Summary
Vi beskriver en non-invasiv i vivo billeddannelse protokol, der er strømlinede og omkostningseffektive, udnytte L-012, en kemiluminescens luminol-analog, for at visualisere og kvantificere reaktive ilt arter (ROS) genereret i en excisional sår musemodel.
Abstract
Generation af reaktive ilt arter (ROS) er kendetegnende for inflammatoriske processer, men overskydende, oxidativ stress er bredt involveret i forskellige patologier såsom kræft, åreforkalkning og diabetes. Vi har tidligere vist at dysfunktion af den nukleare faktor (erythroid-afledte 2)-lignende 2 (Nrf2) / Kelch-lignende erythroid celle-afledte protein 1 (Keap1) signalering vej fører til ekstreme ROS ubalance under kutane sårheling i diabetes. Da ROS niveauer er en vigtig indikator for progression af sårheling, er specifikke og nøjagtig kvantificering teknikker værdifulde. Flere in vitro- assays til at måle ROS i celler og væv er blevet beskrevet; de giver dog kun en enkelt kumulativ måling pr. prøve. Mere nylig, udviklingen af protein-baserede indikatorer og billeddiagnostiske modaliteter har tilladt for enestående spatiotemporelle analyser. L-012 (C13H8ClN4NaO2) er en luminol derivat, der kan bruges til både in vivo og in vitro- kemiluminescens påvisning af ROS genereret af NAPDH oxidase. L-012 udsender et stærkere signal end andre fluorescerende sonder og har vist sig at være både følsomme og pålidelige til påvisning af ROS. Tid bortfalder anvendeligheden af L-012-faciliteret imaging giver værdifulde oplysninger om inflammatoriske processer samtidig at reducere behovet for offer og samlet antal undersøgelse dyr. Her, beskriver vi en protokol udnytte L-012-lettet i vivo imaging for at kvantificere oxidativt stress i en model af excisional sårheling ved hjælp af diabetiske mus med lokalt dysfunktionelle Nrf2/Keap1.
Introduction
Oxygen metabolitter genereret gennem inflammatoriske processer bidrage til forskellige signaling cascades samt destruktive ændring af cellulære komponenter1. Udnytte følsomme og specifikke teknikker til at måle ROS er kritisk for at studere inflammatoriske processer og kendetegner virkningerne af oxidativt stress. In vivo billeddannelse er værdifulde på grund af dens evne til at levere dynamisk rumlige og tidsmæssige data i levende væv. L-012 er et syntetisk kemiluminescens sonde, der er meget følsomme for superoxid anioner og producerer en højere lysintensitet end andre fluorescerende sonder i celler, væv og blod1,2,3, 4. det har med held været ansat i i vivo billeddannelse i murine modeller til at studere adskillige inflammatoriske sygdomme, herunder arthritis, og colitis5,6. Det har endnu at være ansat i en etableret kutane sårheling model. Måling af ROS genereret er lige så relevant at vurdere udviklingen af sårheling under forskellige betingelser. Følsomhed og noninvasive karakteren af denne metode gør det en lovende teknik til at studere sårheling på tværs af murine modeller.
Nrf2 er en vigtig drivkraft for antioxidant respons og en transcriptional faktor med specificitet for den antioxidant svar element (er) fælles for regionerne promotor af flere antioxidant enzymer8. I mangel af oxidativt stress, er Nrf2 afsondret i cytoplasma af Keap1, som efterfølgende forårsager sin ubiquitination og nedbrydning. Ubalance i Nrf2/Keap1 vej har været impliceret i upassende redox homøostase og Forsinket sårheling i fastsættelsen af øget oxidativ stress9. Vi har tidligere vist, at undertrykkelse af Keap1 stimulerer øget Nrf2 aktivitet og fremmer redning af patologiske kutane sårheling i diabetisk sår9.
Her beskriver vi en protokol, der udnytter L-012-assisteret bioluminescens imaging for at måle ROS niveauer i en excisional kutant sår healing model, som er kritiske for fremhævning tilknytningen mellem ROS og sårheling. Denne teknik viser real-time ændringer i oxidative byrde inden for sår og umiddelbar periferien. Desuden, denne metode giver mulighed for hurtig vurdering af interventioner og mekanismer at påvirke redox håndtering. Her bruger vi en model af Keap1 knockdown genskabelse af redox homøostase for at vurdere anvendeligheden af vores strategi. Fordi vores teknik er non-invasiv og sår er uforstyrret, kan det samme dyr som bruges til yderligere konfirmatoriske analyser på grundlag af histologi eller celle lysates.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle metoder beskrevet her er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug Udvalget af New York University School of Medicine. Alle mus er anbragt bag en barriere og alt personale bære passende personlige værnemidler.
1. dag 0: Forberedelse af Murine Model af Excisional sårheling
- Bedøver diabetisk (Leprdb/db) mus, i alderen 8-12 uger, med slimhindeirritation 2% isofluran. Bekræfte, at hver mus har været korrekt bedøvede ved hjælp af mund pad knivspids test. Anvendes sterile okulær smøremiddel til hvert øje at forhindre irritation fra tørhed. Forskere skal følge deres institutionelle veterinaere personale retningslinjer når bedøve dyr med isofluran.
- Vejer mus og optage kropsvægt hver mus. Bekræfte diabetisk status af dyr ved at optage blodsukker for hvert dyr ved hjælp af en glucometer.
- Desinficere proceduremæssige arbejdsområde og anæstesi udstyr. Fjerne dorsale hår af musene bruger en hår trimmer, efterfulgt af anvendelse af hår fjernelse lotion til at tørre væk overskydende hår. Brug alkohol klude til at rengøre den eksponeret hud, to gange, og lad tørre.
- Opret to 10 mm fuld-tykkelse sår strækker sig gennem den panniculus carnosus ved hjælp af steril 10 mm biopsi slag efter en veletableret excisional sårheling teknik7,8. Bruge sterile handsker til alle overlevelse kirurgi. Autoklave alle kirurgiske instrumenter i poser før kirurgi og åben kun i feltet kirurgisk.
- Skinne sår åbne med en 0,5 mm tykt silikone ark med 10 mm cirkulære udskæringer og sikre stenter i sted ved hjælp af afbrudt 4-0 silke suturer.
- Følgende kirurgi, fjerne dyr fra anæstesi og placere på varme pad for at lette korrekt genvinding. Af note, hvis dyrs kropstemperatur falder under proceduren, kan dyret blive flyttet til den hede afrivningsblok tidligere at minimere krop varmetab under anæstesi. Overvåge dyrene, indtil de er vågen og mobil.
- Når fuldt tilbagebetalt, returnere dyr til individuelle bure, der indeholder mad og vand (sikre nogle fødevarer er på gulvet i buret for postoperativ berigelse). Give strimlet papirhåndklæder som supplerende redebygningsmateriale i 2 uger. Hus ikke dyr, der har gennemgået kirurgi med andre dyr, til at undgå negative interaktioner og ændringer til sår healing status.
- For postoperativ smertelindring, injicere mus subkutant med buprenorphin på 0,1 mg/kg legemsvægt to gange om dagen, begynder umiddelbart efter proceduren, for 3 dage.
2. dag 1: Forberedelse af Keap1 siRNA
Bemærk: Forberede alle behandlinger inde en biosikkerhed kabinet.
- Forberede siRNA fortynding ved at kombinere 37,5 µL af reducerede serum medium med 12,5 µL af 20 µM Keap1 siRNA (siKeap1) (250 pmol) i 1,5 mL microcentrifuge rør på is.
- Forberede Liposom fortynding ved at kombinere 25 µL af reducerede serum medium med 25 µL af Liposom mix i 1,5 mL microcentrifuge rør.
- Tilsæt 50 µL af siRNA fortynding til 50 µL Liposom fortynding dråbevis (1:1 bind), og forsigtigt Bland.
- Inkuber i 20 minutter ved stuetemperatur.
- Tilsæt 50 µL af 2% methylcellulose gel i vand og bland forsigtigt af pipettering op og ned.
- Behandle hvert dyr med enten en sludder siNS (kontrol) eller siKeap1 (eksperimentel). Anvende en gel til toppen af såret. Wrap at dyret torsoen med gennemsigtig film dressing til at holde gel på plads, holde lemmer gratis at bevare mobilitet.
3. dag 3: Forberedelse af L-012 løsning
Bemærk: Forberede alle reagenser i et kabinet biosikkerhed.
- I en 1,5 mL microcentrifuge tube, forberede L-012 i 1 X PBS ved en koncentration på 0,5 mg/100 mL.
- Manuelt vortex microcentrifuge røret. L-012 opløses ikke helt i PBS, men det skal være jævnt suspenderet i væske. Af note, forsøg ikke at opløse L-012 i vand for at undgå forstyrrende fysiologisk elektrolytbalance efter injektion.
- Opløsningen overføres til en 1 mL sprøjte ved hjælp af en 27 G nål.
Bemærk: Sørg for at beskytte L-012 løsning fra lys.
4. dag 3: In Vivo billeddannelse af diabetiske sår
- Bedøver mus med slimhindeirritation 2% isofluran. Forskere skal følge deres institutionelle veterinaere personale retningslinjer når bedøve dyr med isofluran. Bekræfte, at hver mus har været korrekt bedøvede ved hjælp af mund pad knivspids test. Anvendes sterile okulær smøremiddel til hvert øje at forhindre irritation fra tørhed.
- Forsigtigt fjerne den gennemsigtige film dressing fra mus uden at forstyrre sår.
- Placere mus i den billeddiagnostiske afdeling i deres respektive ordrer. For at opretholde ordentlig O2 niveauer til stede i salen, indstille imaging system tilstrømningen og induktion afdeling O2 niveauer til 1,0 L/min.
- Image mus for bioluminescens og fotografi på baseline før injektion af L-012 sammensatte.
- Tørre maven med alkohol klude og lad tørre. Udføre en intraperitoneal injektion af L-012 løsning på 5 mg pr. 200 g kropsvægt ved hjælp af en 27-gauge kanyle. For eksempel bør en mus vejer 20 g modtage 0,5 mg af L-012.
- Umiddelbart efter L-012 injektion, placere mus tilbage i deres respektive placeringer i den billeddiagnostiske afdeling. Billede af musene i løbet af 60 minutter, i 1 minut ved 4 minutters intervaller. Definere 10-mm såret som region af interesse for fastsættelsen af niveauet for ROS.
- Følgende kirurgi, fjerne dyr fra anæstesi og placere på varme pad for at lette korrekt genvinding. Overvåge dyrene, indtil de er vågen og mobil.
- Når fuldt tilbagebetalt, returnere dyr til individuelle bure, opretholde den samme postoperativ berigelse miljø tidligere beskrevet i 1,6. Hus ikke dyr, der har gennemgået kirurgi med andre dyr, til at undgå negative interaktioner og ændringer til sår healing status.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Tre dage efter at skabe bilaterale sår efter en etableret excisional sår model (figur 1A), er diabetisk mus placeret i den billeddiagnostiske afdeling. En indledende fotografi og et mål for bioluminescens er taget før injektion af L-012 at tage højde for baggrunden signal (figur 1B). Efter intraperitoneal injektion med L-012 løsning, musene er omplaceres i salen og bioluminescens er visualiseret i områder af såret hvor ROS er opdaget (figur 1 c). Når du har valgt den korrekte billedbehandling og analyse fortsætte indstillinger som skitseret i figur 2, med billedbehandling. Bioluminescens er optaget i 1 minut med 5 minutters mellemrum i løbet af 60 minutter (figur 3). Dette viser bioluminescens mætning af region af interesse over tid. I vores dyremodel, var optimal imaging tid at nå frem til komplet L-012 mætning besluttet på at være 50 min, hvorefter ingen bemærkelsesværdig forskel i bioluminescens blev værdsat. Denne gang vil variere afhængigt af dyret model udnyttet og skal selvstændigt bestemmes og optimeret til varierende sår modeller afhængigt af størrelse, animalsk type, behandling mv
En region af interesse (ROI) med henblik på at kvantificere bioluminescens begrænset til området diabetisk sår er trukket på overlejringsbilledet (figur 4). Disse ROIs defineres på samme måde for alle sår herunder før L-012 injektion (figur 4A), og efter L-012 injektion i nonsens siRNA-behandlede (figur 4B) og Keap1 siRNA-behandlede mus (figur 4 c). Bioluminescens blev beregnet ved at dividere de samlede tællinger af lysintensitet af området. Tabel 1 viser beregningerne af grafen i figur 4D. Nonsens siRNA-behandlede diabetisk sår havde 45,775 11,649 bioluminescens/cm2, mens Keap1 undertrykkelse resulterede i 19,405 5,939 bioluminescens/cm2 (mean SD). Student's t-test viste en betydeligt nedsat bioluminescens (p = 0.042) i den Keap1 siRNA-behandlede sår sammenlignet med det sludder siRNA-behandlede sår, korrelerede med lavere oxidativ byrde med højere Nrf2 aktivitet (figur 4 D). til at bekræfte, at den relative niveauer af ROS visualiseret ved L-012 på siNS og siKeap1 korrelat med andre etablerede metode til at måle betændelse, vi analyseret 10 dag sår væv sektioner. H & E pletter viste reduceret cellulær infiltration i siKeap1-behandlet sår i modsætning til siNS-behandlede dem, der angiver reduceret inflammatoriske morfologi (figur 5A). Immunoreactivity F4/80, en protein makrofag markør, (rød fluorescens) på såret væv sektioner afslørede reduceret makrofager i siKeap1 behandlet sår i forhold til siNS-behandlet sår (figur 5B). Dette viser yderligere, at ROS niveauer visualiseret ved L-012 er præcis og korrelerer med andre etablerede ROS måling modeller. Kritisk, anvende denne teknik ikke nødvendiggøre at ofre dyr for væv sektioner som er nødvendig for H & E og immunfluorescens farvning.
Figur 1: eksperimenterende set-up for billeddannelse. (A) diabetisk mus er såret ved hjælp en etablerede excisional sår model. (B) en baseline overlejring af fotografi med bioluminescens pre-L-012 injektion. (C) efter intraperitoneal injektion med L-012, ROS er visualiseret. Luminescence skala for B og C. venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Billede og analyse indstillinger i in vitro- imaging systemprogram. (A) Vælg "Imaging guiden" erhvervelse i kontrolpanelet (rød pil). (B) "Bioluminescens Imaging" er tilstanden imaging valgt. (C) "åben filter" er markeret som måleteknik. (D) Imaging emne valgt er "mus" og indstillingen "time series undersøgelse" er valgt. Det samlede antal segmenter og tidsforsinkelsen mellem segmenter er input. (E) Vælg "erhverve sekvens" til at gå videre med billedbehandling. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: longitudinelle studier i vivo ROS Imaging. Diabetisk mus er afbildet for 1 minut efter intraperitoneal injektion med L-012 på 5 minutters intervaller i løbet af 60 min. røde cirkler: ROI. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: kvantificere bioluminescens. Fotografier med bioluminescens overlejring af diabetisk sår (A) før L-012 injektion, (B) med sår behandlet med synder efter L-012 injektion, og (C) med sår behandlet med siKeap1 efter L-012 injektion. (D) kvantificering af gennemsnitlige bioluminescens divideret med arealet af ROIs for synder og siKeap1 behandlede sår. De gule cirkler: ROI. Data repræsenteres som mean±standard afvigelse; p < 0,05, n = 4. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: ROS korrelationer med immunhistokemiske pletter. (A) H & E pletter af diabetiske sår væv sektioner på 10 dage viste reduceret cellulær infiltrere som bevis for nedsat inflammatoriske morfologi i siKeap1 behandlet sår i forhold til siNS -behandlet sår. (B) F4/80 immunofluorescens (rød) viste faldt antallet af makrofager i siKeap1 behandlet sår sektioner på 10 dage i forhold til deres siNS -behandlet modstykker. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| ROI | si | Total tæller | AVG tæller | STDAFV tæller | Området [cm²] | Areal tæller | Middelareal tæller |
| ROI 1 | NS | 9.38E + 03 | 1.14E + 02 | 3.85E + 01 | 2.48E-01 | 3.78E + 04 | 4.58E + 04 |
| ROI 2 | NS | 4.68E + 03 | 5.37E + 01 | 3.13E + 01 | 2.63E-01 | 1.78E + 04 | |
| ROI 3 | NS | 1.72E + 04 | 2.18E + 02 | 1.54E + 02 | 2.39E-01 | 7.20E + 04 | |
| ROI 4 | NS | 1.24E + 04 | 1.68E + 02 | 8.41E + 01 | 2.24E-01 | 5.55E + 04 | |
| ROI 5 | Keap1 | 3.21E + 03 | 3.41E + 01 | 2.76E + 01 | 2.84E-01 | 1.13E + 04 | 1.94E + 04 |
| ROI 6 | Keap1 | 2.56E + 03 | 2.88E + 01 | 1.06E + 01 | 2.69E-01 | 9.52E + 03 | |
| ROI 7 | Keap1 | 4.92E + 03 | 6.48E + 01 | 5.03E + 01 | 2.30E-01 | 2.14E + 04 | |
| ROI 8 | Keap1 | 8.34E + 03 | 1.07E + 02 | 5.25E + 01 | 2.36E-01 | 3.54E + 04 |
Tabel 1: kvantificere bioluminescens for defineret ROIs. Bioluminescens er målt for hver ROI og standardiseret i forhold til overfladearealet. Beregninger for middelværdi, standardafvigelse og standardafvigelsen er beregnet i overensstemmelse hermed. ROI 1, 2, 3 og 4 udgør ROI fra sår af biologiske gentagelser af synder behandlet diabetisk sår og ROI 5, 6, 7 og 8 repræsenterer ROIs fra biologiske gentagelser af siKeap1 behandlet diabetisk sår.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Almindelige teknikker til måling af ROS har været begrænset af komplekse protokoller som kræver væv udvinding eller tilsvarende invasive teknikker. I de seneste år, er blevet rapporteret målinger af oxidativt stress på grundlag af innovative billeddiagnostiske modaliteter, hvorved spatiotemporelle vurderinger9,10,11. L-012 har flere fordele som en kemiluminescens sonde i forhold til luminol, lucigenin og MCLA1,4. Sammensat er ugiftigt, let absorberes, og har meget stærkere bioluminescens i forhold til luminol eller lignende sonder12. Kritisk, L-012 kan være sikkert administreres flere gange i kontinuum for langsgående analyse uden nogen form for bivirkninger eller skade på dyre modeller6. Denne strategi kræver begrænset særlig uddannelse, og det nødvendige udstyr er let tilgængelige i de fleste forskningslaboratorier, hvilket gør det et bredt tilgængelige protokol.
For optimal brug foreslår vi, at reagenser være korrekt opdateret og beskyttet mod lys for at undgå nedbrydning. Humanisering sår gennem stent giver mulighed for murine sår til at helbrede gennem migration og fornyet epithelialization, i modsætning til ved betydelig sammentrækning. Suturer skal placeres to tredjedele af vejen igennem stent omkredsen til sikre sår kanter på plads. Indpakning mus med gennemsigtig film dressing efter gel program sikrer, at aktuelle behandlinger tilbage på plads. For at forhindre selvforskyldt sår i mus, som kan forvirre resultater, kan bitter smag spray anvendes til periferien og sutur knob til at afskrække bidende. L-012 har begrænset Opløselighed i PBS, men vil danne en suspension af gentagne Pipettering af løsningen. Disse fejlfinding foranstaltninger sikre konsistens på tværs af forskellige sår, at fjerne indbyrdes bruger variabilitet samtidig bevare dyrenes komfort. Da denne teknik er baseret på intraperitoneal injektion af en løsning i en dyremodel, er der flere interfererende faktorer forbundet til de dyr, som ikke kan kontrolleres. For eksempel, kan ikke være dikteret lokale blodgennemstrømning og efterfølgende absorption og lokalisering af L-012 til områder af interesse. Denne variabel kan afbødes ved hjælp af et dyr, som dens egen interne kontrol således, at et sår kan behandles med siNS og den anden med siKeap1.
Vi rapport om nytten af en strategi for i vivo undersøgelse af ROS i en kutan sårheling model. I vores nuværende undersøgelse, behandling af sår med Keap1 siRNA resulterede i nedsat oxidative byrde, som bekræfter vores forståelse af betydningen af Nrf2 /Keap1 vej for antioxidant håndtering. Mens denne metode giver mulighed for kvantitativ analyse, er der en række vigtige begrænsninger. Mens L-012 er meget følsomme, det er ikke specifik for ROS og har vist sig at også reagere på reaktive nitrogen arter6. Yderligere analyse med målrettede sonder og immunassay baseret metoder supplere denne tilgang gennem øget specificitet og subcellulært lokalisering af ROS korrelerer13. Den foreslåede mekanisme for L-012-baserede bioluminescens indebærer oxidation af L-012 af Molekylær ilt gennem aktivitet af peroxidase i kombination med H2O212. Dette begrænser brugen af denne teknik til at studere antioxidant enzym-hæmmere, der interagerer med peroxidase. Mere detaljeret analyse bestemt til specifikt at kvantificere ROS end superoxid-anion eller reaktive nitrogen arter metabolitter er ikke muligt med den nuværende strategi.
Givet den høje følsomhed af L-012 til påvisning af ROS bredt, er det let kan tilpasses til forskellige kutant sår healing og andre væv modeller. Vi har vist hensigtsmæssigheden i denne teknik for at vurdere redox konsekvenserne af målrettede therapeutics til diabetisk sår som RTA 408 og lipoproteoplex levering af Keap1 siRNA14,15. I betragtning af de betydelige styrker af denne protokol, er der enorme fremtidige potentiale med at anvende lignende strategier for at studere ROS inden for dybere rum gennem ex vivo tilgange, fokuseret dissektioner og organoids.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har ingen oplysninger til rapport.
Acknowledgments
Vi er taknemmelige for de prækliniske Imaging Core på NYU-School of Medicine, med en særlig tak til Orlando Aristizabal og Youssef Zaïm Wadghiri. Kernen er en delt ressource delvist understøttet af Laura og Isaac Perlmutter Cancer Center støtte Grant NIH/NCI 5P30CA016087 og NIBIB biomedicinsk teknologi ressource Center Grant NIH P41 EB017183. Dette arbejde blev støttet af American Diabetes Association "Vej til at stoppe Diabetes" D.C. [grant nummer 1-16-ACE-08] og NYU anvendt støtte forskningsfonden til P.R.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BKS.Cg-Dock7m+/+ Leprdb/J mice | Jackson Laboratories | 000642 | |
| 13 cm x 18 cm Silicone sheet (0.6 mm) | Sigma Aldrich | 665581 | |
| 3M Tegaderm Transparent Film Dressings | 3M | 88-1626W | |
| Lipofectamine 2000 Transfection Reagent | Life Technologies | 11668027 | |
| Keap1 Stealth siRNA | Thermofisher Scientific | 1299001 | |
| Silencer negative control | Thermofisher Scientific | AM4635 | |
| Opti-MEM Reduced Serum | ThermoFisher Scientific | 11058021 | |
| DPBS | ThermoFisher Scientific | 14040133 | |
| Methyl-cellulose | Sigma Aldrich | 9004-67-5 | |
| L-012 | Wako Chemicals | 120-04891 | |
| IVIS Lumina III XR In Vivo Imaging System | PerkinElmer |
References
- Nishinaka, Y., et al. A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).
- Daiber, A., et al. Measurement of NAD(P)H oxidase-derived superoxide with the luminol analogue L-012. Free Radical Biology and Medicine. 36 (1), 101-111 (2004).
- Imada, I., et al. Analysis of reactive oxygen species generated by neutrophils using a chemiluminescence probe L-012. Analytical Biochemistry. 271 (1), 53-58 (1999).
- Sohn, H. Y., Gloe, T., Keller, M., Schoenafinger, K., Pohl, U. Sensitive superoxide detection in vascular cells by the new chemiluminescence dye L-012. Journal of Vascular Research. 36 (6), 456-464 (1999).
- Fuchs, K., et al. In vivo Hypoxia PET Imaging Quantifies the Severity of Arthritic Joint Inflammation in Line with Overexpression of Hypoxia-Inducible Factor and Enhanced Reactive Oxygen Species Generation. The Journal of Nuclear Medicine. 58 (5), 853-860 (2017).
- Asghar, M. N., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in murine colitis. Inflammatory Bowel Diseases. 20 (8), 1435-1447 (2014).
- Galiano, R. D., Michaels, J. t, Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing. Wound Repair and Regeneration. 12 (4), 485-492 (2004).
- Soares, M. A., et al. Restoration of Nrf2 Signaling Normalizes the Regenerative Niche. Diabetes. 65 (3), 633-646 (2016).
- Wang, X., et al. Imaging ROS signaling in cells and animals. Journal of Molecular Medicine. 91 (8), 917-927 (2013).
- Kielland, A., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012. Free Radical Biology and Medicine. 47 (6), 760-766 (2009).
- Balke, J., et al. Visualizing Oxidative Cellular Stress Induced by Nanoparticles in the Subcytotoxic Range Using Fluorescence Lifetime Imaging. Small. , (2018).
- Zielonka, J., Lambeth, J. D., Kalyanaraman, B. On the use of L-012, a luminol-based chemiluminescent probe, for detecting superoxide and identifying inhibitors of NADPH oxidase: a reevaluation. Free Radical Biology and Medicine. 65, 1310-1314 (2013).
- Dikalov, S. I., Harrison, D. G. Methods for detection of mitochondrial and cellular reactive oxygen species. Antioxidants & Redox Signalling. 20 (2), 372-382 (2014).
- Rabbani, P. S., et al. Targeted Nrf2 activation therapy with RTA 408 enhances regenerative capacity of diabetic wounds. Diabetes Research and Clinical Practice. 139, 11-23 (2018).
- Rabbani, P. S., et al. Novel lipoproteoplex delivers Keap1 siRNA based gene therapy to accelerate diabetic wound healing. Biomaterials. 132, 1-15 (2017).
