このプロトコルでは、シュー クリームと Talalay 組み合わせインデックス式を使用して抗がん剤抗体と前臨床モデルで抗悪性腫瘍薬の間の相乗作用を評価する方法について説明します。
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方法論記事
抗がん剤抗体抗悪性腫瘍薬による効果の増強: 組み合わせインデックス式を用いた抗体医薬の相乗作用の検出
* These authors contributed equally
この記事について
サマリー
要約
敵対的なモノクローナル抗体 (mAb) による化学療法剤の増強効果は、がんに対して効果的で安全な治療を設計するための重要な戦略を構成します。ここでは、前臨床段階で合理的な組み合わせを識別するプロトコルを提供します。まず、Talalay ・周1の組み合わせのインデックス式を使用する抗癌剤 mAb と細胞毒性薬物の相乗効果を評価するために細胞に基づく試金を記述します。これは測定の腫瘍細胞と抗体-感受性インデックス (CI) 値の組み合わせを計算するコンピューターが自動的に分析に続いて、MTT アッセイを使用して含まれています。CI の値 < 1 テスト Mab と細胞毒性薬1間の相乗作用を示します。体外の調査結果、体内を裏付ける、さらに異種移植腫瘍モデルの組み合わせ療法の有効性を評価する方法を説明します。このモデルでは、併用療法が腫瘍の成長は、単剤コントロールと比較して有意な拡張生存の結果大幅に遅れます。重要なは、生体内で実験は併用療法は忍容性を明らかにします。このプロトコルには、前臨床モデルで抗癌性の薬剤の組み合わせの有効性評価と臨床試験を評価する合理的な組み合わせの同定ができます。
概要
癌のさまざまな種類の多数の治療に従来のアプローチは、単独療法に基づいていた。場合でも、それは多くの場合使用このメソッドは複合療法2を選ぶことにつながるいくつかの障害に会った。特に、がん細胞が耐性を代替生存メカニズム3患者4の治療の失敗の結果を誘導することによって単一の薬剤と扱われたときになりやすい。また、単独療法、薬、高用量で投与は通常。多くの場合このような状況は我慢でき治療2を停止するために医師を強制的に強力な用量依存性副作用の発生の結果します。これらの理由から、抗癌剤分子の協会は今単独投与することが好ましい。
理想的な薬の組み合わせは、正常細胞に対して毒性を増加することがなく、腫瘍細胞に対する相乗効果で作用するでしょう。相乗効果は、それぞれ個々 の薬剤別に演技の合計よりも大きい治療効果を生成する 2 つ以上の薬剤の相互作用を指します。このような相互作用が臨床治療効果2にあります。治療抵抗性を制限、効果をアップ、また毒性2を減らすことができます。実際には、その副作用を下げる様々 な経路をターゲットに各薬剤の投与量を削減できます。さらに、分子の 1 つはまた癌細胞に対する増感剤として使用できま....
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プロトコル
動物飼育・実験の手順は、(契約 #C44 278 ・ #APAFIS 03479.01) は、フランス政府によって承認されました。動物のケアと手順が #2013-118 科学的目的に使用される動物の保護に関する指令 EU 2010/63/EU とフランス法の下で実施されました。
1. mAb 8B6 薬物相互作用間とトポテカンの併用体外の評価
- 96 ウェル サンプル準備
注意: 機関の健康と安全委員会に相談し、実験室の安全に関連するローカル規制ルールに従います。メディアや細胞、試薬の使用前に素材・安全データ シートの情報を確認します。適切な無菌技術を使用し、層流フードの仕事します。セルの操作に使用されるすべてのソリューション/機器は滅菌である必要があります。
注: 次のプロトコルは付着性のセルで使用するために設計されました。非粘着性細胞懸濁液; 成長にメソッドを適用するために必要な変更このプロトコルは、実験条件ごとに 4 連を使用します。- T75 フラスコの IMR5 セルを育てます。
- 最初の日 (0 日目)、細胞密度を確認する顕微鏡下で細胞培養を観察します。フラスコから細胞の培地を吸引、リン酸緩衝生理食塩水 (PBS) 5 mL で洗い、0.05% エチレンジアミン四酢酸 (EDTA) の 3 mL を追加/PBS ソリューション。フラスコを (37 °....
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結果
代表的な結果や数字14以前出版された仕事からの許可と適応されます。
抗 OAcGD2 モノクローナル抗体 8B6 相乗的神経芽細胞腫細胞ライン増殖に対するトポテカンの抑制効果を高めます。
薬とトポテカンと mAb 8B6 ・薬・ MTT アッセイを用いた神経芽細胞腫を最初に測定した人間の IMR5 の抗体依存性間の相乗作用を評価するために使用する抗体濃度を確立。MAb 8B6 やトポテカン 72 時間だけへの暴露は、IMR5 セル実行可能性 (図 4 a)、濃度依存的な抑制で起因しました。用量反応曲線は、各化合物の50値 ED の計算を許可しました。このため、解析シミュレ.......
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ディスカッション
薬物相互作用の効果を予測する 3 つの方法を使用できます: isobologram 方法論17、非線形混合モデル18、および組み合わせインデックス1。インデックス分析の組み合わせは、ユーザーフレンドリーなコンピューター プログラムの可用性でそのアプリケーションを簡略化するために最もよく使用されます。この目的のため我々 は最初 MTT の試金19を実行することによって単独で、または組み合わせてを使用した各エージェントの量影響応答を特徴付けられます。この方法論は、570 nm19の吸光度の最大値を持つ紫色の塩製品でテトラゾリウム塩を減らすために実行可能なセルの能力に依存します。死では、セルは、MTT を塩に変換する能力を失います。したがって、色の塩製品の数量は文化19で実行可能なセルの数に比例です。確かに、測定セル増殖19.......
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開示事項
S.Fa、j. f. と s ちゃんは、保留中の抗-O-アセチル-GD2 抗体医薬の臨床応用をカバーする特許の発明者として指定されます。
謝辞
サポートを付与: 財団・ デ ・挙デ L 'ユニヴェルシテ ・ ド ・ ナント、レ Bagouz' à La Ligue contre le がん comité マノン ・ ド ・ ロワール = アトランティック県、comité デュ モルビアンと comité ・ ド ・ ヴァンデの宇根バラを注ぐ S.A.R.A.H、エトワール ・ ド ・ マーティンとソシエテ ・ フランセーズ ・ デ ・ ルッテ contre レ ラ癌エ レ leucémies デ ランファン et ・ デ ・ L'adolescent (SFCE)。および j. f. は、La Ligue Contre Le がんによってサポートされます。著者は、構造 Fédérative ・ フランスのフランソワ ・ Bonamy の UTE 施設をありがとうございます。著者は、IMR5 セルを提供するための博士 s. Suzin (Inserm、パリ) とさん h. Estéphan を彼女のテクニカル サポートにもありがとうございます。
....アクセスが制限されています。このコンテンツを表示するにはログインするか、トライアルを開始してください。
材料
| 名前 | 会社 | カタログ番号 | コメント |
|---|---|---|---|
| Cell Proliferation kit (MTT) | Roche | 11-465-007-001 | |
| CompuSyn software | ComboSyn | Combosyn は、http://www.combosyn.com | |
| 電気シェーバー | Bioseb | BIO-1556 | |
| Fetal calf serum | Eurobio | CVFSVFF00-01 | RPMI 1640 Firefox の 10% 熱不活性化子牛胎児血清 |
| で無料でダウンロードできます。 | Mozilla Corporation | Firefoxは、http://www.mozilla.org/en-US/firefox/ | |
| Heat lamp | Verre&から無料でダウンロードできます。クォーツ | 4003/1R | |
| の人間の神経芽細胞腫IMR-5の細胞株 | Accegen Biotechnology | ABC-TC0450 | IMR-5は5459762の人間の神経芽腫の細胞株IMR32のクローンである。IMR-5細胞は、Santos Susin博士(U.872、パリ、フランス)L |
| -グルタミン | Gibco | 25030-024 | 2 mM in RPMI 1640 |
| Lysis溶液 | ロシュ | 11-465-007-001 | |
| mAb 8B6 | ナント大学 | N/A | |
| マトリゲル | コーニング | 354248 | |
| ムルティカン FC | サーモフィッシャー サイエンティフィック | N08625 | |
| 針21G 1½ | BD Microlance | 304432 | |
| Needle 25G 1 | Terumo | NN-2525R | |
| NSG マウス | Charles River Laboratories | 5557 | |
| Nunc MicroWell 96-well microplates | Thermofisher | 167008 | |
| PBS | VWR | L182-10 | |
| PBS, 0,05% EDTA | Sigma-Aldrich | E9884 | |
| PC を実行するWindows 7 | Microsoft | Windows 7は、http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7 ペ | |
| ニシリン-ストレプトマイシン | Gibco | 15140-122 | 100ユニット/ mLペニシリン、100 mg / mLストレプトマイシン、RPMI、1640 |
| リザーバー | 、Thermofischer Scientific | 8094 | |
| 、げっ歯類、抑制剤 | Bioseb | TV-150-SM | |
| RPMIで購入できます。1640 | Gibco | 31870-025 | |
| シリンジ 1 mL | Henke Sass Wolf | 5010.200V0 | |
| トポテカン | Sigma-Aldrich | T2705 |
参考文献
- Chou, T. C. Theoretical basis, experimental design, and computerized simulation of synergism and antagonism in drug combination studies. Pharmacological Reviews. 58 (3), 621-681 (2006).
- Bayat Mokhtari, R., et al. Combination therapy ....
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再版と許可
