Summary
蛋白酶是严格调控的酶参与基本的生物学过程, 失调蛋白酶活动推动复杂疾病, 如癌症的进展。该方法的目的是创造纳米传感器, 以测量体内蛋白酶的活动, 产生一个可从宿主尿和歧视性疾病检测到的裂解信号。
Abstract
蛋白酶是多功能酶, 专门研究肽键的水解和控制广泛的生物过程, 包括稳态和 allostasis。此外, 失调蛋白酶活性驱动发病机制, 是疾病的功能性生物标志物, 如癌症;因此, 检测体内蛋白酶活性的能力可以为生物医学诊断提供临床相关信息。该协议的目的是创造纳米传感器, 通过产生一个可量化的尿液信号, 探索体内蛋白酶的活性。这些蛋白酶纳米传感器由两个成分组成: 纳米粒子和基体。纳米微粒的作用是增加循环半衰期和基质输送到目标疾病地点。基板是一个短肽序列 (6-8 AA), 这是专门针对目标蛋白酶或一组蛋白酶。基体与纳米微粒的表面共轭, 并由记者 (如荧光标记) 终止, 用于检测。当失调蛋白酶切割肽基板时, 记者被过滤成尿液, 作为蛋白酶活性的生物标志物。本文描述了基质金属蛋白酶 9 (MMP9) nanosensor 的构建, 它与肿瘤的进展和转移有关, 用于在小鼠模型中检测大肠癌。
Introduction
蛋白酶是多功能酶, 专门研究肽键的水解, 对许多生物过程有显著的控制作用, 包括稳态、allostasis 和疾病1。蛋白酶活性的改变状态与各种疾病相关, 包括癌症和心血管疾病, 使蛋白酶有吸引力的候选者发展成为临床生物标志物2,3。此外, 蛋白酶活性在功能上与不同的梗死再发, 患者的结局和疾病的预后4。广泛地, 生物传感器被开发用于检测各种生物学现象和疾病, 如癌症, 神经退行性疾病, 电子转移过程5,6,7,8,9. 更具体地说, 以基板为基础的蛋白酶传感器用于检测蛋白酶活性, 包括荧光探针, 用于诊断成像10和 isotopically 标记的肽基片体外质谱检测11。此外, 还开发了基于活动的探针, 其中含有与基片类似的区域, 可以约束或修改目标蛋白酶12。采用这种方法, 当活性部位改变时, 目标蛋白酶不可逆转地受到抑制, 分析需要组织的收获, 这限制了体内的应用。然而,在体内对蛋白酶活性的感知是很重要的, 因为对蛋白酶活性的调节严重依赖于其他生物活动的上下文, 如内源性抑制剂的存在。
这项工作的目的是描述以活动为基础的纳米传感器的配方, 通过产生一个可测量的尿液来检测体内蛋白酶的活性。这个平台被用来作为一种无创诊断, 以鉴别复杂的疾病, 如癌症, 使用失调蛋白酶活动作为功能生物标志物。我们的 nanosensor 平台由氧化铁纳米粒子 (IONP) 与蛋白酶基体结合而成。这些基底被一个荧光记者终止, 当蛋白酶切割基体时释放。这些 IONPs在体内循环, 定位到疾病部位, 并暴露基质到活性疾病相关的蛋白酶。乳沟后, 荧光记者被释放, 由于其体积小, 被过滤成尿液, 而 uncleaved 基质上的 IONP 留在体内。因此,体内蛋白酶活性的增加会导致尿液中的记者浓度增高 (图 1)。由于我们的平台是尿液测试, 不需要成像平台和诊断信号丰富的尿液。
这个平台可以被设计来检测各种疾病, 包括癌症, 纤维化, 血栓形成13,14。在这里, 我们描述了纳米传感器的设计, 以检测基质 metallopeptidase 9 (MMP9) 活性作为结直肠癌的生物标志物的海拔。大肠癌是美国癌症死亡的第二大原因, 估计仅在2014年就有136800例新病例和50300人死亡.结直肠肿瘤细胞产生 MMP9, 这已经显示出推动恶性进展, 基质退化, 以及转移16。此外, 我们确定了一个合适的肽基质 (PLGVRGK) 为 MMP9 从文献17。该平台可用于早期癌症检测和低成本的护理点诊断13,14,18,19,20,21。
图 1:体内Nanosensor 活动示意图.纳米传感器循环通过身体和本地化到疾病的地点。然后, IONPs 提出了与疾病相关的蛋白酶劈裂肽基。切割碎片的大小允许肾脏清除, 导致他们在尿中定位。在动物小便后, 这些肽片段可以通过他们的记者分子来分析。请单击此处查看此图的较大版本.
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Protocol
在研究机构的机构动物护理和使用委员会 (IACUC) 的机构批准是进行以下动物实验的必要。此外, 标准的动物保育设施 (例如,住房室、无菌的动物罩、麻醉的 isofluorane 室和为道德端点 euthanization 的 CO2室) 是必要的, 以便适当地执行这些实验。对这些设施的特殊培训和协助可以由一个机构的生理学研究实验室提供。所有的动物工作都是通过 IACUC 在佐治亚理工大学 (礼宾: A14100) 批准的。
1. 氧化铁纳米颗粒 (IONP) 合成
注: 安全: 整个氧化铁纳米颗粒的合成应使用个人防护设备和在化学油烟机下面。
- 在一个15毫升圆锥管, 冷却1毫升30% 氢氧化铵在一个冰桶30分钟。
- 用去离子水洗250毫升锥形瓶, 加入10毫升双蒸馏水 (ddH2O)。将瓶子的外面浸入一个放在搅拌/热板上的冰浴中。使用塑料吸管将 N2气体流动到瓶中的 ddH2O。气泡15分钟, N2到 deoxygenate。
- 称224µmol (4.5 克) 葡聚糖 (分子量 (兆瓦) = 20 kDa) 为50毫升圆锥管。添加 H2O, 使混合物的最终体积, 包括葡聚糖, 是20毫升。漩涡大力溶解葡聚糖。
- 将290µmol (78.5 克) 的氯化铁 (III) 的重量加到六水合物中, 加入葡聚糖溶液和涡旋溶解。
- 通过0.2 µm 筛选器筛选结果解决方案。
- 将1毫升冷却氢氧化铵转化为9毫升的脱氧水。返回到4°c。
- 重367µmol (73.0 克) 的氯化铁 (II), 溶解在1毫升无氧 ddH2O, 并过滤通过0.2 µm 过滤器。
- 将葡聚糖铁 (III) 溶液转化成250毫升锥形瓶和 deoxygenate, 在冰上15分钟。与 1600 rpm 旋转的磁力搅拌杆混合。
- 要创造一个均匀的氮气气氛, 用橡胶隔膜盖上烧瓶。用18口径的针刺穿隔膜, 将2到烧瓶中流动。插入一个单独的18测量针作为流量出口。
- 添加467µL 的铁 (II) 溶液的葡聚糖铁 (III) 溶液与1毫升注射器, 搅拌与磁搅拌杆在 1600 rpm。铁 (II) 与铁 (III) 的比值导致了平衡反应, 将产生磁铁矿, 或 Fe3O4。
- 加入冷稀释氢氧化铵滴入铁 (II)-铁 (III)-葡聚糖溶液, 以启动成核过程21。确保每个液滴在掉入另一粒之前混合良好。在加入1-2 毫升氢氧化铵后完成反应。
- 停止流动的 N2和消除橡胶隔膜。除去冰浴, 用温水浴代替, 同时继续搅拌溶液。确保溶液的温度达到75摄氏度, 孵育75分钟。
- 从搅拌/热板中取出烧瓶, 然后通过0.2 µm 0.1 µm 过滤器将溶液加倍过滤, 去除粗颗粒。
- 缓冲液将微粒转化成 ddH2O, 使用 100 kDa 分子量切断 (m.w.c.) 选矿厂, 从溶液中去除多余的葡聚糖, 这应该是非常粘性的。如果在 2-3 旋转之后, 即使流通过仍然是暗的, 则替换筛选器, 这表明筛选器可能已损坏。
- 要使用自旋过滤器进行缓冲交换, 离心机在4°c 4800 X g 处15分钟, 丢弃流程, 并向 IONP 解决方案中添加新缓冲区。重复3-5 次。
- 用分光光度计/平板阅读器测定纳米粒子的浓度。吸光度测量在400毫微米和使用 IONP 的摩尔吸收率在这个波长 (ε = 2.07 x 106 cm-1 M-1) 确定 IO 微粒的浓度。
- 并用重悬 IONPs 到10毫克/毫升在 ddH2O (通常总体积是 ~ 3 毫升), 并确保使用聚丙烯管这一步骤的化学相容性。添加1.6 卷5米氢氧化钠, 然后添加0.65 容量的环氧氯丙烷。严格混合在室温下的平板振动筛12小时, 以交联葡聚糖。
- 使用一个20毫升注射器与一个18口径的针将 IONP 溶液转移到 50 kDa m.w.c. 透析膜。将透析膜放入4升 ddH2o, 并更换 H2o 数次 (每 2-3 小时)。孵化过夜。
- 测量浓度, 使 IONPs 5 毫克/毫升 (见步骤 1.15)。加入氢氧化铵达到 20% (v/v), 在室温下摇动 > 12 小时, aminate IONPs 表面。使用 30 kDa m.w.c. 过滤器进行缓冲交换 (见 1.14)。
- 用快速蛋白液相色谱法 (FPLC) 在最终纯化前, 将音量调低至 2.5-3.5 毫升; 见凝胶过滤柱材料表)。
- 使用动态光散射 (dl) 确定 IONPs 的水动力半径 (预期范围 10-100 nm, 平均大小 40-50 nm)。这样做, 通过 aliquoting 1 毫升100X 稀释 IONP 样品在试管, 在机器的地方, 并使用制造商的软件采取的测量。
注: IONPs 的总人口将在10和100毫微米之间由 dl 测量, 但多数人口是在平均直径附近, 范围从 40-50 毫微米。如果你想要限制大小范围, 你可以进一步使用大小排除色谱分离分数以不同的直径。IONPs 应存放在4摄氏度。
2. 肽的设计, 共轭到 IONP, 并在体外验证
- 合成一种多肽基质 (例如,由核心设施或商业) 的目标蛋白酶与 n-终端荧光记者, 如荧光素异硫氰酸酯 (FITC) 和 C 末端半胱氨酸残渣, 以允许硫醇介导的耦合。
注: 在本研究的情况下 MMP9, 使用的肽是 FITC-PLGVRGK C, 与 k猫/km ~ 2.0 x 105 m-1s-1。 - 整除0.5 毫克的 IONP (1 毫克/毫升) 和缓冲交换成耦合缓冲 (50 毫米硼酸钠与1毫米 EDTA, pH = 8.5) 使用 10 kDa m.w.c. o. 旋转过滤器 (见步骤 1.14)。
- 溶解琥珀酰亚胺碘乙酸 (新加坡) 在甲基酰胺 (DMF) 达到浓度为30毫克/毫升, 并增加新加坡航空 IONP 摩尔比500新加坡航空: IONP。
注意: 新加坡航空是一种 heterobifunctional 交叉链接器, 它介导胺类在 IONPs 上的偶联与肽基板上的巯基团。 - 在黑暗的室温下孵育 1-2 小时。如果一夜之间离开, 孵育4摄氏度。
- 使用 10 kDa m.w.c. 旋转过滤器将缓冲区交换到耦合缓冲区中以删除反应 (参见步骤 1.14)。
- 将最终产品解决方案带到1毫克/毫升 (0.5 毫升溶液)。将感兴趣的肽与 90:1 (肽: IONP) 的摩尔比与 20 kDa 硫醇终止的聚乙二醇 (peg) 混合, 摩尔比为 20:1 (peg: IONP)。将这种肽 PEG 溶液与 IONP 混合。
- 在室温下以最高速度在平板振动筛上孵化, 以防止荧光分子漂白。
- 添加 l-半胱氨酸的摩尔比为 500:1 (C: IONP), 以中和任何反应的新加坡航空分子。在室温下以最高速度在25摄氏度上孵育1小时。
- 通过 FPLC 净化 (见 1.1.19)。使用分光光度计测量样品溶液的吸光度, 并计算肽: IONP 比根据以下。提纯后, 在 PBS 的4摄氏度贮存1毫克/毫升的产品。
- 使用分光光度计测量样品溶液在 400 nm (sample,400) 的吸光度, 以及荧光所用的最大吸光度波长, 为 FITC (sample,488) 的 488 nm。测量同一两个波长 (400 nm 和 488 nm) 的股票胺 IONP 溶液的吸光度, 分别表示为NP,400和NP,488。
- 使用等式1和2计算规范化的400和488值。
等式1
等式2 - 400和488表示样本的归一化值。使用这些值计算肽的比率: IONP 与等式3。
等式3 - IONP
和
荧光的摩尔 absorptivities 分别在哪里和哪里。为这些微粒 = 2.06 x 106 M-1cm-1和为 FITC = 7.2万 M-1cm-1, 因此价值
应该是28.75。典型肽: IONP 比应在20:1 到50:1 的范围内。
- 通过进行体外裂解试验验证探针的功能。
- 与 PBS (1% BSA), 使一个18µL 纳米粒子溶液与 200 nM 浓度的肽。混合2µL 的蛋白酶的兴趣 (MMP9; 0.1-1 毫克/毫升)。
- 在37摄氏度的平板阅读器中孵育1小时, 进行荧光测量 (使用适当的激发和发射波长, 分别为 FITC 485 nm 和 528 nm), 每 1-2 分钟来监测裂解。
等式1
等式2
等式3
和
荧光的摩尔 absorptivities 分别在哪里和哪里。为这些微粒
应该是28.75。典型肽: IONP 比应在20:1 到50:1 的范围内。3. 癌症的纳米传感器和尿检管理
注: 有关示例模型的详细信息, 请参阅我们以前的报告13。
- 建立一个新陈代谢的笼子, 通过确保一个圆柱套到96井板顶部的尿收集。在收集尿液时, 将一只老鼠放在袖子内, 用培养皿盖盖住, 以防动物逃跑。
- 在无菌盐水中, 用肽在3000毫克/千克 (~ 50 µmol) 的浓度下, 准备注射液 (200 µL 最大容积)。
- 在雌性, 8 周大的裸鼠, 携带异种 LS174T 大肠肿瘤的负担约100-300 毫米3, 这应该发生在大约10天, 通过尾静脉注射管理 nanosensor 溶液。注射后立即将老鼠放入新陈代谢的笼子里, 注意每只老鼠注射的时间。
- 注射后 60-90 分钟, 从96井板中取出圆柱套筒。抑制小鼠, 对膀胱施加轻微的压力, 诱导小鼠将剩余的尿液放到盘子里。收集所有尿液 (200-500 µL)。
- 通过免疫沉淀分析尿样, 从尿液中纯化 FITC, 提高灵敏度。使用磁性珠子加上抗 FITC 抗体。
- 首先, 用涂层缓冲器清洗25毫克的磁珠3次, 并将最终体积带到225µL。
注意: 要使涂层缓冲 (0.1 米硼酸钠) 是很重要的, ph 值 9.5), 阻断缓冲 (pbs, 0.5% BSA, 0.05% Tween-20, pH 7.4) 和洗涤缓冲 (PBS, 0.1% BSA, 0.05% Tween-20, pH 7.4) 每次新鲜, 每一个大约20毫升是必要的。 - 添加200µL 抗 FITC (5 毫克/毫升) 和200µL 硫酸铵 (3 米)。在旋转的 37 C 上孵育16-24 小时。
- 将解决方案添加到磁选机上, 取出上清, 替换
为625Λ阻塞缓冲器, 并在一夜之间孵化 37 C。然后用洗涤缓冲器清洗3次, 然后在1.25 毫升的洗涤缓冲器中储存。 - 孵化2µL 尿与5µL 磁性珠 (20 毫克/毫升) 和带来到总容量到50µL 与 PBS (0.01% 吐温 20)。孵育60分钟。
- 每洗一次后, 用磁选机将50µL PBS (0.01% 吐温 20) 洗两次, 收集磁性珠子。
- 洗脱两次, 32.5 µL 5% 冰乙酸。中和池洗脱 (70 µL) 与35µL 2 米三, 以达到最终的 pH 值为7。
- 阅读在一个板块阅读器 (见材料表) 在适当的激发和发射波长, 以量化尿荧光。计算荧光记者对已知的自由荧光浓度阶梯的浓度。
- 首先, 用涂层缓冲器清洗25毫克的磁珠3次, 并将最终体积带到225µL。
为625Λ阻塞缓冲器, 并在一夜之间孵化 37 C。然后用洗涤缓冲器清洗3次, 然后在1.25 毫升的洗涤缓冲器中储存。Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
IONPs 的人口的多数是在平均直径附近, 范围从 40-50 毫微米。在聚乙二醇化之后, 这个大小范围有循环半衰期大约6小时13 在体内(参见图 2a)。如果你想选择一个特定的大小范围, 你可以使用大小排除色谱分离 IONP 分数与不同的直径。纳米粒子的透射电镜将显示为单独的球形氧化铁纳米粒子交联在一起的外层葡聚糖。13 IONPs 的溶液将呈半透明状, 无沉淀, 颜色呈淡褐色。在成功的肽结合后, 光谱吸光度分析将在荧光记者的最大激发波长上显示出明显的吸收峰值。在 FITC 的情况下, 这将围绕488毫微米 (见图 2b)。在 FPLC 纯化后, 典型的肽共轭反应会导致肽 IONP 摩尔比为 20-50。为了检验探针对蛋白酶活性的检测能力, 纳米传感器的整除可以用重组蛋白酶进行孵化和荧光监测。裂解活动将导致荧光记者的释放-这是其他 homoquenched 表面上的纳米粒子-进入溶液和增加样品荧光。观察米氏-米氏动力学所遵循的基底劈裂速度是典型的 (见图 2c)。
图 2: 验证体外纳米传感器的结构和功能.(a)一个 dl 图, 表示 IONP 的种群后合成的大小分布。(b) IONPs 后共轭与 FITC 标记 MMP-9 基板的吸光度谱。(c) 体外劈裂试验表明, MMP9 稳定地将 nanosensor 在一小时内所呈现的肽裂解。在 PBS (1% BSA) 缓冲中使用了0.5 毫克/毫升的蛋白酶浓度。请单击此处查看此图的较大版本.
为了将这个平台应用于小鼠癌症模型, 典型的使用纳米传感器涂上近红外荧光记者, 允许全动物荧光成像的药物动力学可视化 (图 3a)。在 LS174T 结直肠肿瘤的小鼠中, 荧光信号将在静脉纳米传感器后60-90 分钟内定位到尿液中, 因为纳米传感器的肽基质 MMP9 分裂。相比之下, 控制组小鼠膀胱内的荧光信号会较低 (见图 3a)。应该指出的是, 在肝脏中观察到的信号是由于微粒最终被内皮系统中的单核细胞和巨噬细胞所清除, 而在肝脏、脾脏和淋巴结中常见。因此,图 3a中肝脏的信号是由纳米微粒的清除引起的。13在用免疫沉淀定量尿荧光量时, 与健康对照组相比, LS174T 肿瘤的小鼠会发现明显升高的信号 (见图 3b)。
图 3: 在老鼠模型中检测大肠癌.(a)肿瘤和对照组小鼠的体内图像, 观察 IONP 在疾病部位的定位, 以及由于肿瘤进展而导致的尿液定位。(b) LS174T 肿瘤模型中控制小鼠肿瘤的尿荧光定量。误差线被绘制为标准偏差 (*p < 0.05 由双尾配对 t 测试)。请单击此处查看此图的较大版本.
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Discussion
该方法描述了由共轭纳米粒核的蛋白酶基质组成的活性纳米传感器的发展。蛋白水解的事件被称为 "药代动力学开关", 因为裂解肽产品小于肾脏大小的过滤限制5毫微米23和过滤成尿产生无创信号。因此, 重要的是使用纳米粒子或载体的水动力半径大于 5 nm, 因为任何更小的将被肾脏迅速清除和混淆尿信号。我们使用 pegylated IONPs, 因为他们是 FDA 批准, 耐受性好, 并有循环半衰期 3-5 小时。13制定纳米传感器的另一个重要考虑因素是 PEG 与肽基片摩尔比。24,25增加比值可以通过多肽26的空间屏蔽来减少非特异的蛋白酶解, 但也可能减少靶向活动。反之, 较低的 PEG 对肽的比率将增加蛋白酶的可及性和裂解肽, 这将放大检测信号, 但也可能增加背景噪声。在体内, PEG 的较低表面浓度也可能增加内皮系统 (RES) 的 nanosensor 吸收, 减少循环时间。
要将这一技术应用于诊断其他疾病, 应从文献17中确定上调在疾病状态下的蛋白酶。发现的努力应该集中在胞外蛋白酶, 因为这些纳米传感器不是为了穿透细胞来感知胞内活动。这些纳米传感器也被设计来感觉 endoproteases 在肽的中间, 它提供了许多候选疾病的目标。通过单独靶向细胞外 endoproteases, 我们已经为肝纤维化、多种类型的癌症和血栓形成13、19、20、21进行了诊断。这个平台可以进一步设计, 以探索 exoprotease 活动后, endoprotease 分裂的情况下, 疾病26,27。此外, 还必须设计一种特定于感兴趣的蛋白酶的肽基片。这可以通过筛选候选肽序列与体外裂解试验 (步骤 2.10-2.11) 来完成。在肽的设计中也应检测潜在的非特异蛋白酶裂解。例如, 在 MMP9 的情况下, 我们测试了基质特异性与凝血酶, 一种凝血蛋白酶发现在高浓度的血液。在体内使用活动纳米传感器, 应通过对纳米传感器后尿液的影像学或离散抽样监测信号产生动力学来确定最佳尿收集时间。小鼠也可以用无菌生理盐水注入 overhydrate 动物, 增加尿量。实际上, 这种技术可以推广到任何上调或 downregulated 胞外蛋白酶活性的疾病。这个平台的优点是它允许放大目标蛋白酶信号, 因此即使只有一小部分的疾病现场蛋白酶种群被调查, 一个重要的读出来可以测量。目前的平台是设计来感知细胞外 endoproteases。当将这个平台应用于其他疾病时, 你需要识别出这种疾病的蛋白酶生物学, 这样这个平台就可以被调谐来感知感兴趣的蛋白酶。
这一核心技术可以进一步设计与分裂记者, 可以检测到不同的分析平台, 以增加应用程序的数量。例如 , 含有抗体结合的配体的记者可以通过纸质测试来检测低成本的护理点诊断19。此外, 用大量的记者贴上标签, 可以使多种蛋白酶同时从尿液中检测出13的质谱。最后, 该方法描述了以活动为基础的纳米传感器, 以了解体内蛋白酶活性作为一种无创性尿液生物标志物。
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Disclosures
邝其志是联合创始人, 并担任 Glympse 的顾问, 正在开发与本文所述研究相关的产品。这项研究可能影响他的个人财务状况。格鲁吉亚技术委员会根据其利益冲突政策审查并批准了这一安排的条款。
Acknowledgments
这项工作由 NIH 主任的新创新奖 (奖号) 资助。DP2HD091793)。Q.D.M. 得到 NSF 研究生研究奖学金计划的支持 (批准号:DGE-1650044)。H 获得美国国立卫生研究院 GT BioMAT 训练补助金的支持, 5T32EB006343 和格鲁吉亚技术总裁的奖学金。G.A.K. 在 "宝来欢迎基金" 的科学界面上担任职业奖。内容完全是作者的责任, 不一定代表国家卫生研究院的官方意见。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.2 µm syringe filters | VWR | 4652 | |
| 18G needle | VWR | 89134-024 | |
| 15 mL conicals | VWR | 89039-670 | |
| 250 mL Erlenmeyer flask | VWR | 89000-362 | |
| Stir bar | VWR | 58949-006 | |
| Hot Plate/Magnetic Stirrer | VWR | 97042-634 | |
| Glacial acetic acid | VWR | 97064-482 | |
| Albumin from Bovine Serum (BSA) | Thermo Fisher | A13100 | |
| Iron (III) chloride hexahydrate | Sigma | 236489 | |
| Iron (II) chloride tetrahydrate | Sigma | 44939 | |
| Epichlorohydrin | Sigma | 45340-500ML-F | |
| DMF | Sigma | D4551 | |
| Ammonium Hydroxide | Sigma | 320145-500ML | |
| Sodium Hydroxide pellets | Sigma | 221465-500G | |
| EDTA | Sigma | E9884 | |
| Sodium Borate | Sigma | B9876 | |
| L-Cysteine | Sigma | 168149-100G | |
| Tris-HCl | Sigma | T5941 | |
| Tris base | Sigma | T6066 | |
| PBS tablets | Sigma | P4417 | |
| Dextran | Pharmacosmos | 5510 0020 9006 | |
| Amicon 15 mL 10k filters, 24 pk | Millipore | UFC901024 | |
| Amicon 15 mL 30k filters, 24 pk | Millipore | UFC903024 | |
| Amicon 15 mL 100k filters, 24 pk | Millipore | UFC910024 | |
| Zetasizer Nano ZS | Malvern Panalytical | NanoZS | |
| Slide-A-Lyzer Dialysis Cassette | LifeTech | 66130 | |
| Dynabeads MyOne Tosylactivated | LifeTech | 65501 | |
| SIA | Life Tech | 22349 | |
| PEG 20k | Laysan Bio | MPEG-SH-20K-1g | |
| Fluorescein Antibody [2A3] | GeneTex | GTX10257 | |
| Hiload 16/600 superdex 200 | GE Healthcare | 45-002-490 | |
| Plate Reader | Fisher | BTCYT5M | |
| BD Insulin Syringes | Fisher | NC0872854 |
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