Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Medicine

Vurdering af neuroprotektive effekter af Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uddrag ved hjælp af en forbigående midt Cerebral arterie okklusion musemodel

doi: 10.3791/58454 Published: December 9, 2018
* These authors contributed equally

Summary

I denne undersøgelse ændre vi en eksisterende Eksperimentel metode til at opnå mere reproducerbare resultater, ved at etablere en midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) musemodel. Oral administration af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GR) methanol ekstrakt (GRex), efter slagtilfælde induktion, faldt betydeligt samlede infarkt volumen i forhold til den ubehandlede kontrolgruppe.

Abstract

Iskæmi efterfulgt af reperfusion af cerebral blodgennemstrømning efter et slagtilfælde fører til død af nerveceller og tab af hjernevæv. De mest almindeligt anvendte dyremodeller for at studere slagtilfælde er den midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) model. Tidligere undersøgelser har rapporteret forskellige infarkt størrelser, selv når de samme eksperimentelle dyrearter blev brugt på lignende betingelser, MCAO. Derfor, har vi udviklet en forbedret eksperimentelle metode for at løse denne uoverensstemmelse. Mus blev udsat for MCAO ved hjælp af en glødetråd okklusion materiale som efterligner humane slagtilfælde betingelser og glødetrådens tykkelse er optimeret for at etablere mere reproducerbare infarkt volumen. Mus behandlet med en methanol uddrag af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex) efter slagtilfælde induktion viste en betydeligt nedsat total infarkt volumen og øget antallet af overlevende celler i forhold til den ubehandlede kontrolgruppe. Dette ændrede forsøgsplan med succes og demonstreret reproducerbar den gavnlige effekt af GRex på iskæmisk slagtilfælde.

Introduction

Hjerneskader forårsaget af iskæmi og reperfusion af cerebral blodgennemstrømning fører til død af nerveceller og tab af hjernevæv. Denne type af hjerneskade fortsætter med at stige med den stigende forekomst af cerebrovaskulære sygdomme på grund af spredningen af metaboliske sygdomme som fedme, forhøjet blodtryk og diabetes mellitus1,2. Det absolutte antal af ældre patienter med slagtilfælde steget dramatisk på verdensplan, og udgifterne til lægebehandling for disse patienter, der ofte tilbage med langsigtede handicap, er en større samfundsmæssig byrde. Derfor bør sekundær handicap mindskes så vidt muligt at mindske den økonomiske byrde1,2.

De mest almindeligt anvendte gnaver model af cerebral infarkt er den midterste cerebral arterie (MCA) okklusion (MCAO) model, hvor MCA er tilstoppet med en silicium-belagt kirurgisk suturing glødelampe at blokere blodgennemstrømning, forårsager iskæmisk slagtilfælde3, 4. ved hjælp af en glødetråd, da okklusion materiale giver mulighed for kontrol af okklusion tid og varighed ved at manipulere varigheden af intra-luminale glødetrådens indsættelse.

Tidligere undersøgelser har vist, at selv når de samme gnaver MCAO model anvendes, den samlede mængde af cerebral infarkt varierer mellem eksperimenter, forårsager lav reproducerbarhed af undersøgelserne. For at forbedre reproducerbarhed, optimeret vi tykkelsen af glødetrådens mynte bruges i eksperimentet. Resultater af en forundersøgelse af cerebral iskæmisk periode og induceret infarkt viste, at en iskæmisk periode længere end 60 min. tilladt den volumetriske region af beskadiget hjernevæv til observeres og kvantificeret.

Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), også kendt som lakrids, består af tørrede rødder og jordstængler af Glycyrrhiza uralensis og G. glabra. Det har været brugt i kinesisk og koreansk traditionel medicin til forskellige formål, herunder som en fødevaretilsætningsstoffet og medicinsk5,6,7.

I en tidligere undersøgelse8, forbehandling med GR methanol ekstrakt (GRex) viste en anti-apoptotiske effekt i MCAO mus, herunder væsentlig forebyggelse af fald i protein udtryk for B-celle lymfom 2 (Bcl-2) og Bcl ekstra store (Bcl-xL). Denne undersøgelse blev udført for at forbedre reproducerbarhed af de konventionelle MCAO musen model ved at evaluere dets effektivitet bestemme, hvis post infarkt behandling med GRex effektivt reduceret infarkt volumen i MCAO-induceret cerebral skade.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alle procedurer, der involverer dyr blev godkendt af den etiske komité i Pusan National University (godkendelsesnummer, PNU-2016-1087). En grafisk oversigt over denne undersøgelse er vist i figur 1.

1. forberedelse og forvaltning af GRex

Bemærk: GR bruges i denne undersøgelse blev købt fra en kommerciel medicinalvirksomhed.

  1. 200 g af GR anbringes i 2.000 mL methanol og inkuberes ved stuetemperatur (25 ° C) i 5 dage.
  2. Filtrer blandingen ved hjælp af filtrerpapir med 0,26 mm tykkelse og 5 µm porestørrelse, og fjern derefter supernatanten. Tilføje 1.000 mL methanol til GR rester og filtrere igen.
  3. Kombinere de to supernatanter, filtreres gennem filtrerpapir, koncentrere sig under vakuum og derefter frysetørre rester til at producere GRex.
  4. Opløse GRex i dimethylsulfoxid (DMSO), fortyndes med 0,9% fysiologisk kogsaltopløsning, og filtreres gennem et 0,45 µm sprøjte filter. Derefter justere den endelige koncentration af DMSO til < 5%.
  5. Administrere GRex (300 mg/kg kropsvægt) 1 h efter reperfusion af MCAO via oral sonde. Administrere DMSO fortyndet i fysiologisk kogsaltopløsning (10 mL/kg legemsvægt) kun på normal grupper og kontrolgrupper, hhv.
    Bemærk: Koncentrationen af GRex anvendes i dette eksperiment var bestemt efter den koncentration, som var aktiv gennem vores tidligere undersøgelse8.

2. mus Model af MCAO

  1. Brug mandlige C57BL/6 mus alderen 6 uger og vejer 22-25 g. give alle dyr med fri adgang til standard chow og vand, og Parlamentet dem i et miljø med kontrolleret temperatur (22 ± 1 ° C) og en 12-timers lys/mørke cyklus.
    1. Opdele musene i grupper af seks mus hver, som bør bestå af sham-drives normal, kontrol og GRex behandlingsgrupper.
    2. Udføre MCAO kirurgi (ændring af metoden for Koizumi et al. 9) om kontrol og GRex behandlingsgrupper ved hjælp af et stereo-mikroskop.
  2. Fremkalde inhalation anæstesi i mus ved hjælp af 2% isofluran i 70% N2O og 30% O2. Anæstesi er anset for tilstrækkelige, når musen bliver ikke reagerer på mekanisk stimulus anvendes til halen. Opretholde kropstemperaturen på mus på 36,5 ± 0,5 ° C ved hjælp af en krop temperatur-bedrift tæppe tilsluttet et termometer.
  3. Fjerne alle hår på kister og hals mus ved barbering efterfulgt af brug af Hårfjerningscreme, desinficere operationsstedet af huden med betadine krat skiftevis med alkohol for to gange og derefter foretage et snit på ca 2 cm lang med kirurgisk Bladene midt på halsen. Omhyggeligt isolere den venstre fælles halspulsåren (LCCA), eksterne halspulsåren, og grenen af den interne carotis arterie fra omkringliggende bindevæv.
  4. Ligate den eksterne halspulsåren og den fælles halspulsåren med en kirurgisk sutur (4-0 silke sutur, halv hitch knude) at midlertidigt blokere blodtilførslen til den interne halspulsåren under operationen.
  5. Indsæt en silicium-belagt nylon sutur (8-0 monofilamenter, 11 mm lang) gennem den interne halspulsåren på venstre MCA oprindelse. Justere tykkelsen af den silicium-belagt del af glødetråden til en vifte af 0,10-0,12 mm.
  6. Måle fald i relative cerebral blood flow (rCBF) i MCA ved hjælp af en laser Doppler flowmåler. MCAO vil blive bekræftet, når rCBF fastholdes på < 20% af de hvilende tilstand værdier under hele iskæmisk.
  7. Fix indsatte glødetråden til blodkar i 2 timer, mens den cerebrale arterie er tilstoppet, og derefter forsigtigt trække glødetråd for at genoprette blodtilførslen til 22 h af reperfusion. Sutur i huden ved syning på 5 steder (3-0 silke sutur, to halve slæbekroge knude) og tillade hver musen til at vække fra anæstesi.
  8. I den normale gruppe, skal du udføre en sham operation efter samme procedure ovenfor (før 2,4), med følgende undtagelse. Ligate den fælles halspulsåren og sutur indridset muskler og hud.

3. måling af mængden af ødelagt hjernevæv

  1. Efter eutanasi af mus for hjerneskade måling med CO2 indånding brains punktafgifter musen 24 timer efter debut af MCAO ved hjælp af iris kirurgisk saks og skrå pincet.
    1. Efter at fjerne hovedet ved hjælp af saks, skal du gøre et snit i midterlinjen huden på hovedet til flip-over huden fra kraniet.
    2. Bryde de parietale knogler med skrå pincet, skrælning off dura på samme tid, og derefter isolere hjernen omhyggeligt fra kraniet.
  2. Klip den skåret væv i sektioner (1 mm tyk) ved hjælp af en mus hjernen matrix og derefter pletten sektioner for 17 min i en opløsning af 2% 2,3,5-triphenyltetrazolium chlorid (TTC).
  3. Fix sektioner i 10% formalin i mindst 2 timer og derefter fotografere dem ved hjælp af et digitalt kamera. TTC vil observeres for at plette levedygtige væv røde mens de nekrotiske områder vil være hvid.
  4. Analysere og kvantificere området cerebral infarkt i hvert afsnit ved hjælp af ImageJ.

4. hæmatoxylin og Eosin (H & E) og Cresyl Violet farvning af histologiske sektioner

  1. Aflive mus til histologisk undersøgelse af CO2 indånding og perfuse dem transcardially med 10 mL af fosfatbufferet saltopløsning (PBS), efterfulgt af 10 mL af 4% PARAFORMALDEHYD (PFA). Isolere hjernen ved hjælp af den samme procedure som ovenfor (3.1) og Fordyb hjernen i 10 mL 30% saccharose natten over.
  2. Integrere hjernevæv i optimal opskæring temperatur (OCT) sammensatte og skær det coronally i 15 µm tykt sektioner ved hjælp af en kryostaten. Montere sektionerne på glas dias, efterfulgt af farvning med hæmatoxylin og eosin (H & E) eller cresyl violet.
  3. Fordyb glas dias i 80% ethanol i 1 min. efterfulgt af farvning i hæmatoxylin løsning i 5 min.
    1. Dyp dias i 1% syre alkohol to gange, fordybe i mættede Lithiumcarbonat løsning til 30 s, vask med postevand til 30 s, og derefter kontrastfarve i eosin løsning til 30 s.
    2. Skyl dias i vand fra hanen, sættetid i 95% og absolut ethanol fortløbende.
    3. Lufttørre dias, fjerne dem i xylen i mindst 10 min og derefter montere coverslips med montering medium.
  4. Placer glas dias på et dias varmere i mindst 1 time, efterfulgt af nedsænkning i 50% ethanol fortyndet med chloroform natten over.
    1. Pletten dias med 0,1% cresyl violet i 10 min i en 40 ° C tør ovn.
    2. Fordyb dig i 95% ethanol i 30 min, så dehydrere i absolut ethanol for 2 gange.
    3. Ryd 2 gange i xylen i 5 min og derefter montere med montering medium efter lufttørring.
  5. Ved hjælp af et mikroskop, observere de histologiske forandringer, der fandt sted efter MCAO-induceret hjerneskade.

5. statistisk analyse

  1. Udtrykke de eksperimentelle resultater som middel ± standardafvigelse og bestemme den statistiske signifikans mellem grupperne ved hjælp af en envejs variansanalyse (ANOVA) efterfulgt af Tukey's post hoc analyse ved hjælp af en data analyse software.
  2. Angiv den statistiske signifikans på en p-værdi < 0,05.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I sham-drives normal-gruppen, er ingen cerebral infarkt observeret i kontrolgruppen, en forholdsvis bred vifte af beskadigede områder er konstaterede. I mus er administreret 300 mg/kg GRex i gruppen MCAO model, en statistisk signifikant reduktion i beskadigede område observeret (figur 2).

De histologiske ændringer er undersøgt af farvning iskæmisk hjernen sektioner med H & E eller cresyl violet. H & E farvning giver strukturelle oplysninger og specifikke funktionelle om celler10, hvorimod cresyl violette pletter bruges til at anslå det samlede antal hippocampus neuroner11. Således H & E eller cresyl violet intensitet, som målt ved hjælp af ImageJ software (fig. 3A), indeholder et indeks over celle overlevelse. H & E og cresyl violet farvning intensiteter betydeligt fald i kontrolgruppen i forhold til den normale gruppe (figur 3B, 3 C). GRex-behandlede gruppe viser større histologiske integritet, hvilket indebærer mindre neuronal celledød, end kontrolgruppen (figur 3C). Disse resultater viser, at GRex har potent neuroprotektive effekter mod iskæmi/reperfusion-induceret hjerneskade.

Figure 1
Figur 1 . Ordningen af den midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) model og behandling med methanol ekstrakt af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex). Mus blev behandlet med 300 mg/kg af GRex 1 h efter MCAO reperfusion, som blev opretholdt for 2 h. mus var aflivede 24 h efter MCAO begyndte, og så høstede hjernen skiver var gemt i en dybfryser for protein assay eller farves med TTC løsning for infarkt måling. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 . Repræsentative billeder af (A) hjerne afsnit viser virkningerne af methanol ekstrakt af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex) behandling på post midt cerebral arterieokklusion (MCAO)-induceret hjernen infarkt diskenheder og (B) enkelt behandling med 300 mg/kg GRex 1 h efter MCAO reperfusion betydeligt undertrykt infarkt mængder. Resultaterne præsenteres som middel ± SDs. ## #p < 0,001 vs normal gruppe, ** p < 0,01 vs styre gruppen; n = 6 pr. gruppe. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 . Repræsentative billeder af (A) hæmatoxylin og eosin (H & E)- og cresyl violet-farvede hjernen sektioner og (B, C) farve intensiteter, der blev brugt til at vurdere virkningerne af methanol ekstrakt af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex) på hjernen på midten cerebral arterieokklusion (MCAO)-såret mus. Histologiske integritet og væv skader i mus hjerner blev vurderet ved hjælp af (B) H & E eller (C) cresyl violet farvning 1 h post-MCAO reperfusion. Røde pletter i H & E-farvede dele angiver nukleare skader. Neuroner farvet med cresyl violet var farves lilla. GRex-behandlede gruppe viste bedre histologiske integritet end kontrolgruppen, der angiver mindre neuronal celledød. en, H & E-farvede; b, cresyl violet-farvede; c og d, udvidelser af a og b, henholdsvis. Resultaterne er middel ± SDs. ## #p < 0,001, og * p < 0,05 vs normal og kontrolgrupper; n = 6 pr. gruppe. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Med den stigende forekomst af metaboliske sygdomme, såsom kronisk hypertension, diabetes, og hyperlipidæmi, som er vigtige risikofaktorer for slagtilfælde, er slagtilfælde forebyggelse og behandling blevet et vigtigt område af medicinsk forskning12, 13. underskud i sprog og bevægelse efter et slagtilfælde er stærkt korreleret med graden af skade på hjernen væv14 og resultere i en dårlig livskvalitet for patienterne og deres familier15. Det er vigtigt at bruge en passende dyremodel for slagtilfælde, der involverer de samme patologiske ændringer som dem, der opstår i menneskelig sygdom at studere effekten af medicinsk behandling. Modellens MCAO efterligner trombotiske slagtilfælde af blokerer cerebral arteriel fartøjer. Det er almindeligt anvendt, fordi det er relativt reproducerbare og minimalt invasiv16,17,18,19.

En sammenligning af området med cerebral infarkt induceret for den samme hvilende tid rapporteret af flere forskere, dog afslører, at den samlede infarkt mængde varierer mellem undersøgelser. Vi konkluderede, at dette var på grund af forskelle i de anvendte materialer, okklusion og den kirurgiske procedure. Derfor, selv om den MCAO gnavere model betragtes meget reproducerbare, det er ikke altid muligt at få sådanne reproducerbarhed. Derfor, vi optimeret tykkelsen af filamenter bruges i mus MCAO model gennem vores indledende undersøgelse og tidligere rapporten8.

Det mest markante resultat af vores indledende undersøgelse i forhold til at andre undersøgelser er, at TTC farvning ikke afsløre nogen cerebral infarkt når iskæmi blev induceret for 60 min. (data ikke vist). Selv efter 90 og 120 min af MCAO i mus, vores resultatet viste en lavere infarkt volumen end andre forskningsundersøgelser. En begrænsning af denne undersøgelse er, at vi endnu ikke har fastlagt den præcise årsag til disse resultater; men vi planlægger at udforske dette fænomen i yderligere undersøgelser.

Talrige undersøgelser har for nylig rapporteret, at GR eller dets komponenter har farmakologiske aktiviteter herunder antitumor, antimikrobielle, og anti-inflammatoriske effekter20,21,22. En tidligere undersøgelse rapporterede, at GRex forbehandling effektivt hæmmede aktivering af caspase-9 af upregulating protein udtryk af Bcl-2 og Bcl-xL8. Forebyggende behandlinger for slagtilfælde er imidlertid mindre klinisk relevante end efter slagtilfælde behandling.

I denne undersøgelse, som var baseret på en tidligere undersøgelse8 evalueres effektiviteten af GRex efter behandling i et MCAO musemodel. Som afbildet i afsnittet repræsentative resultater, viste GRex efterbehandling gavnlige virkninger i at reducere samlede infarkt volumen og mildne skader på cellulære strukturer i MCAO-induceret hjerneskade i mus. Den specifikke handling mekanismer GRex på post iskæmisk hjerneskade mangler i denne undersøgelse, men de eksperimentelle protokoller, der bruges i dette studie med succes demonstreret virkningerne af denne urtemedicin ved at efterligne menneskers virkningerne af et slagtilfælde.

Selv om de eksperimentelle resultater ikke er observeret i denne undersøgelse, neuronal underskud score (NDS) blev målt i vores foreløbige eksperiment og ingen signifikant forskel var konstateret mellem kontrol og GRex-behandlede grupper, som formodes at have tilkommet til tid, kort bemærkning i forhold til sværhedsgraden af slagtilfælde. Vi planlægger at observere effekterne af GRex behandling på NDS over en lang periode efter moderate skader.

Afslutningsvis blev neuroprotektive effekten af GRex behandling i en musemodel MCAO demonstreret i denne undersøgelse med god reproducerbarhed. Proteiner involveret i den underliggende mekanisme bør undersøges i fremtidige undersøgelser.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Ikke gældende.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea Glycyrrhizae Radix et Rhizoma
Qualitative filter paper Advantec Filter paper No. 2 Qualitative filter paper
Dimethyl sulfoxide (DMSO) Sigma D8418-250ML Dimethyl sulfoxide (DMSO)
Syringe filter (0.45 µm) Sigma CLS431220 Syringe filter (0.45 µm)
Stereo Microscope Leica M50 Stereo Microscope
Stereo Microscope Nikon SMZ745 Stereo Microscope
Laser Doppler Moor Instrument moorVMS-LDF Laser Doppler
Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System Harvard Appratus 34-1352 Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System
Homeothermic Monitoring System Harvard Appratus 55-7020 Homeothermic Monitoring System
Digital Camera Canon Eos-M2 Digital Camera
Cryostat Leica CM3050S Cryostat
Microscope Carl Zeiss Zeiss Axio Microscope
Data Analysis Systat Software Inc. SigmaPlot version 12 Data Analysis
Data Analysis NIH Image ImageJ Data Analysis
Mouse diet Doo Yeol Biotech Standard rodent chow Mouse diet
Isoflurane JOONGWAE A02104781 Isoflurane
Isoflurane TROIKAA ISOTROY 100 Isoflurane
Silk suture (4-0 Black silk)  AILEE SK47510 Silk suture (4-0 Black silk) 
Silk suture (3-0 White silk)  Baekjae 57 Silk suture (3-0 White silk) 
Nylon suture (8-0 monofilament)  AILEE NB825 Nylon suture (8-0 monofilament) 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) Sigma T8877-25G 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC)
Formalin (Formaldehyde solution) JUNSEI 69360-1263 20KG Formalin (Formaldehyde solution)
Hematoxylin (Harris Hematoxylin) YD Diagnostics EasyStain Hematoxylin (Harris Hematoxylin)
Eosin (1% Eosin Y Solution) MUTO PURE CHEMICALS 3200-2 Eosin (1% Eosin Y Solution)
Cresyl violet (acetate) Sigma C5042-10G Cresyl violet (acetate)
Paraformaldehyde  Sigma-Aldrich P6148-1KG Paraformaldehyde 
Sucrose JUNSEI 31365-0350 1KG Sucrose
Optimum cutting temperature (OCT) compound Scigen 4583 Optimum cutting temperature (OCT) compound
Disecting Knife Fine Science Tools 10055-12 Disecting Knife
#4 Forcep Fine Science Tools 11241-30 #4 Forcep
#5 Forcep Fine Science Tools 11254-20 #5 Forcep
#6 Forcep Fine Science Tools 11260-20 #6 Forcep
#7 Fine Forcep Fine Science Tools 11274-20 #7 Fine Forcep
Surgical Scissors Fine Science Tools 14001-12 Surgical Scissors
Extra Fine Bonn Scissors Fine Science Tools 14084-08 Extra Fine Bonn Scissors
Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors Fine Science Tools 15371-92 Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors
Vessel Dilating Forcep Fine Science Tools 18153-11 Vessel Dilating Forcep

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bejot, Y., Delpont, B., Giroud, M. Rising stroke incidence in young adults: more epidemiological evidence, more questions to be answered. Journal of the American Heart Association. 11, (5), (2016).
  2. Hadadha, M., Vakili, A., Bandegi, A. R. Effect of the inhibition of hydrogen sulfide synthesis on ischemic injury and oxidative stress biomarkers in a transient model of focal cerebral ischemia in rats. Journal of Stroke and Cerebrovascular Diseases. 24, (12), 2676-2684 (2015).
  3. Durukan, A., Tatlisumak, T. Animal models of ischemic stroke. Article in Handbook of Clinical Neurology. 92, 43-66 (2009).
  4. Kim, D. Animal Models of Stroke. Brain and Neurorehabilitation. 4, (1), 1-11 (2011).
  5. Rizzato, G., Scalabrin, E., Radaelli, M., Capodaglio, G., Piccolo, O. A new exploration of licorice metabolome. Food Chemistry. 221, 959-968 (2017).
  6. Zhu, Z., et al. Rapid determination of flavonoids in licorice and comparison of three licorice species. Journal of Separation Science. 39, (3), 473-482 (2016).
  7. Ota, M., Mikage, M., Cai, S. Q. Herbological study on the medicinal effects of roasted licorice and honey-roasted licorice. Yakushigaku Zasshi. 50, (1), 38-45 (2015).
  8. Lim, C., et al. Licorice pretreatment protects against brain damage induced by middle cerebral artery occlusion in mice. Journal of Medicinal Food. 21, (5), 474-480 (2018).
  9. Koizumi, J. Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. Nosotchu. 8, (1), 1-8 (1986).
  10. Fischer, A. H., Jacobson, K. A., Rose, J., Zeller, R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. Cold Spring Harbor Protocols. 2008, (2008).
  11. Zhu, Y., Liu, F., Zou, X., Torbey, M. Comparison of unbiased estimation of neuronal number in the rat hippocampus with different staining methods. Journal of Neuroscience Methods. 254, 73-79 (2005).
  12. Alberts, M. J., Ovbiagele, B. Current strategies for ischemic stroke prevention: role of multimodal combination therapies. Journal of Neurology. 254, (10), 1414-1426 (2007).
  13. Pinto, A., Tuttolomondo, A., Di Raimondo, D., Fernandez, P., Licata, G. Cerebrovascular risk factors and clinical classification of strokes. Seminars in Vascular Medicine. 4, (3), 287-303 (2004).
  14. Barlow, S. J. Identifying the brain regions associated with acute spasticity in patients diagnosed with an ischemic stroke. Somatosensory and Motor Research. 33, (2), 1-8 (2016).
  15. Roth, S., Liesz, A. Stroke research at the crossroads - where are we heading. Swiss Medical Weekly. 146, 14329 (2016).
  16. Feuerstein, G. Z., Wang, X. Animal models of stroke. Molecular Medicine Today. 6, (3), 133-135 (2000).
  17. Herson, P. S., Traystman, R. J. Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050. Future Neurology. 9, (5), 541-551 (2014).
  18. Kumar, A., Gupta Aakriti, V. A review on animal models of stroke: an update. Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).
  19. O'Collins, V. E., Donnan, G. A., Howells, D. W. History of animal models of stroke. International Journal of Stroke. 6, (1), 77-78 (2011).
  20. Ji, S., et al. Bioactive constituents of Glycyrrhiza uralensis (licorice): discovery of the effective components of a traditional herbal medicine. Journal of Natural Products. 79, (2), 281-292 (2016).
  21. Yang, R., Wang, L. Q., Yuan, B. C., Liu, Y. The pharmacological activities of licorice. Planta Medica. 81, (18), 1654-1669 (2015).
  22. Yang, R., Yuan, B. C., Ma, Y. S., Zhou, S., Liu, Y. The anti-inflammatory activity of licorice, a widely used Chinese herb. Pharmaceutical Biology. 55, (1), 5-18 (2017).
Vurdering af neuroprotektive effekter af Glycyrrhizae Radix et Rhizoma uddrag ved hjælp af en forbigående midt Cerebral arterie okklusion musemodel
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lee, S. E., Lim, C., Lee, M., Kim, C. H., Kim, H., Lee, B., Cho, S. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (142), e58454, doi:10.3791/58454 (2018).More

Lee, S. E., Lim, C., Lee, M., Kim, C. H., Kim, H., Lee, B., Cho, S. Assessing Neuroprotective Effects of Glycyrrhizae Radix et Rhizoma Extract Using a Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Mouse Model. J. Vis. Exp. (142), e58454, doi:10.3791/58454 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter