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Artigo de método

Estimativa do número de néfron em rim inteiro usando o método de maceração ácida

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DOI:

10.3791/58599

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22 de maio de 2019

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Neste artigo

Resumo

As estimativas do número inteiro do nephron do rim são importantes clìnica e experimentalmente, porque há uma associação inversa entre o número do nephron e um risco aumentado de doença renal e cardiovascular. Nisto, o uso do método ácido da maceração, que fornece estimativas rápidas e de confiança do número inteiro do nephron do rim, é demonstrado.

Resumo

O investidura de nephron refere o número total de néfrons um indivíduo é carregado com, porque o nefrogênese nos seres humanos é terminado por 36 semanas da gestação e nenhum néfrons novo é dado forma ao borne-nascimento. O número de néfron refere-se ao número total de néfrons medidos em qualquer momento pós-parto. Tanto os fatores genéticos quanto os ambientais influenciam tanto a investidura de néfron quanto o número. Entender como genes ou fatores específicos influenciam o processo de nefrogênese e perda ou morte de néfron é importante, já que indivíduos com menor investidura ou número de néfron são pensados para estarem em maior risco de desenvolver doenças renais ou cardiovasculares. Compreender como as exposições ambientais no decorrer da vida de uma pessoa afeta o número de néfron também será vital para determinar o risco de doença futuro. Assim, a capacidade de avaliar o número de néfron de rim inteiro de forma rápida e confiável é um requisito experimental básico para compreender melhor os mecanismos que contribuem para ou promovem a nefrogênese ou perda de néfron. Aqui, nós descrevemos o método ácido da maceração para a estimativa do número inteiro do nephron do rim baseado no procedimento descrito por Damadian, por Shawayri, e por Bricker, com modificações ligeiras. O método de maceração ácida fornece estimativas rápidas e confiáveis do número de néfron (conforme avaliado pela contagem de glomérulos) que estão dentro de 5% daqueles determinados usando métodos mais avançados, embora caros, como a ressonância magnética. Além disso, o método de maceração ácida é um excelente método de alta taxa de transferência para avaliar o número de néfron em grandes quantidades de amostras ou condições experimentais.

Introdução

O nephron é a unidade estrutural básica e funcional do rim1. Estruturalmente, o nephron consiste no glomérulo (capilares e podocytes) situados dentro da cápsula de Bowman e do túbulo renal, consistindo no túbulo proximal, no laço de Henle, e no túbulo longe do ponto de origem que termina no duto de coleta. Funcionalmente, o papel do nephron é a filtração e a reabsorção de água e eletrólitos e a secreção de resíduos. Em geral, a nefrogênese é concluída em 36 semanas de gestação em seres humanos e logo após o nascimento em várias espécies, como o rato e o rato2. A investidura de nephron refere-se ao número total de néfrons....

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Protocolo

Suprimentos e reagentes listados abaixo são para a determinação de todo o número de nefrons renais em um rato, ou seja, dois rins. As modificações para o uso do método ácido da maceração para o rato são identificadas com asteriscos. Todos os protocolos experimentais conformados com o guia nacional de saúde para o cuidado e uso de animais de laboratório e foram aprovados pelo Comitê institucional de cuidados e uso de animais do centro médico da Universidade do Mississippi.

1. procedimento de isolamento renal

  1. Pesar o rato (ou outras espécies) e eutanizar-lo com um isoflurano (5%-8%) dose excessiva ou pentobarbital (150 mg/kg de inje....

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Resultados

Estão abaixo as estimativas representativas do número inteiro do nephron do rim de um modelo estabelecido do rato da hipertensão e de um modelo genético do rato da doença de rim crônica idade-relacionada. As principais características de identificação dos glomérulos, como uma estrutura esférica com ou sem estruturas anexadas pré ou pós-arteriolar ou Tubular, são destacadas para aqueles que são novos no método de maceração ácida (Figura 1).

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Discussão

Com boa técnica experimental, o método de maceração ácida é ideal para estimar o número de néfron em rim inteiro. Embora o rim seja dissolvido em ácido, os glomérulos permanecem em grande parte intactos e são prontamente identificáveis, tornando a contagem de glomérulos individuais relativamente fáceis e diretas. A técnica de maceração ácida é particularmente vantajosa por várias razões. Primeiro, o método de maceração ácida é um método rápido e conveniente que requer relativamente pouco em termos de despesa e esforço fí.......

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Divulgações

Os autores não têm nada a revelar.

Agradecimentos

Este trabalho foi apoiado em parte pelos institutos nacionais de saúde, Instituto Nacional do coração, pulmão e sangue (R01HL107632).

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Anestesia com isofluranoAbbott Laboratories05260-05
Sistema vaporizador de isoflurano e medidor de fluxoBraintree ScientificVP IInclui suprimento de oxigênio de grau médico
Leica Microscópio invertido DMIL LEDLeica MicrosystemsDMIL LEDQualquer marca também adequada
Banho-maria digitalFisher Scientific2239Qualquer marca também Tesoura
cirúrgica ToughCut FineFerramentas de Fine Science14058-11Aresta de corte de 25 mm, 11,5 cm de comprimento; Dicas: afiado-afiado; Forma da ponta: pinça
de dissecação micro reta 4 1/4 pol.Biomed Res Instruments, Inc10-1760 Placa decom ponta curvada
5 pol. x 7 pol.qualquer fonte adequadan/aQualquer marca também adequada
Prato de pesagem de poliestireno hexagonalFisher Scientific02-2002-100Qualquer marca também adequada
Lâminas de barbearFisher Scientific12-640Aço carbono de borda única 0.009
Esponjas de gaze 4 x 4 pol. 8 camadasFisher ScientificMSD-1400250
10x concentrado fosfato tamponado salina (PBS)Sigma AldrichP5493-4LDiluído para 1x 
Solução de ácido hidrocólrico 6 NSigma Aldrich3750-32
Tubo de centrífuga cônico de 15 mLFisher Scientific14-959-70CQualquer marca também adequada
Tubo de centrífuga cônico de 50 mLFisher Scientific14-959-49AQualquer marca também adequada
Seringa descartável de 5 mLCole PalmerEW-07944-06Qualquer marca também adequada
18G1.5 descartável agulhaFisher Scientific14-826-5DQualquer marca também adequada
21G1.5 agulha descartávelFisher Scientific14-826-5BQualquer marca também adequada
placas de cultura de células de múltiplos poços de 12 poços com tampaCole Palmer#FW-01959-06Qualquer marca também adequada
Polipropileno modular tubo de ensaio rackCole Palmer#EW-06733-00Capaz de acomodar tubos cônicos de 15 e 50 mL; qualquer marca também adequada
adequada Plexiglass

Referências

  1. Hall, J. E., Guyton, A. C. Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , 13th, Elsevier. Philadelphia, PA. (2016).
  2. Wang, X., Garrett, M. R. Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models. Physiological Genomics.....

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Reimpressões e permissões

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