Summary
Her beskriver vi en protokol, der giver mulighed for histologiske og molekylær analyse af hud prøver efter Candida albicans intradermal injektion. Denne protokol fastholder den strukturelle integritet af huden og giver mulighed for lokalisering af væv-resident eller nyligt rekrutterede immunceller samt patogen distribution.
Abstract
Huden er ekstremt forlængede organ i kroppen, og på grund af denne store overflade, er det konstant udsat for mikroorganismer. Skader i huden kan let føre til infektioner i dermis, som kan, til gengæld medføre spredning af patogener i blodbanen. Forstå hvordan immunsystemet bekæmper infektioner i den meget tidlige fase og hvordan værten kan fjerne patogener er et vigtigt skridt til at indstille basen for fremtidige terapeutiske indgreb. Her beskriver vi en model af Candida albicans infektion, der kan visualisere de processer, der opstår tidligt under en infektion, herunder når patogenet har bestået den epitel barriere, samt den immunrespons, som fremkaldes ved C. albicans invasion. Vi der denne infektion model udfører histologiske analyser, der viser de immunceller, der infiltrere huden samt tilstedeværelse og lokalisering af patogenet. Prøver indsamles efter infektionen kan behandles for RNA udvinding.
Introduction
Den menneskelige krop er dækket med et meget højt antal mikroorganismer. Hudens overflade er levested for næsten en million bakterier pr. kvadratcentimeter1. Dette tal afspejler dog ikke den fulde række mikroorganismer, der koloniserer huden. Ud over bakterier, er den menneskelige krop koloniseret af mange svampe arter, herunder C. albicans, som er i stand til at overleve både på den slimhinde og hud niveau2.
Procentdelen af mennesker diagnosticeret med svampeinfektioner steget enormt i de seneste år. Dette skyldes især det højere antal immunsvækkede personer, dvs., HIV-positive patienter og patienter, der har været igennem kemoterapi eller immunosuppressive lægemidler efter transplantation3. I en overvågning undersøgelse udført i USA, viste Wisplinghoff et al. , 9,5% af nosokomielle blodbanen infektioner skyldes Candida arter4. På grund af øget forekomst af svampeinfektioner og især på grund af den forhøjede procentdel af Candida arter fundet under blodforgiftning, er forstå, hvordan dette patogen undslipper kontrol af immunsystemet yderst vigtigt.
C. albicans er en Dimorfe svampe, der vokser i forskellige morfologiske former, såsom gær, blastospores, pseudohyphae og hyfer afhængigt af de miljømæssige forhold5. I sin hyphal form, C. albicans viser sin højeste invasionsevne kapacitet og har evnen til at trænge epitel6.
C. albicans infektioner er blevet studeret ved hjælp af flere eksperimentelle metoder. Den mest almindelige model for infektion er intravenøs injektion af C. albicans gær7. Dog tager denne model ikke hensyn til alle processer der ske før svampen formår at sprede sig til blodbanen. En anden model tager fordel af C. albicans evne til at invadere epitel. Denne metode, også kendt som sand papir model8, blev udviklet af Gaspari et al. i 19989, og består af at bruge sandpapir til slib huden, hvilket eliminerer stratum corneum før du anvender C. albicans. Denne fremgangsmåde gør det muligt for svampen at trænge epitel, således at analysen af de invasive evner af dette patogen. Endelig, andre modeller af infektioner for gastrointestinale10 og luftveje11 har været brugt i forskellige undersøgelser.
Dannelsen af et sår (som i sand papirmodellen) medfører aktivering af flere veje, herunder immun celle rekruttering og aktivering, for at fremme den helbredende proces12. Dette kan enten ændre eller maskere immunresponset specifikt fremkaldte mod patogenet, hvilket fører til confounding resultater.
Her beskriver vi en metode af hudinfektion, der undgår første sår dannelse og induktion af en basal inflammatoriske miljø. For at bevare den intakt epitelial struktur, injicere vi direkte C. albicans i sin hyphal form i de dybe derma. Selv om en enkelt injektion kan fremkalde mild betændelse, mængden af betændelse er begrænset og begrænsede i forhold til dannelsen af et åbent sår i sand papirmodellen. Den tilgang, som vi beskriver her giver mulighed for undersøgelse af immunresponset svampeinfektion og udbredelsen samtidig undgå overdreven og allerede eksisterende inflammatoriske miljøet forårsaget af mekaniske skader.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurerne, der blev godkendt under den institutionelle Animal Care og brug udvalg (IACUC) og drives under tilsyn af department of Animal ressourcer på børn 's Hospital (SVANGEN) på Boston children's Hospital eller blev godkendt af italienske Ministeriet for sundhed og udføres i henhold til Udvalget om institutionelle Animal Care på Universitet i Milano-Bicocca.
1. C. albicans forberedelse
- Kultur C. albicans, stamme CAF3-113, i rør indeholdende rig medium (gær extract pepton dextrose (YEPD), 1% (w/v) gærekstrakt, 2% (w/v) af Bacto pepton, 2% (w/v) glukose) suppleret med uridine (50 mg/L) på 25 ° C. Under disse betingelser vokser C. albicans som en gær.
Bemærk: Andre C. albicans stammer kan bruges, som de kliniske isolere C. albicans stamme SC531413. Da vi har for nylig påvist, at colitis processen er foranlediget ved aktivering af den medfødte immunsystem14, teoretisk hver C. albicans stamme, der fastholder sin cellevæg komponenter og struktur, samt den evne til at stamme hyphal fremskrivninger, kunne bruges. - Overvåge kulturen ved tælling cellulære koncentrationen ved hjælp af en celle counter analyzer.
- Høste kulturen, når den når en koncentration på omkring 8 x 106 celler/mL. Alternativt, brug et spektrofotometer til måling af OD600.
Bemærk: Normalt, en værdi af OD600 = 1 svarer til en gær koncentration af 3 x 107 celler/mL, men titrering anbefales. - Resuspend kultur i YEPD-uridine medium, ved hjælp af HEPES (50 mM, pH 7,5) som en buffer agent og inkuberes kultur ved 37 ° C til at fremkalde hyfer dannelse. Check hyphal dannelse under et mikroskop på 100 X forstørrelse. Hyphal dannelse er synlige 5 h efter dyrkning ved 37 ° C; dog bruge celler 16 h efter inkubation ved 37 ° C, når den hyphal procentdel når næsten 95% af den samlede kultur.
- For at berige forberedelse i hyphal koncentration, centrifuge delprøver af kultur på 3.300 x g i 5 min. supernatanten og resuspenderes i steril PBS ved en koncentration på 1 x 108 hyfer/mL.
2. dyb Dermal injektion
- 24 timer før proceduren infektion bedøver mus med en intraperitoneal injektion af ketamin (80-100 mg/kg) og xylazin (10 mg/kg), og derefter barbering flanke af musene bruger en elektrisk clipper.
Bemærk: Efter en procedure, der omfatter anæstesi, placere mus under en varme lampe indtil de effektivt har tilbagebetalt. - Hvile mus i 24 timer til at undgå enhver betændelse på grund af barbering proces.
- 24 timer efter barbering procedure, bedøver mus med en intraperitoneal injektion af ketamin (80-100 mg/kg) og xylazin (10 mg/kg).
- Kontrollere pote refleks for at sikre, at musene er dybt bedøvede. Vurdere pote refleks af fast klemme pote. Hvis anæstesi er opnået, at dyret føler ikke smerte og bevæger sig ikke.
- Injicere C. albicans hyfer i den dybe derma ved hjælp af en 0,3 mL insulin sprøjte med en 30 G x 8 mm kanyle i en endelige mængden af 50 µL/injektion, svarende til 5 x 106 hyfer/injektion.
- Træk huden på det barberede flanke stram bruger to fingre for at injicere volumen direkte i den dybe derma. Indsætte nålen med en vinkel på 10-15° med facet af nålen opad.
- Med denne vinkel vil patogenet injiceres med en dybde på ca 300-500 µm. For at sikre, at injektionen udføres godt, absorberet Tjek at den injicerede diskenhed danner en bule, der er få min efter injektionen.
Bemærk: Bump dannet efter injektionen vil være ca 1 cm2. Dette er det område, der vil blive fjernet for den udpegede tidspunkt for enten molekylære eller histologiske analyse. - For tiden point på mindre end 24 timer (anbefales) skal du markere området af infektion med en tusch, da bump dannet med injektion fortsætter i et par minutter, hvorefter den er absorberet. For tiden point af 24 h eller mere er dette trin ikke påkrævet, fordi enten et sår eller en cyste kan klart ses.
3. prøve indsamling og forberedelse for histologiske farvning
- Aflive mus efter institutionelle procedurer.
- Ved hjælp af kirurgiske pincet, trække huden på grænsen til det injiceres site, tidligere markeret med en tusch. Ved hjælp af kirurgiske saks, punktafgifter på inficerede websted ved at skære huden efter den markerede linje.
Bemærk: Vær forsigtig til at adskille huden fra bughinden med rund spids saks. - Fordyb huden i en engangs base mug fyldt med optimal opskæring temperatur (OCT) sammensatte, med den indre side af huden opad. Fryse prøven i flydende kvælstof, indtil stoffet bliver hvide. Lave ikke lade flydende kvælstof dække prøven, før det er helt frosset som dette ville skade prøven.
Bemærk: advarsel! Under trin 3.3, bære en ansigtsskærm for beskyttelse mod flydende kvælstof. - Hvis prøverne ikke anvendes straks til dias forberedelse, hurtigt gemme dem ved-80 ° C.
Bemærk: Prøver kan opbevares ved-80 ° C på ubestemt tid.
4. forberedelse af dias
- Skær prøven i halvdelen til at forberede udsnittene til histologi starter i midten af prøven.
- Skære 5 µm tykke skiver med en kryostaten.
Bemærk: For hud prøver, temperatur af kryostaterne bør ikke være højere end-25 ° C. En højere temperatur medfører en delvis smeltning af H-OLT og derfor prøver vil ikke blive opretholdt i den rigtige position under opskæring procedure. - Bruge positivt ladede objektglas til indsamling udsnittene.
- Hvis de indsamlede skiver ikke bruges snart efter forberedelsen, gemme dem på-20 ° C. På dette tidspunkt, kan udsnit opbevares ved-20 ° C på ubestemt tid.
5. hæmatoxylin & Eosin pletter
- Pletten dias ved nedsænkning i Gills hæmatoxylin i 4 min. Skyl dias i rindende vand i 5 min.
- Pletten dias ved nedsænkning i Eosin Y opløsning i 1 min. Skyl dias i rindende vand i 5 min. Skyl dias ved hjælp af destilleret vand før du fortsætter til protokollen.
- Dehydrere ved nedsænkning i seriefremstillede stigende koncentrationer ethanol løsninger (50%, 70%, 80%, 95%, 100%). Fordyb dias for 15 s i hver ethanol opløsning.
- Fjern dias i mindst 2 min. ved nedsænkning i en histologisk clearing agent.
- Montere dias ved hjælp af montering medium og dække underkjoler.
- Erhverve billeder dias med et mikroskop dias scanner ved 40 X forstørrelse.
6. periodiske syre-Schiff (ikke) farvning
- Fix dias med ≥99.5% acetone ved stuetemperatur i 1 min. Skyl dias i rindende vand i 1 min.
- Pletten dias ved nedsænkning i periodiske syre opløsning (1 g/dL) i 5 min. Skyl dias i 3 ændringer af destilleret vand.
- Pletten dias ved nedsænkning i Schiff's reagens i 15 min. Skyl dias i rindende vand i 5 min.
- Pletten dias ved nedsænkning i Gills hæmatoxylin for 5 min. vask dias i rindende vand i 30 s.
- Dehydrere diasene ved nedsænkning i 3 ændringer af 100% ethanol. Fordyb dias for 15 s hver gang.
- Fjern dias i mindst 2 min. ved nedsænkning i en histologisk clearing agent.
- Montere dias ved hjælp af montering medium og dække underkjoler.
- Erhverve billeder dias med et mikroskop dias scanner.
7. prøve indsamling og forberedelse til RNA udvinding
- Aflive mus efter institutionelle procedurer. Fjerne hud prøver som i trin 3.2.
- Fordyb prøver i et 2 mL snap-cap rør med 1 mL reagens for syre guanidinium kaliumthiocyanat-phenol-chloroform udvinding.
Bemærk: Protokollen kan blive standset her og prøverne kan opbevares ved-80 ° C. - Skær prøven i stykker af ca 0,2 cm2 ved hjælp af kirurgiske pincet.
Bemærk: advarsel! De fleste af reagenser til RNA isolering er giftige og mutagene. Trin 7.3 og 7.4 skal ske i et stinkskab. - Smadre prøven med en perle mølle ved en hastighed på 20 svingninger/s i 20 min. Alternativt, en mekanisk potter kan bruges.
- Kontrollere den effektive homogenisering af prøverne af udkig efter tilstedeværelsen af intakt stykker af huden. Gentag dette trin, hvis prøverne ikke er helt homogeniseret.
- Centrifugeres prøver på 16.000 x g i 1 min. hold analysere for RNA udvinding og kassér pelleten. Dette trin udføres for at fjerne hår og snavs, der kan blokere kolonnerne udvinding.
- Fortsætte med RNA udvinding ved hjælp af RNA oprensning kolonner14.
- Brug et spektrofotometer, der tillader for at vurdere RNA oprensning og koncentration. Hvis RNA ekstrakter ikke som straks anvendes til cDNA forberedelse, opbevare prøver ved-80 ° C.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Ved injektion af patogenet direkte i den dybe derma forbliver strukturelle morfologi af væv intakt (figur 1A).
Vedligeholdelse af hudens strukturelle integritet giver mulighed for påvisning af immunceller og deres lokalisering på webstedet af infektion. Højere forstørrelse vist i figur 1B viser, at bylden hovedsageligt består af polymorfnukleære leukocytter (PMCs) der indeholder patogenets spredning af sin indespærring til stedet på infektion. Ansættelse af PMCs, såsom neutrofile, giver mulighed for dannelse af byld, således at man undgår spredning af svamp i væv14. Højere forstørrelser (figur 1 c, D) viser, hvordan de omkringliggende områder i bylden er også beriget med PMCs.
Ved at opretholde den strukturelle integritet, kan lokalisering af patogenet under infektion bestemmes. At drage fordel af den forhøjede indhold af polysaccharider i cellens væg af C. albicans, identifikation af patogenet blev udført ved hjælp af PAS farvning, hvilket giver en lilla-magenta farve til svampen. Som vist i figur 2A, viser PAS farvning klart, at patogenet er afgrænset af absces, dannet af ansættelse af granulocytter14. C. albicans er klart synlig ved de højere forstørrelse (figur 2B), og det ser ud til at være omgivet af nekrotisk og immun celler.
Benytter den ovenfor beskrevne metode, kan infektion oparbejde og den deraf følgende inflammation følges over tid. På den meget begynder, immun celle fører ansættelse til dannelse af en byld (figur 1A og figur 3A). Når analysen af hudvæv blev forlænget op til 48-72 h, afbrydelse af huden strukturer og dannelsen af et ar blev visualiseret (figur 3B, C). Dannelsen af denne struktur er på grund af den helbredende fase, der følger efter udvisningen af patogenet14.
Den proces, der fører til dannelsen af et sår kan følges i flere dage efter infektionen. Som vist i figur 4A, vise C57BL/6 wild-type mus en colitis proces, der øger over tid. Omkring viser 70-80% af musene dannelsen af et sår 72 h efter infektion. På grund af eksperimentelle variabilitet, bør mindst 8 mus anvendes i hvert eksperiment. Til statistisk analyse anbefales det at bruge et minimum af 8-10 mus for hver ulceration score, hvis man sammenligner forskellige genotyper eller behandlinger. I dette tilfælde, skal selv små forskelle være synlige. Illustrative billeder af colitis processen er vist i figur 4B. Ved særlige behandlinger eller genetiske mangler, dannelsen af sår reduceres og/eller ophævet14. I nogle tilfælde, er i stedet for mavesår, en cyste dannet, som illustreret i figur 4 c.
End hæmatoxylin og Eosin og PAS farvning, dias kan farves til enten specifikke cellulære markører eller med andre immunhistokemiske stainings bedre visualisere: kollagen fibre; cytokin/kemokiner placering inden for væv; og immun celle identitet og geografiske fordeling.
Ud over histologiske præparat anvendes prøver også til molekylære analyser. Hele injektionsstedet kan blive skåret ud som for histologiske præparater, og forarbejdet til RNA udvinding. RNA udvinding fra vævet giver mulighed for undersøgelse og identificering af disse gener upregulated under infektion med patogenet. Mulighed for at behandle prøver til molekylære analyser er et vigtigt redskab, sammen med histologiske analyse, for bedre at kunne karakterisere typen af immunrespons fremkaldte mod patogenet og dets forordning under de tidlige og sene stadier udfordring14.
Figur 1: vedligeholdelse af hud morfologi og cellulære lokalisering. (A) alle lagene bevares. Epitel, adipocytter og muskelceller er let genkendelig. (B) polymorfnukleære leukocytter (markeret med pile) kan blive identificeret inden for bylden. (C, D) Højere forstørrelse viser tilstedeværelsen af polymorfnukleære leukocytter (pile) i området omkring bylden. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Identifikation af C. albicans. (A) C. albicans kan detekteres i væv med PAS farvning. (B) højere forstørrelse til bedre visualisere svamp, farves i lilla, afgrænset af bylden. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: opfølgning af den inflammatoriske proces. (A) i begyndelsen af den inflammatoriske proces fremkaldes ved C. albicans injektion, granulocytter er ansat for at danne en byld for at begrænse patogenet. (B, C) Dannelsen af et sår er nødvendige for udvisning af svampen. Den helbredende væv er karakteriseret ved en ændring i den strukturelle integritet af huden og kan føre til dannelsen af et ar. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: kinetik af ulceration. (A) colitis processen følger en tendens til stigning i de første dage efter infektionen. 72 timer efter infektion, 70-80% af musene viser et sår på infektionsstedet. 16 C57BL/6 vildtype dyr blev brugt. (B) Illustrative billeder af sår, der udviklede 48 h efter infektion. (C) Illustrative billeder af cystedannelse efter infektion. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Her beskrevet vi en metode af C. albicans infektion at studere den inflammatoriske proces, der er indledt efter svampe indgang i den dybe derma.
Selvom hud absces dannelse er en forholdsvis sjælden begivenhed ved C. albicans infektion15, injektion af svampen direkte i den dybe derma giver mulighed for undersøgelse af svampe-drevet absces dannelse, men også analyse af specifik immun celler, der deltager for at indeholde svampe spredes. Med metoden beskrevet her, er det muligt at studere samspillet mellem immunceller, samt ansættelse af de immunceller, der er vigtigt at kontrollere de svampe udbredelse, samtidig undgå enhver inflammatorisk respons til mekaniske skader eller sår dannelse. Mulighed for at holde den epitel struktur intakt er faktisk vigtigt at undgå udviklingen af en inflammatorisk miljøet forårsaget af et mekanisk stimulus, som en slid. Som teoretiske for første gang af Polly Matzinger i 199416, kan skader signaler, faktisk aktivere en immunrespons og dermed påvirke potent immunresponset fremkaldt af patogenet.
Skader associeret molekylære mønstre (DAMPs) kan stamme fra døde celler, men de kan også blive frigivet under stress betingelser. Da disse signaler kan fremstilles i situationer af vævsskader, ville dannelsen af en såret forårsage en hyper-inflammatorisk miljø inden for rammerne af en infektion. Den beskrevne begrænser udgivelsen af DAMPs og dermed reducerer forekomsten af forstyrrende elementer.
Injektion af en patogen direkte i den dybe derma er desuden en metode, der kan bruges ikke kun mod svampeinfektioner, men også for bakteriel udfordringer. En anden patogen for en forhøjet antallet af tilfælde af begge kutane og infektioner i blodet er Staphylococcus aureus4. Vi har for nylig vist, hvordan denne protokol er også et vigtigt redskab til at studere S. aureus infektion14. Især er S. aureus kendt i klinikken for sin evne til form bylder i flere distrikter i kroppen17. Injektion af S. aureus i den dybe derma fører til dannelse af abscesser, således at samtidig undersøgelse af de meget tidlige begivenheder drevet af S. aureus støder samt inddragelse af immunrespons, der fører til heling fase.
Endelig, en anden vigtig funktion af den metode beskrevet her er at opretholdelse af en intakt epitelial struktur giver mulighed for histologisk analysere lokalisering af immunceller og aktivering af forskellige veje, der kan være geografisk opdelte. Disse eksperimentelle betingelser, i virkeligheden, de forskellige anatomiske strukturer i huden er ændret ikke og både immunceller og inflammatoriske mediatorer kan visualiseres i den præcise placering.
Brug af denne metode, der bevarer den geografiske fordeling af immunceller er derfor ideel til bedre at forstå rollerne hver cellulære type under svampe- og bakterielle hudinfektioner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
FG er støttet af Associazione Italiana per la Ricerca sul Cancro (IG 2016Id.18842), Cariplo Foundation (Grant 2014-0655) og Fondazione Regionale per la Ricerca Biomedica (FRRB).
IZ understøttes af NIH grant 1R01AI121066-01A1, 1R01DK115217, HDDC P30 DK034854 grant, Harvard Medical School Milton fandt, CCFA Senior forskning Awards (412708), Eleanor og Miles Shore 50 års jubilæum Fellowship Program og Cariplo Foundation ( 2014-0859).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| PBS | Euroclone | ECB4053L | warm in 37 °C bath before use |
| H-OCT compound | histo-line laboratories | R0030 | |
| Gill's Hematoxilyn | histo-line laboratories | 09-178-2 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | histo-line laboratories | 09-209-05 | |
| Ethanol absolute | scharlau | ET00232500 | |
| Citro-HISTOCLEAR | histo-line laboratories | R0050 | |
| Eukitt, mounting medium | bio-optica | ||
| Acetone | sigma-aldrich | 179124 | |
| PAS staining system | sigma-aldrich | 395B-1KT | |
| Bacto Peptone | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | BD | 212750 | |
| D(+)-Glucose anhydrous for molecular biology | Applichem PanReac | 50-99-7 | |
| Uridine | Merck Millipore | 8451 | |
| HEPES | Applichem PanReac | A1070,0500 | |
| Safe-Lock tubes 2 mL | eppendorf | 30121597 | |
| TRIzol Reagent | Life Technologies | 15596018 | Toxic, corrosive and mutagen. Use all precaution needed |
| Rneasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| liquid nitrogen | Wear eye protection | ||
| Instrument | |||
| Coulter Counter-Particle Count | Beckman Coulter | ||
| Centrifuge 5415 R | eppendorf | ||
| MC 3000 Microtome Cryostat | histo-line laboratories | ||
| TissueLiser | QIAGEN | ||
| Materials | |||
| 0.3 ml Insulin Syringe with a 30G x 8mm needle | BD | 324826 | |
| Surgical forceps | |||
| Surgical scissors | |||
| Base mould disposable | histo-line laboratories | 2781 | |
| Positively charged bio microscope slides | bio-optica | 09-2000 | |
| Cover slips 24 x 50 mm | thermo scientific | 11911998 |
References
- Belkaid, Y., Segre, J. A. Dialogue between skin microbiota and immunity. Science. 346 (6212), 954-959 (2014).
- Kashem, S. W., Kaplan, D. H. Skin Immunity to Candida albicans. Trends Immunol. 37 (7), 440-450 (2016).
- Havlickova, B., Czaika, V. A., Friedrich, M.
- Wisplinghoff, H., Bischoff, T., Tallent, S. M., Seifert, H., Wenzel, R. P., Edmond, M. B. Nosocomial Bloodstream Infections in US Hospitals: Analysis of 24,179 Cases from a Prospective Nationwide Surveillance Study. Clin Infect Dis. 39 (3), 309-317 (2004).
- Romani, L. Immunity to fungal infections. Nat Rev Immunol. 4 (1), 11-24 (2004).
- Odds, F. C.
- MacCallum, D. M., Odds, F. C. Temporal events in the intravenous challenge model for experimental Candida albicans infections in female mice. Mycoses. 48 (3), 151-161 (2005).
- Dai, T., Kharkwal, G. B., Tanaka, M., Huang, Y. -Y., Bil de Arce, V. J., Hamblin, M. R. Animal models of external traumatic wound infections. Virulence. 2 (4), 296-315 (2018).
- Gaspari, A. A., Burns, R., Nasir, A., Ramirez, D., Barth, R. K., Haidaris, C. G. CD86 (B7-2), but not CD80 (B7-1), expression in the epidermis of transgenic mice enhances the immunogenicity of primary cutaneous Candida albicans infections. Infect Immun. 66 (9), 4440-4449 (1998).
- Koh, A. Y. Murine models of Candida gastrointestinal colonization and dissemination. Eukaryot Cell. 12 (11), 1416-1422 (2013).
- Mear, J. B., et al. Candida albicans Airway Exposure Primes the Lung Innate Immune Response against Pseudomonas aeruginosa Infection through Innate Lymphoid Cell Recruitment and Interleukin-22-Associated Mucosal Response. Infect Immun. 82 (1), 306-315 (2014).
- Leoni, G., Neumann, P. -A., Sumagin, R., Denning, T. L., Nusrat, A. Wound repair: role of immune-epithelial interactions. Mucosal Immunol. 8 (5), 959-968 (2015).
- Fonzi, W. A., Irwin, M. Y. Isogenic strain construction and gene mapping in Candida albicans. Genetics. 134 (3), 717-728 (1993).
- Santus, W., et al. Skin infections are eliminated by cooperation of the fibrinolytic and innate immune systems. Sci Immunol. 2 (15), (2017).
- Florescu, D. F., Brostrom, S. E., Dumitru, I., Kalil, A. C. Candida albicans Skin Abscess in a Heart Transplant Recipient. Infect Dis Clin Pract. 18 (4), 243-246 (2010).
- Pradeu, T., Cooper, E. L. The danger theory: 20 years later. Front Immunol. 3, 287 (2012).
- Cheng, A. G., DeDent, A. C., Schneewind, O., Missiakas, D. A play in four acts: Staphylococcus aureus abscess formation. Trends Microbiol. 19 (5), 225-232 (2011).
