Summary
Här beskriver vi ett förfarande för att testa den cell migration in vitro- med en automatiserad optisk kamera Mikroskop. Scratch analysen har använts allmänt om stängningen av scratch följs under en fastställd period. Det optiska mikroskopet ger pålitlig och billig detektering av cellmigration.
Abstract
Cellmigration är en viktig process som påverkar många aspekter av hälsa, såsom sårläkning och cancer, och det är därför avgörande för att utveckla metoder för att studera migreringen. Scratch analysen har länge varit den vanligaste in vitro- metoden att testa föreningar med anti - och pro - migration egenskaper på grund av dess låg kostnad och enkel procedur. Ett ofta rapporterade problem i analysen är dock ansamling av celler över kanten av scratch. Dessutom för att få data från analysen, måste bilder med olika exponeringar tas över en tidsperiod på exakt samma plats att jämföra förehavanden av migreringen. Olika analysprogram kan användas för att beskriva scratch nedläggningen, men de är arbetsintensivt, felaktig, och krafter cykler av temperaturförändringar. I denna studie visar vi en optimerad metod för att testa effekten migration, e.g. med de naturligt förekommande proteinerna mänskliga - och nötkreatur-Laktoferrin och deras N-terminala peptid Lactoferricin på raden epitelial cell HaCaT. En avgörande optimering är att tvätta och skrapa i PBS, vilket eliminerar nämnda ansamling av celler längs kanten. Detta kan förklaras genom avlägsnande av katjoner, som har visat sig ha en effekt på keratinocyter cell-cell-anslutning. För att säkerställa sann upptäckt av migration, lades förbehandlas med mitomycin C, en hämmare av DNA-syntes, till protokollet. Slutligen visar vi automatiserad optisk kameran, vilket eliminerar hög temperatur cykler, kroppsarbete med scratch stängning analys, samtidigt förbättra på reproducerbarhet och garanterar analys av identiska sektioner av scratch över tid.
Introduction
Migration är en viktig process som påverkar flera fysiologiska aspekter. Vid sårläkning underlättar migrering re epithelization av huden. I icke-läkande sår, till exempel kroniska sår, opportunistiska bakterier orsaka infektion i såret, och öppna sår är idealisk för bakterietillväxt och bildande av biofilm1,2. Biofilm är en av orsakerna till utvecklingen av resistenta bakterier, som är en av de största hoten mot vårt moderna samhälle3. Vid sårläkning, immuncellerna kan inte tränga igenom biofilmen. I cancer är migration av cancerceller ett avgörande steg för metastaser, vilket är den primära dödsorsaken för patienter med solida tumörer4,5. Därför är det avgörande att kunna studera migration.
Scratch analysen används ofta för att testa cellmigration eftersom det är billigt och enkelt att utföra på vidhäftande cellinjer, såsom fibroblast, endotelceller, och epitelceller linjer6,7. Idag finns flera metoder för att utföra repor8, och olika material har rapporterats till användas, inklusive tandpetare9, cell scrapers10, lasrar11och elektriska strömmar12. Alla metoder har olika för- och nackdelar, och metoden bör beslutas enligt verktyget cell typ, budget och analys. Som ett exempel, om används celltyp kräver beläggning, manuellt tryck borttagning, e.g. med en tandpetare eller pipetten spets, kommer att påverka migrationen inom området, en annan metod bör användas. I denna studie kommer vi att fokusera på manuell skrapning.
En nackdelen för manuell skrapning är variationen i storlek, former av repor och ansamling av cell på kanterna av scratch. Många protokoll finns, och ett högt citerade papper råder ökad hastighet och/eller grundlig tvätt efter klia13. Dessutom har flera metoder använts för att minimera spridning, eftersom spridningen av cellerna inte kan särskiljas från migration och därför kan ge falskt positiva resultat av migration. Några rapporterade metoder är serum svält föregående scratch14 och minska mängden serum15. Ingen av dessa metoder kan dock se till att det finns ingen spridning. Vi redovisar därför en förbehandling av cellerna med mitomycin C att säkerställa sann resultat av migration. Mitomycin C är ett antibiotikum som hämmar DNA-syntes genom att bilda en kovalent bindning med DNA, vilket förhindrar att separera16i DNA. Genom förbehandlas med mitomycin C och tvätta med PBS innan repor, visar detekterade stängningen av klyftan sant migration av cellerna (figur 1).
Ett kännetecken av alla metoder är behovet av ett system för att analysera processen för migration17. En gemensam och en billig metod att analysera framsteg är att använda en ljus-fält Mikroskop för att ta bilder av scratch vid förutbestämda tidpunkter, följt av en analys av stängningen av klyftan i en bild programvara18,19. Denna metod är tidskrävande, opålitliga när det gäller att ta bilder på samma plats och fokus, och rörelsen från inkubatorn till kamera tvingar cykler av temperaturförändringar medan bilderna är tagna. Andra metoder har utvecklats för att upptäcka migration genom att mäta strömflödet. Aktuella ändringar, som celler täcka mer utrymme på plattan, som läses som en ökning i impedans20. Genom att mäta impedans, miljön i cellerna påverkas inte, och därför anses vara icke-invasiv. Denna metod förlitar sig på specialiserade plattor med guld elektroder, som är dyra, men de möjliggör detektering av många processer, såsom cellulär följsamhet, spridning, migration och celldöd. En stor nackdel med denna metod är att impedans mätningen inte tyder på direkt migrering, eftersom faktorer som temperatur har en stor inverkan på impedans. Förändringar i impedans kan orsakas av flera faktorer som inte granskas av mjukvaran, försvårar analysen av data. Bristen på visualisering kräver därför en konventionell ljusmikroskop att kontrollera migration.
För att övervinna många av nackdelar av tillgängliga teknik, använder vi en realtid automatiserad optisk kamera. Optiska kameran är ett system för upptäckt med ett högt dataflöde Mikroskop i en liten plattform med en lins, belysning enhet och en digitalkamera. Den har en inbyggd programvara, som kan testa migration och spridning bland annat. För att upptäcka migration, används två algoritmer för att analysera tillväxt och migration kineticsen av celler, som kallas spridning och de sårläkning analys, respektive. Spridning analysen är baserad på en två-stegs bild segmentering algoritm som gäller textur analys för att upptäcka skillnaden mellan cell-täckt områden (visas i gult), tom bakgrund områden av avancerade histogram analys. De sårläkning analys bygger på en tre-stegs-algoritm som upptäcker den cell enskiktslager, lokaliserar såret klyftan och bestämmer mellanrummet. Här bedrivs vid användarstyrda tidpunkter och data presenteras som täckt område, mellanrummet och gap område. En av de stora fördelarna med denna maskin är att det möjliggör avbildning av vidhäftande celler genom vätska på grund av vinkeln på kameran21. Lenstakes lutas kamerabilderna som projiceras till en z-stack på en enda z-plan generera för att säkerställa att bilder är i fokus (figur 2). z-stackar genereras genom en sammanslagning av serien av bilder (t.ex. 40) tagna vinkelrätt till såret kanten, och över hela såret. Z-stackarna kan fånga av djupet av det cell-lagret samt ett i-fokus planet över såret. Dessutom kan serien bilder sättas ihop till en videosamling i bilderna, med en knapptryckning.
Vi visar ett optimerat protokoll för upptäckt av migration i keratinocyter cell linje HaCaT. Vi testade Laktoferrin och dess N-terminala peptid, Lactoferricin, från människor och kor, för att analysera deras effekt på migration som dessa molekyler har visat sig ha många tillämpningar som antimikrobiella och immunförsvaret modulerande molekyler22 , 23. de fyra föreningarna var jämfört med obehandlade HaCaT celler och epidermal tillväxtfaktor (EGF) användes som en positiv kontroll.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Den experimentella setup har inga etiska och juridiska restriktioner och genomfördes i samförstånd med Roskilde universitet. En översikt över experimentella set-up kan ses i figur 1 och mekanismerna för optisk kameran i figur 2.
1. beredning
- Utföra alla steg i en steril laminärt flöde-bänk av rengöring bänken och alla utrustning med 70% etanol före starten av experimentet.
- Placera optisk kameran i en konventionell inkubator vid 37 ° C med 5% CO2 att säkerställa optimala villkor för cellerna.
- Växa HaCaT celler DMEM medier med 10% FBS och 1 x antibiotika (penicillin och streptomycin) i en T75 kolv.
- Använd 1 mL 1 x trypsin att lossa cellerna och sub odla dem var 3-4 dagar, genom att sprida det över det cellulära lagret. Förvärm till rumstemperatur före användning.
2. generera en enskiktslager av HaCaT celler i en 48-wells mikrotiterplattan
- Ta bort mediet från T75 kolven med en Pasteur-pipett.
- Tvätta vidhäftande cellerna i kolven genom att tillsätta 5 mL 1 x steril fosfatbuffrad Koksaltlösning till T75 kolven.
Obs: Säkerställa att PBS är fria av kalcium och magnesium. - Cirkulera PBS och ta bort det med en Pasteur-pipett.
- Upprepa steg 2.2 – 2.3.
- Tillsätt 1 mL 1 x trypsin till kolven och skingra det över det cell-lagret.
- Inkubera kolven vid 37 ° C i en konventionell inkubator tills cellerna är fristående (5-8 min räcker för de flesta cellinjer).
- Visa under mikroskopet om cellerna är fristående. När cellerna är fristående, lägga till 9 mL av den vanliga odlingsmedier med 10% FBS att inaktivera den 1 x trypsin.
- Räkna cellen med antingen en hemocytometer, en coulter-counter eller liknande.
Obs: Trypan blå kan användas för att Visa döda celler. Dock i 1 x trypsin HaCaT är celler perfekt runda när levande. - Överföra 7,5 x 104 celler per brunn i 250 µL 10% FBS media till en rundkolv 48-väl vävnadsodling tallrik (Kantbockade).
Obs: Assay kan också ställas in i 6-, 12-, 24- eller 96 brunnar pläterar, som alla kan analyseras under det optiska mikroskopet. - Flytta försiktigt plattan från sida till sida för att säkerställa cellerna sprids lika i brunnarna eller cellerna samlas i mitten av brunnarna. Inspektera under ett ljusmikroskop kontrollera cellen sprids jämnt i media
- Satte plattan i en konventionell CO2 inkubator vid 37 ° C över natten eller tills cellerna har anslutit sig till botten av brunnarna.
3. tillägg av Stimuli för Migration effekter
- Kontrollera om brunnarna är 90-95% konfluenta under ett ljusmikroskop.
- Förbereda 10 µg/mL mitomycin C i en lämplig mängd medium.
Obs: I denna studie förvaras Mitomycin C vid 4 ° C i en stamlösning 1 mg/ml. Mitomycin C i lösning kan förvaras upp till en vecka i mörker vid 2-8 ° C. - Ta bort det förbrukade mediet med en Pasteur-pipett från varje brunn.
- Tillsätt 250 µL 5 µg/mL mitomycin C till varje brunn.
- Inkubera plattan för 2 h vid 37 ° C och 5% CO2.
- Förbereda stimuli av peptider genom att späda ut dem i en lagom mängd av medlet.
Obs: I denna studie testades både mänskliga och bovin Laktoferrin och Lactoferricin på 25 µg/mL i en volym på 250 µL - Ta bort mediet med mitomycin C med en Pasteur-pipett.
- Tvätta brunnarna 1 x med 250 µL av 1 x PBS (rumstemperatur) och ta bort tvätten med en Pasteur-pipett.
- Tillsätt 250 µL av 1 x PBS och manuellt skrapa brunnarna vertikalt med en 200 µL pipettspetsen. Använd en ny pipettspetsen för varje brunn.
- Ta bort PBS och tillsätt 250 µL peptid stimuli.
- Montera plattan i optisk kamerasystem genom att justera skruvarna på båda sidor av plattan. Lämna locket på mikrotiterplattan.
Obs: Kameran kan fungera med locket öppet vid behov.
4. ställa in programmet för optisk kamera på datorn
- Klicka på Skaffa i Aktivitetsfältet på vänster.
- Välja funktionen sårläkning i Aktivitetsfältet på vänster.
- Välj den plattan genom att klicka nedan plattan illustration.
- Osjälvisk brunnar, inte i användning, genom att markera dem och klicka på Aktivera på övre vänstra sidan på skärmen.
Obs: Alla brunnar är markerade som standard. - Justera fokus för linsen på brunnarna att passa positionen för cellerna genom att högerklicka på en av brunnarna.
Obs: Autofokus kan också justeras manuellt genom att flytta fältet till höger om bilden plattan. - Ange tidsperioden för bilder under Bild-intervallet (t.ex. (00: 30:00)).
- Ange antal upprepningar att passa den önskade perioden (t.ex. 97 repetitioner).
- Börja kör genom att klicka på Start -knappen i det nedre högra hörnet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
HaCaT är en keratinocyter cellinje, en av de vanligast förekommande typerna av celler i huden. När ett sår uppstår, börja hudceller föröka sig och migrera över till såret sängen att stänga såret (figur 3). Båda processerna är därför av yttersta vikt för korrekt läkning.
Optiska kameran kan följa båda processer i realtid. För migration, systemet ger tre datauppsättningar: cell omfattas området, mellanrummet och gap område. När övervakning repor behandlats med Laktoferrin, Lactoferricin eller EGF, tillåter det optiska mikroskopet oss att övervaka dessa tre parametrar över tid. Efter 48 h inkubation observerar vi att EGF har resulterat i 95% stängning av såret, jämfört med 38% stängningen av den obehandlade kontrollen (figur 3A). De olika versionerna av Laktoferrin och Lactoferricin placeras mellan 33% och 62% sårslutning med Peptiderna är mer potent än de överordnade proteinerna. Procentandelen av sårslutning, utifrån förändringar i mellanrummet från inledande scratch, kan också vara ritade (figur 3B).
HaCaT celler har en stark cell-cell interaktioner och när cellerna migrerar, serie steg krävs24. Inom kort, de ledande cellerna störa deras webbplats av vidhäftning, sticker ut och kontrakt cytoskelettet flytta25. Den utskjutande delen av ledande cellerna kan lätt ses med kamerans optiska (figur 4).
Figur 1 : Schematisk flödesschema scratch analysens att testa migration på en optisk kamera. HaCaT celler är pläterade på en 48-well platta och tillåtna att följa för 24 h. Cellerna är förbehandlade med mitomycin C för 2 h att hämma spridning och scratch är utfört och följde genom tillsats av peptid stimuli. Plattan är isatt i enheten av kamerans optiska och migration följs för 48 h.
Figur 2 : Den scanning tekniken för optisk kameran. Optisk lins enheten för automatiserad optisk kameran vinklas 6,25 ° mot horisontalplanet att aktivera skanning genom olika lösningar såsom bakteriell och cellulära lösningar. De förvärvade serierna bilder innehåller bildstaplar av alla fokuserar, både out-of-fokus och i fokus, att säkerställa bilder med celler i-fokus. Modifierad från26.
Figur 3 : Migration av förbehandlade mitomycin C HaCaT celler över 48 timmar. (A) Migration upptäcks på automatiserad optisk kameran varje halvtimme för 48 h. Cellerna är förbehandlade med mitomycin C att hämma spridning. Cellerna är behandlade med 25 µg/mL human - eller nötkreatur-Laktoferrin (H-LF eller B-LF) eller - Lactoferricin (H-LFcin, B-LFcin). Epitelial tillväxtfaktor (EGF) används som en positiv kontroll vid 500 ng/mL. Obehandlade HaCaT celler används som en kontroll. (B) grafisk illustration av migration av behandlingar. Resultaten är företrädare för tre oberoende körningar, och resultaten anges som en procentsats nedläggning av inledande scratch * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001.
Figur 4 : Utskjutande lamellipodia av behandlade HaCaT celler. Lamellipodia av HaCaT celler markeras av de svarta pilarna. Stark cell-cell växelverkan av HaCaT resulterar i dynamisk rörelse av celler som de migrera och lätt kan observeras över tid.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vikten av migration i studier av utveckling, sårläkning, immunologi och cancer har lett till flera olika metoder att studera migration. Migration kan antingen vara ett uttryck för expansion eller nedläggning av klyftan av celler. Oftast stängning av scratch testas, eftersom det är lättare att odla cellerna i en enskiktslager och sedan göra en repa än växer cellerna i ett visst formulär8. Vår studie visar en optimerad metod för manuell avlysningen, eftersom tekniken är lätt att bemästra och låg kostnad. Vi introducerade den DNA syntesen hämmare mitomycin C, en extra tvätta att optimera scratch jämfört publicerade metoder18, och användningen av en optisk kamera som tillåter hög genomströmning studier.
In vitro- scratch analysen kräver en vidhäftande cellinje som binder ordentligt till botten av brunnarna och upptäcka migration över en repa, spridning måste hämmas. Dessa två funktioner som är viktiga för analysen. För att upptäcka sann migration, har flera metoder beskrivits sänker serumkoncentrationen, svältande cellen innan repor14, DMSO eller olika hämmare 13,27. I allmänhet ett serumfritt medium kan användas, dock några cellinjer, såsom primär cellinjer, behovet av serum för rörelsen och den totala överlevnaden. Valet bör därför göras enligt den cell-linjen. Cellinjer som kräver beläggning kan vara problematiskt i denna analys, eftersom manuell repor kommer att störa beläggning också.
Olika celltyper kräver olika antal celler att bilda en konfluenta enskiktslager beroende på deras storlek och tillväxt. HaCaT celler följer efter cirka 4-6 h men är kvar att bosätta sig under natten för att göra en stabil enskiktslager. En av de stora nackdelarna med scratch analysen är oregelbunden repor8. I den här studien visar vi att före tvättning med PBS och göra scratch i nya PBS minskar ansamlingar av sårade och skadade celler längs kanterna av scratch. Detta kan rimligen förklaras av desmosomes korsningen ansluta cellerna i huden. Korsningar är Ca2 +-beroende24 och med hjälp av PBS, cationsna tas bort, som skulle kunna försvaga den starka cell-cell-adhesionen. Därmed, kan användning av PBS möjliggöra bättre borttagning av celler individuellt, leder till mindre ansamling av celler längs såret kanten. Dessutom optiska kameran mäter en bred del av brunnarna i alla platta storlekar och anpassar sig till bents i scratch via sin tre steg algoritm. Genom förtvätt med PBS och använda kamerans optiska, elimineras därmed, nackdelarna med manuell repor. Z-stapling av bilder gör med fokus på cellerna som är mer precisa, men beroende på hur olika celltyper växa, fokus kan vara ett problem. Om cellerna växer alltför mycket, flyttas fokus i kameran från i-fokus till out-of-fokus. Således, om mitomycin C inte används, kan det vara fördelaktigt att ställa in fokus lite högre om ditt experiment kommer att köras i mer än 24 timmar. Optiska kameran har en enkel set-up som drivs via en vanlig dator med en intuitiv programvara som kan mäta plattor från 6 - till 96-väl mikrotiter plattor och därför möjliggör olika test uppställningar. När du väljer antalet bilder tas, finns några begränsningar. Om en plattan med 96 brunnar används, är antalet bilder som man kan få bara begränsat till utrymme på datorn, som data-set kan bli stora, och hastigheten på kameran. Om många bilder krävs i en snabb följd, förflyttning av kameran kan vara en begränsande faktor, som behöver tid att skanna varje väl.
Det optiska systemet möjliggör enkla men kraftfulla övervakning. Bilder på scratch analyseras avseende processen för stängningen av klyftan men kan också användas för morfologisk karakterisering av cellerna. Programvaran markerar cellerna gul och lämnar bakgrundsfärgen grå som standardfunktion, bättre visualisera såret kanten, men raw-bilder uppenbarligen finns tillgängliga bör som behövs för t.ex. publikationer. HaCaT celler har stark cell-cell interaktioner som gör migreringen sker i en dynamisk blad28. Denna funktion gör det lätt att se lamellipodia migrerar celler över tiden (figur 4).
Denna studie visar effekten av proteinerna Laktoferrin och deras härledda N-terminala peptider Lactoferricin och EGF som positiv kontroll, men kan ändras för att testa olika läkemedel, peptider/proteiner och kombinationer, som hämmare eller stimulatorer av sårläkning. Scratch analysen kan ändras och optimerad för att passa olika cellinjer och föreningar som kan påverkar migration. Tillsammans med dess låg kostnad och enkel hanterbarhet är denna analys mycket lättillgängligt för de flesta laboratorier. Optiska kameran kunde användas för att testa olika läkemedel, hämmare eller stimulatorer för migration, men också spridning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Danska rådet för oberoende forskning, teknik och produktion, bevilja #4005-00029
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| oCelloScope | BioSense Solution ApS | Optical camera | |
| UniExplorer software | BioSense Solution ApS | (8.0.0.7144 (RL3)) | |
| HaCaT cell | Donated from Bispebjerg Hospital | ||
| DMEM (1x) + GlutaMAX | Gibco | 31966-021 | Medium for HaCaT |
| FBS | Gibco | 10270 | Fetal bovine serum |
| PBS | Gibco | D837 | Without Mg+ and Ca2+ |
| Pencillin-Streptomycin | Sigma | P0781 | Antibiotics |
| Trypsin (10x) | Sigma | T3924 | |
| Mitomycin C | Tocris | 3258 | Inhibits proliferation |
| Microtiter plate | Greiner Bio-one | 677 180 | |
| Incubator | Panasonic | 37°C, 5% CO2 | |
| Hemocytometer | Assistent | Türk (0.1 mm) | |
| Pipet boy | Accu-Jet pro |
References
- Frykberg, R. G., Banks, J.
- da Silva, L., Carvalho, E., Cruz, M. T. Role of neuropeptides in skin inflammation and its involvement in diabetic wound healing. Expert opinion on biological therapy. 10 (10), 1427-1439 (2010).
- Vyas, K. S., Wong, L. K. Detection of Biofilm in Wounds as an Early Indicator for Risk for Tissue Infection and Wound Chronicity. Annals of Plastic Surgery. 76 (1), 127-131 (2016).
- Paul, C. D., Mistriotis, P., Konstantopoulos, K. Cancer cell motility: lessons from migration in confined spaces. Nature Reviews Cancer. 17 (2), 131-140 (2016).
- Folkman, J.
- Monsuur, H. N., et al. Methods to study differences in cell mobility during skin wound healing in vitro. Journal of Biomechanics. 49 (8), 1381-1387 (2016).
- Tang, L., et al. Human lactoferrin stimulates skin keratinocyte function and wound re-epithelialization. The British journal of dermatology. 163 (1), 38-47 (2010).
- Ashby, W. J., Zijlstra, A. Established and novel methods of interrogating two-dimensional cell migration. Integrative Biology. 4 (11), 1338-1350 (2012).
- Klettner, A., Tahmaz, N., Dithmer, M., Richert, E., Roider, J. Effects of aflibercept on primary RPE cells: toxicity, wound healing, uptake and phagocytosis. British Journal of Ophthalmology. 98 (10), 1448-1452 (2014).
- Doyle, W., Shide, E., Thapa, S., Chandrasekaran, V. The effects of energy beverages on cultured cells. Food and Chemical Toxicology. 50 (10), 3759-3768 (2012).
- Zordan, M. D., Mill, C. P., Riese, D. J., Leary, J. F. A high throughput, interactive imaging, bright-field wound healing assay. Cytometry Part A. 79 (3), 227-232 (2011).
- Keese, C. R., Wegener, J., Walker, S. R., Giaever, I. Electrical wound-healing assay for cells in vitro. Proceedings of the National Academy of Sciences. 101 (6), 1554-1559 (2004).
- Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nature Protocols. 2 (2), 329-333 (2007).
- Räsänen, K., Vaheri, A. TGF-beta1 causes epithelial-mesenchymal transition in HaCaT derivatives, but induces expression of COX-2 and migration only in benign, not in malignant keratinocytes. Journal of Dermatological Science. 58 (2), 97-104 (2010).
- Tochio, T., Tanaka, H., Nakata, S., Hosoya, H. Fructose-1,6-bisphosphate aldolase A is involved in HaCaT cell migration by inducing lamellipodia formation. Journal of Dermatological Science. 58 (2), 123-129 (2010).
- Tomasz, M. Mitomycin C: small, fast and deadly (but very selective). Chemistry and Biology. 2 (9), 575-579 (1995).
- Stamm, A., Reimers, K., Strauß, S., Vogt, P., Scheper, T., Pepelanova, I. In vitro wound healing assays - state of the art. BioNanoMaterials. 17 (1-2), 79-87 (2016).
- Justus, C. R., Leffler, N., Ruiz-Echevarria, M., Yang, L. V. In vitro Cell Migration and Invasion Assays. Journal of Visualized Experiments. (88), 1-8 (2014).
- Jonkman, J. E. N., et al. An introduction to the wound healing assay using live-cell microscopy. Cell Adhesion & Migration. 8 (5), 440-451 (2016).
- Hong, J., Kandasamy, K., Marimuthu, M., Choi, C. S., Kim, S. Electrical cell-substrate impedance sensing as a non-invasive tool for cancer cell study. The Analyst. 136 (2), 237-245 (2011).
- Fredborg, M., et al. Real-time optical antimicrobial susceptibility testing. Journal of Clinical Microbiology. 51 (7), 2047-2053 (2013).
- Jenssen, H. Anti herpes simplex virus activity of lactoferrin/lactoferricin - An example of antiviral activity of antimicrobial protein/peptide. Cellular and Molecular Life Sciences. 62 (24), 3002-3013 (2005).
- Jenssen, H., Hancock, R. E. W.
- Delva, E., Tucker, D. K., Kowalczyk, A. P.
- Ponti, A. Two Distinct Actin Networks Drive the Protrusion of Migrating Cells. Science. 305 (5691), 1782-1786 (2004).
- Canali, C., Spillum, E., Valvik, M., Agersnap, N., Olesen, T. Whitepaper a Digital Time-Lapse Bright Field Technology To Drive Faster, Higher Throughput Bioanalysis. , (2016).
- Peplow, P. V., Chatterjee, M. P. A review of the influence of growth factors and cytokines in in vitro human keratinocyte migration. Cytokine. 62 (1), 1-21 (2013).
- Ilina, O., Friedl, P. Mechanisms of collective cell migration at a glance. Journal of Cell Science. 122 (18), 3203-3208 (2009).
