Summary
En trin for trin protokol for ikke-destruktiv og længe-periode overvågning proces af vaskulære remodellering og stillads nedbrydning i real-time kultur af bionedbrydeligt polymere stillads-baserede tissue Engineering blodkar med pulsatile stimulation ved hjælp af optisk kohærens tomografi er beskrevet her.
Abstract
Manipuleret vaskulære transplantationerne med konstruktions- og maskinmæssigt egenskaber svarende til naturlige blodkar forventes at imødekomme den stigende efterspørgsel for arterielle bypass. Karakterisering af vækst dynamics og remodeling proces af nedbrydeligt polymer stillads-baserede tissue Engineering blodkar (TEBVs) med pulsatile stimulation er afgørende for karvæv engineering. Optiske billeddannelse teknikker skiller sig ud som kraftfulde værktøjer til at overvåge vascularization manipuleret væv giver høj opløsning imaging i real-time kultur. Dette papir viser en ikke-destruktiv og hurtig real-time imaging strategi for at overvåge væksten og remodellering af TEBVs i langsigtede kultur ved at bruge optisk kohærens tomografi (OCT). Geometriske morfologi evalueres, herunder vaskulære remodeling proces, vægtykkelse og sammenligning af TEBV tykkelse i forskellige kultur tid og tilstedeværelse af pulsatile stimulation. Endelig, i OLT giver praktiske muligheder for real-time overvågning af polymer i voldsomme væv under pulsatile stimulation nedbrydning eller ej og på hvert fartøj segment, af sammenlignet med vurdering af polymer nedbrydning ved hjælp af scanning elektron microscopic(SEM) og polariseret mikroskop.
Introduction
Væv-manipuleret blodkar (TEBVs) er den mest lovende materiale som en ideel vaskulære graft1. For at udvikle grafts for at være klinisk nyttigt med tilsvarende strukturelle og funktionelle egenskaber som hjemmehørende fartøjer, er flere teknikker designet til at opretholde vaskulær funktion2,3. Selvom der har været manipuleret fartøjer med acceptabel passage satser under implantation og i fase III kliniske undersøgelse4, viser langtidskulturer og høje omkostninger også nødvendigheden af at overvåge udviklingen i TEBVs. Forståelse af ekstracellulære matrix(ECM) vækst, ombygning og tilpasning processer i TEBVs i biomimetiske kemo-mekaniske miljø kan give afgørende oplysninger for udviklingen af karvæv engineering.
Den ideelle strategi til at spore udviklingen af lille diameter manipuleret fartøjer5 bør være ikke-slettende, steril, langsgående, tre-dimensionelle og kvantitative. TEBVs forskellige kultur betingelser kunne vurderes af denne imaging modalitet, selv inklusive ændringer før og efter vaskulære transplantation. Strategier til at beskrive funktionerne i levende manipuleret fartøjer er nødvendige. Optiske billeddannelse teknikker giver mulighed for visualisering og kvantificering af væv deposition og biomaterialer. Andre fordele er muligheden for at aktivere dybe væv og etiket-gratis billedbehandling med høj opløsning6,7. Image-specifikke molekyler og mindre lettilgængelige optisk udstyr til real-time overvågning er imidlertid en betydelig praktisk hindring, som har begrænset den omfattende anvendelse af ikke-lineær Optisk mikroskopi. Optisk kohærens tomografi (OCT) er en optisk tilgang med intravaskulær imaging modalitet som et almindeligt anvendt klinisk værktøj til at guide hjerte interventionel terapi8. I litteraturen blev metode i OLT rapporteret som en måde at vurdere vægtykkelse af TEBVs9,10, kombineret med bekræftende billeddiagnostiske modaliteter til karvæv engineering research. Der henviser til, at dynamikken i manipuleret vaskulære blev vækst og remodellering ikke observeret.
I dette manuskript detalje vi forberedelse af biologisk nedbrydeligt polymert stillads-baseret TEBVs for fire uger kultur. Menneskelige umbilical arterier vaskulære glatte muskelceller (HUASMCs) er udvidet og seeded i en porøs nedbrydelige polyglycolic syre (PGA) stilladser i bioreaktor. Biologisk nedbrydelige polymerer spille rollen i en midlertidig substrat for vævsteknologi og har en vis nedbrydning sats11. For at sikre en passende match mellem stillads nedbrydning og neo-væv dannelse, er ECM og PGA stilladser afgørende faktorer for effektiv vaskulære remodellering. Perfusion system simulerer den biomekaniske mikromiljø af hjemmehørende fartøjer og fastholder en konsekvent deformation under pres stimulation.
Præsenteres protokollen sigter mod at beskrive en relativt enkel og ikke-destruktiv strategi for TEBVs billeddannelse og langsigtet overvågning af kultur. Denne protokol kan anvendes til visualisering af morfologiske ændringer og tykkelsesmålinger manipuleret fartøjer under forskellige kultur betingelser. Derudover kan analyser af polymer-baserede materialer nedbrydning i væv engineering stilladser udføres for identifikation. Ved at kombinere metoder til scanning elektron microscopic(SEM) og polariseret mikroskop bruges i denne protokol, korrelation og kvantificering af ekstracellulære matrix distribution og PGA nedbrydning kan gøres, som kan lette vurderingen af stillads nedbrydning kombineret med OCT billeddannelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. nedbrydeligt PGA stillads baseret væv-manipuleret fartøjer kultur
- PGA stillads fabrikation
- Sy PGA mesh (19 mm i diameter og 1 mm tyk) omkring silikoneslanger steriliseret med ethylenoxid (17 cm længde, 5,0 mm diameter og 0,3 mm tyk) med 5-0 sutur.
- Sy polytetrafluorethylen (ePTFE, 1cm længde) med 4-0 sutur til hver ende af PGA mesh og overlappet af 2 mm.
- Dyp PGA stilladser med hånden i 1 mol/L NaOH for 1 min til at justere den rumlige struktur af trådnet og blød med vævskultur grade vand tre gange i 2 min. Forsigtigt pat tør stillads med en silkepapir hver gang. Derefter tørre op stilladser i en hætte med en blæser i 1 time.
- Montering af bioreaktor og Y-knudepunkt for OCT imaging
- Sættetid egenudviklede glas cylindrisk bioreaktor (10 cm diameter og 11,7 cm i højden med fire læber inde og fire sidevåben uden for reaktoren som vist i figur 1), PGA stilladser, silikone rør (udvendig diameter 5 mm, tykkelse 0,3 mm), biokompatibelt rør, stik, røre bar og udstyr til montering i et 95% ethanol tank til 2 h.
- Trække PGA stillads gennem sidevåben af bioreaktor tilsluttet én side med et stik samt en anden side med Y-krydset bruges til at levere OCT guidewire. Samle en anden PGA stillads i bioreaktor på samme måde. Henvises til figur 1.
- Passer ePTFE til bioreaktor læber ved at spænde med 4-0 sutur.
- Sætte bioreaktor i ethanol tanken igen i 1 time og tørre op natten i hætte med blæser på.
- Såning af HUASMCs og statisk bioreaktor Conditioning
- Isolere HUASMCs fra menneskelige umbilical arterierne af standard eksplantat teknikker.
- Udvide og vedligeholde celler i glat muskel celle vækstmedium består af DMEM medium, 20% føtal bovint serum, 2,36 mg/mL HEPES, 100 U/mL penicillin G, 50 µg/mL prolin, 20 µg/mL alanin, 50 µg/mL glycin, 1,5 µg/mL CuSO4, 50 µg/mL ascorbinsyre , 10 ng/mL basic fibroblast vækstfaktor og 10 ng/mL Trombocyt-afledt vækstfaktor.
- Seed HUASMCs i en koncentration på 5 × 106 celler/mL i ovenstående næringssubstratet på PGA stilladser.
- Sætte opsigt bar (1,5 cm længde) i bioreaktor. Indsæt en påfyldningsrør (5 mm diameter, 15 cm længde) og tre korte rør segmenter (5 mm diameter, 7 cm længde) til luftskiftet gennem silikone proppen låg.
- Vedhæfte PTFE 0,22 µm filtre til hver luft ændring rør og en heparin cap til påfyldningstragten. Justere rør bar med en omrøring hastighed 13 runder pr. minut. Samle glas bioreaktor, silikone proppen låg og PGA stillads til kultur-systemet.
- Tillade HUASMCs at overholde i 45 min. ved hælder bioreaktor hvert 15 min med stativ, til venstre og højre. Reaktor havne og led er alle forseglet med paraffin film.
- Tilslut Luo-Ye pumpe, PBS taske, driver med biokompatible rør som perfusion system. Lukke op drive at fylde rørene med PBS.
- Placer de samlede bioreaktor i en fugtig kuvøse med 5% CO2 ved 37 ° C. Fyld kultur kammer med 450 mL af næringssubstratet HUASMCs.
- Tryk på stopknappen, og sluk for strømmen af enhedens drev. Vokse de seedede stilladser under statisk kultur i en uge.
- Ændre næringssubstratet hver 3-4 dage ved sugning halvdelen af den gamle medium gennem påfyldningsrør og genpåfyldning reaktor med en tilsvarende mængde frisk næringssubstratet.
- Forberedelse af perfusion system for OCT imaging
- Pumpe væsker i PBS posen til at cirkulere gennem biokompatible rør og tilbage til posen.
- Åbn power af driveren og regulere pumpe indstilling med en frekvens på 60 beats per minut og output systolisk blodtryk af 120 mmHg. Justere de mekaniske parametre efter behov af engineering vaskulære vævskultur.
- Klik på knappen Kør for at gøre perfusion systemet til at fungere. Give de ovenstående faste pulsatile stimulation for fartøjer i 3 uger ved iterativt presse biokompatible rør10,12 efter 1 uge med statisk kultur.
2. udføre optiske billeddannelse med OLT
- Bruge en lyskilde til at sikre den aksiale resolution af 10-20µm og billeddybde på 1-2 mm for at identificere strukturen af TEBV baseret på den frekvens-domæne OCT intravaskulær imaging system9.
- Tænd på afbryderen og åbne image capture software.
- Tilslut fiber optic imaging kateter til drive-motor og optisk controller (DOC) med kateter automatisk retreat funktion.
- Angiv parametrene for billede erhvervelse sats til 10 billeder per sekund med en automatisk pullback hastighed på 10 mm/s.
- Knytte imaging kateter til Y-krydset via heparin cap med en 18G nåle.
- Placer kateteret ind i silikone rør og identificere sutur tæthed af PGA mesh før pålæsning PGA stillads på bioreaktor.
- Placér kateteret tip over region af interesse. Justere pullback enhed og kontrollere for billede kvalitet8.
- Erhverve billeder på 1, 4, 7, 10, 14, 17, 21, 28 dage under kultur for hver enkelt TEBV og gemme sekventielt med realtid observation af TEBV mikrostruktur, herunder overflade morfologi, indre struktur og sammensætning.
- Gentag målingen for 3 gange at få pålidelig måling af manipuleret fartøjer hver gang. Fange en serie af billeder i hele laboratorietest image capture software.
3. imaging analyse
- Brug billede analyse software til at måle TEBV væggens tykkelse. Vælg billedet, der skal analyseres. Klik på værktøjet sporing for at identificere den indvendige side af TEBV af softwaren automatisk og manuelt skitsere den udvendige side. Et diagram af tykkelse vil vises på skærmen.
- Gentag målingen for 5 gange at få pålidelig måling af konstruktioner. OCT analyse blev udført af to uafhængige investigatorer blindet for de opnåede oplysninger.
4. høst af TEBV og væv behandling
- Åben silikone proppen låg placeret over bioreaktor når kulturen er færdig og kassér næringssubstratet. Løsne ePTFE fra bioreaktor læber og skære silikone rør fra den ydre side af ePTFE med saks. Høste TEBVs fra bioreaktor og skæres i sektioner for scanning elektronmikroskopi undersøgelse.
- Tag resten af TEBVs og skæres i 4 µm tykt sektioner. Træk den understøttende silikone rør og lave sektioner med 4% PARAFORMALDEHYD. Udføre rutinemæssige histologiske farvning af Masson's trichrome og Sirius rød at undersøge morfologi af kollagen og PGA10,13,14.
- For at vurdere PGA indhold og kollagen komponent, observere histologiske prøver med Sirius rød farvning af en polariseret mikroskop. PGA rester er klart afgrænset gennem dobbeltbrydning og området rest kan kvantificeres baseret på tværsnitsareal10.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tre-dimensionelle kultur system bestod af et kultur kammer i bioreaktor og perfusion system med et lukket væske cyklus10,13 (figur 1). OCT imaging kateteret blev indsat i den distale ende af Y-krydset og trak sig tilbage i silikone rør til billedbehandling. OCT imaging blev først brugt til at afgrænse strukturel karakterisering af biologisk nedbrydeligt polymert stillads-baseret TEBVs under bioreaktor dyrkning.
Figur 2 viste processen med manipuleret vaskulære remodeling gennem disse tværsnits imaging af væv mikrostrukturen i realtid. Geometriske morfologi blev evalueret, herunder godstykkelse, nedbrydelige PGA indhold og sammenligning af TEBV tykkelse i forskellige kultur tid point samt tilstedeværelsen af pulsatile stimulation. En tendens til faldende tykkelse og dramatisk ændringer af manipuleret væv inden for de første to uger af kultur blev set, tyder på signal-rige PGA gradvise nedbrydning og strukturen af nyt væv fra løst til stramt. På 21 dage i kultur, havde Vaskulaturen dannet en glat struktur med ekstracellulære matrix er jævnt fordelt og højt signal komponenter for det meste spredes. Vægtykkelse af TEBVs med selv signal steg gradvist efter tre uger af kultur. Denne remodeling opstod tidligere og de morfologiske ændringer manifesteret mere klart i gruppen dynamisk (figur 3). Dermed giver OCT billeddannelse af manipuleret vaskulære morfologi til visualiseres på stedet og i realtid under langvarige kultur.
Figur 4 sammenlignet OCT billeder med histopatologiske fund af TEBV efter 4 uger af kultur. Masson's trichrome farvning viser kollagen fibre fordelt i en bestemt retning med PGA rester i media lag af manipuleret fartøjer (figur 4B). Sirius rød farvning afslørede PGA rester og kollagen komponent ved hjælp af en polariseret mikroskopet (fig. 4 c). Scanning elektron micrographs af manipuleret fartøjer med kompakt mikrostruktur blev sammenlignet med histologisk vurdering (figur 4D). Tilsammen, viste OCT billeder PGA var med forskellige størrelser og porøse netværksstruktur. Strukturen af PGA stillads har nogen åbenbar ændring og hævede ved direkte kontakt med næringssubstratet i tidlige stadier af kultur. Men signalet intensiteten af PGA blev reduceret. PGA komponenter blev opløst og erstattet med celler og ekstracellulære matrix. Færre fragmenter blev set fire-ugers periode. SEM billeder af tværsnits-manipuleret fartøjer viste fiber brud til udvidelse af inkubationstiden. Materiale og ekstracellulære matrix kompositter var i honeycomb-lignende struktur med mere kompakte og mindre gennemsigtighed.
Figur 1 . Skematisk af tissue engineering vaskulære kultur system, som bestod af en kultur kammer i bioreaktor og perfusion system for OCT imaging. Pulsatile pumpen leveres en stabil væskestrøm simulerer den biomekaniske mikromiljø. OCT imaging kateter blev trukket tilbage i silikone rør i kultur kammer. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2 . Mikrostruktur af væv manipuleret blodkar under kultur. Kultur i tidens signal-rige PGA nedbrudt gradvist og strukturen af nyt væv var fra løs at stramme. TEBVs havde en glat overflade og rigelige ekstracellulære matrix jævnt fordelt efter fire ugers kultur. Det viste processen af manipuleret vaskulære remodeling gennem tværsnitsdata billeder i realtid. Dette tal er blevet ændret fra Chen, W. mfl. 10 tykkelsen af silikone slange bruges her er 0,8 mm. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3 . Sammenligning af TEBV væg tykkelse ændring under vaskulære remodeling i dynamiske og statiske grupper fremstillet af OCT målinger. Fejllinjer angive standard fejl. Dette tal er blevet ændret fra Chen, W. mfl. 10 Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4 . Imaging af bionedbrydeligt polymer-baserede tissue Engineering blod fartøjer. (A) OCT billede af TEBV efter fire ugers kultur. M: næringssubstratet; S: silikone rør; tykkelsen af silikone slange bruges her er 0,8 mm. Hvid pil angivet TEBV. Rød pil angivet PGA fragment. B Masson trichrome farvning demonstreret velorganiseret kollagen fibre sammen med residualindholdet af PGA i media lag af manipuleret fartøjer. Skalalinjen = 100 µm. c Sirius rød farvning afslørede PGA resterne ved hjælp af en polariseret mikroskop. Grøn pil angiver PGA fragment. Skalalinjen: 100 µm. (D) Scanning elektron micrographs af manipuleret fartøj med kompakt mikrostruktur var viste at sammenligne med histologisk vurdering. Skalalinjen = 50 µm. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
At generere manipuleret fartøjer med struktur og mekaniske egenskaber svarende til native blodkar kan føre til at forkorte tiden til klinisk brug og er det ultimative mål af vaskulære teknik. Optiske billeddannelse teknikker tillade visualisering af væv manipuleret vaskulære specifikke komponenter, som kan overvåge individuelle konstruktioner i hele kultur og eksponering grafts til en kultur miljø uden at kompromittere sterilitet7. I denne artikel, er kultur-salen adskilt fra perfusion system. Det relativt uafhængige perfusion system garanterer mindske risikoen for forurening under kultur og placeringen af OCT guidewire. I mellemtiden denne intraluminal imaging modalitet vedtaget let og sikkerhed overvågning af TEBVs i situs med høj opløsning nærmer sig, af histopatologi, som lavet vurdering TEBV vækst tilstand mere praktiske og var endda forventes anvendt før eller efter implantat placering.
Den nuværende protokol angiver en let tilgængelig, hurtig real-time og ikke-destruktiv billedbehandling strategi for at evaluere nedbrydeligt polymer-baserede manipuleret fartøj udvikling ved hjælp af kateter-baserede OCT. Gennem observation af den dynamiske proces, kan nogle vigtigste faktorer, der påvirker vaskulære teknik, såsom forurening eller uovertruffen celle-materiale interaktion førte til tab af væv, skelnes med tidlig påvisning. Afgørende skridt til at sikre effektiviteten af protokollen omfatter fabrikation af NaOH-ændret PGA stillads, vellykket såning af HUASMCs i stillads, adskillelse sterile kultur system fra overvågningssystemet, hurtig og dygtig kateter operation proces .
Denne teknik kan udnyttes til at vurdere nedbrydningen stater og komplekse struktur af PGA stilladser blandet med nyt væv. De polymere stillads med porøse netværksstruktur nedbrydes gradvist og dominerer processen af vaskulære remodeling i de første tre uger, som er vigtigt for celle vedhæftning og ekstracellulære matrix aflejring med en tre-dimensioneret struktur for næringsstof exchange og som et signal carrier15,16. Til kvantificering af PGA rester i manipuleret fartøjer klart identificeret ved Sirius rød-farvede billeder, brug af polariserede mikroskoper17 i nedbrydeligt stillads-baserede vaskulære teknik har potentiale til at blive en standard vurdering efter dyrkning. Dermed kan OCT imaging kombineret med polariserede mikroskop tjene som kvalitative og kvantitative metoder til vurdering af PGA nedbrydning i vaskulære teknik.
En begrænsning af denne teknik er opløsning grænsen at vurdere celle spredning, distribution, celle-celle og celle-ECM interaktion under manipuleret vaskulære remodellering. Vi håber at finde egnet metode til at undersøge TEBVs mikrostruktur på cellulært eller subcellulært niveau18 og kvantificere vækst kinetik. Med kvantitativ analyse af gennemsnitlige optiske signaler OCT Imaging, kan vi være mere opmærksomme på mekanismen af materialet nedbrydning i vaskulære teknik. Sådanne eksperimenter anses for vores fremtidige undersøgelser.
Samlet set viser vores resultater, at OCT er en let tilgængelig, hurtig real-time og ikke-destruktiv billedbehandling strategi for at overvåge væksten og remodellering af TEBVs. Det er udnyttet til at karakterisere strukturelle arkitektoniske særpræg og den langsigtede remodeling proces med manipuleret fartøjer. Anvendelsen af polariseret mikroskop, som fremlagde supplerende beviser for kvantificering af polymert rester i manipuleret fartøjer kan være nyttige til vurdering af stillads nedbrydning kombineret med OCT billeddannelse. Tilsammen, holder den nuværende protokol lovende værdi i OLT for dens anvendelse i karvæv engineering.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, de har ingen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Vi vil gerne anerkende den videnskab og teknologi planlægger projektet i Guangdong provinsen i Kina (2016B070701007) til støtte for dette arbejde.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PGA mesh | Synthecon | ||
| silicone tube | Cole Parmer | ||
| connector | Cole Parmer | ||
| intravascular OCT system | St. Jude Medical, Inc | ILUMIEN™ OPTIS™ SYSTEM | |
| scanning electron microscopic | Philips | FEI Philips XL-30 | |
| polarized microscope | Olympus | Olympus BX51 | |
| sutures | Johnson & Johnson | ||
| pulsatile pump | Guangdong Cardiovascular Institute | ||
| LightLab Imaging software | St. Jude Medical, Inc |
References
- Chan-Park, M. B., et al. Biomimetic control of vascular smooth muscle cell morphology and phenotype for functional tissue-engineered small-diameter blood vessels. Journal of Biomedical Materials Research Part A. 88, 1104-1121 (2009).
- Ballyns, J. J., Bonassar, L. J. Image-guided tissue engineering. Journal of Cellular & Molecular Medicine. 13, 1428-1436 (2009).
- Smith, L. E., et al. A comparison of imaging methodologies for 3D tissue engineering. Microscopy Research & Technique. 73, 1123-1133 (2010).
- Chang, W. G., Niklason, L. E. A short discourse on vascular tissue engineering. NPJ Regenerative Medicine. 2, (2017).
- Appel, A. A., Anastasio, M. A., Larson, J. C., Brey, E. M. Imaging challenges in biomaterials and tissue engineering. Biomaterials. 34, 6615-6630 (2013).
- Rice, W. L., et al. Non-invasive characterization of structure and morphology of silk fibroin biomaterials using non-linear microscopy. Biomaterials. 29, 2015-2024 (2008).
- Niklason, L. E., et al. Enabling tools for engineering collagenous tissues integrating bioreactors, intravital imaging, and biomechanical modeling. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 3335-3339 (2010).
- Zheng, K., Rupnick, M. A., Liu, B., Brezinski, M. E. Three Dimensional OCT in the Engineering of Tissue Constructs: A Potentially Powerful Tool for Assessing Optimal Scaffold Structure. Open Tissue Engineering & Regenerative Medicine Journal. 2, 8-13 (2009).
- Gurjarpadhye, A. A., et al. Imaging and characterization of bioengineered blood vessels within a bioreactor using free-space and catheter-based OCT. Lasers in Surgery and Medicine. 45, 391-400 (2013).
- Chen, W., et al. In vitro remodeling and structural characterization of degradable polymer scaffold-based tissue-engineered vascular grafts using optical coherence tomography. Cell & Tissue Research. 370, 417-426 (2017).
- Naito, Y., et al. Characterization of the natural history of extracellular matrix production in tissue-engineered vascular grafts during neovessel formation. Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).
- Ye, C., et al. The design conception and realization of pulsatile ventricular assist devices-from Spiral-Vortex pump to Luo-Ye pump. Chinese Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 9, 35-40 (2002).
- Chen, W., et al. Application of optical coherence tomography in tissue engineered blood vessel culture based on Luo-Ye pump. Chinese Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 31, 687-690 (2015).
- Pickering, J. G., Boughner, D. R., et al. Quantitative assessment of the age of fibrotic lesions using polarized light microscopy and digital image analysis. American Journal of Pathology. 138, 1225-1231 (1991).
- Martinho, J. A., et al. Dependence of optical attenuation coefficient and mechanical tension of irradiated human cartilage measured by optical coherence tomography. Cell Tissue Bank. 16, 47-53 (2015).
- Poirierquinot, M., et al. High-resolution 1.5-Tesla magnetic resonance imaging for tissue-engineered constructs: a noninvasive tool to assess three-dimensional scaffold architecture and cell seeding. Tissue Engineering Part C Methods. 16, 185-200 (2010).
- Naito, Y., et al. Beyond burst pressure: initial evaluation of the natural history of the biaxial mechanical properties of tissue-engineered vascular grafts in the venous circulation using a murine model. Tissue Engineering Part A. 20, 346-355 (2014).
- Smart, N., Dube, K. N., Riley, P. R. Coronary vessel development and insight towards neovascular therapy. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 90, 262-283 (2009).
