I denne undersøgelse ændre vi en eksisterende Eksperimentel metode til at opnå mere reproducerbare resultater, ved at etablere en midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) musemodel. Oral administration af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GR) methanol ekstrakt (GRex), efter slagtilfælde induktion, faldt betydeligt samlede infarkt volumen i forhold til den ubehandlede kontrolgruppe.
Iskæmi efterfulgt af reperfusion af cerebral blodgennemstrømning efter et slagtilfælde fører til død af nerveceller og tab af hjernevæv. De mest almindeligt anvendte dyremodeller for at studere slagtilfælde er den midterste cerebral arterie okklusion (MCAO) model. Tidligere undersøgelser har rapporteret forskellige infarkt størrelser, selv når de samme eksperimentelle dyrearter blev brugt på lignende betingelser, MCAO. Derfor, har vi udviklet en forbedret eksperimentelle metode for at løse denne uoverensstemmelse. Mus blev udsat for MCAO ved hjælp af en glødetråd okklusion materiale som efterligner humane slagtilfælde betingelser og glødetrådens tykkelse er optimeret for at etablere mere reproducerbare infarkt volumen. Mus behandlet med en methanol uddrag af Glycyrrhizae Radix et rhizom (GRex) efter slagtilfælde induktion viste en betydeligt nedsat total infarkt volumen og øget antallet af overlevende celler i forhold til den ubehandlede kontrolgruppe. Dette ændrede forsøgsplan med succes og demonstreret reproducerbar den gavnlige effekt af GRex på iskæmisk slagtilfælde.
Hjerneskader forårsaget af iskæmi og reperfusion af cerebral blodgennemstrømning fører til død af nerveceller og tab af hjernevæv. Denne type af hjerneskade fortsætter med at stige med den stigende forekomst af cerebrovaskulære sygdomme på grund af spredningen af metaboliske sygdomme som fedme, forhøjet blodtryk og diabetes mellitus1,2. Det absolutte antal af ældre patienter med slagtilfælde steget dramatisk på verdensplan, og udgifterne til lægebehandling for disse patienter, der ofte tilbage med langsigtede handicap, er en større samfundsmæssig byrde. Derfor bør sekundær handicap mindskes så vidt muligt at mindske den økonomiske byrde1,2.
De mest almindeligt anvendte gnaver model af cerebral infarkt er den midterste cerebral arterie (MCA) okklusion (MCAO) model, hvor MCA er tilstoppet med en silicium-belagt kirurgisk suturing glødelampe at blokere blodgennemstrømning, forårsager iskæmisk slagtilfælde3, 4. ved hjælp af en glødetråd, da okklusion materiale giver mulighed for kontrol af okklusion tid og varighed ved at manipulere varigheden af intra-luminale glødetrådens indsættelse.
Tidligere undersøgelser har vist, at selv når de samme gnaver MCAO model anvendes, den samlede mængde af cerebral infarkt varierer mellem eksperimenter, forårsager lav reproducerbarhed af undersøgelserne. For at forbedre reproducerbarhed, optimeret vi tykkelsen af glødetrådens mynte bruges i eksperimentet. Resultater af en forundersøgelse af cerebral iskæmisk periode og induceret infarkt viste, at en iskæmisk periode længere end 60 min. tilladt den volumetriske region af beskadiget hjernevæv til observeres og kvantificeret.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma (GR), også kendt som lakrids, består af tørrede rødder og jordstængler af Glycyrrhiza uralensis og G. glabra. Det har været brugt i kinesisk og koreansk traditionel medicin til forskellige formål, herunder som en fødevaretilsætningsstoffet og medicinsk5,6,7.
I en tidligere undersøgelse8, forbehandling med GR methanol ekstrakt (GRex) viste en anti-apoptotiske effekt i MCAO mus, herunder væsentlig forebyggelse af fald i protein udtryk for B-celle lymfom 2 (Bcl-2) og Bcl ekstra store (Bcl-xL). Denne undersøgelse blev udført for at forbedre reproducerbarhed af de konventionelle MCAO musen model ved at evaluere dets effektivitet bestemme, hvis post infarkt behandling med GRex effektivt reduceret infarkt volumen i MCAO-induceret cerebral skade.
Med den stigende forekomst af metaboliske sygdomme, såsom kronisk hypertension, diabetes, og hyperlipidæmi, som er vigtige risikofaktorer for slagtilfælde, er slagtilfælde forebyggelse og behandling blevet et vigtigt område af medicinsk forskning12, 13. underskud i sprog og bevægelse efter et slagtilfælde er stærkt korreleret med graden af skade på hjernen væv14 og resultere i en dårlig livskvalitet for patienterne og deres fami…
The authors have nothing to disclose.
Ikke gældende.
Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | Gwangmyoung Pharmaceuticals Co., Korea | Glycyrrhizae Radix et Rhizoma | |
Qualitative filter paper | Advantec | Filter paper No. 2 | Qualitative filter paper |
Dimethyl sulfoxide (DMSO) | Sigma | D8418-250ML | Dimethyl sulfoxide (DMSO) |
Syringe filter (0.45 µm) | Sigma | CLS431220 | Syringe filter (0.45 µm) |
Stereo Microscope | Leica | M50 | Stereo Microscope |
Stereo Microscope | Nikon | SMZ745 | Stereo Microscope |
Laser Doppler | Moor Instrument | moorVMS-LDF | Laser Doppler |
Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System | Harvard Appratus | 34-1352 | Anesthesia Tabletop Bracket with N2O&O2 Flowmeter System |
Homeothermic Monitoring System | Harvard Appratus | 55-7020 | Homeothermic Monitoring System |
Digital Camera | Canon | Eos-M2 | Digital Camera |
Cryostat | Leica | CM3050S | Cryostat |
Microscope | Carl Zeiss | Zeiss Axio | Microscope |
Data Analysis | Systat Software Inc. | SigmaPlot version 12 | Data Analysis |
Data Analysis | NIH Image | ImageJ | Data Analysis |
Mouse diet | Doo Yeol Biotech | Standard rodent chow | Mouse diet |
Isoflurane | JOONGWAE | A02104781 | Isoflurane |
Isoflurane | TROIKAA | ISOTROY 100 | Isoflurane |
Silk suture (4-0 Black silk) | AILEE | SK47510 | Silk suture (4-0 Black silk) |
Silk suture (3-0 White silk) | Baekjae | 57 | Silk suture (3-0 White silk) |
Nylon suture (8-0 monofilament) | AILEE | NB825 | Nylon suture (8-0 monofilament) |
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) | Sigma | T8877-25G | 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) |
Formalin (Formaldehyde solution) | JUNSEI | 69360-1263 20KG | Formalin (Formaldehyde solution) |
Hematoxylin (Harris Hematoxylin) | YD Diagnostics | EasyStain | Hematoxylin (Harris Hematoxylin) |
Eosin (1% Eosin Y Solution) | MUTO PURE CHEMICALS | 3200-2 | Eosin (1% Eosin Y Solution) |
Cresyl violet (acetate) | Sigma | C5042-10G | Cresyl violet (acetate) |
Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148-1KG | Paraformaldehyde |
Sucrose | JUNSEI | 31365-0350 1KG | Sucrose |
Optimum cutting temperature (OCT) compound | Scigen | 4583 | Optimum cutting temperature (OCT) compound |
Disecting Knife | Fine Science Tools | 10055-12 | Disecting Knife |
#4 Forcep | Fine Science Tools | 11241-30 | #4 Forcep |
#5 Forcep | Fine Science Tools | 11254-20 | #5 Forcep |
#6 Forcep | Fine Science Tools | 11260-20 | #6 Forcep |
#7 Fine Forcep | Fine Science Tools | 11274-20 | #7 Fine Forcep |
Surgical Scissors | Fine Science Tools | 14001-12 | Surgical Scissors |
Extra Fine Bonn Scissors | Fine Science Tools | 14084-08 | Extra Fine Bonn Scissors |
Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors | Fine Science Tools | 15371-92 | Moria Pascheff-Wolff Spring Scissors |
Vessel Dilating Forcep | Fine Science Tools | 18153-11 | Vessel Dilating Forcep |