Summary
כדי להרחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולים עם סרטן ריאות לטיפול pembrolizumab, באופן אמין לשחזור, פיתחנו וזמינותו של העושה את תרכיז נוגדן 22C 3-נרחב זמין immunohistochemical autostainer, עבור דגימות ביופסיה והן ציטולוגיה.
Abstract
יחידני Pembrolizumab אושרה לטיפול, השנייה-שורה ראשונה של חולי PD-L1-הבעת מתקדמים סרטן ריאות תאים שאינם קטנים (NSCLC). בדיקות עבור הביטוי PD-L1 PD-L1 אימונוהיסטוכימיה (IHC) 22C 3 לוויה אבחון וזמינותו, אשר נותן שיעור הגידול ניקוד (TPS), אומתה על גידול רקמות. פיתחנו ממוטבת מפותחות מעבדה מבחן (LDT) המשתמשת את תרכיז נוגדן 22C 3 (אלב) על autostainer IHC נרחב זמין עבור דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה. תוכנית-המיתאר PD-L1 הוערך עם דגימות ביופסיה ומקטעים לזווג רקמת הגידול כל 120, עם 70 לזווג דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה (שוטף הסמפונות, n = 40; השתפכות, n = 30). Ab 22C 3 שמבוסס להתרכז LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) ציטולוגיה דגימות (~ 95%) בהשוואה ל- PD-L1 IHC ביטוי באמצעות וזמינותו לוויה 22C 3 IHC PD-L1-TPS שני חותכים נקודות (≥1%, ≥50%). LDT ממוטבת המובאים כאן, באמצעות את תרכיז אלב 22C 3 כדי לקבוע את הביטוי PD-L1 ברקמת הגידול שני, דגימות ציטולוגיה, ירחיב את היכולת של מעבדות ברחבי העולם כדי להעריך את הזכאות של חולי NSCLC לטיפול pembrolizumab יחידני באופן אמין לשחזור.
Introduction
האחרונות ניסויים קליניים הראו את היעילות של pembrolizumab, monoclonal IgG4 קאפה isotype מואנשים שחוסמת את האינטראקציה בין מות תאים מתוכנת 1 (PD-1), שלה ליגנדים, PD-L1 ו- PD-L2, לטיפול בחולים עם מתקדם NSCLC1,2,3,4.
כיום, pembrolizumab אושרה לטיפול של NSCLC PD-L1-הבעת ' בחולים הן טיפול-תמים עם ביטוי PD-L1 תוכנית-המיתאר של ≥50%, אין גורם הגדילה באפידרמיס קולטן (EGFR) או לימפומה אנפלסטית קינאז (ALK) הגידול גנומית סטיות3 בעבר מטופלים חולים עם תוכנית-מיתאר PD-L1 של ≥1%1.
PD-L1 חלבון הביטוי שזוהה על-ידי IHC כבר בשימוש נרחב עבור טיפולים אנטי-PD-1/PD-L1 כמו assay סמן ניבוי. בניסויים קליניים pembrolizumab, המיתאר PD-L1 שהושג עם פורמלין-קבוע-מוטבע פרפין (FFPE) דגימות רקמה נקבע באמצעות PD-L1 IHC 22C 3 assay לוויה, או5. Assay זו אושרה על ידי מינהל המזון והתרופות האמריקני (FDA) ומאז CE המסומן באירופה מצפני הגידול PD-L1 TPS5.
אפשרויות נוספות גלובלית על פני מוסדות עבור הערכות איכותי ואמין של המיתאר PD-L1 עם LDTs להשתמש בו את תרכיז נוגדן 22C 3 חיוניים לתמיכה קלינית ההחלטות הנוגעות זכאות החולה pembrolizumab טיפול. מספר רב של מעבדות הפתולוגיה אין גישה PD-L1 IHC 22C 3 אבחון לוויה וזמינותו. לכן, הפיתוח של LDTs אמינה ועקבית תואם פלטפורמות autostainer IHC נוספים, הנפוצה היא חיונית.
יתר על כן, יש צורך בהקמת LDTs באמצעות דגימות ציטולוגיה המהווים סוג הדגימה היחיד הזמין לעתים קרובות מחולים NSCLC. PD-L1 IHC 22C 3 מסייע וזמינותו מאומת כריתות, ביופסיות מחט הליבה של bronchoscopies רק אם ברונכוסקופיה מניבה 100 תאים סרטניים. למרות סוגי דגימה לעיל מתקבלים לעיתים קרובות, ציטולוגיה דגימות נאספים ביתר קלות, סוג הדגימה הנפוץ ביותר הזמינים ב6,כמה מוסדות7. עם זאת, יש כיום אין assay אבחון המאומת זמין עבור הערכת הביטוי PD-L1 בדגימות ציטולוגיה; תואם עם דגימות ציטולוגיה אמין LDTs להמשיך לקדם את בדיקת PD-L1 באיכות גבוהה.
יתר על כן, בעת יצירת האימות קליני של LDT, IHC צריכה להתבצע באופן דומה מבחן מסחרי המאומת קלינית המתאימה8. למשל, מספר שלבים קריטיים צריך לאמת כדי לקבל את האות באותו בסעיפים טורית כגון נוגדנים טיטור, עיכובים pretreatment, זמן הדגירה, מערכות הגברה9.
לאחרונה פיתחנו של LDT ממוטבת העושה את תרכיז נוגדן 22C 3 להעריך את הביטוי PD-L1 על הגידול ביופסיות ו ציטולוגיה דגימות10,11. . מצאנו את הקונקורדנציה גבוהה עם LDT לעומת "תקן הזהב" PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. פרוטוקול המאומת קלינית זה יתמוך אמין, איכותי PD-L1 בדיקות על-פני אזורים ברחבי העולם.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
כל ההליכים אושרו על ידי ועדת האתיקה המקומית (ועדת האתיקה מחקר אנושי, מרכז Hospitalier Universitaire דה ניס/Tumorothèque BB-0033-00025).
הערה: פרוטוקול זה במיוחד מותאמת לשימוש של נוגדן 22C 3 להתרכז זמינים מסחרית אוטומטיות IHC הוספת גוון לסמלים (המכונה כפי autostainer כאן, לראות את הטבלה של חומרים) עבור גידול ביופסיות ודוגמאות ציטולוגיה.
1. הכנת דגימות רקמה הגידול
- לתקן את רקמת הגידול בפורמלין 10% נייטרלי במאגר (NBF) בקלטת.
הערה: רקמת הגידול גידולים ריאות proximal מתקבל בדרך כלל על ידי ברונכוסקופיה, בביצוע הרגעה מתונה pulmonologist, או ריאות מומחה. נגעים היקפיים, מחלות ריאה ' מאטום לשקוף ', מסומן ביופסיה transbronchial או מחט. הליכים אלה נעשים בדרך כלל חדר ניתוח או יחידת טיפול נמרץ. - להטביע את הקלטת פרפין.
הערה: קיבוע יכולה להיות מושגת על ידי זלוף או טבילה מיד לאחר ניתוח, בדרך כלל דורש 8-10 h. אמצעי האחסון מקבע צריך להיות גבוה יותר נפח דגימה 15 – 20 x. לא מומלץ לתקן ביופסיה רקמות עבור יותר מ 10 h, כי overfixation יכול לגרום מיסוך של אנטיגן. מהירות קיבעון היא בערך 1 מ/שעה בטמפרטורת החדר. - לחדור את דגימת הרקמה קבוע עם שעווה במעבד רקמות (ראה טבלה של חומרים).
הערה: התייבשות מתבצע בשלוש אמבטיות אלכוהול עם הגדלת ריכוזים 70%, 85% ו- 90%. מים סוף סוף הוסר על ידי שלוש אמבטיות אלכוהול המוחלט הסופי. קרחת היער מתבצע שלוש אמבטיות טולואן, חדירה שעווה, שעווה חמה אמבטיות (44 – 60 ° C). - להטביע את הרקמה בתוך תבנית מלאה פרפין מותכת (ראה טבלה של חומרים) ולחכות התמצקות.
- בסעיף ברקמות עובי של 3 μm על מיקרוטום פרפין-מוטבע.
- העברת הכלים פרפין לכוס מיקרוסקופ הטעון חיובית שקופית (ראה טבלה של חומרים).
- יבש את השקופית עבור h 1-37 מעלות צלזיוס.
הערה: אחסן את קטעי רקמה ב 2-8 ° C (מועדפת) או בטמפרטורת החדר עד 25 ° C כדי לשמר את antigenicity, כתם בתוך 15 ד' של חלוקתה.
2. הכנת דוגמאות ציטולוגיה
-
לאסוף את הסמפונות כביסות בפתרון משמרים (ראה טבלה של חומרים).
הערה: בשביל זה, ברונכוסקופיה רגילים משתמשים בטכניקה.- שטיפה חלוקת סמפון מתחננות שיטעמו. לאסוף כביסה במיכל נקי. תווית המיכל עם המטופל הראשון, שם משפחה, תאריך הלידה, ואת מקור הדגימה.
- להעביר את הסמפונות כביסות צינור חרוטי 50 מ"ל ולהוסיף 2 גר' DL-Dithiothreitol אבקה (ראה טבלה של חומרים), מערבולת הצינור במשך 30 דקות ולאחר מכן centrifuge זה ב x 250 g למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
- הסר את תגובת שיקוע והוסף 10 מ"ל של פתרון mucolytic (ראה טבלה של חומר).
- לנער את הדגימה כעשרים דקות במהירות בינונית (רמה 9), centrifuge זה ב 250 x g למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר.
- הסר את תגובת שיקוע, להפקיד בגדר תא במנורות האוסף המכיל 10% NBF.
- להוסיף 4 טיפות של ריאגנט הכנה בלוק תא (ראה טבלה של חומרים) כדי בגדר התא.
- להעביר בגדר תא קסטה, תקן את זה ב 10% NBF, פרפין- להטביע אותו עבור התא בלוק והכנה חלוקתה (ראה שלבים 1.1 – 1.7).
3. PD-L1 מכתים Assay
- . הפעילי את autostainer ואת המחשב
- לחץ פעמיים על הסמל autostainer ובחר את המשתמש.
- לחץ על 'צור תווית' ולאחר מכן על "פרוטוקול".
- לחץ פעמיים על פרוטוקול 22C 3.
הערה: הפרוטוקול קודם מותקן במחשב של autostainer על ידי לחיצה על ' צור פרוטוקול '. פרוטוקול מלא מסופק 1 קובץ משלים. - לכתוב מזהה המטופל על התווית ולחץ על 'הדפסה'.
- לתקוע את התווית על השקופית.
- פתח את המגירה שקופית על-ידי לחיצה על הלחצן של המגירה זה נבחר.
- מקום השקופית עם תוויות על משטח תרמי עם התווית פונה ואת פנימה.
- סגור את המגירה שקופיות.
- להסיר את הפקקים של החלוקה וטען את ריאגנטים על מדפים של נוגדנים.
- פתח את מכסה המנוע הוספת גוון לסמלים ומניחים המדפים על קרוסלת של ריאגנטים מוודא כי הם מתאימים ולהחזיק בעמדה.
- סגור את מכסה המנוע.
- התוכנה, לחץ על הכלי ישמש ולחץ על 'זורמים'.
- בסוף ההליך IHC, לשטוף את השקופית למשך מספר שניות עם מי ברז וטיפה אחת של ניקוי.
- נתרענן השקופית עם אמבטיה אחת של אתנול 100% ואמבט השני של אתנול 95% למשך מספר שניות.
- השקופית לתוך המכונה coverslipping להעלאה אוטומטית של coverslip המקום.
4. הפרשנות ההכתמה PD-L1
הערה: פתולוג מוסמך, יש לבצע את הפרשנות של הבדיקה IHC PD-L1.
- להעריך את איכות ההכתמה PD-L1 על-ידי ניתוח הפקדים חיוביים ושליליים לפני הבדיקה של הדגימה של המטופל.
הערה: התוצאות המתקבלות על הדגימה של המטופל נחשבים לא חוקיים אם ההכתמה של הפקדים אינה מקובלת. - לאשר הנוכחות של מינימום של 100 תאים סרטניים קיימא תחת מיקרוסקופ.
הערה: דוח כאשר הדגימה של החולה יש פחות מ-100 תאים סרטניים. - בהגדלה גדולה נמוך של 4 X, להעריך את כל אזורי גידול שלילי וחיובי שהשתמרה היטב.
הערה: בהגדלה נמוכה, קרום חלקי להכתים או קרום מכתים בעוצמה חלשה (1 +) עשוי להיות קשה לזהות. - ניקוד חלקי או מלא של קרום התא מכתים.
הערה: ההכתמה cytoplasmic יש ייכללו פרשנות. - לחשב תוכנית-המיתאר על-ידי הערכת שיעור PD-L1 בתאים גידול חיובי יחסית תאים סרטניים כל נוכח באזורי הגידול שהשתמרה היטב.
הערה: רק תאים סרטניים קיימא צריך להיבדק. כל הסלולר רכיבים אחרים, כגון תאים חיסוניים, תאים עם נמק, תאים נורמליים, וממצאים, צריך להיות נשלל מכל הבחינה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
באמצעות ההליך שהוצגו כאן, ולא כפי שתואר בפירוט של קבוצה זו האחרונה פרסומים10,11, LDT ממוטבת קלינית אומתה עם 120 דגימות ביופסיה ארכיוני FFPE NSCLC של חולים שעברו ניתוח כריתה או ביופסיה בבית החולים האוניברסיטאי פסטר, ניס, בין מרץ 2007 ו- 2016 מרס. יתר על כן, על הערכה PD-L1 הביטוי של דגימות ציטולוגיה, תוכנית-מיתאר הוערך 70 דגימות ביופסיה רקמות לזווג, בלוקי תא שהוכנו מ שוטף הסימפונות (n = 40) או מקרום הריאה (n = 30) (הנאספים את פסטר בית החולים האוניברסיטאי, נחמד, בין יולי 2014 2016 נובמבר). כל השקופיות היו טרי חתוך, צבעונית תוך 24 שעות.
נציג מכתים דפוס עם ביופסיה דגימות באמצעות רכז נוגדן 22C 3 (LDT), לעומת וזמינותו לוויה PD-L1 IHC 22C 3 (תקן הזהב) מוצג איור 1A ו- 1B. באמצעות תוכנית-מיתאר של ≥1%, 54/120 מקרים (45%) היו PD-L1 חיובית, תוך שימוש תוכנית-מיתאר של ≥50%, 29/120 מקרים (24%) נחשבו חיובי עבור PD-L1.
מקדם המתאם intraclass (ICC) המשמש למדידת המתאם של הציון TPS כמשתנה רציף היה 99% בין LDT תקן הזהב. באמצעות שני המיתאר לחתוך נקודות של ≥1% ל≥50%, הציונים κ הסכם interpathologist שווה ל- 1 בתוך הפלטפורמה LDT.
נציג מכתים דפוס עם ציטולוגיה דגימות באמצעות נוגדן 22C 3 להתרכז LDT לעומת ערכת PD-L1 IHC 22C 3 (תקן הזהב) מוצג באיור 1C ו- 1 D. הקצב קונקורדנציה של 70 זוגות של דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה עם LDT באמצעות או שאחד המיתאר לחתוך נקודות של ≥1% ו ≥50% היה גדול מ- 95%, וה -ICC באמצעות התוצאה TPS כפי משתנה רציף היה בין 0.88 0.90. ממצא זה היה עקבי לאורך כל סוג הדגימה ציטולוגיה (תפליט פלאורלי vs. שטיפת הסמפונות) או גידול היסטולוגיה (אדנוקרצינומה vs. קרצינומה של תאים קשקשיים) עם ICC בין 0.82 0.96. בהשוואת המיתאר PD-L1 של 37 (מתוך 70) זוגות של דגימות ציטולוגיה עם LDT על דגימות ביופסיה עם תקן הזהב, הקצב קונקורדנציה של % ≥1 תוכנית-המיתאר או של ≥50% תב לחתוך נקודת באמצעות היה גדול מ- 97%, ה-ICC היה בין 0.93 0.95.
איור 1: נציג מכתים דפוס על דגימות ביופסיה ו ציטולוגיה באמצעות את תרכיז נוגדן 22C 3 (LDT), לעומת IHC PD-L1 ערכת 22C 3 (תקן הזהב). (א) לוח זה מראה וזמינותו PD-L1 IHC 22C 3 בשימוש על ביופסיה של הגידול. (B) לוח זה מציג LDT ממוטב באמצעות את תרכיז נוגדן 22C 3 במקטעי טורי של הביופסיה הגידול באותו כפי שנותחו פאנל A. (ג) לוח זה מציג וזמינותו PD-L1 IHC 22C 3 לתא כלא. (ד) לוח זה מציג LDT ממוטב באמצעות נוגדן 22C 3 להתרכז מקטעים טורי מ באותו אגף כפי שנותחו בחלונית C. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הבדיקה והאימות של LDT ממוטב באמצעות. תתרכזי נוגדן PD-L1 22C 3, על-ידי השוואתה עם ה10,המקביל בדיקה קלינית המאומת מסחרי11. 22C 3 מרוכז נוגדן מבוססי LDT הראה שיעור קונקורדנציה גבוה בין ביופסיה (~ 100%) דגימות ציטולוגיה (~ 95%) בהשוואה הביטוי PD-L1 IHC נקבע באמצעות וזמינותו PD-L1 IHC 22C 3 ב ≥1% תב והן את ≥50% תב לחתוך נקודות. כמו לאחרונה המומלצת על ידי האגודה הבינלאומית המחקר של סרטן ריאות, האזורים חיובי PD-L1 צריך להיות זהה עבור 10 דוגמאות שליליות PD-L1, 10 דוגמאות חיוביות PD-L1, ודוגמאות 20 מכסים את הטווח הדינמי ליניארי של PD-L1 IHC קלינית לאמת מבחן8. אנו לבצע מחקר אימות ביופסיות 120 ודוגמאות ציטולוגיה 70. בסך הכל, הקונקורדנציה היה גבוה, ללא תלות הקיצוץ חיוביות, הסוג של דגימות, או גידול היסטולוגיה המיתאר. הממצאים המוצגים כאן הם מסכים עם אלה של אחרים מחקרים קודמים שהראו שיעור קונקורדנציה גבוה בשביל לרקמות והן ציטולוגיה דגימות12,13,14,15-
במחקר זה, כל דגימות תוקנו ב 10% NBF. אנחנו לא להעריך את ההשפעה של כתות ומייצבים אחרים, ואילו ההשפעה על PD-L1 מכתים של כתות אחרות ללא פורמלין ומייצבים כמו כתות ומייצבים מבוססי אלכוהול הוא כעת נחקרו. הנוכחות של תאים חיסוניים לבטא PD-L1, במיוחד מקרופאגים, צווי פרשנות זהירה של דגימות ציטולוגיה. אלה דוגמאות הערכת ביחס טורי hematoxylin והחלק אאוזין ו בחלק מהמקרים קשה, כתמי משלימים כדי להעריך את התאים החיסוניים ניתן לבצע כדי לא לכלול כל פירוש מוטעה של הביטוי PD-L1 בתאים סרטניים בלבד.
מחקר זה מחזיקה מספר מגבלות, כולל ניתוח רטרוספקטיבי על מוסד יחיד, ואת העובדה כי החולה לא היה שטופלו pembrolizumab כדי להעריך את התוצאה הקלינית. בנוסף, מגבלה מינור של LDT המובאת כאן דאגות התבנית מכתימים פרטנית שנצפתה לעיתים בעת שימוש במערכות הגברה, אשר עשויות להפוך את הפרשנות שלהם יותר קשה. יתר על כן, הדפוס ההגדלה של תאים חיסוניים הוא קצת יותר חזק מזה שנצפה עם תקן הזהב. ההכשרה של פתולוגים יש צורך לקבל פרשנות נכונה של PD-L1 מכתים עם IHC. 16
בהגדרה קלינית, היציבות של LDTs צריך להיות מתוחזק לאורך זמן על-ידי המבקשים אישור והסמכה לפי נהלי הבאים, על ידי המשתתפים באופן קבוע ערכות הערכת איכות חיצוני8. הערבות של ההופעה חזוי קליניים יכולים שמפות רק כאשר תנאים מוקדמים אלה הישגים8.
הפרוטוקול הציג כאן כתובות בצורך קריטי LDTs PD-L1 על דגימות ביופסיה והן ציטולוגיה כאשר מנותח על autostainer הנפוצה על פני אזורים גיאוגרפיים זה עשוי לא להיות מצויד וזמינותו תקן הזהב. LDT המובאים כאן, אשר היה מותאם משתמש את תרכיז נוגדן 22C 3, ניתן להעריך את הביטוי PD-L1 על דגימות ביופסיה והן ציטולוגיה מחולים NSCLC. זה תרחיב באופן משמעותי את מספר מעבדות יכולים להציע PD באיכות גבוהה-בדיקות לזיהוי חולים עם NSCLC L1 הזכאים לטיפול יחידני pembrolizumab, באופן אמין לשחזור.
כיוון עתידי פוטנציאלי הוא להעריך את הכדאיות של שימוש אחר סוגי הדגימה ציטולוגיה (למשל, דגימות מן הקנס-מחט הביופסיה, מונחה ברונכוסקופיה FNA, אם הם אולטרסאונד מונחה FNA ולאחר מברשות הסמפונות) עם נוגדנים 22C 3 מבוסס להתרכז LDTs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים אין לחשוף.
Acknowledgments
מחקר זה מומן על ידי מרק & ושות', בע מ, Kenilworth, ניו ג'רזי, ארה ב. התורמים שחיים אין תפקיד ב תכנון המחקר, איסוף נתונים, ניתוח, ההחלטה לפרסם או אופן ההכנה של כתב היד.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
References
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al. Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial. The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).
- Reck, M., et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).
- Langer, C. J., et al. Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study. The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).
- Buttner, R., et al. Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer. Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).
- Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis. Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).
- Padmanabhan, V., et al. Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).
- Tsao, M. S., et al. IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , International Association for the Study of Lung Cancer (IASLC) Press. (2017).
- Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective. Lung Cancer. , 102-105 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms. PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients. Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).
- Skov, B. G., Skov, T. Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).
- Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas. Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).
- Heymann, J. J., et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).
- Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy. Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).
- Ilie, M., Hofman, P. Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them. Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).
