Summary
Præsenteret her er en nyttig protokol for lunge fiksering, der skaber en stabil tilstand for histologisk evaluering af lunge prøver fra en musemodel af emfysem. Den største fordel ved denne model er, at det kan fastsætte mange lunger med samme konstante tryk uden lungekollaps eller deflation.
Abstract
Emfysem er et signifikant træk ved kronisk obstruktiv lungesygdom (KOL). Undersøgelser, der involverer en emphysematous musemodel, kræver optimal lunge fiksering for at producere pålidelige histologiske prøver af lungerne. På grund af arten af Lundens strukturelle sammensætning, som hovedsagelig består af luft og væv, der er en risiko for, at det kollapser eller presses under fikserings processen. Forskellige lunge fikserings metoder findes, som hver har sine egne fordele og ulemper. Den lunge fikserings metode præsenteret her udnytter konstant tryk for at muliggøre optimal vævs evaluering for undersøgelser ved hjælp af en emphysematous mus lunge model. Den største fordel er, at det kan fastsætte mange lunger med samme tilstand på én gang. Lunge prøver er fremstillet af kroniske cigaretrøg-udsatte mus. Lunge fiksering udføres ved hjælp af specialiseret udstyr, der muliggør produktion af konstant tryk. Dette konstante tryk opretholder lungerne i en forholdsvis oppustet tilstand. Således, denne metode genererer en histologisk prøve af lungerne, der er egnet til at evaluere cigaretrøg-induceret mild emfysem.
Introduction
COPD er en af de førende verdensomspændende dødsårsager1. Cigaretrøg er den vigtigste årsag til KOL, men mekanismerne i patogenesen forbliver ufuldstændigt defineret. COPD udviser to hovedkarakteristika, herunder progressiv begrænsning af luftstrømmen og en unormal inflammatorisk reaktion i lungerne. Emphysematous lidelse forekommer hyppigt i lungerne hos KOL-patienter2. De patologiske fund af emfysem er karakteriseret ved alveolær væg ødelæggelse3. Flere dyrearter er blevet anvendt til at frembringe COPD-modeller in vivo (dvs. hunde, marsvin, aber og gnavere)4. Men, musen er blevet den mest almindeligt anvendte i opbygningen af COPD modeller. Dette har mange fordele, herunder dens lave omkostninger, evne til at blive genetisk modificeret, omfattende genomisk information tilgængelighed, tilgængelighed af antistoffer, og evnen til at bruge en række muse stammer5. I øjeblikket er der ingen musemodel, der kan efterligne de fulde funktioner i human COPD; således skal de enkelte forskere vælge, hvilken model der er mest egnet til den specifikke KOL forskning6. Den emphysematous musemodel er en af mange COPD musemodeller, der i øjeblikket er tilgængelige. Yderligere modeller omfatter eksacerbations musemodel, systemisk Co-morbiditeter model, og COPD følsomhed model7.
Den emphysematous musemodel kan genereres af flere typer af eksogene agenter, herunder kemiske agenser og cigaretrøg eksponering4. Kemisk eksponering (f. eks. til elastase) producerer en alvorlig type emfysem, mens cigaretrøg resulterer i mild emfysem8,9. Cigaretrøg menes at være den vigtigste årsag til patogenesen af KOL; Derfor er valget af cigaretrøg som et middel til at skabe en COPD musemodel er rimelig10. Mange undersøgelser har brugt cigaretrøg til at skabe emfysem i musen. For eksempel, Nikula et al. held skabt en emphysematous musemodel fra B6C3F1 hunmus ved at udsætte dem for cigaretrøg i 7 eller 13 måneder11. Vi har også etableret en emphysematous musemodel via senescens markør protein/SMP-30 KO-mus12. Det er afgørende at udføre en lunge fiksering metode, der kan korrekt visualisere denne milde emfysem model ved cigaretrøg eksponering.
Der er etableret forskellige metoder til lunge fiksering13. Men, der er ingen guld standardmetode til lunge væv fiksering til evaluering af emfysem14. Flere undersøgelser fra dette laboratorium har vist, at fikserings systemet præsenteret her er nyttigt ved at skabe en stabil tilstand for evaluering af emfysem12,15,16,17,18. Den største fordel ved det nuværende system er, at det kan fastsætte mange lunger med samme tilstand på én gang uden lungekollaps eller deflation. Det nuværende lunge fikseringssystem bruger noget særligt udstyr, der gør det muligt at oppustet lunge prøver ved et passende konstant tryk i en given periode. Dette specialudstyr består af tre dele, herunder en nedre beholder, øvre beholder og pumpe. Lunge prøver anbringes i den nedre beholder, der er forbundet med tryk fastgørings midler, hvilket resulterer i en 25 cmH2O trykforskel i niveauet af agenter mellem øvre og nedre beholdere19.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende metoder er blevet godkendt af Udvalget for dyrepasning og-brug i Juntendo University School of Medicine. Retningslinjerne for korrekt gennemførelse af dyreforsøg, videnskabelige råd i Japan, juni 1, 2006 blev fulgt. Der er tre vigtigste trin i denne metode: 1) mus dissektion, 2) lunge exsanguination, og 3) fiksering af lungevævet bistået af specialiseret udstyr. Typisk behandles lunge prøver til nedstøbning efter 48 h fiksering12,15,16,17,18.
1. dissektion med mus
- Mål kropsvægten af musen, derefter bestemme mængden af pentobarbital at administrere.
- Injicer pentobarbital intraperitonealt med en dosis på 70 mg/kg legemsvægt og bekræft anæstesi ved fravær af reaktion på tåen knivspids.
- Injicer nålen i en vinkel på 45 °, indtil den trænger ind i huden og musklen. Tegn stemplet og bekræft et luft vakuum, og Injicer derefter pentobarbital.
- Bekræft anæstesi ved fravær af refleks bevægelse.
Bemærk: Brug bedøvet mus i modsætning til en aflives mus anbefales til fuldt lunge exsanguination. - Skær muse huden og abdominal musklen på mediale linje, sigter til cephalgic område.
- Skær sideværts for at give et bredere arbejdsrum.
2. lunge-exsanguination
- Eksponere membran laget og punktere det med tang.
- Åbn thorax rummet og skær brystbenet området, så lungerne og hjertet kan ses tydeligt.
- Skær hjertet i venstre atrium og højre ventrikel.
- Der indsættes en kanyle (24 G) i det højre ventrikel område, og den dirigles til cephalgic-området, indtil den når lungearterien, som vist i figur 1.
- Tænd for pumpen og lad 1x fosfat-Buffered saltvand (PBS) cirkulere (ca. 200 mL/t), indtil alle lungevævet skifter til en hvid farve.
3. fiksering af lungevævet
- Fjern luftrøret, lungerne og hjertet.
- Frigør alle tre organer ved at skære det omgivende bindevæv.
- Binde den rigtige hoved Bronkie med en sutur tråd og skære alle lapper af den rigtige lunge.
- (Valgfrit): de højre lunge lapper består af fire dele. Skær disse dele fra højre hoved Bronkie og opdele delene til forarbejdning som frosne vævsprøver.
- Indsæt hjertet og loberne af den venstre lunge i fastgørelsesmidler, placeret inde i en 10 mL sprøjte.
Forsigtig: fastgørelsesmidler er farlige. Bær korrekt beskyttelsesudstyr (f. eks. lange gummihandsker), og Arbejd i et godt ventileret rum. - Opret en vakuum tilstand ved hjælp af en 10 mL sprøjte for at puste lungerne, som vist i figur 2.
- Indsæt en kanyle (20 G) i luftrøret og binde en knude.
- Oppump lungerne med fastgørelsesmidler, der skal kontrolleres for lækager, ved hjælp af en 1 mL sprøjte.
- Overførsel til lunge fikserings trykudstyr, som illustreret i figur 3.
- Efter fastsættelse perioder, fjerne lunge prøven binde luftrør ud med en knude.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Som beskrevet tidligere, kan det specialiserede udstyr, som genererer forlænget konstant tryk, opdeles i tre dele (figur 3A). Den nederste del er det punkt, hvor lunge prøven skal indsættes (figur 4A). Lungerne er forbundet via en kanyle (20 G) til spidsen af formalin flow ved hjælp af en trevejs stophane (figur 4B). Der dannes tryk fra de forskellige overflade niveauer af fastgørelsesmidler mellem de nedre og øvre beholdere (figur 5). Trykforskellen er 25 cmH2O; ved hjælp af højde justeringsknappen kan trykket dog justeres inden for intervallet 25 – 30 cmH2O (figur 5). En pumpe forbinder de nedre og øvre beholdere via rør (figur 3A), bevarer en 25 cm forskel i fastsættelse agent overflade højde. Retningen af agens flow er beskrevet i figur 3B.
Præsenteret næste er et repræsentativt resultat af histologiske fund i lungerne, efter 48 h fiksering. Seks måneder gamle mandlige SMP30-KO-mus blev udsat for cigaretrøg eller frisk luft (som kontrol) i 8 uger. Begge vævsprøver blev plettet med hematoxylinlegemer og eosin. Figur 6 A viser histologiske fund fra de luft-udsatte mus, som ikke udviser en markant udvidelse af luftrummet. I modsætning hertil afslører figur 6B en betydelig udvidelse af luftrummet og en alveolær vægødelæggelse i mus, der blev udsat for kronisk cigaretrøg.
De gennemsnitlige lineære aflyter (MLI) blev bestemt efter den metode, der er beskrevet af Thurlbeck et al. 20 for at få adgang til luftrums størrelsen. Det destruktive indeks (DI) var fast besluttet på at evaluere ødelæggelsen af alveolær væggen efter den metode, der er beskrevet af Saetta et al. 21. disse morphometriske undersøgelser af lunge prøven afslørede, at di og MLI var signifikant større i de røg-EKSPONEREDE SMP30-ko-mus end hos de luft udsatte mus (figur 6C, D).
Figur 1: lunge-exsanguination. En kanyle blev indsat på placeringen af højre ventrikel og rettet til lungearterien. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: vakuum sprøjtens lunge inflation. Vakuum tilstand inde i 10 mL sprøjten med fastgørelsesmidler for at puste lungerne. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: lunge fikserings udstyr. (A) akryl udstyr tilladt en 25 CMH2O trykforskel at puste lungerne kontinuerligt for 48 h, ved hjælp af en pumpe maskine. (B) retningen af fastgørelses agens flow er angivet med pile. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: nedre beholder. (A) musens lunge prøve blev anbragt inde i fastgørelsesmidler i den nedre beholder. B) i den nedre beholder er der en prøve placeringsboks, hvor formalin løber gennem en trevejs stophane og kanyle. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: øvre beholder og højde justeringsknap. Den øvre beholder genererede et tryk på 25 cmH2O. Der er to par højde justeringsknapper, som kan bruges til at justere højden af den øvre beholder; som følge heraf kan det tryk, der genereres, indstilles inden for intervallet 25 – 30 cmH2O. Klik venligst her for at se en større version af dette tal.
Figur 6: mus lunge histologisk og morphometriske fund. Repræsentative histologiske billeder af lunge sektioner fra 8-ugers cigaretrøg-eksponeret eller luft-eksponeret SMP30-KO mus (6 måneder gamle, mandlige), farvet med hematoxylin-eosin. Scale bar = 100 μm. A) den luft udsatte gruppe ikke udviser væsentlige udvidelser eller andre resultater. B) cigaret røgudsatte grupper udviste markant udvidelse af luftrummet og ødelæggelse af alveolære vægge. C) de gennemsnitlige lineære aflyter (MLI). I lungerne af cigaretrøg-udsatte mus, MLI var betydeligt større end luft-udsatte mus (* p < 0,001). D) det destruktive indeks (di). I lungerne af cigaretrøg-udsatte mus, DI blev signifikant forøget i forhold til lungerne af luft-udsatte mus (* p < 0,001). Værdier vises som middelværdien ± SD (n = 6 for hver gruppe). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Fikserings proceduren for gnavere lunger præsenteret her er ikke roman; Dette system har dog flere fordele. For det første kan det løse mange lunger (maksimum på 20) med samme tilstand på én gang. Foreningen af toksikologisk patologi hedder det, at trykket for tyngdekraften instillation varierer fra 22 – 25 cmH2O22. Flere undersøgelser har især udført lunge fiksering ved et tryk på 25 CMH2O13,19,23,24,25,26,27 , som er blevet vedtaget i vores laboratorium ved hjælp af det nuværende system12,15,16,17,18.
For det andet, det kan fastsætte lunge væv ved et konstant tryk i forskellige perioder af tid. I vores laboratorium, er lunge prøver normalt fastgjort til 48 h. Mange efterforskere bruger en relativt kort periode (f. eks. 5 – 20 min)13,28,29,30,31,32, derefter binde den oppustet lunge og fordybe sig i formalin i længere tid efter behov. Der er ingen data eller forskning indikerer en guld standard for længden af varighed for lunge fiksering. Men erklæringen fra American Thoracic Society (ATS)/European respiratorisk Society (ERS) beskriver "Silver standard", hvor luftvejene inflationstryk skal opretholdes i mindst 24 h14. Det japanske samfund af patologi anbefalede også fikserings tider på ikke længere end 1 uge til at producere konsistente immun histokemiske slides; selv om deres anbefaling er baseret på analyse ved hjælp af humane prøver33. Relativt korte fikserings perioder er muligvis ikke gældende for det nuværende system, fordi hver prøve formodes at være placeret enkeltvis i den nedre beholder. Dette er en begrænsning af det nuværende system. Afslutningsvis, den korrekte længde af tid til mus lunge fiksering forbliver ukendt.
Kritiske trin i denne metode er relateret til risikoen for lunge formalin lækage under formalin fikserings processen. Lunge formalin lækage kan forårsage lunge størrelses krympning. Denne risiko kan opdeles i to dele. Den første del opstår under offer trinnet. Mens du åbner thorax bur, er det vigtigt ikke at forårsage skade på lunge overfladen. Nøglen til forebyggelse er at nærme sig dette fra membranen og fortsætte med at skære thorax rib bur efter lungerne er løsrevet fra parietal pleura. Denne metode undgår lungeskade forårsaget af kirurgisk udstyr. Et andet vigtigt skridt opstår, når binde den rigtige hoved bronchus. Det er vigtigt at identificere, hvilke er musens højre lobes. At placere lungerne i en position, hvor de kan ses fra en rygudsigt, gør det lettere at identificere placeringen af lungerne.
Den anden del er under lunge fikserings processen ved hjælp af specialiseret udstyr. Der opstår et kritisk trin, når lunge prøven indsættes i den nedre container formalin port. Det bør bekræftes, at indsættelsen er tæt fastgjort for at forhindre, at der løsrives lunge prøver fra formalin-porten under den konstante trykproces. Et andet aspekt at fremhæve er slangeforbindelsen mellem de tre dele af specialiseret udstyr (nedre beholder, øvre container, og pumpe). Alle rørtilslutninger skal være tæt forbundet. Hvis der opstår lækage, vil formalin-volumenet i den øvre beholder falde, hvilket reducerer det konstante tryk.
Ifølge anbefalinger fra foreningen af toksikologisk patologi, intratrakeal instillation af formalin har fordele for gnavere lunge model, som forrang over sine ulemper22. De har foreslået anvendelse af en intratrakeal formalin fikserings metode ved udførelse af kvantitative undersøgelser af alveolær lunge morphometri. Intratracheal lunge instillation har to fordele, herunder bevarelse af luftvejene og alveolær væggen samt visualisering af lunge parentchyma22. En undersøgelse af Braber et al. afslørede, at intratrakeal formalin instillation metode er overlegen med hensyn til at bevare lunge struktur sammenlignet med vakuum inflation og helkrops perfusion metoder13. Den nuværende metode udnytter intratrakeal instillation i en musemodel for at optimere visualisering af det alveolære område.
Med hensyn til fastgørings midler anvendes 10% formalin, som indeholder formaldehyd, konventionelt. Formaldehyd er almindeligt anvendt som en fastgørelsesmiddel til immunopatologiske undersøgelser, fordi det ikke helt ødelægger protein immunogenicitet. Den ATS/ERS erklæring anbefaler ikke formalin fiksering, fordi det ikke tilstrækkeligt stabilisere vævs struktur14. Glutaraldehyd anbefales til luftvejs instillation i stedet; Men, det er genstand for at ødelægge protein immunogenicitet, hvilket resulterer i en uegnet fastgørelsesmiddel til immun histokemi. Flere beviser har rapporteret, at de faste lunger kan gives til morphometrisk evaluering (f. eks. gennemsnitlige lineære aflyter, internt overfladeareal og destruktivt indeks) efter formalin fiksation ved hjælp af det nuværende fikseringssystem12 , 15 , 16 , 17 , 18. glutaraldehyd kan bestemt vedtages for det nuværende system; således kan forskerne vælge begge agenter i det nuværende system i henhold til eksperimentelle behov.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen konkurrerende interesser at erklære.
Acknowledgments
Dette arbejde blev delvist støttet af JSPS KAKENHI Grant nummer 26461199 (T. Sato) og instituttet for miljø-og kønsspecifik medicin, Juntendo University Graduate School of Medicine, Tilskudsnummer E2920 (T. Sato). Funder havde ingen rolle i udformningen af de nuværende metoder og i at skrive manuskriptet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 10% formalin (formalin neutral buffer solution) | Wako | 060-01667 | |
| Bent forceps | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cannula, size 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Cannula, size 22G | Terumo | SR-OT2225C | Cannula to exsanguinate lung |
| Forceps | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Lower container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
| Roller pump | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Pump machine to exsanguinate lung |
| Roller pump RP-2000 | Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Pressure equipment pump |
| Silicone tube Ø 9 mm | Sansyo | 94-0479 | Pressure equipment component |
| Somnopentyl (64.8 mg/mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Sodium |
| Surgical scissor | Hammacher | HSB014-11 | |
| Suture thread, size 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Syringe, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| Syringe, 1 ml with needle | Terumo | SS-01T2613S | |
| Syringe, 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Three-way stopcock | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Upper container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
References
- Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
- Pauwels, R. A., Rabe, K. F. Burden and clinical features of chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Lancet. 364 (9434), 613-620 (2004).
- Spurzem, J. R., Rennard, S. I.
- Vlahos, R., Bozinovski, S., Gualano, R. C., Ernst, M., Anderson, G. P.
- Vlahos, R., Bozinovski, S. Recent advances in pre-clinical mouse models of COPD. Clinical Science (Lond). 126 (4), 253-265 (2014).
- Stevenson, C. S., Belvisi, M. G. Preclinical animal models of asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Expert Review of Respiratory Medicine. 2 (5), 631-643 (2008).
- Stevenson, C. S., Birrell, M. A. Moving towards a new generation of animal models for asthma and COPD with improved clinical relevance. Pharmacology and Therapeutics. 130 (2), 93-105 (2011).
- Vandivier, R. W., Ghosh, M. Understanding the Relevance of the Mouse Cigarette Smoke Model of COPD: Peering through the Smoke. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 57 (1), 3-4 (2017).
- Wright, J. L., Cosio, M., Churg, A. Animal models of chronic obstructive pulmonary disease. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (1), L1-L15 (2008).
- Rennard, S. I., Togo, S., Holz, O. Cigarette smoke inhibits alveolar repair: a mechanism for the development of emphysema. Proceedings of the American Thoracic Society. 3 (8), 703-708 (2006).
- Nikula, K. J., et al. A mouse model of cigarette smoke-induced emphysema. Chest. 117, 246S-247S (2000).
- Sato, T., et al. Senescence marker protein-30 protects mice lungs from oxidative stress, aging, and smoking. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 174 (5), 530-537 (2006).
- Braber, S., Verheijden, K. A., Henricks, P. A., Kraneveld, A. D., Folkerts, G. A comparison of fixation methods on lung morphology in a murine model of emphysema. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 299 (6), L843-L851 (2010).
- Hsia, C. C., et al. An official research policy statement of the American Thoracic Society/European Respiratory Society: standards for quantitative assessment of lung structure. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 181 (4), 394-418 (2010).
- Kasagi, S., et al. Tomato juice prevents senescence-accelerated mouse P1 strain from developing emphysema induced by chronic exposure to tobacco smoke. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 290 (2), L396-L404 (2006).
- Koike, K., et al. Complete lack of vitamin C intake generates pulmonary emphysema in senescence marker protein-30 knockout mice. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 298 (6), L784-L792 (2010).
- Koike, K., et al. Vitamin C prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in mice and provides pulmonary restoration. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (2), 347-357 (2014).
- Suzuki, Y., et al. Hydrogen-rich pure water prevents cigarette smoke-induced pulmonary emphysema in SMP30 knockout mice. Biochemical and Biophysical Research Communications. 492 (1), 74-81 (2017).
- Saad, M., Ruwanpura, S. M. Tissue Processing for Stereological Analyses of Lung Structure in Chronic Obstructive Pulmonary Disease. Methods in Molecular Biology. 1725, 155-162 (2018).
- Thurlbeck, W. M. The internal surface area of nonemphysematous lungs. The American Review of Respiratory Disease. 95 (5), 765-773 (1967).
- Saetta, M., et al. Destructive index: a measurement of lung parenchymal destruction in smokers. The American Review of Respiratory Disease. 131 (5), 764-769 (1985).
- Renne, R., et al. Recommendation of optimal method for formalin fixation of rodent lungs in routine toxicology studies. Toxicologic Pathology. 29 (5), 587-589 (2001).
- Schneider, J. P., Ochs, M. Alterations of mouse lung tissue dimensions during processing for morphometry: a comparison of methods. American Journal of Physiology Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (4), L341-L350 (2014).
- Wright, J. L. Relationship of pulmonary arterial pressure and airflow obstruction to emphysema. Journal of Applied Physiology. 74 (3), 1320-1324 (1993).
- Wright, J. L., Churg, A. Cigarette smoke causes physiologic and morphologic changes of emphysema in the guinea pig. The American Review of Respiratory Disease. 142 (6 Pt 1), 1422-1428 (1990).
- Thurlbeck, W. M. Internal surface area and other measurements in emphysema. Thorax. 22 (6), 483-496 (1967).
- Wright, J. L., et al. Airway remodeling in the smoke exposed guinea pig model. Inhalation Toxicology. 19 (11), 915-923 (2007).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964 (2015).
- Roos, A. B., Berg, T., Ahlgren, K. M., Grunewald, J., Nord, M. A method for generating pulmonary neutrophilia using aerosolized lipopolysaccharide. Journal of Visualized Experiments. (94), (2014).
- Laucho-Contreras, M. E., Taylor, K. L., Mahadeva, R., Boukedes, S. S., Owen, C. A. Automated measurement of pulmonary emphysema and small airway remodeling in cigarette smoke-exposed mice. Journal of Visualized Experiments. (95), 52236 (2015).
- Nakanishi, Y., et al.
- Maeno, T., et al. CD8+ T Cells are required for inflammation and destruction in cigarette smoke-induced emphysema in mice. Journal of Immunology. 178 (12), 8090-8096 (2007).
- Sato, M., et al. Optimal fixation for total preanalytic phase evaluation in pathology laboratories: a comprehensive study including immunohistochemistry, DNA, and mRNA assays. Pathology International. 64 (5), 209-216 (2014).
