Summary
Hier präsentieren wir ein Protokoll, um einen Pleuraerguss bei Ratten durch intratracheale Instillation von Polyacrylat/Nanosilica konstruieren.
Abstract
Pleuraerguss ist eine vorherrschende klinische Befund von vielen Lungenerkrankungen. Ein nützliches Tier Pleuraerguss-Modell ist sehr wichtig, diese Lungenerkrankungen zu studieren. Pleuraerguss Vorgängermodellen Aufmerksamkeit mehr auf biologische Faktoren eher als Nanopartikel in der Umwelt. Hier stellen wir ein Modell um Pleuraerguss bei Ratten durch intratracheale Instillation von Polyacrylat/Nanosilica und eine Methode der Nanopartikel Isolation in der Pleuraerguss zu machen. Durch intratracheale Instillation von Polyacrylat/Nanosilica mit Konzentrationen von 3.125, 6,25 und 12,5 mg/Kg∙mL Pleuraerguss bei Ratten präsentiert am 3. Tag, erreichte bei 7-10 Tage in 6,25 und 12,5 mg/Kg∙mL-Gruppen, dann langsam abgenommen und am 14. Tag verschwunden. Wenn die Konzentration von Polyacrylat/Nanosilica erhöht, ist der Pleuraerguss produziert mehr und schneller. Diese pleural Flüssigkeit wurde durch Ultraschall oder CT Brust scannen und bestätigt durch Sezieren von Ratten gefunden. Silica-Nanopartikel wurden in die Ratten Pleuraerguss von Transmissions-Elektronenmikroskop beobachtet. Diese Ergebnisse zeigten, dass die Exposition gegenüber Polyacrylat/Nanosilica führt zur Induktion von Pleuraerguss, die in Übereinstimmung mit unseren früheren Bericht beim Menschen war. Darüber hinaus ist dieses Modell für die weitere Erforschung der Nanotoxikologie und Pleuraerguss Krankheiten vorteilhaft.
Introduction
Pleuraerguss ist eine sehr häufige klinische Manifestation von Lungenerkrankungen mit einer Vielzahl von Ursachen. Ein nützliches Tier Pleuraerguss-Modell ist sehr wichtig, diese Lungenerkrankungen, die Rollen der zwei pleural Membran Schichten, die Mechanismen der Pleuraerguss und deren Behandlung zu studieren. Einige berichteten jedoch, dass Pleuraerguss Modelle konzentrieren sich hauptsächlich auf die malignen Pleuraerguss oder biologische Faktoren als die Nanopartikel in der Umwelt-1,-2. Hier stellen wir ein neues Modell der Pleuraerguss, die einfach, sicher und wirksam ist.
Mit der Entwicklung der Nanotechnologie und die weitgehende Verwendung von Nanoprodukten gibt es eine Besorgnis über die möglichen Gefahren der Nanomaterialien auf die Umwelt und die menschliche Gesundheit3,4. Nanomaterialien Risikofaktoren führen und möglicherweise zu neuartigen Gefährdungen am Arbeitsplatz oder durch Kontamination der Umwelt führen. In vitro und in vivo Studien zeigen, dass Nanomaterialien in Multi-Organ-Schäden an der Lunge, das Herz, die Leber, der Niere und das Nervensystem sowie die Fortpflanzungs- und Immunsystems5,6führen können. Darüber hinaus berichteten einige Studien, dass die spezifische Toxizität von Nanomaterialien aufgrund ihrer physikalisch-chemischen Eigenschaften3,4,7.
Wir haben berichtet, dass eine Gruppe von Arbeitern mit Exposition gegenüber Nanomaterialien klinisch mit Pleura und Herzbeutel Erguss, Lungenfibrose und Granulom8,9dargestellt. Silica-Nanopartikel wurden in diesen Patienten Pleuraerguss9lokalisiert. Um zu reproduzieren und überprüfen der Pleuraerguss induziert durch die eingeatmete Nanopartikel in der Human-, haben wir das Experiment durch Einträufeln Polyacrylat/Nanosilica (PA/NPSi) über die Atemwege in Ratten, die menschliche Atmung in einem echten nachgeahmt Umwelt, und fand, dass intratracheale Instillation von PA/Koalitionsregierungen Pleuraerguss bei Ratten führen könnte. Hier stellen wir, wie in Ratten durch intratracheale Instillation von PA/Koalitionsregierungen zu Pleuraerguss und Nanopartikel in der Pleuraerguss zu isolieren. Dieses Modell kann nützlich für das weitere Studium der Nanotoxikologie und Pleuraerguss Krankheiten sein.
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Protocol
Die Studie folgte Richtlinien des Capital Medical University (Beijing, PR China) für die Pflege und Verwendung von Versuchstieren. Alle Verfahren wurden durch das Tier ethischen Ausschuss der Hauptstadt medizinische Universität in China angenommen.
(1) experimentelle Vorbereitungen
Hinweis: Die weiblichen bestimmten Pathogen-freies Wistar-Ratten akklimatisieren (Gewicht: 200 ± 10 g) zu den Versuchsaufbauten für eine Woche vor der Verabreichung (Umweltbedingungen: Licht / dunkel: 12h / 12h, Temperatur 22 ± 2 ° C, Luftfeuchtigkeit 50 ± 10 %).
- Verwenden Sie eine frische 10 mL PA/NPSi Suspensionen (Nanosilica Ø:20 ± 5 nm durch in-situ Emulsionspolymerisation) in normalen Kochsalzlösung bei Konzentrationen von 3,125, 6,25 und 12,5 mg/mL, bzw.10verdünnt. Beschallen Sie vor der Verabreichung die Aufhängungen für 20-30 min und Wirbel für 10 min um Nanopartikel Aggregation zu verhindern.
- Ebenso teilen insgesamt 20 Ratten in vier Gruppen: eine Gruppe für jede Konzentration von PA/NPSi (0, 3,125 6,25 und 12,5 mg/mL).
- Um sie zu betäuben, legen Sie die Ratten in einem geschlossenen Behälter mit 1,5 mL Ether (99,5 %) oder andere Protokolle IACUC genehmigt. Suchen Sie nach 60-90 s der Anästhesie das Ausbleiben einer Reaktion, Reflex pedal. Stellen Sie sicher, dass die Ratten atmest.
- Die narkotisierten Ratte auf dem Brett und befestigen Sie ihre vorderen Zähne mit einer sterilisierten Nylon auf dem Brett zu.
- Öffnen Sie ihren Mund und setzen Sie seine Riss der Stimmritze mit Hilfe eines chirurgischen Zangen und frontalen Linse.
- Die Ratten mit 0,5 mL Suspension PA/Koalitionsregierungen in jede Ratte Lunge für eine Gesamtmenge von 1 mL mit einem feinen Schlauch mit einer sterilisierten Nadel stumpf in der bilateralen Bronchus zu vermitteln.
- Legen Sie die Ratten auf einer Kunststoffplatte in Rückenlage und lassen Sie die Ratten langsam in ca. 5-10 min zu erholen.
2. Ultraschalluntersuchung für Pleuraerguss
- Verwenden Sie ein Ultraschallsystem mit einer linear-Array-Schallkopf (Frequenz: 8 MHz), Ratten auf 1, 3, 7 und 14 Tagen10zu prüfen.
- Anästhesie (0,35 mL/100 g, 10 % Chloral Hydrate, i.p.), die Ratten zu geben und überprüfen Sie, ob des Mangels an Pedal Reflexe.
- Entfernen Sie die Haare aus Ratten Brust und oberen Bauch einen elektrischen Rasierer verwenden. Dann legen Sie die Ratte auf einer Montageplatte in Rückenlage.
- Bedecken Sie die Haut mit dem beschichteten Gel, und platzieren Sie den Schallkopf auf der Intercostalneuralgie Raum und subcostal Fläche um die pleural Flüssigkeit zu erkennen.
Hinweis: Um den Erguss genau zu erfassen, wurden links und rechts seitlichen Positionen ausgewählt, um eine Ultraschall-Untersuchung durchführen. - Setzen Sie die Ratte auf eine Kunststoffplatte in Rückenlage nach Ultraschalluntersuchung und lassen Sie die Ratten langsam in 10 min zu erholen.
3. Brust CT Scan für Pleuraerguss
- Betäuben Sie auf 7 und 14 Tage Post-Verwaltung die Ratten mit 10 % Chloral Hydrate (IP). Halten Sie es ausreichend Tiefe der Narkose, wenn die Ratte nicht reagiert, Reflexe pedal.
Hinweis: 7. Tag Post-Verwaltung ist die am besten geeignete Zeit, Pleuraerguss durch CT Scan zu beobachten. - Legen Sie die Ratte auf einer Plastikfolie in Bauchlage und Scannen Sie ihre Brust untersuchen Pleuraerguss mit einem 64-Kanal-CT-Use folgenden Einstellungen: 64 x 0,625 mm Detektor Konfiguration, 120 kV (Peak) und 350 mAs.
4. Erhebung von Pleuraerguss und Isolation von Nanopartikeln in der Pleuraerguss
- Nach Brust CT Scan von Ratten und unter Narkose von Chloral, Hydrat, überprüfen Sie das Pedale Reflex der Ratten, rasieren die Haare vom Bauch, Brust und desinfizieren Sie die Haut durch Jod.
- Bringen Sie die Ratten in den OP-Bereich.
- Geschnitten Sie unter Narkose schnell 1-1,5 cm von der Haut und Bauchmuskulatur, Xiphoid entlang der Mittellinie mit intakter Membran.
- Vorsichtig öffne die Truhe und bilateralen Pleura Hohlräume mit Hilfe der Pinzette, vor allem die bilateralen kostalen Phrenicus Winkel zu inspizieren. Sammeln Sie 1-2 mL der hellgelben Pleuraerguss mit einer sterilen Spritze 2 mL.
- Ist das erledigt, Opfern Sie die Ratten mit IACUC genehmigte Protokoll.
- Zentrifugieren der Pleuraerguss in ein 2 mL Tube für 15 min bei 300 X g um die Nanopartikel zu isolieren.
- Verwenden Sie einen Tropfen der oberen Schicht der hellen Flüssigkeit ist und unter einer Übertragung Elektronen microscope(TEM,) bei einer Beschleunigungsspannung von 60-80 kV beobachten.
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Representative Results
Mittels einer thorakalen Ultraschall, fanden wir keine pleural Ergüsse an Tag 1 in allen Gruppen. Am 3. Tag erschien der Pleuraerguss die 6,25 und 12,5 mg/Kg∙mL-Gruppen. Der Erguss war vor allem in der rechts kostalen Phrenicus Winkel, während der Herzbeutel Erguss nur in 12,5 mg/Kg∙mL-Gruppe präsentiert. Darüber hinaus wurden am 7. Tag, Pleuraerguss (Video 1) und Herzbeutel Erguss (Video 2) 6,25 mg/Kg∙mL-Gruppe (Abbildung 1) entdeckt. Pleuraerguss erhöht langsam so weit wie auf 7-10 Tage und dann allmählich verringert. Am 14. Tag fand kein Pleuraerguss mehr aber mit dem Zeichen der Adhäsion der Pleura in allen Gruppen. 10
Mit 7 und 14 Tagen gab es keine Anzeichen von Pleuraerguss in 3.125 und 6,25 mg/Kg∙mL Gruppen10. Allerdings war in der 12,5 mg/Kg∙mL-Gruppe, die Brust CT Abtastung abnorme mit der stumpfen posterior Costophrenic Winkel, die eine kleine Menge von Pleuraerguss (Abbildung 2a, b) angedeutet. Keine Anzeichen des Füllstands wurden beobachtet, die durch eine unzureichende Menge an Wasser erklärt wurde.
Bei der Präparation von Ratten beobachteten wir gelb oder farblos Ergüsse 6,25 mg/Kg∙mL und 12,5 mg/Kg∙mL Gruppen und an den Tagen 3 und 7. Die Bände der Pleuraerguss variieren von 1 bis 1,8 mL in jedem pleural Raum in den 6,25 mg/Kg∙mL und 12,5 mg/Kg∙mL Gruppen. In der Gruppe von 3,125 mg/Kg∙mL erschien keine Flüssigkeit in den pleuralen Räumn in der vollen experimentellen Prozess.
Mit der TEM Koalitionsregierungen Nanopartikel einzeln vorgestellt und Cluster in die abgetropften pleural Flüssigkeit gebildet. Der mittlere Durchmesser (Ø: 20 ± 5 nm) und die Morphologie in der pleural Flüssigkeit entsprachen die Koalitionsregierungen in der zubereiteten Suspension. Die Nanopartikel waren meist kugelförmig und gut verteilte, und die durchschnittliche Größe einer einzelnen Nanopartikel war ~ 20 ± 5 nm (Abbildung 3a, b).
Abbildung 1 : Repräsentative Bilder von Pleuraerguss durch sonographische Befunde am Tag 7. (a, b) Sonographische Bilder von einer Ratte in der 3,125 mg/Kg∙mL-Gruppe mit keine Flüssigkeit im pleural und Herzbeutel Hohlräume. (c, d) Sonographische Bilder von einer Ratte in der 6,25 mg/Kg∙mL-Gruppe mit scheinbaren Pleuraerguss und Herzbeutel Erguss. (e, f) Sonographische Bilder von einer Ratte in der 12,5 mg/Kg∙mL-Gruppe mit viel mehr Flüssigkeit im pleural und Herzbeutel Hohlräume. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 2 . Repräsentative Bilder des Thorax CT-Bilder in Ratten. CT Bild von einer Ratte in der 3,125 mg/Kg∙mL-Gruppe ohne Pleuraerguss (ein) und CT-Bild von einer Ratte in der 12,5 mg/Kg∙mL-Gruppe mit der negativen Feststellung der freien Flüssigkeit aber stumpfe posterior Costophrenic Winkel in den pleural Raum (b). Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Abbildung 3 . Silica-Nanopartikel Polyacrylat/Nanosilica Federung und Pleuraerguss einer Ratte. (ein) Silica-Nanopartikel in Polyacrylat/Kieselsäure Nanocomposites. (b) Silica-Nanopartikel in eine Ratte Pleuraerguss mit Clustern oder individuelle Form. Maßstabsleiste: 200 nm. Bitte klicken Sie hier für eine größere Version dieser Figur.
Video 1. Der Pleuraerguss in eine Ratte im Gruppenrahmen 6,25 mg/Kg∙mL. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. (Rechtsklick zum download)
Video 2. Der Herzbeutel Erguss in der Ratte im Gruppenrahmen 6,25 mg/Kg∙mL. Bitte klicken Sie hier, um dieses Video anzusehen. (Rechtsklick zum download)
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Discussion
Sonographie ist die bequemste Werkzeug für die Bestimmung von Lungenerkrankungen, wegen seiner ausgezeichneten Empfindlichkeit auf die freie Flüssigkeit in der Pleurahöhle11. Und zwar deshalb, weil Sonographie den Kontrast der akustischen Impedanz von Luft und Flüssigkeit in der Lunge12sofort erkennen kann. Außerdem ist die Sonographie flexibler in ein kleines Tier Modell als CT. Trotzdem die Luft in der Lunge die Schallwelle reflektiert und aus der Beobachtung der Intrapulmonale Veränderungen nach Nanopartikel Instillation behindert. Daher haben wir kombiniert Brust-CT-Scan und Lunge Sonographie, die Intrapulmonale Veränderungen und die pleural Flüssigkeit zu untersuchen.
Nach der Erkundung der Bilddaten, fanden wir die bildgebenden Ergebnisse bemerkenswert. Erstens zeigte unser Modell, dass die PA/NPSi, induziert in der Tat die ungewöhnliche Toxizität, das als der Pleura und der Herzbeutel Erguss im frühen Stadium in die Rattenmodell manifestierte. Zweitens, dieses Modell erfolgreich reproduziert, das auftreten und die Entwicklung der menschlichen Polyserous Ergüsse; Inzwischen wurden diese Prozesse bei unseren Patienten beobachtet, die mit Pleura und Herzbeutel Erguss, Lungenfibrose und Granulom8,9vorgestellt. So impliziert diese Tatsachen, dass die Serous Membrane wie die pleural Membran oder der Herzbeutel Membran eines der Ziele der Verletzungen von PA/NPSi, ähnlich wie in der Natur war, die durch Asbest verursacht. Auch war die Zeitleiste des Polyserous Ergüssen sinnvoll wie durch unsere Ergebnisse zustande.
Wie für die Gestaltung unseres Modells war die intratracheale Instillation der entscheidende Schritt. Diese Methode sichergestellt, dass die Toxizität der Nanopartikel des Körpers durch die trachealen eingetragen, die anders als die vorherigen Studie13war. Jedoch die Nachteile dieser Methode waren wie folgt: der PA/NPSi wurde in bilateralen Bronchus durch die feinen Schlauch, der höchst experimentelle Fähigkeiten um die mechanische Schäden an der Luftröhre und der Husten verursacht durch die Reizung erforderlich eingeflößt. So war der kritische Punkt der richtigen Tiefe intratracheale Instillation. Unterdessen war die richtige Anästhesie Pflege entscheidend für den oben genannten Schritt.
Die Verwendung von Nanopartikeln sind die feinen Partikel für die Forschungszwecke picking up mehr und mehr Aufmerksamkeit. Je kleiner der Durchmesser der Teilchen, desto schwieriger ist es, sie zu schützen. Auf der anderen Seite benötigt der Nano-Silizium mit einem Durchmesser von 20 ± 5 nm in der Tat eine Hightech-Vorbereitung Methode zur Vorbereitung dieser Studie führte zu einem Anstieg in Schwierigkeiten mit der Abnahme der Durchmesser. So gehörte zu den Profis unserer Technik der Durchmesser des Nano-Silizium, das war kleiner als die vorherige Studie13,14. Ein weiterer Vorteil dieser Studie war, dass wir die Nanopartikel über Trachealkanüle anstatt Haut oder Zirkulation13,15,16induziert. Die intravenöse Belichtung behindert uns beispielsweise bei der Untersuchung des Zielorgan, das schwer verletzt das Zielorgan, ausgelöst durch die primäre oder sekundäre Schäden zu unterscheiden war. Daher werden die intratracheale Instillation in unserer Meinung nach der beste Weg, die Nanopartikel-Toxizität der Lunge in der nächsten Zukunft zu untersuchen. Außerdem war die Dosierung der Nanopartikel niedriger ist als die vorherigen Studie13, die eine höhere Wirtschaftlichkeit Verhältnis vorgestellt.
Was die Pleura und der Herzbeutel Erguss induziert durch PA/Koalitionsregierungen wäre die Entzündungsreaktion und die Produktion von reaktiven Sauerstoff-System (ROS) die Ursache davon. Wir erklärten es wie folgt: Erstens die Nanosilica ROS Konzentration erhöht, induziert entzündliche Produktion, verursacht mitochondriale Depolarisation und reduziert Glutathion-Spiegel sowohl in vivo und in vitro-5,6. Zweitens erhöht Entzündung und Produktion von ROS die interstitielle Flüssigkeit in der Lunge oder Durchlässigkeit der pleuralen Kapillaren, die die Bildung von Pleuraerguss am Ende gefördert. Die mögliche Beeinträchtigung der Pleura Lymphdrainage könnte außerdem die Anhäufung der pleural Flüssigkeit auch beteiligt werden. Mit mehr Ansammlung von pleural Flüssigkeit hatte der onkotischen Druck erhöht, die induzierte schließlich der Ablagerung von PA/Koalitionsregierungen in Pleura Hohlräumen. Dieses Ergebnis war im Einklang mit unseren früheren Tierversuche und berichteten Patienten8,10.
Für die Pleuraerguss selbst war es weit verbreitet in der Klinik. Dennoch führen zahlreiche respiratorische oder systemische Erkrankungen Pleuraerguss. Daher würden die konstruieren ein Tiermodell die ätiologische Studie der Pleuraerguss profitieren. Die vorherige Studie berichtet die Lunge Toxizität von Nanosilica13,17. Die Vorgängermodelle der gemeldeten Pleuraerguss konzentriert sich jedoch hauptsächlich auf die biologische Faktoren als Nanopartikel18,19. Daher blieb die Dosierung der Nanopartikel eine offene Frage. Unser Modell gezeigt, dass Pleuraerguss ereignete sich am 3. Tag nach einer PA/NPSi Konzentration von 6,25 mg/Kg∙mL wurde durch intratracheale Instillation verabreicht und erreichte auf ca. 7-10 Tage. Darüber hinaus mit steigenden Konzentrationen von PA/NPSi, Pleuraerguss produziert mehr und schneller. Darüber hinaus war im Vergleich zu biologischen Modellen18,19, unser Modell der Pleuraerguss gut kontrollierbar und effektiv. Zusammenfassend lässt sich sagen, wäre unser Modell von Vorteil für das zukünftige Studium der Pleuraerguss Krankheiten, sowie für die weitere Untersuchung der Nanotoxizität insbesondere.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts preisgeben.
Acknowledgments
Die vorliegende Studie und Produktion zu diesem Artikel wurden von der National Natural Science Foundation of China (Grant 81773373, 81172614 und Grant 81441089) finanziert. Wir danken Dr. Jin Yan und Dr. Pan Yujie, des Department of Emergency, Beijing Chaoyang Krankenhaus und Dr. Qu Peng von Ultraschall Medizinabteilung, Beijing Chaoyang Krankenhaus für die Hilfe bei der Videoproduktion.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acuson S2000 Color Doppler ultrasound system | Siemens Medical Solutions, Mountain View ,CA | ||
| Polyacrylate/nanosilica | Fudan University,Shanghai, China | made by order with nanosilica(20±5)nm | |
| 10% chloral hydrate | Beijing Chemical Works | 302-17-0 | |
| Light speed 16 spiral computed tomography | GE Healthcare, US | ||
| Specific pathogen-free Wistar | Animal Center of Lianhelihua (Beijing, China) | Wistar rats |
References
- Stathopoulos, G. T., et al. Nuclear factor-kappaB affects tumor progression in a mouse model of malignant pleural effusion. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 34 (2), 142-150 (2006).
- Shen, J., et al. The dosage-toxicity-efficacy relationship of kansui and licorice in malignant pleural effusion rats based on factor analysis. Journal of Ethnopharmacology. 186, 251-256 (2016).
- Nel, A., Xia, T., Mädler, L., Li, N. Toxic potential of materials at the nanolevel. Science. 311 (5761), 622-627 (2006).
- Maynard, A. D., et al.
- Duan, J., et al. Toxic effects of silica nanoparticles on zebrafish embryos and larvae. PLoS One. 8 (9), 74606 (2013).
- Skuland, T., Ovrevik, J., Låg, M., Schwarze, P., Refsnes, M. Silica nanoparticles induce cytokine responses in lung epithelial cells through activation of a p38/TACE/TGF-α/EGFR-pathway and NF-κΒ signaling. Toxicology and Applied Pharmacology. 279 (1), 76-86 (2014).
- Oberdörster, G., Oberdörster, E., Oberdörster, J. Nanotoxicology: an emerging discipline evolving from studies of ultrafine particles. Environmental Health Perspectives. 113 (7), 823-839 (2005).
- Song, Y., Li, X., Du, X. Exposure to nanoparticles is related to pleural effusion, pulmonary fibrosis and granuloma. European Respiratory Journal. 34 (3), 559-567 (2009).
- Song, Y., et al. Nanomaterials in humans: identification, characteristics, and potential damage. Toxicologic Pathology. 39 (5), 841-849 (2011).
- Zhu, X., et al. Polyacrylate/nanosilica causes pleural and pericardial effusion, and pulmonary fibrosis and granuloma in rats similar to those observed in exposed workers. International Journal of Nanomedicine. 11, 1593-1605 (2016).
- Havelock, T., et al. Pleural procedures and thoracic ultrasound: British Thoracic Society Pleural Disease Guideline 2010. Thorax. 65, Suppl 2 61-76 (2010).
- Jha, A., Ullah, E., Gupta, P., Gupta, G., Saud, M. Sonography of multifocal hydatidosis involving lung and liver in a female child. Journal of Medical Ultrasound. 40 (4), 471-474 (2013).
- Hikaru, N., et al. Histological analysis of 70-nm silica particles-induced chronic toxicity in rats. European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics. 72, 626-629 (2009).
- Sun, L., et al. Cytotoxicity and mitochondrial damage caused by silica nanoparticles. Toxicology in Vitro. 25, 1619-1629 (2011).
- Hikaru, N., et al.
- Liu, T. I., et al. Single and repeated dose toxicity of mesoporous hollow silica nanoparticles in intravenously exposed mice. Biomaterials. 32, 1657-1668 (2011).
- Ding, M., et al. Diseases caused by silica: Mechanisms of injury and disease development. International Immunopharmacology. 2, 173-182 (2002).
- Shen, J., et al. The dosage-toxicity-efficacy relationship of kansui and licorice in malignant pleural effusion rats based on factor analysis. Journal of Ethnopharmacology. 186, 251-256 (2016).
- Ji, J. H., et al. Twenty-eight-day inhalation toxicity study of silver nanoparticles in Sprague-Dawley rats. Inhalation Toxicology. 19 (10), 857-871 (2007).
