Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Yüksek frekans ultrason Fetal ve plasental geliştirme Vivo içinde analizi için

doi: 10.3791/58616 Published: November 8, 2018

Summary

Burada biz fetusa farelerde vivo çözümlenmesi için yüksek frekans ultrason tekniği tarif. Bu yöntem, fetusa takibi ve plasental parametreleri hem de gebelik boyunca maternal ve fetal kan akışı analizi sağlar.

Abstract

Ultrason görüntüleme organ anomalileri ve tümör insan ve hayvan dokularda algılamak için kullanılan yaygın bir yöntemdir. Non-invaziv, zararsız ve ağrısız yöntemidir ve uygulama kullanımı kolay, hızlı ve her yerde, hatta mobil cihazlar ile yapılabilir. Gebelikte, ultrason görüntüleme size fetal gelişim yakından izlemek için kullanılır. İntrauterin büyüme kısıtlama (IUGR), kısa ve uzun vadeli sağlık sonuçları ile anne ve fetüs için gebelik komplikasyonu değerlendirmek önemli bir tekniktir. IUGR süreci anlamak etkili tedavi stratejileri geliştirmek için vazgeçilmezdir.

Bu el yazması kullanılan ultrason sistemi küçük hayvanlar analiz için üretilen bir ultrason cihazı ve gebelik araştırma dahil olmak üzere çeşitli araştırma alanlarında kullanılabilir. Burada doğal öldürücü (NK) hücre/mast hücresi (MC) gelen fetusa vivo içinde analiz için sistem kullanımını açıklamak-büyüme tarafından kısıtlanmış pups Doğum eksik anneler. Fareler daha önce ve ölçümleri ve B-mod kullanımı sırasında işleme, renkli doppler modu ve darbe-wave doppler modu, protokolü hazırlama sistemi içerir. Fetal boyutu, plasental boyutu ve fetus için kan akımı analiz edildi. Azaltılmış implantasyon boyutları ve daha küçük plasenta orta gebelik itibaren gelen NK/MC-eksik farelerde bulduk. Buna ek olarak, MC/NK-eksikliği yok ile ilişkili ve fetal Arteria umbilicalis(UmA) ve yüksek direnç dizin son diyastolik akımını ters. İletişim kuralında tanımlanan yöntemleri kolayca ilgili ve ilgili olmayan araştırma konuları için kullanılabilir.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ultrason frekansları yukarıda insan kulağının, yaklaşık 20 kHz1' den daha yüksek sesli aralığı ile ses dalgaları var. Hayvanlar gibi yarasalar, Galler, yunuslar2,3, fareler4, fareler5ve fare maymunları6 tüm yönlendirme veya iletişim için ultrason kullanın. İnsanlar çeşitli teknik ve tıbbi uygulamalar için ultrason avantajlarından yararlanın. Bir ultrason cihazı ses dalgası oluşturma ve dağıtma ve sinyal gösterme yapabiliyor. Ultrason bir engel karşılaşırsa, ses absorbe yansıtılır veya üzerinden gidebilirsiniz. Ultrason uygulama ultrason, adlı bir görüntüleme yöntemi olarak Organik dokular insan veya hayvan hastalıklarıyla ilgili ilaç kalp (ekokardiyografi)7,gibi8, akciğer9, tiroid bezi10 analizi için kullanılır , böbrekler11ve idrar ve üreme yolları12,13; safra taşı14 ve tümör15algılama; ve kan damarları veya organları16,17perfüzyon değerlendirilmesi. Ultrason için standart bir yol Doğum öncesi bakım hamilelik sırasında ve fetal gelişimsel engelli veya bozuklukları erken kabul edilebilir. Özellikle, cenin gelişimini yakından mümkün IUGR tanımak için düzenli aralıklarla kontrol edilmektedir. Bu büyüme kısıtlamaları18,19,20,21işaret edebilir gibi sonunda, fetal kan akımı izlenebilir.

Ultrason görüntüleme radyografi sesin zararsızlık dokuların analiz edilecek gibi diğer yöntemlerine göre önemli bir avantajı. Bu kolay ve hızlı yöntem, non-invaziv, ağrısız ve -ebilmek var olmak birkaç kez kullanılan. Bir ultrason cihazı ilk harcama pahalıdır; Ancak, gerekli tüketim malzemeleri ucuz. Bu el yazması kullanılan ultrason sistemi hayvan modelleri aralığı için uygundur (yani, fareler ve balık) insanlar için bir ultrason cihazı 3-15 mHz frekans gerektirir iken 15-70 mHz frekans fareler için gereklidir.

Mevcut el yazması B-mod, renkli doppler modu ve darbe-wave doppler modu kullanımı için bir protokol açıklar. Tanım hazırlık fareler gibi performans, veri toplama ve depolama içerir. Bu yöntem başarıyla uygulanan farklı fare suşları hiç gebelik gün oldu ve fetal ve plasental geliştirme yanı sıra maternal ve fetal kan parametreleri araştırmak için kullanılır. Burada, tüm uygulamalar tabanlı çalışmalarımız hamile MC/NK-eksik ve kontrol fareler istihdam açıklanmıştır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tüm yöntem tanımlamak burada tarafından onaylanmış olan "Landesverwaltungsamt Sachsen Anhalt: 42502-2-1296UniMD."

1. deneysel bir işlem

  1. Dostum 6-8-hafta-yaşlı kadın MC-eksik C57BL/6J-Cpa3Cre /+ (Cpa3Cre /+) fareler ve MC yeterli C57BL/6J-Cpa3+/+ (koloni denetimleri; Cpa3+/+) BALB/c erkekler.
  2. Kadın hemen tak onay alındıktan sonra tedavi ve gebelik gün (gd) 0 onay vajinal fiş sonra tanımlayın.
    Not: Bir fiş vajinal ağzının içinde erkek kadın sperm var.
    1. PBS+/+ intraperitoneally denetimindeki Cpa3 250 µL enjekte kadın.
    2. Anti-CD122 (0.25 mg) 250 µL intraperitoneally MC-eksik Cpa3 enjekteCre /+ kadın.
      Not: Periferik NKs ve MC-eksik Cpa3 uNKs anti-CD122 0,25 mg bir enjeksiyon depletesCre /+ 22daha önce açıklandığı gibi kadın.
  3. GD5 kadar bekleyin.
    Not: gd5 implantasyon analizi için en erken olasılık da.
    1. Ultrason analiz için adım 2-5 ile devam edin.
  4. Ultrason düşsel vasıl gd5, gerçekleştirmek 8, 10, 12 ve 14.

2. ultrason sistemi hazırlanması

  1. Üstünde belgili tanımlık sistem açın (Şekil 1A; arka ve bilgisayar ana güç bekleme sol sitesinde), ısıtmalı platformu (Şekil 1B; control Pad uygulamasını,) ve jel ısıtıcı (Şekil 1 c).
    Not: Ultrason jeli yaklaşık 0,5 h için sıcak gerekiyor.
  2. İsoflurane birim yeterince doldurma sağlamak (Şekil 1 d).
  3. Bir Yeni çalışma veya Yeni serisi varolan bir çalışma tarayıcıda açın. Tüm gerekli bilgileri (sahibi, çalışma adı, seri adı, hayvan veri) Çalışma bilgi penceresinde doldurun. Tamam' ı tıklatın.
  4. Oktıkladıktan sonra B-mod görüntüleme penceresi görünür ve görüntüleme B-modda otomatik olarak başlar emin olun.

3. fare işleme

  1. Anesthetization fare
    1. Devirme kutusunda (Şekil 1E) fareyi getirin, kutusunu kapatın, isoflurane tüp devirme kutusunu açın ve isoflurane (konsantrasyonu % 3,5) açın.
    2. Ne zaman fare imzalat, daha düşük (to konsantrasyonu % 1.5) ve ısıtma platformu yönünde tüp açarak isoflurane akışı yönlendirme ve akışı devirme kutusunu kapatın.
      Not: yeterli anestezi ulaşmak için ek 10 bekleyin sonra fare artık hareketli s.
    3. Fare hızlı nakavt kutusundan bir dorsal konumda ısıtma platformu (Şekil 1F) takabilir ve hafifçe burnunu platformu üst kısmında bulunan anestezi burun tüpü yerleştirin.
  2. Fiksasyon, Depilasyon ve ölçmek için fareyi hazırlanması
    1. Göz koruması krem kuru göz önlemek için fare her gözünde yerleştirin.
    2. Elektrot jel bir damla her dört bakır alanda ısıtmalı platform (Şekil 1F) yerleştirin.
    3. Belgili tanımlık paws elektrot jel kaplı alanlar ısıtma platformu üzerinde cerrahi bant ile dokunun.
    4. ECG kontrol [optimal değeri 450-550 atım/dk (BPM) =] ve her zaman Solunum fizyolojisi.
      Not: bir rektal sonda kullanarak, vücut sıcaklık ölçümü mümkün, ama gerekli de değil.
    5. Yer depilatory fare karın krem, ovmak bir pamuklu çubukla ve bekleyin yaklaşık 1 dk. ile krem krem suya batırılmış bir kompres ile kaldırın. Tüm kıllar gitti iseniz bu adımı yineleyin.
    6. Önceden ısıtılmış Ultrason jeli depilated cilt üzerinde uygulayın.

4. ölçüleri ve satın alma görüntüleri ve videoları

  1. Dönüştürücü (Şekil 1G) elinde tutmak veya holding cihazda kelepçe (Şekil 1 H; aygıt önerilir tutarak).
  2. Mesane dönüştürücü ile tanımlamak ve referans noktası olarak kullanabilirsiniz. Dönüştürücü izleme takılan karın sol ve sağ siteleri için hareket ettirin.
  3. B-mod 2D gri tonlamalı görüntüde anatomik yapıları görüntüleme için
    1. Dönüştürücü taşıyabilir veya ilk implantasyonu en büyük boyutunda ekranda görünene kadar fare kafayı nerede platformu tablo Isıtma.
      1. Görüntü etiketini seçin ve tek kare veya bir cineloop bütün implantasyon ölçümler için saklamak için Cine mağaza depolamak için bir ad veya Çerçeve mağaza (saklama adı olmadan) girin.
    2. Dönüştürücü veya tablo plasenta kan akımı UmA görünür nerede bir konuma getirmek için taşıyın. Deposunda bir tek kare veya cineloop (bkz. Adım 4.3.1.1) plasental ölçümler için.
      Not: Plasental ölçümleri gd10 itibaren mümkündür.
    3. Aynı yöntemi kullanarak tüm takılan ile devam edin.
  4. Renk görselleştirmek ve kan akışının yönünü belirlemek için doppler modu
    1. Renk düğmesine basın.
    2. Renk kutusunu taşımak (Bu alanda sinyal görünür) topunu kullanarak gerekli konuma. Gerekirse, güncelleştirme basarak kutusunun boyutunu değiştirmek ve topunu hareket (sağ tarafta/yukarı için daha büyük =; sol yan/aşağı için daha küçük =). Kutusunda doğru boyutta olduğunda Seç' e basın.
    3. Tek kare veya cineloops 4.3.1.1. adımda açıklandığı gibi depolar.
  5. Arteria uterina (uterin arter, UA) damarları yoluyla kan akışını ölçmek için nabız dalga (PW) doppler modu ve UmA
    1. Renkli doppler satın alma ilgi bölgenin bulun.
      Not: UA mesane kaudal bulunur ve UmA fetus ve plasenta arasında yer almaktadır.
    2. Basın PWve kesikli bir çizgi görünür. Faiz damar için bu satıra gidin ve kan akışı doğrultusunda "Doppler açı" düğme kullanarak çizginin açısını ayarlayın. Basın güncelleştirmesi.
      Not: Kan akış yönü ve dönüştürücü arasındaki açı özellikle 60 ° den büyük açılarını kullanırken tüm hayvanlarda tutarlı olmalıdır (burada, UAs için 70° ile 45° UMASâ için kullanılmıştır).
    3. Bir cineloop görünen doppler satırlarının PW doppler edinme penceresinde saklamak.

5. gözden geçirme ve veri toplama bitirme ve bir dizi kaydetme

  1. Verileri gözden geçirmek için tuşuna basın çalışma yönetimi. Faiz küçük resme gidin ve güncelleştirmeyiçift tıklatın.
  2. İlk Çalışma yönetimi sonra yakın tarayıcı penceresinde veri toplama bitirmek ve kaydedilmiş bir dizi kaydetmek için tuşuna basın.
    Not: bir dizi kapattıktan sonra bu çerçeveleri veya cineloops bu dizi artık depolamak mümkün değildir.

6. fare veri edinimi ardından işleme

  1. Jel kuru sıkıştırır yardımıyla anaesthetized hayvan kaldırın.
  2. Cerrahi teyp--dan belgili tanımlık paws dikkatli bir şekilde çıkarın.
  3. İsoflurane tüp (konsantrasyonu % 0) kapatın.
  4. Gd5, aşağıdaki ultrason analiz devam 8, 10 ve 12.
    1. Uyan ve yönlendirmek için zaman sahiptir, bu nedenle hayvan en az 5 dk bir kafeste tek başına yerleştirin.
    2. Fare geri orijinal kafese koyun.
      Not: fareler çok hızlı bir şekilde uyanmak gibi isoflurane jel ve cerrahi bant kaldırmadan önce açmayın (yaklaşık 20 s) isoflurane açtıktan sonra.
  5. Gd14, aşağıdaki ultrason analizi ile devam edin.
    1. Servikal çıkığı tarafından uyanmadan önce dişi feda. Hayvan açmak, rahim kaldırmak, fetus ve plasenta ayrı ve fetal ve plasental ağırlık ölçmek.

7. kopyalama ve veri alma

  1. Bir veya daha fazla serisi Vermek için tıklatarak işaretleyin ve verileri sabit diske kopyalamak için depolama alanı seçin.
  2. Açık bir bilgisayar, bilgisayar yazılımı ve Kopyalama kaynağı tıklatın ve çalışma/serisi yazılım almak için sabit diskten çalışması/serisi seçin.
  3. Yazılımı ile çözümleyebilirsiniz.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Bu el yazması kullanılan ultrason sisteminin bileşenleri tek tek Şekil 1' de gösterilmiştir. Şekil 2 temsilcisi ultrason görüntüleri B-modunda gd5, 8, 10 ve 12 (B) ve karşılık gelen implantasyon alan ölçüm sonuçları (A)bir önemli Azaltılmış implantasyon bölgesinde gösteren, elde gösterir Anti-CD122-tedavi Cpa3Cre / + gd10 itibaren gelen fareler.

Tek bir implantasyon (decidua basalis, plasenta, embriyo) bölümlerini B-modunda (Şekil 3A) satın aldı ve conduced plasental ölçüm (alan, kalınlığı, çapı) Şekil 3 gösterir (Şekil 3B). Plasental ölçümleri sonuçlandı önemli ölçüde azaltılmış plasental alanında (Şekil 3A), kalınlığı (Şekil 3B) ve çapı (Şekil 3 c) anti CD122 tedavi Cpa3Cre / + gd10 ve gd12 WTs için göre fareler. Buna ek olarak, plasental alan ve çapı gd14 adlı gruplar arasında karşılaştırılabilir ve kalınlığı önemli ölçüde anti-CD122-tedavi Cpa3 artış olduCre / + gd14, WTs ile karşılaştırıldığında fareler.

Şekil 4 gd14 fetal ve plasenta ağırlığı gösterir. Sonuçları ortaya bir önemli ölçüde decreasedfetal ağırlığı (Şekil 4A), karşılaştırılabilir plasenta ağırlığı (Şekil 4B) ve önemli ölçüde azalmıştır feto plasental dizinde (FPI) (Şekil 4 c) anti CD122 tedavi Cpa3Cre / + fareler WTs. Şekil 5 gösterilere karşılaştırıldığında bir temsilcisi PW doppler görüntü UA WT fare (Şekil 5A) ve pik sistolik hız (PSV) (Şekil 5B) ölçümleri bitir, diyastolik hız (EDV) (Şekil 5C) ve hesaplanan direnç dizin (Şekil 5 d), nereye tüm değerleri gruplar arasında karşılaştırılabilir. Şekil 6 gd14 bir WT fetal UmA bir temsilci renkli doppler görüntüsünü gösterir (Şekil 6A) ve normal, eksik veya tersine çevrilmiş temsilcisi PW doppler görüntülerle sona diyastolik akım (Şekil 6B) ve PVS (Şekil ölçümleri 6 C), EDV (Şekil 6D), sistolik/diyastolik oranı (Şekil 6E), ve direnç dizini (Şekil 6F). Anti-CD122-tedavi Cpa3 direnç DizinCre / + fareler WT fareler ile karşılaştırıldığında önemli ölçüde artış oldu.

Figure 1
Şekil 1: görüntüleme sistemi. Platform kontrol Isıtma ile ana kontrol ünitesi (A) (B) ünite, daha sıcak (C), isoflurane kontrol ünitesi (D), devirme kutusu (E), ısıtmalı platformuyla dört bakır alanı (F; jel F.1), dönüştürücü (G) ve dönüştürücü mermiyi (H) tutuyor. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2: gd5, implantasyon alanlarda karşılaştırılması 8, 10 ve 12. (A) WT Cpa3 implantasyon alanlarından+/ + + PBS fareler (fareler n = 2-5, takılan n = 6-31 günlük) ve MC/NK-eksik Cpa3Cre / + + anti-CD122 fareler (fareler n = 3, takılan n = 8-16 günlük) adlı gd5, 8, 10 ve 12. Sonuçlar her tek implantasyon ve Ortalama değerlerini ayrı ayrı olarak sunulur. İstatistiksel farklar elde edilen bir unpaired tkullanımı-test (** p < 0,01, *** p < 0.001). (B) temsilcisi ultrason görüntüleri Cpa3+/ + + PBS fareler gd5 (i), gd8 (II), gd10 (III) ve gd12 (IV). GD, gebelik gün; WT, vahşi türü; MC, mast hücresi; NK, doğal katil hücre. Bu rakam bir önceki yayın23yayınlanacaktır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3: gd10, plasental ölçülerde 12 ve 14. (A) decidua basalis, plasenta ve embriyo gösteren bir WT implantasyon gd10, temsilcisi ultrason görüntüsü. (B) plasental kalınlığı (kalın) ve plasenta çapı (dia) gösteren bir WT implantasyon gd12, temsilcisi ultrason görüntüsü. Plasental alanı (C), plasental kalınlığı (D) ve plasenta çapı (e) WT Cpa3 üzerinden+/ + + PBS fareler (fareler n = 3-5, plasenta n = 12-22 günlük) ve MC / NK-eksik Cpa3Cre / + + anti-CD122 fareler (fareler n = 3-4, plasenta n = 8-14 günlük), gd10, 12, ve 14. sonuçlar her tek plasenta ve Ortalama değerlerini ayrı ayrı olarak sunulur. İstatistiksel farklar elde edilen bir unpaired tkullanımı-test (* p < 0,05, ** p < 0,01). GD, gebelik gün; WT, vahşi türü; kalın, kalınlığı; Dia, çapı; MC, mast hücresi; NK, doğal katil hücre. Bu rakam bir önceki yayın23yayınlanacaktır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4: Fetal ve plasental kilo ölçümleri ve feto plasental dizinde (FPI) gd14. Fetal ağırlık (A), plasenta ağırlığı (B) ve FPIs (C) WT Cpa3 Döl+/ + + PBS fareler (fareler n = 4, fetüs/plasenta n = 35) ve MC/NK-eksik Cpa3Cre / + + anti-CD122 fareler (fareler n = 3, fetüs/plasenta n = 28), gd14. Sonuçları tek tek değerleri ve ortalama sunulmuştur. İstatistiksel farklar unpaired t-testi kullanılarak elde (* p < 0,05, ** p < 0,01). GD, gebelik gün; WT, vahşi türü; MC, mast hücresi; NK, doğal katil hücre. Bu rakam bir önceki yayın23yayınlanacaktır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 5
Şekil 5: uterin arter hızları gd10, analizini. (A) temsilcisi nabız dalga WT Cpa3 doppler görüntülerden+/ + + PSV ve EDV gösteren PBS fareler. PSV (B), EDV (C) ve direnç dizin (D) Cpa3 dan uterin arter+/ + + PBS (n = 3) ve Cpa3Cre / + + anti-CD122 (n = 3), gebeliğin gd10 fareler. Demek SEM istatistiksel analizi ile Mann-Whitney U testi kullanılarak gerçekleştirilen gibi verileri sunulmaktadır. GD, gebelik gün; WT, vahşi türü; MC, mast hücresi; NK, doğal katil hücre; PSV, pik sistolik hız; EDV, sonunda diyastolik hız. Bu rakam bir önceki yayın23yayınlanacaktır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 6
Şekil 6: gd14, umbilikal arter hızları analizini. (A) GD'deki 14 fetal UmA temsilcisi renkli Doppler görüntüsü. (B) temsilcisi nabız dalga Cpa3 doppler görüntülerden+/ + + PBS (i) ve Cpa3Cre / + + anti-CD122 (II, III) fareler, normal gösterilen sona diyastolik akım (ı), son diyastolik akım (II) yok veya ters işlem sonunda diyastolik akım (III). PSV (C), EDV (D), sistolik/diyastolik oranı (E) ve direnç dizin (F) fetusa Cpa3 gelen UMASâ+/ + + PBS (fareler n = 3, UmA ölçümler n = 7) ve Cpa3Cre / + + anti-CD122 (fareler n = 3, UmA ölçümler n = 10) gd14, fareler. Veri SEM istatistiksel analizi ile ortalama bir unpaired tkullanılarak gerçekleştirildi olarak sunulmaktadır-test (* p < 0,05). UmA, umbilikal arter; GD, gebelik gün; PSV, pik sistolik hız; EDV, sonunda diyastolik hız. Bu rakam bir önceki yayın23yayınlanacaktır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ultrason sistemimizi kullanarak, biz fetal büyüme kısıtlama MC/NK-eksik annelerinde gd10 üzerinde gösterdi. Ayrıca, gd10 ve 12, biz indirimli plasental boyutları, gözlenen ve gd14, yokluğu veya bazı fetusa uMC/uNK-eksik farelerin UMASâ son diyastolik akım reversion. Zavallı vaskülarizasyon bu iz IUGR gösteren arterler önemli direnç dizini ile ilişkili. Sonuçları uMCs ve uNKs önemli rolü gebelik ve fetal iyilik ve IUGR seyri anlamak onaylamak.

Protokol gebelik güne gd5 itibaren (implantasyon sonra) geçerlidir. Dikkate alınması gereken protokol bazı önemli adımlar vardır. İlk olarak, epilasyon dikkatle yapılmalıdır. Örneğin, Depilasyon krem ile aşırı temas cilt tahrişine neden olabilir. Ancak, eksik epilasyon girişim görünür ekran üzerinde bir gölge olarak sinyal yol açar. Yetersiz bir sinyal (gölgeler veya solmuş resimler) için bir başka neden de jel arasında fare ve ultrason ışını yerleştirilen bir çok düşük miktarda olabilir. Deneyim, daha doğrusu jel (yaklaşık 10 mL) yüksek miktarda yeterli sinyal görünürlük için gereklidir. İkinci, 2D ölçümler bir şekilde yanlışlık için eğilimli olabilir. Takılan arasında ölçü farklılıklarını en aza indirmek için biz ne zaman implantasyon çevreleyen en büyük kullanılabilir boyut kullanımı öneriyoruz. Kesin plasenta ölçülerini tüm takılan UmA kan akımı görülebilir bir şekilde konumlandırılmış. Ayrıca, kaynakları hatalar en aza indirmek için ölçümler her zaman aynı operatörü tarafından gerçekleştirilmelidir. Üçüncü olarak, nabız dalga için doppler ölçümleri, kan akış yönü ve ultrason kiriş arasındaki açı izlemek önemlidir. Bir çok yüksek açı veya tek bir deney hayvanları arasında farklı açılardan yanlış hız ölçümleri için neden olabilir. Dikkat Ayrıca tekrarlayan anesthetization kadın göze ödenmesi gerekmektedir. Bu risk ve annesi için stres azaltmak için ultrason ölçümleri en çok iki günde yapılmalıdır.

Hamilelik boyunca ilgili gebelik gün takip fetusa olasılığı ultrason teknolojisinin büyük bir avantajdır. Farklı gebelik aşamaları, feda eden fare aksine, teknoloji bireysel hamile farelerin boyuna doğru çözümlemesi sağlar. Bu gücü rağmen düşünülmesi gereken sistemin bazı sınırlamalar vardır. Örneğin, fetusa pozisyonlar gebelik boyunca değişebilir. Bu nedenle, bireysel fetus için farklı zamanlarda elde edilen belirli veri kümelerini ayırmak zor olabilir. Ayrıca, bazen bazı fetusa daha sonra gebelik gün i) konumlarını ışını ile ulaşmak zor olabilir, II) fetusa ekrana sığmayacak kadar büyük olabilir veya III) onlar-ebilmek var olmak saklı altında bağırsak olarak izlemek mümkün değildir. Fare gerginliği bağlı olarak, gd12 veya gd14 kadar bütün implantasyon ölçümleri mümkündür. Daha sonra fetus kalp dahil olmak üzere, yalnızca tek organlarının ölçülen ve kaydedildi. Bütün implantasyon içinde ekrana sığacak şekilde daha sonra gebelik aşamalarında çok büyüktür.

Bizim bilgi en iyi şekilde, ultrason görüntüleme (manyetik rezonans görüntüleme ve bilgisayarlı tomografi ile birlikte) çeşitli hayvanların farklı gebelik ödün vermeden hamilelik sırasında belirtilen parametreleri çözümlenecek yalnızca kullanılabilir yöntemdir gün. Bu tek yöntem doğru kan akışını ve yönünü değerlendirmek mümkün doppler görüntüleme için özellikle doğrudur (kırmızı akışını ultrason yönde = kiriş; mavi ultrason demetinin ters yönde akışı =). Nabız-wave doppler görüntüleme sırasında ultrason ışın doku tarafından döndürülür ve kan akışı24hakkında hızlı bilgi birkaç darbeleri gönderir.

Ultrason kendisi anne ve fetüs için zararsız görünüyor gibi ultrason görüntüleme mükemmel gebelik araştırma için uygundur. Yine de, bu el yazması açıklanan yöntemlerden çok sayıda diğer araştırma alanlarına, de uygulanabilir; Örneğin, sistem aynı zamanda 3D ölçümleri, görselleştirme ve zaman içinde doku hareketinin miktar sağlar görselleştirme kan tümörleri, biyolojik hücre yüzey, tansiyon ölçümleri üzerinde tespiti akışı ve ultrason destekli enjeksiyon.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Çok görüntüleme aracı şirkete (özellikle Magdalena Steiner, Katrin Suppelt ve Sandra Meyer) hoş ve hızlı destek ve derhal ve tamamen görüntüleme sistemi ve kullanım ile ilgili tüm sorulara cevap için teşekkürler. Cpa3 koloni sağlamak için Prof. Hans-Reimer Rodewald ve Dr. Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Almanya) için minnettarız. Ayrıca, Stefanie fare kolonileri sorumlu kimdi ve kim resimleri Şekil 1'de oluşturulan Langwisch, teşekkür ederim.

İş ve görüntüleme sistemi projeleri DFG öncelik programı 1394 "Mast hücreleri sağlık ve hastalığında." gömülü olan hibe Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) üzerinden A.C.Z. (ZE526/6-1 ve AZ526/6-2) tarafından finanse edilmiştir

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) BioLegend 123204 Klon TM-β1; 500 µg
Vevo 2100 System  FujiFilm VisualSonics Inc. Transducer MS550D-0421
Vevo LAB Software  FujiFilm VisualSonics Inc.
Isoflurane Baxter PZN: 6497131
Electrode gel Parker 12_8
Surgical tape 3M Transpore 1527-1
Eye cream Bayer PZN: 1578675
Cotton tipped applicators Raucotupf 11969 100 pieces
Depilatory cream Reckitt Benckiser 2077626
Compresses Nobamed Paul Danz AG 856110 10 x 10 cm
Ultrasound gel Gello GmbH 246000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Abramowicz, J. S., Kremkau, F. W., Merz, E. Ultraschall in der Geburtshilfe: Kann der Fötus die Ultraschallwelle hören und die Hitze spüren? Ultraschall in der Medizin. 33, (3), Stuttgart, Germany. 215-217 (1980).
  2. Jones, G. Echolocation. Current Biology. 15, (13), R484-R488 (2005).
  3. Simmons, J. A. The sonar receiver of the bat. Annals of the New York Academy of Sciences. 188, 161-174 (1971).
  4. Zala, S. M., Reitschmidt, D., Noll, A., Balazs, P., Penn, D. J. Sex-dependent modulation of ultrasonic vocalizations in house mice (Mus musculus musculus). Public Library of Science ONE. 12, (12), e0188647 (2017).
  5. Wöhr, M., Seffer, D., Schwarting, R. K. W. Studying Socio-Affective Communication in Rats through Playback of Ultrasonic Vocalizations. Current Protocols in Neuroscience. 75, 1-8 (2016).
  6. Hasiniaina, A. F., et al. High frequency/ultrasonic communication in a critically endangered nocturnal primate, Claire's mouse lemur (Microcebus mamiratra). American Journal of Primatology. e22866 (2018).
  7. Yeo, L., Romero, R. Color and power Doppler combined with Fetal Intelligent Navigation Echocardiography (FINE) to evaluate the fetal heart. Ultrasound in Obstetrics & Gynecology. 50, (4), 476-491 (2017).
  8. Teichholz, L. E. Echocardiography in valvular heart disease. Progress in Cardiovascular Diseases. 17, (4), 283-302 (1975).
  9. Zechner, P. M., et al. Lungensonographie in der Akut- und Intensivmedizin. Der Anaesthesist. 61, (7), 608-617 (2012).
  10. Blank, W., Schuler, A. Sonografie der Schilddrüse - Update 2017. Praxis. 106, (12), 631-640 (2017).
  11. Hansen, K. L., Nielsen, M. B., Ewertsen, C. Ultrasonography of the Kidney: A Pictorial Review. Diagnostics. 6, (1), Basel, Switzerland. (2015).
  12. Older, R. A., Watson, L. R. Ultrasound anatomy of the normal male reproductive tract. Journal of Clinical Ultrasound. 24, (8), 389-404 (1996).
  13. Reeves, J. J., Rantanen, N. W., Hauser, M. Transrectal real-time ultrasound scanning of the cow reproductive tract. Theriogenology. 21, (3), 485-494 (1984).
  14. Sharma, M., Somani, P., Sunkara, T. Imaging of gall bladder by endoscopic ultrasound. World Journal of Gastrointestinal Endoscopy. 10, (1), 10-15 (2018).
  15. Weskott, H. -P. Ultraschall in der Diagnostik maligner Lymphome. Der Radiologe. 52, (4), 347-359 (2012).
  16. Shirinifard, A., Thiagarajan, S., Johnson, M. D., Calabrese, C., Sablauer, A. Measuring Absolute Blood Perfusion in Mice Using Dynamic Contrast-Enhanced Ultrasound. Ultrasound in Medicine & Biology. 43, (8), 1628-1638 (2017).
  17. Quaia, E. Assessment of tissue perfusion by contrast-enhanced ultrasound. European Radiology. 21, (3), 604-615 (2011).
  18. Saw, S. N., Poh, Y. W., Chia, D., Biswas, A., Zaini Mattar, C. N., Yap, C. H. Characterization of the hemodynamic wall shear stresses in human umbilical vessels from normal and intrauterine growth restricted pregnancies. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. (2018).
  19. Kessler, J., Rasmussen, S., Godfrey, K., Hanson, M., Kiserud, T. Fetal growth restriction is associated with prioritization of umbilical blood flow to the left hepatic lobe at the expense of the right lobe. Pediatric Research. 66, (1), 113-117 (2009).
  20. Laurin, J., Lingman, G., Marsál, K., Persson, P. H. Fetal blood flow in pregnancies complicated by intrauterine growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 69, (6), 895-902 (1987).
  21. Arduini, D., Rizzo, G., Romanini, C., Mancuso, S. Fetal blood flow velocity waveforms as predictors of growth retardation. Obstetrics and Gynecology. 70, (1), 7-10 (1987).
  22. Meyer, N., et al. Chymase-producing cells of the innate immune system are required for decidual vascular remodeling and fetal growth. Scientific Reports. 7, 45106 (2017).
  23. Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. Simultaneous Ablation of Uterine Natural Killer Cells and Uterine Mast Cells in Mice Leads to Poor Vascularization and Abnormal Doppler Measurements That Compromise Fetal Well-being. Frontiers in Immunology. 8, 1913 (2017).
  24. Evans, D. H., Jensen, J. A., Nielsen, M. B. Ultrasonic color Doppler imaging. Interface Focus. 1, (4), 490-502 (2011).
Yüksek frekans ultrason Fetal ve plasental geliştirme <em>Vivo içinde</em> analizi için
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).More

Meyer, N., Schüler, T., Zenclussen, A. C. High Frequency Ultrasound for the Analysis of Fetal and Placental Development In Vivo. J. Vis. Exp. (141), e58616, doi:10.3791/58616 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter