Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Høy frekvens ultralyd for analyse av Fetal og Placental utvikling i Vivo

doi: 10.3791/58616 Published: November 8, 2018

Summary

Her beskriver vi teknikken av høyfrekvente ultralyd i vivo analyse av fostre i mus. Denne metoden tillater oppfølgingen av fostre og analyse av placental parametere som mors og fetal blodstrøm gjennom graviditet.

Abstract

Ultralyd imaging er en utbredt metode som brukes til å oppdage orgel anomalier og svulster i mennesker og dyr vev. Metoden er ikke-invasiv, ufarlig og smertefri, og programmet er enkel, rask, og kan gjøres hvor som helst, selv med mobile enheter. Under graviditet brukes ultralyd imaging elever med en standard nøye overvåke fosterets utvikling. Teknikken er viktig å vurdere intrauterine vekst restriksjonskoder (IUGR), en graviditet komplikasjoner med kort - og langsiktige helsemessige konsekvenser for både mor og fosteret. Forstå prosessen med IUGR er uunnværlig for å utvikle effektive strategier.

Den ultralyd systemet brukes i dette manuskriptet er et ultralydapparat produsert for analyse av små dyr og kan brukes i ulike forskningsfelt, blant annet graviditet. Her beskriver vi bruk av systemet for i vivo analyse av fostre fra naturlige killer (NK) cellen/mast celle (MC)-mangelfull mødre som føder vekst-begrenset pups. Protokollen inneholder utarbeidelse av systemet, håndtering av mus før og under målinger og bruken av B-modus, farge doppler, og pulsen bølge doppler modus. Fosterets størrelse, placental størrelse og blodtilførselen til fosteret ble analysert. Vi fant redusert implantasjon størrelser og mindre placentas i NK/MC-mangelfull mus fra midten av svangerskapet og utover. I tillegg MC/NK-mangel var tilknyttet fraværende og tilbakeførte slutten diastolisk flyt i fosterets Arteria umbilicalis(UmA) og en forhøyet motstand indeks. Metodene som er beskrevet i protokollen kan enkelt brukes for relaterte og ikke-relaterte emner.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ultralyd er lydbølger med frekvenser over det hørbare området av det menneskelige øret, høyere enn 20 kHz1. Dyr som ball, wales, delfiner2,3, mus4, rotter5, og musen lemurer6 alle bruker ultralyd for retning eller kommunikasjon. Mennesker utnytte ultralyd for flere tekniske og medisinske programmer. Et ultralydapparat er kjøpedyktig opprette lydbølge og distribuere og representerer signalet. Hvis ultralyd støter på en hindring, lyden er reflektert, absorberes eller kan gå gjennom den. Anvendelse av ultralyd som en bildebehandling metode, kalt sonography, brukes til analyse av økologisk vev i menneskelige eller veterinærmedisin som hjertet (echocardiography)7,8, lunge9, skjoldbruskkjertelen10 , nyrer11og urin og reproduktive traktater12,13; oppdage gallestein14 og svulster15; og evaluere perfusjon av blodkar eller organer16,17. Ultralyd er en standard metode i svangerskapskontroll under graviditet fosterets utviklingsmål funksjonshemminger eller nedsatt kan gjenkjennes tidlig. Veksten av et foster overvåkes spesielt nøye med jevne mellomrom å gjenkjenne en mulig IUGR. Til slutt, fosterets blodstrøm kan overvåkes, som dette kan peke ut vekst restriksjoner18,19,20,21.

En stor fordel for ultralyd imaging forhold til andre metoder som røntgenfotograferingen er lyden er harmløshet av vev som skal analyseres. Denne enkel og rask metode er ikke-invasiv, smertefri, og kan brukes flere ganger. Det første utlegget på et ultralydapparat er dyrt; men er forbruksmateriale som trengs billig. Den ultralyd systemet brukes i dette manuskriptet er egnet for en rekke dyremodeller (dvs. mus og fisk) mens for mennesker krever et ultralydapparat en frekvens på 3-15 mHz, en frekvens på 15 og 70 mHz kreves for mus.

Nåværende manuskriptet beskriver en protokoll for bruk av B-modus, doppler fargemodus og puls-bølge doppler modus. Beskrivelsen inneholder utarbeidelse av mus som ytelsen, datainnsamling og lagring. Denne metoden har vært vellykket brukes til ulike musen stammer hele svangerskapsdiabetes dager og kan brukes til å undersøke fosterets og placental utvikling samt mors og fetal blood parametere. Her er alle programmer forklart basert på våre studier ansette gravid MC/NK-mangelfull og kontroll mus.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alle metodene som er beskrevet her er godkjent av den "Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD."

1. eksperimentelle prosedyren

  1. Kompis 6 til 8-uke-gamle kvinnelige MC-mangelfull C57BL/6J-Cpa3grobunn /+ (Cpa3grobunn /+) mus og MC-tilstrekkelig C57BL/6J-Cpa3+/+ (kolonien kontroller; Cpa3+/+) med BALB/c menn.
  2. Definerer svangerskapet dagen (gd) 0 etter bekreftelse av vaginal behandle kvinner umiddelbart etter plug bekreftelse.
    Merk: En plugin er sæd av mannlig i vaginal munnstykket av kvinnelige.
    1. Injisere 250 µL av PBS intraperitoneally i kontrollen Cpa3+/+ kvinner.
    2. Injisere 250 µL av anti-CD122 (0,25 mg) intraperitoneally i MC-mangelfull Cpa3grobunn /+ kvinner.
      Merk: En injeksjon av 0,25 mg av anti-CD122 reduserer eksterne NKs og uNKs i MC-mangelfull Cpa3grobunn /+ kvinner som beskrevet tidligere22.
  3. Vent til gd5.
    Merk: På gd5 er det tidligste muligheten for implantasjon analyse.
    1. Fortsett med trinn 2 – 5 for ultralyd analyse.
  4. Utføre ultralyd imaging på gd5, 8, 10, 12 og 14.

2. forberedelse av ultralyd

  1. Slå på systemet (figur 1A; strøm på ryggen og datamaskinen standby på venstre område), oppvarmet plattformen (figur 1B; på \\\kontrollblokken), og gel varmere (figur 1 c).
    Merk: Ultralyd gel må varm opp ca 0,5 timer.
  2. Sikre at isoflurane enheten fylles tilstrekkelig (figur 1 d).
  3. Åpne en Ny studie eller Ny serie i en eksisterende studie i leseren. Fyll ut all nødvendige informasjon (eier, studie navn, serienavn, dyr data) i Studere Info -vinduet. Klikk Ok.
  4. Når du klikker Ok, kan du sikre at vinduet B-modus tenkelig og bildebehandling i B-modus starter automatisk.

3. musen håndtering

  1. Anesthetization av musen
    1. Plasser musen i boksen knockdown (figur 1E), lukke, åpne isoflurane røret til boksen knockdown og slå på isoflurane (konsentrasjon 3,5%).
    2. Når musen er bedøvet, lavere (til konsentrasjon 1,5%) og omdirigere isoflurane strømmen ved å åpne røret i retning av oppvarming plattformen og lukke flyten til boksen knockdown.
      Merk: For å nå tilstrekkelig anestesi, vent en ekstra 10 s når musen er ikke lenger flytter.
    3. Overføre musen raskt fra boksen knockout oppvarming plattformen (figur 1F) i dorsal posisjon, og forsiktig plassere nesen sin i anestesi nese røret ligger på toppen av plattformen.
  2. Fiksering, Versace og utarbeidelse av musen for å måle
    1. Plasser Øyevern krem i hvert øye på å hindre tørre øyne.
    2. Plass en dråpe elektrodegel på hver av de fire kobber områdene på oppvarmet plattformen (figur 1F).
    3. Tapp paws med kirurgisk tape på gel-belagt elektrodeområdene på oppvarming plattformen.
    4. Sjekk ECG [optimal verdi = 450-550 slag/minutt (BPM)] og respiratoriske fysiologi til alle tider.
      Merk: Ved å bruke en endetarms sonde, måling av kroppstemperatur er mulig, men ikke nødvendig.
    5. Sted riktige krem på magen av mus, gni kremen med en bomullspinne og vente rundt 1 min. fjerne kremen med en vann-gjennomvåt komprimere. Gjenta dette trinnet hvis ikke alle hår er borte.
    6. Bruke forvarmes ultralyd gel på depilated huden.

4. mål og anskaffelse av bilder og videoer

  1. Hold svingeren (figur 1G) i hånden eller klemme den holder enheten (figur 1 H; holder enheten anbefales).
  2. Identifisere blæren med svingeren og bruke den som referansepunkt. Flytte svingeren til venstre og høyre nettstedene til magen til å spore implantations.
  3. B-modus for visualisering av anatomiske strukturer i 2D gråtonebilde
    1. Flytt svingeren eller oppvarming plattform bordet der musen er fiksert til første implantation er synlig på skjermen i den største størrelsen.
      1. Velg Bilde etikett og angi et navn eller Ramme Store (lagring uten navn) for å lagre enkeltbilder eller Cine butikken for å lagre en cineloop for hele implantasjon målinger.
    2. Flytte svinger eller bord for å bringe morkaken til en plassering der blodstrøm i UmA er synlig. Lagrer et enkeltbilde eller en cineloop (se trinn 4.3.1.1) for placental målinger.
      Merk: Placental målinger er mulig fra gd10 og utover.
    3. Fortsett med alle implantations på samme måte.
  4. Doppler fargemodus å visualisere og bestemme retningen av blodstrøm
    1. Trykk på farge .
    2. Flytte fargeboksen (i dette området, signalet er synlig) til ønsket plassering ved å bruke styrekulen. Om nødvendig, endre størrelsen på boksen ved å trykke Oppdater og flytte styrekulen (til høyre/oppover = større, til den venstre siden/nedover = mindre). Når boksen har riktig størrelse, trykk på Velg.
    3. Lagre enkeltbilder eller cineloops som beskrevet i trinn 4.3.1.1.
  5. Puls-bølge (PW) doppler modus å kvantifisere blodstrøm gjennom blodårene i Arteria uterina (livmor arterien, UA) og UmA
    1. Finne området av interesse i farge doppler oppkjøpet.
      Merk: UA ligger caudal til blæren og UmA ligger mellom fetus og placenta.
    2. Trykk PW, og en stiplet linje vises. Flytte denne linjen til blodkaret rundt og justere vinkelen på linjen med "Doppler Angle" knotten linje med blodstrømmen. Trykk Oppdater.
      Merk: Vinkelen mellom retning av blodstrøm og svingeren må være konsekvent i alle dyr, særlig når benytter vinkler større enn 60° (her, 70° for UAs og 45° for UMASâ ble brukt).
    3. Lagre en cineloop av vises doppler linjene i vinduet PW doppler oppkjøpet.

5. gjennomgang og etterbehandling datainnsamling og lagring en serie

  1. Hvis du vil se gjennom data, trykk studie Management. Rull til miniatyrbilde av interesse og dobbeltklikk oppdateringen.
  2. Trykk først Studie Management deretter Lukk i leservinduet til ferdig datainnsamling og lagrer en innspilte serier.
    Merk: Etter stengetid en serie, det er ikke mulig å lagre rammer eller cineloops i denne serien lenger.

6. musen behandling etter oppkjøpet av Data

  1. Fjern gel fra anaesthetized dyret med hjelp av tørr komprimerer.
  2. Fjern kirurgisk båndet nøye fra paws.
  3. Lukk isoflurane røret (konsentrasjon 0%).
  4. Fortsette med følgende ultralyd analyse på gd5, 8, 10 og 12.
    1. Plassere dyret alene i et bur i minst 5 minutter så det har tid å våkne opp og orientere.
    2. Plass musen i opprinnelige buret.
      Merk: Ikke slå av isoflurane før du fjerner gel og kirurgisk bånd, som mus våkne opp raskt (rundt 20 s) etter dreier av isoflurane.
  5. Fortsett med følgende ultralyd analyse på gd14.
    1. Ofre kvinnelige før det våkner av cervical forvridning. Åpne dyret, fjerne livmoren, skille fostre og placentas og måle fosterets og placental vekter.

7. kopiere og importere Data

  1. Merke en eller flere serier ved å klikke Eksporter til og velg lagringen mellomrom kopiere data på harddisken.
  2. Åpne programvaren på en datamaskin og klikk Kopier fra og velg studie/serien fra harddisken til å importere en studie/serien til programvaren.
  3. Analysere data med programvaren.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Individuelle komponenter av ultralyd systemet brukes i dette manuskriptet er vist i figur 1. Figur 2 viser representant ultralyd bildene ervervet i B-modus på gd5, 8, 10 og 12 (B) og tilsvarende implantasjon områdemålenheten resultater (A), viser en betydelig redusert implantasjon området anti-CD122-behandlet Cpa3grobunn / + mus fra gd10 og utover.

Figur 3 viser én deler av en implantasjon (decidua basalis, morkaken, embryoet) ervervet i B-modus (figur 3A) og conduced placental måling (området, tykkelse, diameter) (figur 3B). Placental målinger resulterte i et betydelig redusert placental område (figur 3A), tykkelse (figur 3B) og diameter (Figur 3 c) i anti-CD122-behandlet Cpa3grobunn / + mus sammenlignet WTs på gd10 og gd12. Derimot placental området og diameter var sammenlignbar mellom gruppene på gd14, og tykkelsen var betydelig økt i anti-CD122-behandlet Cpa3grobunn / + mus i forhold til WTs ved gd14.

Figur 4 viser fosterets og placental vekt på gd14. Resultatene viste en signifikant decreasedfetal vekt (figur 4A), sammenlignbare placental vekt (figur 4B) og betydelig redusert feto-placental indeks (FPI) (figur 4C) i anti-CD122-behandlet Cpa3grobunn / + mus sammenlignet med WTs figur 5 viser et representativt PW doppler bilde av UA WT museklikk (figur 5A) og målinger av topp systolisk hastighet (PSV) (figur 5B), avslutte diastolisk hastighet (EDV) (figur 5C), og beregnet motstand indeks (figur 5 d), der alle verdiene var sammenlignbar mellom gruppene. Figur 6 viser et representativt doppler fargebilde av en WT fosterets UmA gd14 (figur 6A) og representative PW doppler bilder med normal, fraværende eller motsatt ende diastolisk flyt (figur 6B) og målinger av PVS (figur 6 C), EDV (figur 6D), systolisk/diastolisk forholdet (figur 6E), og motstand indeks (figur 6F). Motstand indeksen for anti-CD122-behandlet Cpa3grobunn / + mus var betydelig økt sammenlignet med WT mus.

Figure 1
Figur 1: bildebehandling systemet. Største enhet (A) med oppvarming plattformuavhengig pad (B), gel varmere (C), isoflurane kontrollenheten (D), pusse boksen (E), oppvarmet plattform med fire kobber områder (F; F.1), svinger (G) og svinger holde enheten (H). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2: sammenligning av implantasjon områder ved gd5, 8, 10 og 12. (A) implantasjon områder fra WT Cpa3+/ + + PBS mus (mus n = 2-5, implantations n = 6-31 per dag) og MC/NK-mangelfull Cpa3grobunn / + + anti-CD122 mus (mus n = 3, implantations n = 8-16 per dag) på gd5, 8, 10 og 12. Resultatene presenteres som enkeltverdiene for hver enkelt implantasjon og mener. Statistisk forskjeller ble oppnådd ved hjelp av en kort t-test (** p < 0,01, *** p < 0,001). (B) representant ultralyd bilder fra Cpa3+/ + + PBS mus ved gd5 (i), gd8 (ii), gd10 (iii) og gd12 (iv). gd, gestation dag; WT, wild type. MC, mast celle. NK, naturlig killer cellen. Dette tallet er publiseres fra en tidligere publikasjon23. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3: Placental målinger på gd10, 12 og 14. (A) representant ultralyd bildet av en WT implantasjon på gd10 viser den decidua basalis, morkaken og fosteret. (B) representant ultralyd bildet av en WT implantasjon på gd12 viser placental tykkelse (tykk) og placental diameter (dia). Placental området (C), placental tykkelse (D) og placental diameter (e) fra WT Cpa3+/ + + PBS mus (mus n = 3-5, placentas n = 12-22 per dag) og MC / NK-mangelfull Cpa3grobunn / + + anti-CD122 mus (mus n = 3-4, placentas n = 8-14 per dag) på gd10, 12, og 14. resultatene presenteres som enkeltverdiene for hver enkelt morkaken og mener. Statistisk forskjeller ble oppnådd ved hjelp av en kort t-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). gd, gestation dag; WT, wild type. tykk, tykkelse; Dia, diameter; MC, mast celle. NK, naturlig killer cellen. Dette tallet er publiseres fra en tidligere publikasjon23. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4: fosterlivet og placental mål og feto-placental index (FPI) på gd14. Fosterets vekter (A), placental vekter (B) og FPIs (C) fra avkom av WT Cpa3+/ + + PBS mus (mus n = 4, fosteret/placentas n = 35) og MC/NK-mangelfull Cpa3grobunn / + + anti-CD122 mus (mus n = 3, fosteret/placentas n = 28) på gd14. Resultatene presenteres som enkeltverdier og betyr. Statistisk forskjeller ble hentet ved hjelp av kortet t-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). gd, gestation dag; WT, wild type. MC, mast celle. NK, naturlig killer cellen. Dette tallet er publiseres fra en tidligere publikasjon23. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 5
Figur 5: analyse av livmor arterien fart på gd10. (A) representant puls-bølge doppler bilder fra WT Cpa3+/ + + PBS mus viser PSV og EDV. PSV (B), EDV (C) og motstand indeks (D) av livmor arterier fra Cpa3+/ + + PBS (n = 3) og Cpa3grobunn / + + anti-CD122 (n = 3) mus ved gd10 av svangerskapet. Dataene presenteres som mener med SEM. statistisk analyse var utført ved hjelp av Mann-Whitney U testen. gd, gestation dag; WT, wild type. MC, mast celle. NK, naturlig killer cellen; PSV, topp systolisk hastighet; EDV, slutten diastolisk hastighet. Dette tallet er publiseres fra en tidligere publikasjon23. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 6
Figur 6: analyse av umbilical arterien fart på gd14. (A) representant Color Doppler bilde av en fosterets UmA i gd 14. (B) representant puls-bølge doppler bilder fra Cpa3+/ + + PBS (i) og Cpa3grobunn / + + anti-CD122 (ii, iii) mus, viser normal ende diastolisk flyt (i), fraværende slutten diastolisk flyt (ii), eller motsatt ende diastolisk flyt (iii). PSV (C), EDV (D), systolisk/diastolisk forhold (E) og motstand indeks (F) av UMASâ av fostre fra Cpa3+/ + + PBS (mus n = 3, UmA målinger n = 7) og Cpa3grobunn / + + anti-CD122 (mus n = 3, UmA målinger n = 10) mus på gd14. Dataene presenteres som mener med SEM. statistisk analyse var utført ved hjelp av en kort t-test (* p < 0,05). UmA, navle arterien; gd, gestation dag; PSV, topp systolisk hastighet; EDV, slutten diastolisk hastighet. Dette tallet er publiseres fra en tidligere publikasjon23. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bruker ultralyd systemet, viste vi fetal vekst begrensning i MC/NK-mangelfull mødre fra gd10 på. Videre på gd10 og 12, observerte vi redusert placental dimensjoner, og gd14 fravær eller hjemfall slutten diastolisk Flow i UMASâ av noen fostre uMC/uNK-mangelfull mus. Denne tegn på dårlig endometrial blodkar var assosiert med betydelig motstand indeks av arteries som angir IUGR. Resultatene bekrefter den viktige rollen av uMCs og uNKs i svangerskapet og fosterets velvære og forstå løpet av IUGR.

Protokollen er tilgjengelig på daglig svangerskapet fra gd5 og utover (etter implantasjon). Det er noen viktige skritt i protokollen som må tas i betraktning. Først må hårfjerning gjøres nøye. For eksempel forårsake overdreven kontakt med Cellulite kremen hudirritasjon. Men fører ufullstendig hårfjerning til signal forstyrrelser synlig som en skygge på skjermen. En annen grunn for et lite signal (skygger eller kornete bilder) kan også være en for lav mengde gel mellom musen og ultralyd strålen. I vår erfaring, snarere er en høy mengde gel (ca 10 mL) nødvendig for tilstrekkelig signal synlighet. Andre, 2D målinger kan liksom utsatt for feil. For å minimere måling forskjellene mellom implantations, anbefaler vi bruk av den største tilgjengelige størrelsen når omringe implantation. For nøyaktig morkaken målinger, ble alle implantations plassert på en måte som UmA blodstrøm kan sees. I tillegg for å minimere kilder av feilene, skal målinger alltid utføres av den samme operatøren. Tredje for puls-bølge doppler målinger er det viktig å se vinkelen mellom retning av blodstrøm og ultralyd strålen. En for høy vinkel eller forskjellige vinkler mellom dyrene i ett enkelt eksperiment kan føre til unøyaktige hastighet målinger. Oppmerksomhet bør også betales til risikoen for gjentatte anesthetization av kvinner. For å redusere denne risikoen og stress for mor, bør ultralyd mål gjøres ikke mer enn hver annen dag.

Til oppfølging fostre relevante svangerskapsdiabetes dager gjennom graviditet er en stor fordel av ultralydteknologi. I motsetning til ofre mus på ulike graviditet stadier kan teknologien vi utføre nøyaktig langsgående analyser av personlige gravid mus. Til tross for denne styrken finnes det noen begrensninger i systemet som bør vurderes. For eksempel kan fostre endre posisjoner i løpet av svangerskapet. Derfor kan det være vanskelig å tildele enkelte datasett på forskjellige tider til individuelle fostre. I tillegg, er noen ganger det ikke mulig å overvåke noen fostre senere svangerskapet dager, som i) sin posisjon kan være vanskelig å nå med strålen, ii) fostre kan være for stort til å passe skjermen eller iii) de kan være skjult under tarmen. Avhengig av mus belastningen er hele implantasjon målinger mulig inntil gd12 eller gd14. Bare én organer av fostre, inkludert hjertet, kan senere målt og registrert. Hele implantation selv er for stor i senere svangerskap stadier å passe på skjermen.

Til best av vår kunnskap er ultralyd imaging (sammen med magnetisk resonans imaging og konstatere) metoden bare tilgjengelig til å analysere de angitte parameterne under graviditet uten å ofre flere dyr på forskjellige svangerskapsdiabetes dager. Dette gjelder særlig for doppler bildebehandling, som er den eneste metoden kunne nøyaktig evaluere blodstrøm og retning (rød = strømning i retning av ultralyd stråle, blå = flyt i motsatt retning av ultralyd strålen). Under puls-bølge doppler bildebehandling sender ultralyd strålen ut flere pulser som returneres av vev og gir hastighet informasjon om blod flyte24.

Som ultralyd selv synes å være ufarlig for mor og fosteret, er ultralyd imaging perfekt for graviditet forskning. Likevel kan er beskrevet i dette manuskriptet brukes til mange andre forskningsområder, i tillegg; for eksempel systemet gir også mulighet for 3D-mål, visualisering og kvantifisering av vev bevegelse over tid visualisering av blod flyte i svulster, oppdagelsen av biomarkers på celle overflaten, blodtrykksmålinger, og ultralyd-guidede injeksjoner.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Mange takk til Imaging Instrument selskapet (spesielt til Magdalena Steiner, Katrin Suppelt og Sandra Meyer) for sin behagelig og rask støtte og svare på alle spørsmålene våre om Imaging systemet og bruken raskt og fullstendig. Vi er takknemlige til Prof Hans-Reimer Rodewald og Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Tyskland) for å gi Cpa3 kolonien. I tillegg takker vi Stefanie Langwisch, som var ansvarlig for musen koloniene og som genererte bilder i figur 1.

Arbeidet og Imaging System ble finansiert med tilskudd fra Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) til A.C.Z. (ZE526/6-1 og AZ526/6-2) som var prosjekter i de DFG prioritet programmet 1394 "Mast cellene i helse og sykdom."

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) BioLegend 123204 Klon TM-β1; 500 µg
Vevo 2100 System  FujiFilm VisualSonics Inc. Transducer MS550D-0421
Vevo LAB Software  FujiFilm VisualSonics Inc.
Isoflurane Baxter PZN: 6497131
Electrode gel Parker 12_8
Surgical tape 3M Transpore 1527-1
Eye cream Bayer PZN: 1578675
Cotton tipped applicators Raucotupf 11969 100 pieces
Depilatory cream Reckitt Benckiser 2077626
Compresses Nobamed Paul Danz AG 856110 10 x 10 cm
Ultrasound gel Gello GmbH 246000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren? Ultraschall in der Medizin. 33, (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).
  2. Jones, G. Echolocation. Current Biology. 15, (13), R484-R488 (2005).
  3. Simmons, J. A. The sonar receiver of the bat. Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).
  4. Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus). Public Library of Science ONE. 12, (12), e0188647 (2017).
  5. Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations. Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).
  6. Hasiniaina, A. F., et al. High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra). American Journal of Primatology. e22866 (2018).
  7. Yeo, L., Romero, R. Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart. Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50, (4), 476-491 (2017).
  8. Teichholz, L. E. Echocardiography in valvular heart disease. Progress in Cardiovascular Diseases. 17, (4), 283-302 (1975).
  9. Zechner, P. M., et al. Lungensonographie in der Akut- und Intensivmedizin. Der Anaesthesist. 61, (7), 608-617 (2012).
  10. Blank, W., Schuler, A. Sonografie der Schilddrüse - Update 2017. Praxis. 106, (12), 631-640 (2017).
  11. Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review. Diagnostics. 6, (1), Basel, Switzerland. (2015).
  12. Older, R. A., Watson, L. R. Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract. Journal of Clinical Ultrasound. 24, (8), 389-404 (1996).
  13. Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract. Theriogenology. 21, (3), 485-494 (1984).
  14. Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10, (1), 10-15 (2018).
  15. Weskott, H. -P. Ultraschall in der Diagnostik maligner Lymphome. Der Radiologe. 52, (4), 347-359 (2012).
  16. Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound. Ultrasound in Medicine & Biology. 43, (8), 1628-1638 (2017).
  17. Quaia, E. Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound. European Radiology. 21, (3), 604-615 (2011).
  18. Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. (2018).
  19. Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe. Pediatric Research. 66, (1), 113-117 (2009).
  20. Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 69, (6), 895-902 (1987).
  21. Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 70, (1), 7-10 (1987).
  22. Meyer, N., et al. Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth. Scientific Reports. 7, 45106 (2017).
  23. Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being. Frontiers in Immunology. 8, 1913 (2017).
  24. Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. Ultrasonic color Doppler imaging. Interface Focus. 1, (4), 490-502 (2011).
Høy frekvens ultralyd for analyse av Fetal og Placental utvikling <em>i Vivo</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).More

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter