嗜中性粒细胞外陷阱(NETs)是由DNA和颗粒衍生抗菌蛋白组成的类似网络的抗菌结构。免疫荧光显微镜和基于图像的定量方法仍然是定量中性粒细胞细胞外陷阱形成的重要工具。然而,目前可用于量化NET的基于荧光的方法存在关键局限性。基于图像的 NET 量化的手动方法通常是主观的,对于用户(尤其是没有经验的用户)来说,容易出错和繁琐。此外,目前可用的量化软件选项要么是半自动的,要么需要在操作前进行培训。在这里,我们演示了基于免疫荧光的自动图像定量方法的实现,以评估NET形成称为NETQUANT。该软件易于使用,具有用户友好的图形用户界面(GUI)。它考虑了与生物学相关的参数,如表面积和DNA:NET标记蛋白比的增加,以及核变形,以定义NET的形成。此外,此工具是作为一个免费的应用程序构建的,并允许单细胞分辨率量化和分析。
有许多图像分析选项可用于执行基于荧光图像的NETs11、12的定量。但是,这些软件选项在用户不友好和/或完全自动化方面存在限制。在本文中,我们演示了NETQUANT13的操作,这是一个免费的应用程序,可以执行无偏的全自动免疫荧光显微镜基于NET定量。该应用程序具有用户友好的图形界面 (GUI),可以执行单单元分析。该软件通过检测DNA-NET结合标记区域的形态变化、染色质分离相关细胞核变形和DNA:NET结合蛋白比的增加来量化图像中的NETosis。综合起来,多个 NET 定义标准允许以无偏的方式跨多个数据集进行严格的 NET 量化。
Mohanty, T., Nordenfelt, P. Automated Image-Based Quantification of Neutrophil Extracellular Traps Using NETQUANT. J. Vis. Exp. (153), e58528, doi:10.3791/58528 (2019).