildene med destillert vann før du fortsetter protokollen.
- Tørke av nedsenking i serielt økende konsentrasjoner av etanol løsninger (50%, 70%, 80%, 95%, 100%). Fordype lysbilder for 15 s i hver etanol løsning.
- Fjern lysbildene i minst 2 minutter av nedsenking i en histologiske clearing agent.
- Montere lysbildene med montering medium og dekke slips.
- Hente bilder lysbildene med et mikroskop slide skanner på en 40 X forstørrelse.
6. periodiske Acid-Schiff (PAS) flekker
- Fastsette lysbildene med ≥99.5% aceton ved romtemperatur i 1 vask lysbildene i rennende vann fra springen i 1 min.
- Stain lysbildene ved nedsenkning i periodiske acid løsning (1 g/dL) for 5 min. vask lysbildene i 3 endringer destillert vann.
- Stain lysbildene ved neddykkelse i Schiff's reagens i 15 min. vask lysbildene i rennende vann fra springen i 5 min.
- Stain lysbildene ved neddykkelse i Gill's hematoxylin for 5 min. vaske lysbildene i rennende vann fra springen for 30 s.
- Tørke lysbildene ved nedsenkning 3 endringer av 100% etanol. Fordype lysbilder for 15 s hver gang.
- Fjern lysbildene i minst 2 minutter av nedsenking i en histologiske clearing agent.
- Montere lysbildene med montering medium og dekke slips.
- Hente bilder lysbildene med et mikroskop slide skanner.
7. prøve innsamling og forberedelse til RNA utvinning
- Euthanize musene i henhold til institusjonelle prosedyrer. Fjerne hud prøvene som i trinn 3.2.
- Fordype eksemplene i en 2 mL snapin-cap rør med 1 mL av reagens for syre guanidinium thiocyanate-fenol-kloroform utvinning.
Merk: Protokollen kan pauses her og prøvene kan lagres på-80 ° C. - Kutt prøven i biter på ca 0.2 cm2 bruke kirurgisk tang.
Merk: Advarsel! De fleste av reagensene RNA isolasjon er giftige og mutagene. Trinn 7.3 og 7.4 må gjøres under avtrekksvifte. - Knuse prøven med en perle møllen med en hastighet på 20 svingninger/s i 20 min. Alternativt, en mekanisk potter kan brukes.
- Sjekk effektiv homogenisering av prøvene etter tilstedeværelsen av intakt biter av huden. Gjenta dette trinnet hvis prøvene ikke er helt homogenisert.
- Sentrifuge prøvene 16.000 x g i 1 holde supernatants for RNA utvinning og kast pellet. Dette trinnet utføres for å fjerne hår og rusk som kan blokkere kolonnene utvinning.
- Fortsett med RNA utvinning bruk RNA rensing kolonner14.
- Bruk et spektrofotometer for å vurdere RNA rensing og konsentrasjon. Hvis RNA ekstrakter ikke brukes umiddelbart for cDNA forberedelse, lagre eksemplene på-80 ° C.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Igjennom innsprøytingen av patogen direkte i den dype derma forblir strukturelle morfologi av vev intakt (figur 1A).
Vedlikehold av huden konstruksjonssikkerhet tillater påvisning av immunceller og deres lokalisering på stedet av infeksjonen. Høyere forstørrelsen vist i figur 1B avslører at byllen består hovedsakelig av polymorfonukleære leukocytter (PMCs) som inneholder spredning av patogen av sin confinement til området av smitte. Rekruttering av PMCs, for eksempel nøytrofile, gjør det mulig for byllen, dermed unngå spredning av soppen i vev14. Høyere forstørrelse (figur 1 c, D) viser hvordan de omkringliggende områdene i svulst er også beriket i PMCs.
Ved å bruke den strukturelle integriteten, kan lokalisering av patogen under infeksjon bestemmes. Utnytter for forhøyet polysakkarider i cellen vegg av C. albicans, identifikasjon av patogene ble utført PAS flekker, som gir en lilla-magenta farge til soppen. Som vist i figur 2A, viser PAS flekker tydelig at patogen er begrenset i byllen, dannet av rekruttering av granulocytter14. C. albicans er tydelig på høyere forstørrelse (figur 2B), og det synes å være omgitt av necrotic og immunsystemet cellene.
Med metoden beskrevet ovenfor kan infeksjon prosessen og den påfølgende betennelsen følges over tid. På den svært begynnelsen immun cellen fører rekruttering til dannelsen av en byll (figur 1A og figur 3A). Når analysen av huden vev ble forlenget opptil 48-72 h, avbrudd i huden strukturer og dannelse av et arr var visualisert (figur 3B, C). Dannelsen av denne strukturen er den helbredende fasen etter fordrivelsen av patogen14.
Prosessen som fører til dannelsen av en ulcer kan følges i flere dager etter smitte. Som vist i figur 4A, vise C57BL/6 vill-type mus en ulcerøs prosess som øker over tid. Rundt viser 70-80% av mus dannelsen av en ulcer 72 h etter smitte. På grunn av eksperimentell variasjoner, bør minst 8 mus brukes i hvert eksperiment. For statistisk analyse anbefales det å bruke minst 8-10 mus for partituret sårdannelse hvis sammenligne ulike genotyper eller behandlinger. I dette tilfellet skal selv små forskjeller vises. Illustrasjon bilder av ulcerøs prosessen er vist i figur 4B. Ved spesifikke behandlinger eller genetisk mangler, dannelsen av sår kan reduseres og/eller avskaffet14. I noen tilfeller, er i stedet for sår, en cyste dannet, som vist i figur 4C.
Hematoxylin & Eosin og PAS flekker, lysbildene kan være farget for enten bestemt mobilnettet markører eller andre immunohistochemical stainings bedre visualisere: kollagenfibre; cytokin/chemokines sted i vev; og immun celle identitet og romlige fordelingen.
I tillegg til histologiske forberedelse, kan vareprøver brukes også for molekylær analyser. Hele injeksjonsstedet kan forbrukeravgift, som for histologiske preparater, og behandles for RNA utvinning. RNA utvinning fra vevet kan studier og identifikasjon av de gener upregulated under infeksjon med patogen. Muligheten til å behandle prøvene for molekylær analyser er et viktig verktøy, sammen med histologiske analyse, for å bedre karakterisere av immunrespons skapte mot patogen og dens regulering i den tidlige og sene fasen etter den utfordring14.
Figur 1: vedlikehold av huden morfologi og mobilnettet lokalisering. (A) beholdes alle lagene. Epitel, adipocytter og muskelceller er lett gjenkjennelig. (B) polymorfonukleære leukocytter (markert med piler) kan identifiseres i byllen. (C, D) Høyere forstørrelser viser tilstedeværelse av polymorfonukleære leukocytter (piler) i området rundt byllen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Identifikasjon av C. albicans. (A) C. albicans kan oppdages i vevet med PAS flekker. (B) høyere forstørrelse bedre visualisere sopp, beiset i lilla, begrenset inne byllen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: oppfølging av inflammatoriske. (A) på begynnelsen av inflammatoriske elicited av C. albicans injeksjon, granulocytter er rekruttert for å danne en byll å begrense patogen. (B, C) Dannelsen av en ulcer er nødvendig for utvisning av soppen. Helbredende vevet er preget av en endring i den strukturelle integriteten av huden og kan føre til dannelse av et arr. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Kinetics av sårdannelse. (A) ulcerøs prosessen følger et trend med økning i de første dagene etter smitte. 72 h etter infeksjon, 70-80% av mus viser en ulcer på stedet av infeksjonen. 16 C57BL/6 vill type dyr ble brukt. (B) illustrasjon bilder av sår utviklet 48 timer etter smitte. (C) illustrasjon bilder av cyste formasjonen etter smitte. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Her beskrev vi en metoden for C. albicans infeksjon å studere den inflammatoriske prosessen som startes ved fungal inngangen i den dype derma.
Selv om huden abscess dannelse er en relativt sjelden hendelse på C. albicans infeksjon15, tillater injeksjon av sopp direkte i den dype derma ikke bare studiet av sopp-drevet abscess dannelse, men også analyse av spesifikk immun celler som inneholder fungal spredt. Med metoden beskrevet her, er det mulig å studere samspillet mellom immunceller, samt rekruttering av immunceller som er viktig å kontrollere fungal spredningen, mens unngå noen inflammatorisk respons til mekanisk skade eller sår formasjon. Faktisk, muligheten til å holde epithelial strukturen intakt er viktig å unngå utvikling av en inflammatorisk miljøendringer forårsaket av en mekanisk stimulans, som en slitasje. Som theorized for første gang av Polly Matzinger i 199416, kan skade signaler, faktisk, aktivere en immunrespons og, derfor potently påvirke immunrespons brakt frem av patogen.
Skader forbundet molekylær mønster (DAMPs) kan stamme fra døde celler, men de kan også bli utgitt under stress forhold. Siden disse signalene kan produseres i situasjoner av skade på vev, vil dannelsen av en såret føre en hyper-inflammatorisk miljø før konteksten av en infeksjon. Metoden vi har beskrevet begrenser utgivelsen av DAMPs og dermed reduserer tilstedeværelsen av confounding elementer.
Videre er injeksjon av en patogen direkte i den dype derma en metode som kan brukes ikke bare for fungal infeksjoner, men også for bakteriell utfordringer. En annen patogen ansvarlig for et forhøyet antall tilfeller av både kutan og blodbanen infeksjoner er Staphylococcus aureus4. Vi har nylig vist hvordan denne protokollen er også viktig for å studere S. aureus infeksjoner14. Spesielt er S. aureus kjent i klinikken grunn av skjemaet abscesser i flere distrikter av kroppen17. Injeksjon av S. aureus i den dype derma fører til dannelse av abscesser, dermed aktivere samtidig studiet av tidlig hendelsene drevet av S. aureus møter og involvering av immunreaksjoner som fører til helbredelse fase.
Til slutt, en annen viktig funksjon i metodikk beskrevet her er at vedlikehold av en intakt epithelial struktur gir muligheten til å analysere histologisk lokalisering av immunceller og aktivering av forskjellige veier som kan romlig compartmentalized. Under disse eksperimentelle forhold, faktisk ulike anatomiske strukturer i huden endres ikke og både immunceller og inflammatoriske mediatorer kan visualiseres i et bestemt geografisk område.
Bruk av denne metoden som bevarer den romlige fordelingen av immunceller er derfor ideell for bedre å forstå rollene av hver mobilnettet under sopp og bakterielle hudinfeksjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
FG støttes av Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (IG 2016Id.18842), Cariplo Foundation (Grant 2014-0655) og Fondazione Regionale per la Ricerca Biomedica (FRRB).
IZ støttes av NIH grant 1R01AI121066-01A1, 1R01DK115217, HDDC P30 DK034854 grant, Harvard medisinske skole Milton funnet, CCFA Senior forskning priser (412708), den Eleanor og Miles Shore 50th Anniversary Fellowship Program og Cariplo Foundation ( 2014-0859).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| PBS | Euroclone | ECB4053L | warm in 37 °C bath before use |
| H-OCT compound | histo-line laboratories | R0030 | |
| Gill's Hematoxilyn | histo-line laboratories | 09-178-2 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | histo-line laboratories | 09-209-05 | |
| Ethanol absolute | scharlau | ET00232500 | |
| Citro-HISTOCLEAR | histo-line laboratories | R0050 | |
| Eukitt, mounting medium | bio-optica | ||
| Acetone | sigma-aldrich | 179124 | |
| PAS staining system | sigma-aldrich | 395B-1KT | |
| Bacto Peptone | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | BD | 212750 | |
| D(+)-Glucose anhydrous for molecular biology | Applichem PanReac | 50-99-7 | |
| Uridine | Merck Millipore | 8451 | |
| HEPES | Applichem PanReac | A1070,0500 | |
| Safe-Lock tubes 2 mL | eppendorf | 30121597 | |
| TRIzol Reagent | Life Technologies | 15596018 | Toxic, corrosive and mutagen. Use all precaution needed |
| Rneasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| liquid nitrogen | Wear eye protection | ||
| Instrument | |||
| Coulter Counter-Particle Count | Beckman Coulter | ||
| Centrifuge 5415 R | eppendorf | ||
| MC 3000 Microtome Cryostat | histo-line laboratories | ||
| TissueLiser | QIAGEN | ||
| Materials | |||
| 0.3 ml Insulin Syringe with a 30G x 8mm needle | BD | 324826 | |
| Surgical forceps | |||
| Surgical scissors | |||
| Base mould disposable | histo-line laboratories | 2781 | |
| Positively charged bio microscope slides | bio-optica | 09-2000 | |
| Cover slips 24 x 50 mm | thermo scientific | 11911998 |
References
- Belkaid, Y., Segre, J. A. Dialogue between skin microbiota and immunity. Science. 346 (6212), 954-959 (2014).
- Kashem, S. W., Kaplan, D. H. Skin Immunity to Candida albicans. Trends Immunol. 37 (7), 440-450 (2016).
- Havlickova, B., Czaika, V. A., Friedrich, M.
- Wisplinghoff, H., Bischoff, T., Tallent, S. M., Seifert, H., Wenzel, R. P., Edmond, M. B. Nosocomial Bloodstream Infections in US Hospitals: Analysis of 24,179 Cases from a Prospective Nationwide Surveillance Study. Clin Infect Dis. 39 (3), 309-317 (2004).
- Romani, L. Immunity to fungal infections. Nat Rev Immunol. 4 (1), 11-24 (2004).
- Odds, F. C.
- MacCallum, D. M., Odds, F. C. Temporal events in the intravenous challenge model for experimental Candida albicans infections in female mice. Mycoses. 48 (3), 151-161 (2005).
- Dai, T., Kharkwal, G. B., Tanaka, M., Huang, Y. -Y., Bil de Arce, V. J., Hamblin, M. R. Animal models of external traumatic wound infections. Virulence. 2 (4), 296-315 (2018).
- Gaspari, A. A., Burns, R., Nasir, A., Ramirez, D., Barth, R. K., Haidaris, C. G. CD86 (B7-2), but not CD80 (B7-1), expression in the epidermis of transgenic mice enhances the immunogenicity of primary cutaneous Candida albicans infections. Infect Immun. 66 (9), 4440-4449 (1998).
- Koh, A. Y. Murine models of Candida gastrointestinal colonization and dissemination. Eukaryot Cell. 12 (11), 1416-1422 (2013).
- Mear, J. B., et al. Candida albicans Airway Exposure Primes the Lung Innate Immune Response against Pseudomonas aeruginosa Infection through Innate Lymphoid Cell Recruitment and Interleukin-22-Associated Mucosal Response. Infect Immun. 82 (1), 306-315 (2014).
- Leoni, G., Neumann, P. -A., Sumagin, R., Denning, T. L., Nusrat, A. Wound repair: role of immune-epithelial interactions. Mucosal Immunol. 8 (5), 959-968 (2015).
- Fonzi, W. A., Irwin, M. Y. Isogenic strain construction and gene mapping in Candida albicans. Genetics. 134 (3), 717-728 (1993).
- Santus, W., et al. Skin infections are eliminated by cooperation of the fibrinolytic and innate immune systems. Sci Immunol. 2 (15), (2017).
- Florescu, D. F., Brostrom, S. E., Dumitru, I., Kalil, A. C. Candida albicans Skin Abscess in a Heart Transplant Recipient. Infect Dis Clin Pract. 18 (4), 243-246 (2010).
- Pradeu, T., Cooper, E. L. The danger theory: 20 years later. Front Immunol. 3, 287 (2012).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19 (5), 225-232 (2011).
