Summary
Osteoartrose do joelho é frequentemente visto no departamento de Ortopedia. Apresentamos em detalhe o processo de tratamento de osteoartrite do joelho inteiro com injeção de plasma rico em plaquetas, incluindo preparação, procedimentos e avaliação.
Abstract
Osteoartrose do joelho (KOA) é uma das doenças mais frequentemente encontradas no departamento de Ortopedia. Tratamentos não-cirúrgicos existentes têm um efeito limitado sobre a reparação da cartilagem e regeneração óssea. Plasma rico em plaquetas (PRP) é uma substância autóloga Bioativo que pode reparar a lesão da cartilagem e acelerar a regeneração óssea efetivamente. No entanto, relatórios de protocolos de preparação PRP em estudos clínicos é altamente inconsistente, com a maioria dos estudos, fornecendo informações suficientes para permitir que o protocolo a ser reproduzida. Nós descrevemos um método reproduzível de preparação PRP visualmente, o tratamento de KOA usando injeção intra-articular de PRP e métodos de avaliação do resultado. PRP foi preparado usando manual dupla centrifugação. A camada PRP foi extraída do sangue periférico e usada para injeção de cavidade articular do joelho. Avaliações incluíram avaliações das concentrações de plaquetas do sangue e os resultados clínicos. Preparação do PRP por centrifugação manual requer menos aparelhos e é menos dispendiosa do que o plasma filtração ou centrifugação utilizando equipamentos. O tempo de centrifugação do nosso método de dupla centrifugação foi 6 e 5 minutos para os respectivos centrifugações às forças de 800 e 1400 x g, respectivamente permitir a elaboração consistente de PRP padronizado. No entanto, um método manual é suscetível a erros do operador, e preparação do lote PRP não está disponível. Injeção intra-articular de PRP provou para ser um tratamento eficaz para a osteoartrose do joelho. O procedimento de tratamento inteiro levou menos de 30 minutos, a concentração de sangue plaquetas de PRP pode ser padronizada e tratamento foi provado para ser eficaz quando avaliada pelo acompanhamento.
Introduction
Osteoartrose do joelho (KOA) é uma das doenças mais frequentemente vistas no departamento de Ortopedia; 30% - 50% das pessoas com idade superior a 65 anos de experiência nesta doença1. Atualmente, o tratamento conservador de KOA inclui principalmente a administração oral de drogas antiinflamatórias não-esteroides e drogas nutrientes de cartilagem, a injeção intra-articular de hialuronato de sódio e fisioterapia. No entanto, esses métodos não podem parar o processo de degeneração articular de joelho2. Defeitos da cartilagem articular podem causar um desgaste da superfície articular, instabilidade articular e alterações metabólicas, que são parte da patogênese de KOA3. No entanto, devido à ausência de vasos sanguíneos, nervos e tecido linfoide na cartilagem articular, a recuperação após o dano é difícil. Um método eficaz de reparação da cartilagem é especialmente importante para o tratamento de KOA. O tratamento da osteoclasia também é um foco importante no tratamento de KOA.
Plasma rico em plaquetas (PRP) é uma substância Bioativo autóloga, e a aplicação de PRP para problemas de ossos e articulação está sendo cada vez mais estudada. A justificativa biológica para o uso clínico de PRP inclui seu efeito sobre a entrega local de fatores de crescimento e modificação da resposta inflamatória e seus efeitos positivos no4, de proliferação e diferenciação celular. Após a ativação após injeção intra-articular, PRP libera α-grânulo através da degranulação e segrega vários fatores de crescimento, incluindo o fator de crescimento derivado de plaquetas, o fator de crescimento transformador-β, o fator de crescimento semelhante à insulina, o fator de crescimento epidérmico, o fator de crescimento vascular endotelial e o fator de crescimento. Estas promover proliferação osteoblástica e condrócitos, inibir a degeneração da cartilagem, reforçar a estabilidade do osso da cartilagem e subcondral, regular o inibidor de tecido de expressão do gene da metaloproteinase e manter o equilíbrio entre a síntese e degradação de proteoglicanos5,6. Portanto, PRP pode reparar a lesão da cartilagem e acelerar a regeneração óssea.
O resultado da injeção de PRP é influenciado por vários fatores, incluindo o local de amostragem7, o tipo de centrífuga preparação método8e o uso de anticoagulantes9 e ativadores10. Há aproximadamente 3 tipos métodos centrífugas para preparar o PRP. Centrifugação manual, centrifugação com base em equipamentos ou técnicas de filtração do plasma estão disponíveis, embora métodos manuais e baseados em equipamentos são os mais comumente usados. O método manual requer menos equipamento, é conveniente, é de baixo custo e é simples de executar (Figura 1). PRP é preparado por desempenho de centrifugação manual duas vezes. Anticoagulante e sangue periférico misto são centrifugados para separar hemócitos de plasma e plaquetas sanguíneas. Depois de eliminar os glóbulos vermelhos na camada inferior, o líquido sobrenadante é centrifugado para re-separação, dividindo-a em sobrenadante plasma pobre em plaquetas PRP médio e residuais subnatant células vermelhas do sangue. A camada média é usada para a injeção da cavidade articular do joelho (se a quantidade é insuficiente, parte do sobrenadante pode ser desenhado). Avaliações do método incluem avaliações de concentração de plaquetas do sangue e os resultados clínicos.
O relato de protocolos de preparação PRP em estudos clínicos é altamente inconsistente, e a maioria dos estudos não fornecem informações suficientes para permitir que o protocolo para ser reproduzido11. Aqui, descrevemos um método reprodutível de preparação PRP e tratamento de KOA com injeção intra-articular do PRP, com avaliação do resultado. Critérios de inclusão foram pacientes com osteoartrose do joelho que têm alívio da dor pobre para medicamento analgésico simples (como o paracetamol) e tratamento conservador. Critérios de exclusão foram pacientes com distúrbio de drenagem linfática ou retorno venoso; pacientes com infecções de articulação de joelho; pacientes com Dermatose ou infecção na área da injeção; pacientes com febre; pacientes com anormalidade da função coagulante; pacientes com doença cardiovascular grave. O procedimento de tratamento todo leva menos de 30 minutos, e a concentração de sangue plaquetas de PRP é comprovada para alcançar uma medida padronizada. Sua eficácia é demonstrada através da avaliação dos resultados durante o seguimento de perto.
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Protocol
Os métodos descritos foram aprovados pela Comissão ética do Hospital Geral de Guangdong.
1. obter PRP por centrifugação Manual
- Preparar o paciente em posição supina em uma sala de cirurgia estéril fluxo laminar com uma confortável sala de temperatura e umidade: temperatura é de 22 ° C e umidade do quarto é de 60%.
- Use uma seringa de 1 mL para desenhar 0,2 mL de heparina de sódio (2 mL = 12.500 U) e em seguida umedeça uma seringa de 50 mL.
Nota: 3 mL de citrato de sódio também é típico nesta etapa para substituir o sódio de heparina. - Equipar um torniquete, esterilizar o cotovelo 2 - 3 vezes e usar a seringa de 50 mL a úmido para retirar a veia de cotovelo 30 mL de sangue periférico.
- Realize a primeira centrifugação.
- Divida o sangue periférico igualmente em dois tubos de centrífuga estéril de 50 mL.
- Colocar dois tubos em rotores horizontais na centrífuga, sob condições assépticas.
- Centrífuga para 6 minutos a 800 x g.
- Levar os rotores horizontais para fora, desgaste luvas estéreis e tirar os tubos de centrífuga.
- Observe as estratificações para certificar-se de que o sangue periférico é estratificado em duas camadas.
- Use uma seringa de 10 mL limpa para coletar o líquido sobrenadante destes tubos de centrífuga de dois para um tubo de centrifugação limpo.
- Realize a segunda centrifugação.
- Use uma seringa de 10 mL limpa para adicionar uma quantidade equivalente de água estéril ou solução salina normal para outro tubo de centrifugação limpo para o equilíbrio. Colocar os tubos nos rotores horizontais. Marque-o um com o líquido da camada sobrenadante por Emplastro adesivo.
- Centrifugue por 5 minutos a 1400 x g.
- Pegue os rotores horizontais para fora, e observando as estratificações verificar que o líquido do tubo marcado é dividido em três camadas.
- Use uma seringa de 10 mL para retirar a camada de células granulares médio (rico em leucócitos, PRP layer) e a camada inferior do sobrenadante de 4 mL de líquido. Se a quantidade de camada média é suficiente, apenas retire 4 mL isso.
- Coloque 0,4 mL do líquido em um tubo estéril de anticoagulante (EDTA de2K, 3,6 mg) para avaliação, deixando 3,6 mL de líquido remanescente na seringa.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui.
2. intra-articular de PRP
- Deixe a paciente em decúbito dorsal na mesa de operações de mentira e dobrar o joelho a 90 graus.
- Localize o local de punção na margem inferior da patela e 1cm de ligamento patelar lateral. Use uma caneta para marcar o local.
- Realizar esterilização de pele no local de punção, três vezes com anerdian III, luvas estéreis e cubra com uma toalha-buraco asséptica.
- Coloque a seringa paralela ao planalto tibial e em seguida, executar a punção em ângulo de 45 graus. Introduza completamente a agulha na pele.
- Injete a 3,6 mL de PRP da seringa para a cavidade articular do joelho.
- Cobrir a posição de punção com gaze estéril e corrigi-lo com Emplastro adesivo.
- Aplique pressão sobre o ferimento por 10 minutos. Observe para qualquer reação adversa grave durante 30 minutos.
- Administre um total de três injeções em intervalos mensais.
Nota: O protocolo pode ser pausado aqui.
3. no pós-operatório avaliação da injeção de PRP
- Avalie a concentração de plaquetas no PRP.
- Use o 0,4 mL de PRP do tubo de anticoagulação (K2EDTA, 3,6 mg).
- Analise a concentração de plaquetas do sangue do PRP usando um analisador automático de células sanguíneas.
- Avalie o resultado pós-operatório da injeção PRP.
- Com uma consulta 1 dia antes de cada um dos três tratamentos, conduta mais acompanhar paciente 1 dia depois de cada tratamento, 3 dias após cada tratamento, 1 semana após cada tratamento, 1 mês após o terceiro tratamento, 3 meses após o terceiro tratamento e 6 meses após o terceiro tratamento.
- Use uma escala análoga visual (VAS), o Western Ontario e McMaster universidades osteoartrite Index (WOMAC), joelho sociedade Pontuação (KSS) e escala funcional do joelho Lysholm para avaliar o efeito no pós-operatório.
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Representative Results
Como resultado, as plaquetas contagem do PRP atingiu uma concentração padrão nível de 1121 x 103/µL. Realizamos os 15 inquéritos de seguimento descritos no protocolo de um paciente masculino de 55 anos com início KOA. Era óbvio que esse resultado clínico precoce foi satisfatório após a administração intra-articular de PRP (Figura 2). No entanto, a eficácia de médio prazo foi ligeiramente inferior. Um efeito analgésico marcadamente significativo foi observado (Figura 2A). Pontuação de joelho KSS foi superior a função KSS Pontuação (Figura 2 C, Figura 2D), o que significava que o efeito do PRP sobre sintomas subjetivos foi melhor do que sobre os sintomas da objetivos. O golo de escala funcional de joelho Lysholm indicou que o nosso método tinha um efeito probatório na melhoria da lesão da cartilagem e sintomas de lesão de tecidos moles (Figura 2E). Em geral, os efeitos terapêuticos do nosso protocolo PRP eram notáveis.
Figura 1 : Fluxograma do projeto protocolo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2 : Avaliação do resultado pós-operatório da injeção de PRP. Avaliação dos resultados clínicos por VAS (A), (B) de WOMAC, KSS (C, D) e Lysholm joelho funcional escala (E). KSS fornece joelho marcar (dor, mobilidade e estabilidade, C) e a função de Pontuação (pouca atividade de habilidade e da escada, D). Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
A concentração de plaquetas no sangue humano normal é entre 150.000 / µ l e 350.000 / µ l, e acredita-se amplamente que plaquetários concentração de PRP deve alcançar 1.000.000 / µ l, que é de 3 a 5 vezes concentrações normal9. De acordo com o sistema de hierarquia de pata, acredita-se que o PRP não tem nenhum efeito óbvio quando a concentração de plaquetas do sangue é inferior a três vezes a concentração normal, enquanto o PRP tem um efeito inibidor quando sua concentração de plaquetas do sangue é mais do que seis vezes a concentração normal de12. Portanto, um requisito mínimo para este protocolo é que a concentração de sangue plaquetas de PRP é entre estes níveis.
Preparação de PRP manual pode ser alcançada por uma centrifugação única ou com duas rodadas de centrifugação. Devido os parâmetros diferentes de centrífuga, a qualidade do PRP obtido difere entre as duas técnicas. As concentrações de plaquetas do sangue obtidas através da centrifugação única são baixas, mas o PRP não contém glóbulos brancos e vermelhos. As concentrações de plaquetas do sangue obtidas através da centrifugação dupla são elevadas, e o PRP normalmente contém uma pequena quantidade de células brancas do sangue e de glóbulos vermelhos até13. Se a existência de células brancas do sangue em PRP é benéfica para os resultados é disputada. Alguns estudos têm demonstrado que glóbulos brancos ricos PRP tem forte atividade antimicrobiana, facilita a recuperação funcional e está a menos de um irritante, reduzindo a necessidade de analgésicos14. No entanto, os radicais livres do oxigênio liberados de células brancas do sangue, metaloproteases, interleucinas e citocinas podem agravar danos na fase aguda, obstruindo o auto reparo de tecidos e retardar o processo cura15. Para obter as plaquetas de sangue em altas concentrações, usamos dupla centrifugação.
A taxa de coleta de sangue plaquetas também está relacionada à força centrífuga e tempo. É geralmente reconhecido que plaquetários concentração aumenta com o aumento da força centrífuga. No entanto, excessiva força centrífuga irá danificar as plaquetas do sangue, reduzindo a taxa de recuperação. Também aumenta a concentração de plaquetas com comprimento de centrifugação. Quando centrifugação é menos de 5 minutos, as plaquetas de sangue são baixas, e nenhum efeito significativo será obtido; entre 10 e 20 minutos de centrifugação, a concentração de plaquetas do sangue gradualmente e progressivamente aumenta; Depois de mais de 20 minutos, a concentração de plaquetas do sangue já não obviamente muda16. Uma centrifugação longa pode causar deposição excessiva de plaquetas e reduzem a bioatividade, então o tempo de centrifugação ideal é entre 5 e 10 minutos. Nós estabelecemos um tempo de centrifugação ideal para dupla centrifugação de 6 e 5 minutos para o primeiro e o segundo Centrifugar as forças de 800 e 1400 x g, respectivamente, para preparar o PRP.
Alguns PRP é colhido e injetado diretamente para a área de lesão, mas outras formulações adicionar um agente de ativação de plaquetas como trombina ou CaCl2. Em geral, o PRP usado para aliviar a inflamação crônica ou "desgaste" ferimentos tais como OA é geralmente injetada sem uma activação agente17.
Para a avaliação dos resultados dos tratamentos, foi utilizado um número de escalas. O VAS desde medição detalhada da dor. Usamos o WOMAC para avaliar a gravidade da gonite e o efeito do tratamento de acordo com os sinais e sintomas relevantes. A KSS prevista uma pontuação de joelho dor, mobilidade e estabilidade e um escore de função por acompanhar a atividade de habilidade e da escada. A escala funcional de joelho Lysholm avaliada a lesão do ligamento e cartilagem.
Houve várias limitações ao nosso método. Preparação manual, primeira é suscetível a erros do operador, principalmente da subjetividade no desenho do meio tampão camada e parte do líquido sobrenadante após a centrifugação de segunda. No entanto, após experiências repetidas com diferentes operadores, finalmente encontramos a concentração eficaz de plaquetas. Em segundo lugar, a preparação do lote PRP não está disponível usando esse método. PRP só pode ser preparada pelo sangue antes de cada injeção de desenho. Como armazenamento de amostras é difícil, deve ser aceitável para re-preparar PRP cada vez.
Em resumo, a injeção intra-articular de PRP é um tratamento eficaz para a osteoartrose do joelho. Este relatório de estudo fornece o procedimento de todo tratamento em detalhes, incluindo a preparação do PRP de qualidade confiável, a introdução de um procedimento de injeção padrão e um plano de avaliação científica e prática.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este estudo foi suportado pela Fundação Nacional de ciências naturais da China (81371991) e o maior programa de ciência e tecnologia de Guangdong (2015B020225007).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Centrifuge | Eppendorf | 5702 | |
| Centrifuge tube | CORNING | 430828 | |
| Horizontal rotor | Eppendorf | LL080 | |
| Anerdian III | Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD | 310173 | Disinfect the skin |
| 1ml Syringe | KDL Medical Equipment Co., LTD | 0.4*13 RWLB | |
| 10ml Syringe | KDL Medical Equipment Co., LTD | 1.2*38 TWSB | |
| 50ml Syringe | KDL Medical Equipment Co., LTD | 0.7*32 TWLB | |
| Medical Tourniquet | Changzhou Jinli Latex Products Co., LTD | 0087-2011 | |
| Single-use sterile rubber surgical gloves | Shanghai jinxiang Latex Products Co., LTD | 17060 | |
| Disposable Draw Blood Needle | KDL Medical Equipment Co., LTD | 0.55*20 L(II) RWLB | |
| Heparin Sodium Injection | SPH No.1 Biochemical & Pharmaceutical Co., LTD | 1706101 | 2ml:12500U |
| Jifro Hand Antiseptic Rinse Free Gel | Shanghai Likang Disinfectant HiTech Co., LTD | 311793 | |
| Medical Cotton Swab | Foshan Kangzheng Medical Supplies Co., LTD | KZ3-12 | Disinfect the skin |
| 10ml Normal Saline | Jiangxi Shuangshi Pharmecutical Co., LTD | 140211458 | |
| Automatic Blood Cell Analyzer | Beckman Coulter | LH-750 | |
| Hole-towe | Sterile | ||
| Anticoagulation Tube(Blood Collection Tubes, K2E 3.6mg) | Becton, Dickinson and Company | CNL17-COO56 | Store in a cool dry place within 4 to 25 degrees Celcius |
| Tweezers | RWD LIFE SCIENCE | F12006-10 | |
| Sterile Gauze | Guangdong Ze Chang Trade Co., LTD | 170915 | |
| Adhesive Plaster | 3M Transpore | 1527C-0 | |
| Skin Marker Pen | Guangzhou Mingjia Medical Device Manufacturing Co., LTD | 10110 |
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