Summary
이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.
Abstract
대동맥 동맥 류 및 해 부 상당한 병 적 상태와 사망률은 인구에 연결 되어 있으며 매우 치명적일 수 있다. 대동맥 질환의 동물 모델 존재는 맥 관 구조의 이미징 vivo에서 제한 되었습니다. 최근 몇 년 동안, 미세 전산화 단층 촬영 (마이크로 CT) 모두 크고 작은 혈관 이미징에 대 한 기본 양식 적임 떠오르고 있다 vivo에서 및 전 비보. 함께 관 주조 방법, 주파수 및 C57/Bl6 마우스 β-aminopropionitrile 치료에 대동맥 병 리의 분포 특성 마이크로-CT를 사용 성공적으로 했습니다. 이 방법의 기술적 한계 가난한 동물 준비, 선박 크기 정량화에 대 한 적절 한 방법론의 응용 프로그램 및 비-이 절차의 생존에 의해 소개 하는 관류의 품질에 변화를 포함 합니다. 이 문서는 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 aortopathy의 양적 특성에 대 한 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 방법론을 자세히 설명합니다. 대동맥 병 리를 시각화, 뿐만 아니라 다른 혈관 침대에 vivo에서 또는 혈관 침대 제거 사후 조사이 메서드를 사용할 수 있습니다.
Introduction
대동맥 해 부의 발생률은1년 당 100000 당 3 경우. 대동맥 해 부 및 aneurysmal 계정 10000 죽음에 대 한 미국에서 매년, 서방 국가2에 있는 모든 죽음의 1-2%. 대동맥 해 부 생리 압력에서 대동맥 벽의 층을 통해 혈액의 전파와 그릇의 내 층에 눈물에 의해 시작 됩니다. 높은 환자 펄스 압력 해 부 및 합병증의 발생률이 증가와 연결 됩니다. 증가 벽 전단 응력 선도 동맥 형성3,4대동맥 벽 확장 연결 됩니다. 대동맥 해 부의 결과 두뇌, 신장, 대변, 및 사지, 만성 동맥 류, 파열, 또는 죽음5,,67의 형성을 포함 하 여 먼 장기에 혈액 흐름의 폐색을 포함 합니다.
현재, 개시 및 대동맥 동맥 류 및 해의 진행에 관련 된 생화학과 세포 프로세스 여전히 제대로 이해 하 고. 대동맥 동맥 류 및 해 부 재현 동물 모델은 그들의 병 태 생리학을 이해 하는 열쇠입니다. Β-aminopropionitrile (BAPN)은 lysyl 산화 효소 억제제, 엘라 스 틴과 콜라겐의 교차 연결을 방지 하 고 혈관 벽 세포 외 매트릭스와의 biomechanical 무결성6의 구조를 크게 변경 표시 되었습니다, 8. BAPN로 치료 하는 설치류 대동맥 동맥 및 해 부9,10의 일반적인 동물 모델 활용 되어 있다.
혈관 이미징 형식 혈관 병 리를 확인 하 고, 선박 patency 확인 평가 기관 관류에 있습니다. 최근, 마이크로 계산 된 단층 촬영 (마이크로 CT)은 쥐와 유사 하 게 치수가 재 진된 동물의 맥 관 구조를 공부 하 이용 되었습니다. Intraluminal 혈액은 본질적으로 비교적 radiolucent 뼈와 달리 단층에 의해 혈관의 축 이미징, 제한 됩니다. 그러나 혈관 내 조 영제와 결합 하면,, 마이크로-CT 수 있습니다 매크로 해부학 혈관 병 리11연구를 위한 동물 vasculatures의 상세한 3 차원 복원을.
선택한 대비 에이전트는 방사선 불 투과성 실리콘 고무 리드 크롬과 리드를 포함 하는 ( 테이블의 자료를 참조). 촉매의 면 전에 서 관류, 시 신속 하 게 견고 하 게 캐스팅 배경 조직 달리 높은 방사선 불 투과성는 맥 관 구조를 만드는 혈관의 매크로 해부학 아키텍처에 최소한의 변경으로 맥 관 구조를 형성 하는 경우 radiographically 검사. 이 대비 에이전트 처리를 쉽게 하 고 조직 저하와 자주 관련 혈관 캐스트 부식 된 파손으로 인해 선박 손실 방지 때문에 유리 하다. 그것은 최소한의 수축12치료, 혈관 혈액의 허가 특허 유지 하 고는 동물 매크로-맥 관 구조 비 생존 실험에의 한 정확한 평가 대 한 허용. 이전 작업은 성공적으로 동물 연구의 다양 한 방사선 불 투과성 실리콘 고무-대비를 사용 했다. 특히, 관상, 사, 태 반, 그리고 대뇌 순환11,12,13,,1415 머릿속에 적용 표시 되었습니다. 이 논문에서 우리 세부 양적 마이크로-코네티컷에 의해 마우스 모델에서 대동맥 병 리 BAPN 유도 하 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무의 혈관 내 관류에 대 한 오픈 왼쪽 심 실 펑크의 방법론
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Protocol
처리 하는 동물에 대 한 프로토콜 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 메릴랜드, 볼티모어 (동물 프로토콜 번호 0116024)에 의해 승인 되었고 AAALAC 국제 표준에 따라 실시.
1입니다. 시 약의 준비
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헤 파 린
- 희석 250 µ L 1000의 U/mL 헤 파 린 황산 50 ml의 인산 염 버퍼 5 U/mL의 최종 농도 수 있도록 염 분.
- 따뜻한는 heparinized (5 U/mL) 인산 염 버퍼 식 염 수, 37 ° c 설정 물 욕조에 맥 관 구조에 혈액 대체 하 게 됩니다
- 필요한 튜브를 연결 하 여 압력 제어 펌프를 준비 하 고 2 빈 10 mL 주사기, heparinized 염 분 버퍼에 대 한 1 및 대비 에이전트에 대 한 1.
- 버퍼링 따뜻한 heparinized 인산 염으로 튜브와 압력 펌프의 배관에서 공기 방울을 제거.
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대비 에이전트
참고: 참조 하십시오 테이블의 자료 를 대비 에이전트 키트 성분.- 희석제 비율 1:6 염료를 달성 하는 희석제와 함께 색소 화합물을 혼합.
- 사용 (단계 2.3.12), 직전 200 µ L 희석된 색소 화합물의 약 각 5 mL 수를 경화제와 혼합 그들 잘 볼륨 (4%)를 추가 합니다.
참고: 제조업체 보고 작업 시간은 40 분입니다. 실리콘 고무 대비 에이전트 시작으로 치료 대리인의 추가 후에 20 분을 유해 하, 그것은 그것의 주입 직전 솔루션을 준비 하는 것이 중요.
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BAPN 식 수
- 3 g/L (문학에서 설명한 프로토콜에서 적응)9,,1617의 최종 농도 만들려고 식용 수에 있는 β-aminopropionitrile (BAPN)을 분해.
- 일단 그들이 마이크로-중부 대 한 관류의 시간까지 나이의 4 주 쥐의 그룹에 포함 하는 BAPN 식 수 관리
2. 수술
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동물 준비
- 쥐 나이의 3 주에 유아, 12 h 빛/12 h 어두운 주기에, 그들을 유지 하 고 그들을 먹 여 표준 설치류 차 우. BAPN 대우 그룹에 대 한 16-26 주 광고 libitum갓된 BAPN 식 수를 관리 합니다. 표준 음주와 제어 동물 물 광고 libitum제공 합니다.
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마 취 기술
참고: CT 분석, 다음 절차에서는 이전 24 시간 수행 됩니다. 수술 절차는 사후 intracardiac 관류에 대 한 표본 준비를 제정 했다.- 100% O2 와 3 %isoflurane 정밀 기화 기를 통해 전달 유도 탱크를 통해 마 취 유도. 마 취 유도 후는 isoflurane 중단 하 고 O2챔버를 플러시. 2-2.5 %isoflurane 1 L/min 코 콘을 통해 O2 의 마 취를 유지 합니다.
- 직원을 보호 하기 위해 폐기물 가스 흡착에 대 한 목탄 폐품을 유도 챔버와는 안 면을 첨부 합니다. 유해 자극 (발가락 핀치)에 대 한 응답이 있다는 것을 입증 함으로써 적절 한 마 취 비행기를 확인 합니다.
- 수술 트레이 및 필요한 수술 악기의 구성 요원 필드를 준비 합니다.
- 동물 수술 필드에 전송 하 고 등 쪽 recumbency에 위치.
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수술 기술
- 가 위를 사용 하 여, 피부 및 연 조직 overlying 흉 골까지 연장 sternal 노치를 음모 관절 사이에서 피부와 부드러운 조직 통해 중간 절 개를 확인 합니다.
- 가 위를 사용 하 여 흉 강 입력 칼 과정에서 격 막에 구멍을 만듭니다.
- 가 위를 사용 하 여 양측 복 부 가슴 벽의 격 막 해 부.
- 바로 sternal 국경에서 흉 골에서 늑 골을 분리 하는 늑 골 연골을 통해 잘라.
- (근처 칼 과정) 흉 골의 끝에 잘 hemostatic 클램프를 적용 하 고 이동 하는 hemostat cranially 마우스의 머리 위에 배치 됩니다. 이 thymus과 심장, 심 혼 및 중대 한 배 추가 조작에 대 한 노출에서 흉 골을 철회 합니다.
- 급격히 심장 및 흉 벽 사이 어떤 부착 해 부.
- 미리 로드 버퍼 heparinized 인산 염 (5 U/mL)의 10 mL 주사기에 27-게이지 IV 카 테 테 르 바늘을 연결 하 고 압력 펌프의 튜브에서 공기 방울을 제거 하려면 해당 버퍼와 함께 모든 튜빙을 채우기.
- 유체 라인에 거품으로 액체를 준비 하는 동안 주의 작은 혈관의 작성을 방해 수 있습니다. 이 최종 영상에 아티팩트를 소개 하 고 완전 충전에 필요한 볼륨을 변경 절단 선박의 누출에 대비 에이전트를 발생할 것입니다 동물 준비 하는 동안 손상 된 혈관의 수를 제한 합니다.
- 왼쪽된 심 실 직각 클램프와 안정 27 게이지 바늘으로 찔린 합니다. 우 심 실 또는 헤 파 린 솔루션 및 혈액을 배출 하는 열 등 한 베 나 카바 incise 즉시.
참고: 헤 파 린은 동물의 죽음 후에 혈관 응고에서 혈액을 방지 하기 위해 항 응고 제로 사용 됩니다. - 2 mL/분 단일 주사기 펌프를 사용 하 여 일정 한 속도로 동물 perfuse Note는 기관의 표시 창백. 정 맥 순환에서 배출 하는 perfusate는 혈액 (약 5-6 mL)의 무료 때까지 관류를 계속 합니다. 펌프를 중지 합니다.
- 10 mL 주사기, 좌 심 실에 바늘의 위치를 방해 하지 않도록 주의 복용에서 IV 카 테 테 르 튜브를 분리 합니다.
- 즉시 전체 exsanguination 후 5 mL aliquots에 대비 에이전트 솔루션을 분리 하 고이 이번에 경화제를 추가 (단계 1.2 참조). 그들을 잘 섞는다. 10 mL 주사기로 대비 에이전트 믹스의 5 mL을 인출 하 고 그것으로 동물을 perfuse.
- 혈관 (동맥 및 정 맥)의 완전 한 작성에 대 한 정 맥 솔루션 종료 볼 수 있다 때 과거 시점 주입을 계속 합니다. 관상 동맥, 폐 동맥, 소장과 간 맥 관 구조에 캐스팅 에이전트의 시각화를 포함 하 여 성공적인 관류의 흔적을 찾고 있습니다.
- 대비 에이전트는 실 온에서 약 20 분 후 치료할 것 이다. 치료, 시 필요에 따라 개별 기관, 수확 하 고 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정. 샘플 마이크로-CT 검사 다음 날에 사용 되지 않는 경우 전체 시체를 수정 합니다. 시체 사용 될 연속적인 일 하는 경우 금속 쟁반에 그들을 놓고 밤새 치료 4 ° C에서 냉장고에 넣어.
3. 마이크로-CT 스캔 및 매개 변수
참고: 특정 이미지 수집 매개 변수 사용에 기계에 의존 될 것입니다.
- 관류 55 kVp, 150 µ A의 전류, 2.19, 시스템 확대 요인 및 CCD 카메라 픽셀 범주화 요소 2의 x 선 관 전압을 사용 하 여 마이크로 CT 스캐너를 사용 하 여 다음 날 각 마우스의 계산 된 x 선 단층 촬영 이미지를 취득 합니다. 이 29 µ m의 효과적인 픽셀 크기를 생성합니다.
- 마이크로-CT 스캐너 테이블에 부정사 마우스 시체를 얻을 정찰 x-선 검사.
- 대동맥의 전체 길이 이미지를 몸통에 57.4 m m (축) x 37.1 m m (transaxial)의 보기의 탐지기 분야 초점.
- 2도 및 투영 2800 ms의 당 한 번의 회전 증가와 180 이미지 계획을 취득 합니다.
- 수정 된 Feldkamp 알고리즘;를 사용 하 여 이미지를 재구성 재건된 복 크기는 29 µ m3 x 29 x 29 (슬라이스 두께 = 29 µ m) 여기 사용 하는 소프트웨어에 대 한 복합 3D 시각화 플러그인을 사용 하 여.
4. 후 처리 및 렌더링
- 적절 한 소프트웨어를 사용 하 여 DICOM 형식으로 CT 데이터를 변환 합니다.
- 동맥 류 존재 여부를 식별 하기 위해 이미지를 분석 합니다. 하강 하는 흉부 대동맥, 대동맥 아치의 넓은 시점에서 부 축 직경을 측정 하 고 복 부 대동맥 앞18 (그림 1)에서 설명한.
참고: 우리의 연구에서 이미지 분석 되었다 2 명의 독립적인 관찰자 (1 눈) 동맥 류 존재 여부를 확인 하는 DICOM 뷰어를 이용 하 여. 부 축 직경 대동맥 아치, 앞에서 설명한19 (그림 1)으로 흉부 대동맥, 그리고 복 부 대동맥을 내림차순의 가장 넓은 지점에서 측정 되었다. BAPN 치료 쥐의 비 aneurysmal 동맥 세그먼트 설립 나이 일치 하는 컨트롤 값으로 정상적인 혈관 직경을 의미 합니다. - 동맥 류는 대동맥 직경 보다 큰 50% 기준 직경의 세그먼트의 지역화 된 또는 확산 팽창으로 정의 됩니다. 위의 측정에 따라이 찾습니다.
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Representative Results
이 프로토콜을 평가 하기 위해 20 남성 성인 쥐, 혼합된 배경으로 앞에서 설명한19 의 그리고 20-30 주 나이, 또는 BAPN 치료 없이 리드 기반의 방사선 불 투과성 실리콘 고무 끼얹는다 했다 ( 테이블의 자료를 참조 ) 위에 상세한 프로토콜을 사용 하 여. 그들은 수술 다음 날에 마이크로-CT 검사 (그림 1 및 그림 2). 비교 그룹 중 쥐의 년에서 상당한 차이가 있었다.
작은 축 직경 다음이 쥐에 정량 했다. BAPN 치료 쥐에 오름차순 대동맥의 평균 직경은 치료 나이 일치 하는 컨트롤의 그것 보다 훨씬 더 큰 (1.43 ± 0.56 m m 대 0.93 ± 0.11 mm; p = 0.023, 홀 학생 t-테스트). BAPN와 lysyl 산화 효소의 저해 하강 하는 나이 일치 하는 컨트롤에 비해 흉부 또는 복 부 대동맥 직경 의미에 큰 영향 없어 (p > 0.082, 짝이 없는 학생 t-테스트, 그림 3).
동맥 류는 1.5 x 치료 그룹의 평균 직경으로 정의 되었다. 동맥 류는 BAPN-치료 BAPN 치료 컨트롤 (치료 쥐;의 0% 대 BAPN 치료 쥐의 50%와 비교 된 쥐의 수에 있는 상당한 증가 P = 0.042) 피셔의 정확한 시험. BAPN 취급 생쥐에서 동맥 류는 대동맥에 독점적으로 흉부 대동맥 (식별 10 동맥 류에서 8)에서 식별 된 대다수와 확인 되었다. 4 마우스 개발 1 이상의 동맥 BAPN 치료 (표 1).
그림 1: 대표적인 단면 마이크로-CT 이미지. A. 이것은 BAPN 치료 쥐의 횡단면 화상 진 찰. B. 이것은 BAPN 처리 쥐의 횡단면 화상 진 찰. 부 축 직경 측정 대동맥 아치의 수준에서 만들어집니다.
그림 2: 마우스 대동맥 동맥 및 마이크로 코네티컷으로 식별 해 부의 3 차원 재구성 A. 이것은 saccular 복 부 대동맥 동맥 그리고 대동맥 아치 동맥 류와 BAPN 처리 마우스의 대표 3 차원 재구성. B.이 패널 대표 BAPN 취급 마우스에서 흉부 대동맥 해 부를 내림차순으로 보여줍니다. True 및 false 루멘 내 플랩으로 구분 됩니다. 진실한 루멘 (TL)은 혈액의 정상적인 통로 이며 거짓 루멘 (FL) 새로 만든된 통로.
그림 3: 대동맥 직경에 BAPN 치료의 효과. 이러한 패널 표시 의미 부 축 선박 직경 BAPN 치료 및 BAPN 처리 남성 생쥐에서 마이크로-CT로 측정. 동맥 류를가지고 결정 그 생쥐는 빨간색으로 강조 표시 됩니다. 치료 그룹의 의미는 각 패널에 점선으로 표시 됩니다. 한. 이것은 오름차순 대동맥/아치 (AAo/아치); 0.93 ± 0.11 대 1.43 ± 0.56 m m; p = 0.023. b. 이것은 하강 흉부 대동맥 (DTA); 0.82 ± 0.04 대 1.11 ± 0.43 m m; p = 0.0817. c. 이것은 복 부 대동맥; 0.66 ± 0.11 대 0.89 ± 0.58 m m; p = 0.296. 모든 데이터는 평균 ± 표준 편차로 표시 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
| 없음 BAPN (n = 8) |
BAPN (n = 12) |
|
| 동맥으로 총 동물 | 0 | 6 * |
| 동맥 류의 총 수 | 0 | 10 |
| AAO/아치 | 0 | 5 |
| DTA | 0 | 3 |
| ABD 대동맥 | 0 | 2 |
표 1입니다. BAPN 치료 없이 남성 생쥐에서 확인 된 동맥 류의 해부학 분포. 이 표에서 동맥 류의 부각으로 마이크로-CT에 의해 식별 (n = 20). AAO 오름차순 대동맥; = DTA 흉부 대동맥; 내림차순 = ABD 대동맥 = 복 부 대동맥. p < 0.05.
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Discussion
마이크로-CT 영상 동물 모델에서 혈관 병 리의 매우 상세 하 고 3 차원 개조를 제공 하기 위해 사용할 수 있습니다. 혈관 내 대비 향상 된 미디어의 사용을 통해 향상 된 비 부드러운 조직, 혈관, 루멘 등 그는 강화에서 분화 수 있다. 레이저 도플러, microangiography, 자기 공명 혈관, confocal, 또는 두 광자 현미경으로 조직학 혈관 침대를 평가 하기 위해 사용 될 수 있습니다, 그리고 그들은 일반적으로 연구의 제한 된 영역에 초점 및 2 차원 평가로 제한 됩니다. 마이크로-CT 기본 신생 혈관 생물학의 이해에 도움이 될 수 있습니다 혈관 구조의 상세한 이미지를 얻기의 비용 효율적인 수단을 제공 합니다. 작은 동물을 이미징의 추가 방법에는 vivo에서 마이크로-CT 및 디지털 감산 혈관 포함 됩니다. 마찬가지로 여기서 설명 하는 기술, 마이크로-CT vivo에서 해상도 증가 시킬 exogenous 대비 에이전트에 의존 합니다. Fenestra VC 및 Isovue-370는 2 같은 혈액 풀 대비 에이전트입니다 마이크로-코네티컷 Fenestra VC 사용 되었습니다 그리고 대동맥 주입20다음 20 분에서에서 ~ 620 Hounsfield 단위 최대 의미의 향상을 보고 사용할 수 있습니다. 또한 다른 나노 입자 기반 조 영제 CT와 MRI에서 잠재적인 표시. 가슴 열지 않고 왼쪽된 심 실 catheterization 설명된21된 microimaging에 대 한 전체 마우스 관류의 또 다른 방법입니다. 혈관 직경의 경도 측정에 대 한 초음파 이미징 생존 연구에 사용할 수 있는 마지막 방법입니다.
이 절차 동안, 적절 한 관류 세부 사항에 주의의 고차를 요구 한다. 그것은 완전히 대조 대리인으로 관류 이전 exsanguinated 수를 맥 관 구조에 대 한 중요 한입니다. 간 희게 하지 않습니다 그것의 어두운 붉은 색을 유지 하는 경우 추가 heparinized 염 분 솔루션 홍 대조와 관류 전에 필요할 수 있습니다. 맥 관 구조의 불완전 한 exsanguination 또는 artifactual 말 초 혈관 않기는 맥 관 구조에 결함 작성으로 나타나는 최종 이미지 품질에 영향을 수 있습니다. 또한, 좌 심 실에 바늘의 삽입은 심 실 벽을 찢 어 또는 우 심 실을 통해 잘라 수 있는 섬세 한 절차입니다. 우 심 실에 바늘을 삽입 하는 경우 폐 신속 하 게 끼얹는다 것입니다 하 고 불완전 한 혈관 관류로 이어지는 관류 동안 일찍 노란색 바뀝니다. 혈관 파열은 불완전 한 관류 하는 최종 합병증 이다. 동맥 트리를 통해 관류 시작 전에 정 맥 순환에서 적절 한 배수 함으로써 혈관 파열의 기회를 최소화할 수 있습니다. 퇴행 성 주입 이전 이미지 관상 맥 관 구조11에 설명 되어 있는 관 침대를 perfusing 하는 대체 방법입니다. 그것은 더 정확 하 게 흉부 및 복 부 대동맥에 생리 혈을 나타냅니다로 관류 하는 antegrade 방법을 선택 했습니다. 마이크로-CT로 얻은 이미지의 품질 능력 평가 교내 혈전 또는 혈 종에 대 한 대동맥을 제한지 않습니다. 그러나, 부드러운 조직 코네티컷 프로토콜을 작성 하는 방법에 따라 아주 잘 구상 될 수 있다. 우리의 연구에 대 한 우리는 세그먼트 작성 intraluminal 혈전에서 stenoses 때문에 아마도 결함으로 대동맥의 것으로 나타났습니다. 으로 기술을 설명 하는 혈관 내 공간을 평가 적합 합니다.
요약,이 프로토콜에는 대동맥 동맥 해 부는 murine 모델의 맥 관 구조의 고해상도 검사를 위한 안전 기술을 제공합니다. 정량 분석은 마이크로-CT 이미지는 맥 관 구조의 정확한 캐스팅을 제공할 수 있습니다를 사용 하 여 쉽게 달성 수 있습니다. 이 책에서 설명 하는 실험의 목적을 위해 우리는 임상 연습에서 대동맥 동맥 류의 측정을 모방 하는 큰 대동맥 직경을 측정 하기로 결정 했다. 해부학와 슬라이스 위치 거리의 조합 필요한 경우 대동맥의 특정 세그먼트를 측정 하기 위해 활용할 수 있습니다. 그것은 또한 perfused 동물 맥 관 구조 몇 군데 하 고 디지털 주요 혈관 및 그것의 작은 말 초 분 지의 3 차원 표현 생성 하기 원하는 금액을 골격 배경에서 분리 수 있습니다 표시 됩니다. 이 프로토콜 파라핀에 포함 된 추가 검사에 대 한 조직학 단면에 사용 될 수 있는 관심의 혈관 조직 유지 합니다.
마이크로-CT는 혈관 생물학 연구를 위한 유망한 이미징 적임. 높은 공간 해상도, 그것은 구조, 조직 및 혈관의 병 리 평가 하는 기회를 제공 합니다. 이 원고에 설명 된 절차에는 여러 기술과 기법 등 동물 취급 및 준비, 이미지 수집, 결과의 정량화 필요 합니다. 이 문서는 성공적으로 쥐에 aortopathies를 식별 하기 위해 혈관 관류에의 한 응용 프로그램을 설명 했다. 다른 동물 모델 및 질병 과정에의 적용 가능성을 평가 하기 위해 추가 연구가 필요 합니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
우리는 방사선 영상으로 그의 지원에 대 한 마크 스미스에 게 감사 하 고 싶습니다. 이 작품은 NIH T32 그랜트 심혈 관 질환 (보아), 미국 심장 협회 (SMC), 및 NIH R35 그랜트 (DKS)에서 학 제 연구에 지원 됩니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microfil | Flow Tech, Inc | MV-122 | We use yellow, a different color can be ordered as desired. Kit includes MV-Compound, MV-Diluent, and MV-Curing Agent. |
| Heparin (1000 U/mL) | Sagent Pharmaceuticals | 25021-400-10 | |
| Phosphate buffered saline | Corning | 21-031-CV | |
| Isoflurane | Vet One, MWI | 502017 | |
| 3-Aminopropionitrile fumarate salt | Sigma-Aldrich | A3134 | |
| Single syringe pump | Fisher Scientific | 14-831-200 | |
| 27-gauge scalp vein set needle | Exel Int | 26709 | 27G x 3/4", 12" tube |
| Inveon Micro-CT scanner | Siemens Medical Solutions | ||
| Osirix MD | Pimxmeo SARL | Version 8.0.2 | |
| Inveon Research Workplace | Siemens Medical Solutions | Version 4.2 | |
| Rodent Chow | Harlan Teklad | 2018sx |
References
- Meszaros, I., et al. Epidemiology and clinicopathology of aortic dissection. CHEST. 117 (5), 1271-1278 (2000).
- Kochanek, K. D., et al. Deaths: final data for 2009. National Vital Statistics Reports. 60 (3), 1-116 (2011).
- Li, J. S., Li, H. Y., Wang, L., Zhang, L., Jing, Z. P. Comparison of beta-aminopropionitrile-induced aortic dissection model in rats by different administration and dosage. Vascular. 21 (5), 287-292 (2013).
- Huffman, M. D., Curci, J. A., Moore, G., Kerns, D. B., Starcher, B. C., Thompson, R. W. Functional importance of connective tissue repair during the development of experimental abdominal aortic aneurysms. Surgery. 128 (3), 429-438 (2000).
- Wu, D., Shen, Y. H., Russel, L., Coselii, J. S., LeMaire, S. A. Molecular mechanisms of thoracic aortic dissection. Journal of Surgical Research. 184 (2), 907-924 (2013).
- Bruel, A., Ortoft, G., Oxlund, H. Inhibition of cross-links in collagen is associated with reduced stiffness of the aorta in young rats. Atherosclerosis. 140 (1), 135-145 (1998).
- Martinez-Revelles, S., et al. Lysyl oxidase induces vascular oxidative stress and contributes to arterial stiffness and abnormal elastin structure in hypertension: Role of p38MAPK. Antioxidants & Redox Signaling. 27 (7), 379-397 (2017).
- Kumar, D., Trent, M. B., Boor, P. J. Allylamine and beta-aminopropionitrile induced aortic medial necrosis: Mechanisms of synergism. Toxicology. 125 (2-3), 107-115 (1998).
- Ren, W., et al. β-Aminopropionitrile monofumarate induces thoracic aortic dissection in C57BL/6 mice. Scientific Reports. 6, 28149 (2016).
- Kanematsu, Y., et al. Pharmacologically-induced thoracic and abdominal aortic aneurysms in mice. Hypertension. 55 (5), 1267-1274 (2010).
- Weyers, J. J., Carlson, D. D., Murry, C. E., Schwartz, S. M., Mahoney, W. M. Jr Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging. J Vis Exp. (60), e3740 (2012).
- Cortell, S. Silicone rubber for renal tubular injection. Journal of Applied Physics. 26 (1), 158-159 (1969).
- Bentley, M. D., Ortiz, M. C., Ritman, E. L., Romero, J. C. The use of microcomputed tomography to study microvasculature in small rodents. American Journal of Physiology - Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 282 (5), R1267-R1279 (2002).
- Marxen, M., et al. MicroCT scanner performance and considerations for vascular specimen imaging. Medical Physics. 31 (2), 305-313 (2004).
- Yang, J., Yu, L. X., Rennie, M. Y., Sled, J. G., Henkelman, R. M. Comparative structural and hemodynamic analysis of vascular trees. American Journal of Physiology - Heart and Circulatory Physiology. 298 (4), H1249-H1259 (2010).
- Jia, L. X., et al. Mechanical stretch-induced endoplasmic reticulum stress, apoptosis, and inflammation contribute to thoracic aortic aneurysm and dissection. The Journal of Pathology. 236 (3), 373-383 (2015).
- Kurihara, T., et al. Neutrophil-derived matrix metalloproteinase 9 triggers acute aortic dissection. Circulation. 126 (25), 3070-3080 (2012).
- Dillavou, E. D., Buck, D. G., Muluk, S. C., Makaroun, M. S. Two-dimensional versus three-dimensional CT scan for aortic measurement. Journal of Endovascular Therapy. 10 (3), 531-538 (2003).
- Muratoglu, S. C., et al. LRP1 protects the vasculature by regulating levels of connective tissue growth factor and HtrA1. Arterioclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33, 2137-2146 (2013).
- Badea, C. T., Dragova, M., Holdsworth, D. W., Johnson, G. A. In vivo small animal imaging using micro-CT and digital subtraction angiography. Phys Med Biol. 53 (19), R319-R350 (2008).
- Zhou, Y. Q., et al. Ultrasound-guided left-ventricular catheterization: A novel method of whole mouse perfusion for microimaging. Laboratory Investigation. 84, 385-389 (2004).
