Summary
Denne protokol udgør en i vivo rotte model af selvklæbende capsulitis. Modellen omfatter en intern fiksering af glenohumeral fælles med ekstra artikulære sutur fiksering i længere tid, resulterer i en nedsat roterende vifte af bevægelse (ROM) og øget stivhed.
Abstract
Dette forslag sigter på at skabe en i vivo rotte model af selvklæbende capsulitis for forske potentielle behandlingsmuligheder for denne betingelse og andre etiologies af sammenlignelige arthrofibrosis. Modellen indeholder ekstra artikulære fiksering af skulderen i rotter via skulderblad til overarm sutur, resulterer i en sekundær kontraktur uden invaderer den intra-artikulær plads og resulterer i nedsat roterende ROM og øget fælles stivhed.
Vi brugte 10 Sprague-Dawley rotter med henblik på denne undersøgelse. Baseline ROM målinger blev taget før glenohumeral immobilisering. Rotter blev udsat til 8 ugers immobilisering før fiksering suturer var fjernet og ændringer i ROM og ledstivhed blev evalueret. For at vurdere hvorvidt immobilisering resulteret i en betydelig reduktion i ROM, blev ændringer i kinematik beregnet. ROM blev målt til hvert tidspunkt i opfølgningsperioden og var i forhold til baseline interne og eksterne ROM målinger. For at vurdere den stivhed, fælles kinetik blev beregnet ved at bestemme de forskelle i drejningsmoment (text og tint ) nødvendig for at nå de oprindelige ekstern rotation af 60 ° og indledende indadrotation af 80 °.
Efter fjernelse af ekstra artikulære sutur fiksering på opfølgende dag 0 fandt vi en 63% fald i samlede ROM i forhold til grundlinjen. Vi observerede løbende forbedring indtil uge 5 af opfølgning, med de fremskridt, der er bremse omkring 19% begrænsning. Uge 8 af opfølgning, der var stadig en 18% begrænsning af ROM. Derudover opfølgningsdagen 0, fandt vi det drejningsmoment, steg med 13,3 Nmm i forhold til baseline. Uge 8, den samlede drejningsmoment blev målt til at være 1,4 ± 0,2 Nmm højere end oprindelige målinger. Dette arbejde introducerer en rotte model af skulder selvklæbende capsulitis med varig nedsat ROM og øget stivhed.
Introduction
Selvklæbende capsulitis af skulderen er ofte omtales som frossen skulder eller skulder kontraktur. Det er kendetegnet ved begrænset glenohumeral bevægelse og smerter, formentlig som følge af fremskreden fibrose og fælles kontraktur1,2,3. Betingelsen indebærer fibroblast og myofibroblast celle ansættelse med en deraf følgende tætte kollagen matrix (type I og III) i fælles kapsel2,3. Der er mange mulige risikofaktorer for at udvikle en fælles kontraktur, herunder køn, diabetes mellitus, hyperthyroidisme, traumatisk skade, og forlænget immobilisering4,5,6.
Effektive behandlingsmuligheder mangler og for det meste omfatte fysisk terapi, med intervention i form af kirurgisk frigivelse i ekstreme tilfælde, der ikke er blevet forbedret med konservativ behandling. Den bedste behandlingsmetode er fortsat uafklaret og har været genstand for stor interesse for år i medicinsk felt7,8. Udvikling af nye terapeutiske muligheder vil kræve en reproducerbar dyremodel for den betingelse, at ikke stole på intra-artikulær induceret traumer. Den optimale selvklæbende capsulitis model bør omfatte de to vigtigste karakteristika ved sygdommen: kontraktur af skulderen kapsel og en langvarig reduktion i bevægelse (ROM). Schollmeier et al. 9 beskrevne en af de første fælles kontraktur modeller ved hjælp af en støbt for at udvikle skulder kontraktur i hjørnetænder. De rapporterede også, at ændringer i ROM og intra-artikulær presset tilbage til normale niveauer efter ophør af immobilisering9. Men en vigtig begrænsning, der er nævnt i undersøgelsen er variationen i lemmer position mellem dyr på grund af brugen af en støbt teknik. For at opnå en mere reproducerbare model, Kanno et al. 10 præsenteret senere en selvklæbende capsulitis rotte model ved hjælp af stive intern fiksering af skulderen. Men, selv om de opnåede en betydelig reduktion i ROM med deres model, de ikke, om disse ændringer var midlertidig eller længerevarende. Formålet med vores undersøgelse var at skabe en egnet i vivo skulder kontraktur rotte model ved at undersøge effekten af langvarig ekstra artikulære glenohumeral fælles immobilisering på ROM og ledstivhed.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Undersøgelsen blev godkendt af det institutionelle Animal Care og brug udvalg på Beth Israel Deaconess Medical Center. Omhu at undgå unødvendige langvarig anæstesi og også at undgå hypotermi. Dyrene blev vægtet på hver ROM måling session og overvåges for vægttab.
1. undersøgelsen fag
- Brug 10 Sprague-Dawley rotter, der er 13 uger gammel på tidspunktet for kirurgi og der spænder mellem 250-300 g kropsvægt.
2. kirurgisk Procedure
- Under anæstesi og før kirurgisk immobilisering, måle baseline drejningsmoment som en funktion af rotationsvinkel mellem 60° for ekstern rotation og 80° af intern rotation (Se trin 5).
-
Fremkalde anæstesi med 5% isofluran gennem indånding i en induktion kammer, og derefter opretholde med 2% isofluran gennem næsen kegle i hele operationen.
- Bruge en vandbaseret radiator nedenunder dyret til at opretholde kropstemperaturen under anæstesi.
- Med henblik på smerte kontrol, administrere vedvarende-release buprenorphin subkutant i en dosis på 1,2 mg/kg afhængig af rottens kropsvægt.
-
Immobilisere den venstre glenohumeral leddene i en vinkel på 60 ° bortførelse (vinklen mellem overarm akslen og skulderblad rygsøjlen)10 , 11.
- Start den kirurgiske procedure med en posterior langsgående snit parallelt med den overarm aksel. Gøre huden snit lige under glenohumeral fælles og udvide for omkring 3 cm.
- Brug 2 suturer (flettet polyester) til at immobilisere glenohumeral fælles, ved piercing gennem den laterale kant af scapula og omkring den distale to tredjedele af de overarm aksel, og efterfølgende stramme som illustreret i figur 1A. Tage ekstra indsats for at undgå snærende kritiske strukturer såsom brachialis arterie.
Bemærk: Den kirurgiske teknik har en fordel af at kunne begrænse glenohumeral fælles ved 60° for bortførelse (Z) uden at påvirke andre planer (X & Y). Ved at placere suturer omkring humerus og gennem den laterale grænse af skulderbladet, er en tilnærmelse af de to strukturer opnået og vedligeholdes på skulderblad klinge flyet. Efter stramning suturer, er armen fast på den hvilende stilling når de overvejer X & Y fly og ved 60° for bortførelse når Z plane betragtes. Dette menes at begrænse variabilitet mellem de dyr, der kan genereres fra svigt af finjustering den fælles holdning i de tre planer.
3. lukke snit
- Efter korrekt hæmostase, lukke den hud indsnit ved hjælp af huden klip.
- Afbryde anæstesi og give dyret til at inddrive under tilsyn i et varmt miljø. Genvinder tilstrækkelig bevidsthed at opretholde brystbenet recumbency, returnere det tilbage til sit bur efter dyret.
- Umiddelbart efter proceduren, tillade, at dyr til at vende tilbage til normal aktivitet. Tillad dyr at flytte uden begrænsning, hovedsagelig påberåbe sig interne suturer at fastsætte glenohumeral fælles.
- Hvis du vil overvåge for mulig infektion, inspicere indsnit sites dagligt i de første postoperative uge.
- Fjern sår klip på 10th dagen efter operationen.
Bemærk: Der var ingen manipulation af muskler under proceduren, og teknikken, der ikke indebærer nogen intra-artikulær traumer, dermed bevare kapsulær og artikulære kontinuitet og anatomiske integritet. Hverken eksterne begrænse eller aktivitet begrænsning blev fulgt i vores protokol. - Give analgesi ved hjælp af vedvarende-release buprenorphin, injiceres subkutant i en dosis på 1,2 mg/kg startende fra anæstesi induktion og gentages hver 72 h, hvis det er nødvendigt.
4. sutur fjernelse 8 uger efter immobilisering
- Fremkalde anæstesi med 5% isofluran gennem indånding i en induktion kammer, så vedholdende med 2% isofluran gennem næsen kegle i hele operationen. Med henblik på smerte kontrol, administrere vedvarende-release buprenorphin subkutant i en dosis på 1,2 mg/kg afhængig af rottens kropsvægt.
- Gøre et snit på toppen af ar fra den tidligere procedure.
- Skær suturer og Fjern fra humerus og Bovbladet.
- Luk snittet med sår klip.
- Undersøge webstedet indsnit dagligt i løbet af den første uge til at opdage eventuelle tegn på infektion. Overvåge smerte og lidelse som godt.
- Fjern sår klip på 10th dagen efter operationen.
5. range of Motion og ledstivhed målinger
-
Måle ROM og passive skulder mekanik, før og efter immobilisering ved hjælp af en brugerdefineret enhed bestående af en arm klemme, en sensor forsamling og en drejelig aksel11. Dette er udført før indgrebet (baseline) og løbende efter sutur fjernelse.
- Foranstaltning ROM umiddelbart efter sutur fjernelse (opfølgningsdagen 0), og derefter to gange om ugen.
- Reducere målinger én gang ugentligt ved optagelse mindre end 10% ændre fra den tidligere tidspunkt.
Bemærk: Efter test ROM i ugevis, ROM af hvert dyr ikke ændre sig drastisk mellem afprøvning tid point (mindre end 10% ændre). ROM syntes at plateau på dette tidspunkt, derfor, vi følte, at faldende test frekvens fra to gange om ugen til en gang om ugen var tilstrækkelig.
- Foretage målinger under anæstesi ved hjælp af isofluran via præcision vaporizer på 5% for induktion og 2% for vedligeholdelse for den fulde længde af proceduren (ca. 5 minutter), for at lette målingerne effektivt. Bruge en vandbaseret radiator nedenunder dyret til at opretholde kropstemperaturen under anæstesi.
- Placer dyr ordentligt for ROM måling ved hjælp af en laser guide. Position forelimb på arm klemmen i 90° fremad fleksion, med sensing akse på linje med den lange akse af humerus. Sikre forelimb af håndled og albue som illustreret i figur 1B.
- Styre passiv forelimb rotation af en stepper motor til at vurdere ROM og drejningsmoment på en ensartet måde. Kontrol stepper motor med en microcontroller. Bruge input fra inclinometer, sammen med dem fra et drejningsmoment sensor til angiver begyndelsen og slutningen af målingerne.
- Tilslut microcontroller til en computer og kontrol bruge en in-house udviklede MATLAB kode.
- For grundlæggende målinger kun, cykle sensor forsamling 3 gange mellem 60° for ekstern rotation og 80° af intern rotation til at få Start momentet målinger (ydre: text og indre: tint) til senere sammenligning.
- ROM målinger, bruge drejningsmomentværdier af hvert enkelt dyr på deres egen grundlæggende målinger (text og tint) som forudindstillede inputvariable i programmet til at registrere ændringer i rotation ROM. bruge grundlæggende målinger som en sammenlignende stoppe punkt for efterfølgende ROM målinger. Ændringer blev opdaget med 0,2 ° beslutning.
- Stivhed målinger, bruge de oprindelige rotation vinkler på 60° ekstern rotation og 80° indadrotation som forudindstillede input i programmet for at registrere ændringer i drejningsmoment. Ændringer blev opdaget med en opløsning på 0,01 Nmm.
- Veje dyr på samme dag som hver ROM vurdering. Placere dyr på skalaer og optage deres masserne. Disse data blev brugt som et af værktøjerne til at vurdere dyresundhedsstatus i løbet af undersøgelsen.
- Efter gendannelse, returnere rotter til deres bure og kontrollere for tegn på smerte eller lidelse. I hele denne test, er dyr, der efterlades uden opsyn, indtil den har genvundet tilstrækkelig bevidsthed for at opretholde brystbenet recumbency.
NOTE: ROM og drejningsmoment målinger blev opnået med en brugerdefineret enhed, tidligere rapporteret af vores gruppe {Villa-Camacho 2015}. Enheden er en skræddersyet jig, der består af en aksel roteret af motor, stepper og kontrolleret af en brugerdefineret MATLAB script. Et drejningsmoment sensor og inertial måleenhed anvendes til at fange drejningsmoment og placere data under artikulation af modellen.
6. post mortem-Immunohistologic analyse
- For enden af 8-ugers ROM måleperioden euthanize rotter med CO2 eksponering.
- Dissekere både venstre (immobiliseret) og højre (sund kontrol) skuldre ved disarticulating humerus fra ulna og skære skulderblad fra nøgleben og brysthulen.
- Fix skåret skuldrene i en opløsning af 10% neutrale bufferet formalin i 3 dage, efterfulgt af afkalkning i en opløsning af ethylendiamintetra syre (EDTA) 10% ved pH 7,4 for yderligere 2 måneder.
- Under denne proces, prøveemner på en shaker i en blid agitation cyklus og opbevares ved 4 ° C. Overvåge afkalkning af glenohumeral fælles med ugentligt microcomputed tomografi (uCT) scanninger.
Bemærk: EDTA er en chelatdanner, der binder calciumioner fra apatit krystal ydre overflade, progressiv reduktion af krystal størrelse12,13,14. Denne proces er meget langsom og skånsom, og det bruges til at registrere specifikke væv elementer, der skal bevares for teknikker såsom Immunhistokemi (IHC). Den hastighed, hvormed EDTA decalcifies modellen er afhængig af pH og koncentrationen af opløsningen. Med hensyn til pH, kan det spænder fra 7 til 7.4, med mere basisk løsninger accelererende afkalkning hastighed. Men løsninger med højere pH niveauer kan skade vigtige væv elementer. Derudover sædvanlige EDTA koncentrationen for sådanne eksperimenter ligger mellem 10-14%, men det er meget vigtigt at huske, at det aktive stof bliver forarmet når det obligationer til calcium, så dette forudsætter udskiftning af afkalkning væske på mindst 3 til 4 gange pr. uge15. - Når den afkalkning var afsluttet, montere glenohumeral leddene i paraffin stakke for histologiske skæring. Orientere prøver at tillade koronale skiver. Skiver opnået ved 50% dybde af overarm hovedet (på center, mid-coronally) er vist i figur 1. Udføre immunhistokemiske farvning ved hjælp af metoden peroxidase-anti-peroxidase for at betegne tilstedeværelsen af fibrotisk væv i leddet. 4 , 9 , 10 , 16
- Udføre antigen hentning af mikrobølgeovn bestråling af nedsænkning dias i en plastik Coplin krukke i en buffer natriumcitratopløsning (10 mM natriumcitrat, 0,05% Tween 20, pH 6.0, forvarmes i 5 min. ved 95-100 ° C) og placere i en regelmæssig mikrobølgeovn i 10 minutter på medium styrke. Tillad dias til afkøling i 30 min. ved stuetemperatur.
- Udføre spærring med geder serum i 30 min, og Inkuber prøver med en primær mus mono-klonede antistof (1: 400 fortynding) til fibronektin natten over ved 4 ° C.
- Efter inkubering med det primære antistof, vaske prøver to gange med PBS (0,5 mg/mL) i 10 minutter; og inkuberes med en sekundær antistof, ged antimouse IgG-peroxidase konjugat (1: 400 fortynding) i 30 minutter.
- Vaske prøver to gange med PBS (2,5 µg/mL) på en shaker i 10 minutter og eksponere til 3,30-diaminobenzidine tetrahydro-chlorid og 30% hydrogenperoxid i mørke i 10 min. kontrastfarve med Carazzi hæmatoxylin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vifte af bevægelse
Opfølgende dag 0, vi fandt en 63% fald i samlede ROM i forhold til baseline (P <.001 procentmålpunkt Vi observerede en gradvis forbedring af ROM indtil uge 5 af opfølgning, når progression stoppet på 19% begrænsning (P < 0,001). De resterende restriktioner, 18% af samlede ROM, var stadig synlige ved 8 ugers opfølgning (P < 0,001).
Stivhed
Opfølgende dag 0, fandt vi en stigning på 13,3 Nmm i samlede drejningsmoment i forhold til baseline (P < 0,001); 8.9 Nmm eksternt (P =.002) og 4,4 Nmm internt (P < 0,001), hvilket resulterer i en forhøjelse af ekstern rotation drejningsmoment på 138.8%, 159.6% stigning i indadrotation drejningsmoment, og ialt 149.2% øget drejningsmoment samlet. Uge 8 af opfølgning, fandt vi det samlede målte drejningsmoment at være 1,4 ± 0,2 Nmm højere end baseline (P = 0.115), med en 0,6 ± 0,1 Nmm stigning af eksterne drejningsmoment (P = 0.369) og 0,7 ± 0,2 Nmm stigning af interne drejningsmoment (P = 0,036). Dette angiver drejningsmoment øger 10% eksternt og 25,7% internt, for en samlet 17,9% stigning. I begyndelsen af postoperative uge 3 plateaued forbedring af stivhed.
Histologiske resultater
Som det ses i figur 2A, vises intakt gruppen korrekt adskillelse mellem kapsel og artikulær overfladen af lårbenshovedet og normal cellulære organisation. Derudover blev normal cellulære organisation også observeret i synovial væv og ledbrusken. Men gruppen kirurgisk immobiliseret viser tegn på kapsulær sammenvoksninger i ringere aspekt af glenohumeral fælles. Desuden, det omgivende væv synes at være tættere i forhold til de intakte skuldre, fører til en strammere kapsel med en nedsat fælles rum (figur 2B). Skiver farvet for fibronektin Vis en øget kapsulær tykkelse i den aftalte kirurgiske gruppe (figur 2B). sammenlignet med raske kontrolpersoner (figur 2A). Disse resultater er i overensstemmelse med tidligere rapporteret litteratur om fælles immobilisering10 -dyremodeller og støtte oprettelsen af en ordentlig kontraktur model.
Figur 1: test apparater. (A) immobilisering af glenohumeral fælles med 2 flettet polyester suturer, bestået fast mellem den laterale kant af skulderblad og humerus; (B) tilpasset enhed for måling af ROM og passive skulder mekanik; a) en stepmotor overvåge. En sensor forsamling bestående af b) en reaktion drejningsmoment sensor og c) en orientering sensor. d) en arm klemme. (C) indre eller (D) ekstern rotation af glenohumeral fælles11. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: koronale skiver af overarm hovedet. Billede farvet for fibronektin (IHC) opnået på 40 X forstørrelse. Skalalinjen = 200 µm. (A) sund kontrol. (B) kirurgisk kontrol. Røde pile skitsere fælles kapsulær tykkelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: bevægelsesområdet versus normaliseret drejningsmoment for både sund og kirurgisk begrænset rotte glenohumeral leddene. Indadrotation er betegnet som positiv, ekstern rotation er negativ. Det skraverede område viser 95% konfidensinterval (CI). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne undersøgelse præsenterer en rotte model af selvklæbende capsulitis af skulder gennem intern fiksering af glenohumeral fælles. Det viser endvidere, en udvidet reduktion af samlede ROM i mindst 8 uger efter fjernelse af fiksering. For at beregne ændringerne i ROM på forskellige tidspunkter, blev målinger sammenlignet med dyrs specifikke basislinjer. Omvendt Kanno et al. 10 anvendes en standardiseret drejningsmoment til alle dyr for at bestemme ex vivo ROM ændringer.
I 2008, Sarver et al. 17 rapporteret om stivhed i skulderen som følge af ikke-kirurgiske ekstern fiksering. Deres undersøgelse viste en forbigående stigning i stivhed efter immobilisering af såret og behandles skuldre, der blev løst af uge 8 opfølgning. Endnu, i den nuværende undersøgelse, vi ikke finde et lineært forhold mellem moment og vinkel, snarere et polynomium, passe (figur 3). Desuden, vi kun fundet en statistisk signifikant forskel i stivhed i forhold til baseline under vurdering af intern rotation, hvor en 25,7% stigning i stivhed fortsatte efter 8 ugers immobilisering.
Vi brugte baseline ROM og stivhed målinger for hvert dyr som deres egne interne kontrol. I betragtning af den mulige variation mellem dyr18, bruger de kontralaterale skulder af samme dyr som intern kontrol øger interne gyldighed og hjælper med at reducere antallet af dyr kræves.
En af begrænsningerne i vores undersøgelse er, at de apparater, der anvendes til at måle ROM ikke stabilisere skulderbladet. En rotte scapula er imidlertid mere skråt orienteret med endnu mere opadgående rotation end hos mennesker. At have rotter i liggende stilling bør teoretisk kontrol for skulderblad vippe som skulderbladet hviler mod den fast plade af den test jig. En yderligere begrænsning af undersøgelsen er, at vi kun vurdere indadrotation og eksterne-rotation af glenohumeral fælles. Dette er dels, at bortførelse, fleksion og overhead aktiviteter kræver grundig ekstern fiksation eller begrænsning af scapulothoracic fælles under ROM prøvning, som kræver et andet system end vores.
Den patogenese og behandling af selvklæbende capsulitis fortsætter med at være utilstrækkeligt forstået. Uanset ætiologi, har det vist sig at det er kontraktur af kapslen, der forårsager smerte og begrænser glenohumeral bevægelse1,3,11. Derudover er det blevet foreslået, at der er inflammatoriske udløsere, der resulterer i fælles fibrose, hvorved kontraktur10. Selv om vores rotte model ikke kan efterligne den oprindelige inflammatoriske fornærmelse af en primær kontraktur, ikke desto mindre replikerer det tilstrækkeligt den karakteristiske kinetik af selvklæbende capsulitis og dens patologiske ændringer10,19. Denne model påberåber sig en varig reduktion i ROM og øget stivhed, giver mulighed for en samlet vurdering af nuværende og potentielle terapeutiske behandlinger for skulder kontraktur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen
Acknowledgments
Forfatterne vil gerne anerkende Mr. og Mrs. Tom og Phyllis Froeschle for at give økonomisk støtte til dette projekt.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories, Wilmington, MA, USA | 250-300 g | |
| Surgical tool: | |||
| Injection needle | BD 1' 30 guage | ||
| Needle holder | |||
| 5% isoflurane | |||
| 2% isoflurane | |||
| Nose cone | |||
| Skalpel and skalpel holder | No. 11 scalpel | ||
| Curved hemostat forceps | |||
| Staright hemostat forceps | |||
| Tissue retractor | |||
| Toothed tissue forceps | |||
| Plain tissue forceps | |||
| Dissecting scissors | |||
| Suture scissors | |||
| Skin clip applicator | Any standard staples for wound closure | ||
| Immobilization material | Ethicon | No. 2-0 braided polyester ethibond suture was used for immobilization | |
| Other materials: | |||
| Costumized device for ROM: 1)Sensor assembly, 2)pivoting axle, 3)arm clamp | Assembly that is described in relaxin paper and adhesive capsulitis paper | ||
| Orientation sensor (part of sensor assembly) | MicroStrain Inc., Williston, VT, USA | 3DM-GX3-15 | |
| Reaction torque sensor (part of sensor assembly) | Futek Inc., Irvine, CA, USA | TFF400 | |
| Stepper Motor | SparkFun Electronics, Niwot, CO 80503 | https://www.sparkfun.com/products/13656 | |
| Microcontroller | Torino, Italy). | Arduino UNO, R3 | |
| MATLAB code | MATLAB 7.13.0.564, Natick, Ma, USA | ||
| Weight Scale | Ohaus |
References
- Bunker, T. D. Time for a new name for 'frozen shoulder'. British medical journal. 290 (6477), 1233-1234 (1985).
- Bunker, T. D., Anthony, P. P. The pathology of frozen shoulder. A Dupuytren-like disease. The Journal of bone and joint surgery. British volume. 77 (5), 677-683 (1995).
- Kilian, O., et al. The frozen shoulder. Arthroscopy, histological findings and transmission electron microscopy imaging. Chirurg. 72 (11), 1303-1308 (2001).
- Wang, K., et al. Risk factors in idiopathic adhesive capsulitis: a case control study. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 22 (7), e24-e29 (2013).
- Milgrom, C., et al. Risk factors for idiopathic frozen shoulder. The Israel Medical Association Journal. 10 (5), 361-364 (2008).
- Huang, S. W., et al. Hyperthyroidism is a risk factor for developing adhesive capsulitis of the shoulder: a nationwide longitudinal population-based study. Scientific Reports. 4, 4183 (2014).
- Struyf, F., Meeus, M. Current evidence on physical therapy in patients with adhesive capsulitis: what are we missing. Clinical Rheumatology. 33 (5), 593-600 (2014).
- Song, A., Higgins, L. D., Newman, J., Jain, N. B. Glenohumeral corticosteroid injections in adhesive capsulitis: a systematic search and review. Journal Of Physical Medicine And Rehabilitation. 6 (12), 1143-1156 (2014).
- Schollmeier, G., Sarkar, K., Fukuhara, K., Uhthoff, H. K. Structural and functional changes in the canine shoulder after cessation of immobilization. Clinical Orthopaedics and Related Research. 323 (323), 310-315 (1996).
- Kanno, A., Sano, H., Itoi, E. Development of a shoulder contracture model in rats. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 19 (5), 700-708 (2010).
- Villa-Camacho, J. C., et al. In vivo kinetic evaluation of an adhesive capsulitis model in rats. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 24 (11), 1809-1816 (2015).
- Liu, H., et al. Evaluation of Decalcification Techniques for Rat Femurs Using HE and Immunohistochemical Staining. BioMed Research International. 2017, 9050754 (2017).
- Gonzalez-Chavez, S. A., Pacheco-Tena, C., Macias-Vazquez, C. E., Luevano-Flores, E. Assessment of different decalcifying protocols on Osteopontin and Osteocalcin immunostaining in whole bone specimens of arthritis rat model by confocal immunofluorescence. International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (10), 1972-1983 (2013).
- Sanjai, K., et al. Evaluation and comparison of decalcification agents on the human teeth. Journal of Oral and Maxillofacial Pathology. 16 (2), 222-227 (2012).
- Rolls, G. An Introduction to Decalcification. , (2013).
- Burry, R. W. Controls for immunocytochemistry: an update. Journal of Histochemistry & Cytochemistry. 59 (1), 6-12 (2011).
- Sarver, J. J., et al. After rotator cuff repair, stiffness--but not the loss in range of motion--increased transiently for immobilized shoulders in a rat model. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 17 (1 Suppl), 108S-113S (2008).
- Macbride, M. Variations within Outbred Strains: Know Your Strains and Stocks | Taconic Biosciences. , Available from: https://www.taconic.com/taconic-insights/quality/variations-within-outbred-strains-know-your-strains-and-stocks.html (2016).
- Liu, Y. L., Ao, Y. F., Cui, G. Q., Zhu, J. X. Changes of histology and capsular collagen in a rat shoulder immobilization model. Chinese Medical Journal. 124 (23), 3939-3944 (2011).
