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Chemistry

Spatiotemporally controlado translocação Nuclear de convidados em células vivas, usando cola Molecular enjaulada como Photoactivatable Tags

Published: January 17, 2019 doi: 10.3791/58631
Automatic Translation
1, 1, 1, 1,2
1Department of Chemistry and Biotechnology, School of Engineering, University of Tokyo, 2Riken Center for Emergent Matter Science

Summary

Este protocolo descreve luz-acionou translocação nuclear de convidados em células vivas, usando tags cola molecular enjaulado. Este método é promissor para a entrega de drogas de nuclear-direcionamento local-seletivo.

Abstract

O núcleo da célula é dentre as organelas mais importantes como um destino de entrega da droga subcellular, desde modulação de replicação de gene e expressão é eficaz no tratamento de várias doenças. Aqui, demonstramos a luz-acionou a translocação nuclear de convidados usando enjaulado tags cola molecular (Cagedcola-R), cujas múltiplas guanidínio pingentes de íon (Gu.+) são protegidos por um grupo de photocleavable aniônicos (butirato-substituídos nitroveratryloxycarbonyl; BA NVOC). Os hóspedes com cola de Caged-R são absorvidos vivos células através de endocitose e permanecem em endossomos. No entanto, após photoirradiation, Cagedcola-R é convertido em uncaged molecular cola (cola-RUncaged) carregando vários pingentes de Gu+ , que facilita a fuga de CDDP e translocação nuclear subsequente dos convidados. Este método é promissor para entrega da droga local-seletiva nuclear multiplataforma, desde que os convidados etiquetados podem migrar para o citoplasma, seguido pelo núcleo da célula apenas quando photoirradiated. Enjaulado Etiquetas de colagem-R podem entregar macromoleculares convidados como pontos quânticos (QDs) bem como convidados da pequeno-molécula. Enjaulado Etiquetas de colagem-R podem ser uncaged com luz UV, não só mas também dois fotões infravermelho próximo (NIR) a luz, que pode penetrar profundamente no tecido.

Introduction

O núcleo da célula, que carrega a informação genética, dentre as mais importantes organelas é como um destino de entrega da droga subcellular, desde modulação de replicação de gene e expressão é eficaz no tratamento de várias doenças, incluindo câncer e genética 1,2,3de distúrbios. Para nuclear entrega de drogas, a conjugação de peptídeo etiquetas tais como um sinal de localização nuclear a4,5,6 tem sido amplamente pesquisada. No entanto, a fim de reduzir os efeitos colaterais indesejados, controle spatiotemporal de translocação nuclear é necessário.

Anteriormente, acionada por luz translocação de proteínas para o núcleo celular foi conseguida usando enjaulado NLS7,8,9. NLS migra para o núcleo da célula por ligação a proteínas de transporte citoplasmáticos6. Nos métodos relatados, proteínas comentários enjaulado NLS do rolamento são diretamente incorporadas no citoplasma por microinjeção8 ou expressos nas células de destino usando um código genético expansão técnica9. Portanto, um método que pode alcançar tanto celular absorção e translocação nuclear induzida por foto é vantajoso para aplicações práticas.

Aqui, descrevemos a luz-acionou a translocação nuclear dos convidados em células vivas, usando tags dendríticas cola molecular enjaulado (Cagedcola-R, Figura 1). Water-soluble colas molecular10,11,12,13,14,15,16,17,18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 tendo vários pingentes de Gu+ têm sido desenvolvidos anteriormente, que aderem firmemente a proteínas11,12,13,14,15, 16,17, ácidos nucleicos18,19,20, de membranas fosfolipídicas21e argila nanosheets22,23 , através da formação de múltiplas pontes de sal entre seus pingentes Gu+ e oxyanionic grupos dos alvos. O pingentes de Gu+ de Cagedcola-R é protegido por um grupo de photocleavable aniônicos, nitroveratryloxycarbonyl butirato-substituídos (BANVOC). Os hóspedes com cola de Caged-R são absorvidos vivos células através de endocitose e estadia em endossomos (Figura 2). Sobre photoirradiation, os grupos NVOC BAde Cagedcola-R são desanexados para render uma uncaged molecular cola (cola deUncaged-R) carregando vários pingentes de Gu+ , que então facilita a migração do convidado etiquetado para o citoplasma, seguido-se o núcleo da célula (Figura 2). A marca de cola-R Cagedpode ser uncaged pela exposição a UV ou luz de dois fotões infravermelha (NIR) sem grave fototoxicidade. Demonstramos a entrega nuclear controlada spatiotemporally de macromoleculares convidados, bem como convidados da pequeno-molécula com etiquetas de colagem-R Caged, usando pontos quânticos (QDs) e uma tintura fluorescente (nitrobenzoxadiazole; NBD), respectivamente, como exemplos.

Figure 1
Figura 1: Estruturas esquemáticas do Cagedcola-R. Os 9 pendentes de íon (Gu.+) ultracentrifugation do Cagedcola-R são protegidos por um grupo de nitroveratryloxycarbonyl butirato-substituídos (BANVOC). Os grupos NVOC BAsão clivados por irradiação com UV ou luz NIR dois fotões. O núcleo focal do Cagedcola-R é acrescido com nitrobenzoxadiazole (NBD) ou dibenzocylooctyne (DBCO). Reproduzido com permissão da referência20. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2: Ilustração esquemática da luz-acionou a translocação nuclear de convidados conjugados com uma marca de cola-R Caged. O convidado / conjugado de colagem-RCagedé retomado em vida células através de endocitose. Após a photoirradiation, a marca de cola-R Cagedé uncaged para produzir uma marca de cola-R Uncaged, que pode facilitar a fuga de CDDP do convidado marcado. Posteriormente, os comentários marcados migra para o núcleo da célula. Reproduzido com permissão da referência20. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Protocol

1. preparação dos convidados com colagem-R enjauladoTags

  1. Prepare a solução de cola-NBD Caged.
    1. Sintetiza Cagedcola-NBD (Figura 1) seguindo os procedimentos descritos anteriormente20.
    2. Prepare uma solução stock de Cagedcola-NBD (10 mM) em seco dimetilsulfóxido (DMSO).
      Nota: Guarde a solução-mãe no escuro. A solução pode ser diluída com buffers aquosas ou meios de cultura celular em cima de uso.
  2. Prepare a solução de cola-QD Caged.
    1. Sintetizar Cagedcola-dibenzocylooctyne (Cagedcola-DBCO) (Figura 1) seguindo os procedimentos anteriormente descritos20.
    2. Prepare uma solução stock de Cagedcola-DBCO (10 mM) em DMSO seco.
    3. Para a preparação do Cagedcola-QD, primeiro preparar acrescida de azida QDs (QD-azida; A Figura 3). Adicionar 100 µ l de solução de azida-PEG4-NHS éster (Figura 3) dimetil formamida (DMF, 125 µM) a 400 µ l de uma DMF (500 nM) solução de pontos quânticos (QDs) revestida com PEG amina acrescida (amina-QD; A Figura 3). Agite a mistura por 1h à temperatura ambiente.
    4. Dialize a solução resultante para 24h contra 800 mL de DMF usando uma membrana de celulose regenerada com 3.500 de peso molecular de corte (MWCO).
    5. Dilua a solução-mãe de Cagedcola-DBCO de 50 µM com DMF. Adicionar 200 µ l da solução para a solução de pós-diálise (Figura 3) e agitar a mistura por 3 h à temperatura ambiente.
    6. Dialize a solução resultante para 24h contra 800 mL de DMF usando uma membrana de celulose regenerada (25.000 MWCO).
    7. Diluir a solução resultante a 200 nM com DMF.

Figure 3
Figura 3: ilustração esquemática da preparação do Cagedcola-QD. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

2. preparação da amostra de células Hep3B para observações microscópicas

  1. Manter as células de carcinoma Hep3B hepatocelular humano em essencial meio mínimo do águia (EMEM) contendo 10% de soro fetal bovino (FBS) a 37 ° C, menos de 5% de CO2.
  2. As células no dia anterior o experimento de semente. Células de3 Hep3B semente 5,0 × 10 por bem de um substrato de vidro 8-septadas no EMEM (10% FBS, 200 µ l) e incubar a amostra de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 24 h.
  3. Remover o meio de cultura e enxagúe a amostra de células com 100 µ l de soro de tampão de fosfato de Dulbecco (D-PBS) duas vezes.

3. observação da translocação Nuclear da pequeno-molécula convidados desencadeada pela luz UV

  1. Fornecer a amostra de células (preparado no passo 2.3) com 200 µ l de EMEM FBS-livre contendo Cagedcola-NBD (10 µM) e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 3 h.
    Nota: A incubação da amostra celular no EMEM FBS-livre por mais de 4 h provoca danos celulares graves.
  2. Remover o meio de cultura e enxagúe a amostra de células com 100 µ l de PBS-D duas vezes.
  3. Para visualização dos endossomos, fornecer a amostra de células com 200 µ l de EMEM (10% FBS) contendo um corante vermelho-fluorescente (por exemplo, LysoTracker vermelho, 100 nM) e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 20 min. remover a cultura médio e enxaguar a amostra de células com 100 µ l de PBS-D duas vezes. Fornecer a amostra de células com 200 µ l de EMEM (10% FBS).
  4. Para a translocação nuclear do Cagedcola-NBD, expor a amostra de célula à luz por 2 min através de uma fibra óptica usando uma fonte de luz xenon de 100 W, equipada com um filtro de passa-banda 365 nm UV. Para uma amostra de células de referência sem exposição aos raios UV, manter a amostra de células escuras.
    Nota: A tampa dos substratos de vidro pode ser retirada para eficiente exposição aos raios UV. Longa exposição à luz UV pode causar citotoxicidade para as células.
  5. Para visualização dos núcleos, adicionar 1 µ l de Hoechst 33342 (1 mg/mL) para o meio de cultura e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 10 min.
  6. Submeter a amostra de células para a microscopia eletrônica de varredura a laser confocal e gravar as micrografias em cima de excitação em 488 nm (λobs = 500-530 nm), 543 nm (λobs = 565-620 nm) e 710 nm (dois fotões; Λ OBS = 390-465 nm) para NBD e corante vermelho-fluorescente Hoechst 33342, respectivamente.

4. observação da translocação Nuclear de hóspedes pequeno-molécula desencadeada por NIR dois fotões de luz

  1. Fornecer a amostra de células (preparado no passo 2.3) com 200 µ l de EMEM FBS-livre contendo Cagedcola-NBD (10 µM) e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 3 h.
  2. Remover o meio de cultura e enxagúe a amostra de células com 100 µ l de PBS-D duas vezes. Fornecer a amostra de células com 200 µ l de EMEM (10% FBS).
  3. Submeter a amostra de células para a microscopia eletrônica de varredura a laser confocal e gravar as micrografias em cima de excitação em 488 nm (λobs = 500-530 nm).
  4. Para a translocação nuclear do Cagedcola-NBD, irradiar a região, incluindo a célula de interesse com um laser de excitação de dois fotões (710 nm), instalado como uma fonte de luz no microscópio, por 2 min (30 s × 4). Observe a translocação, conforme descrito no passo 4.3.

5. observação da translocação Nuclear de convidados Macromolecular desencadeada pela luz UV

  1. Fornecer a amostra de células (preparado no passo 2.3) com 200 µ l de EMEM FBS-livre contendo Cagedcola-QD (10 nM) e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 3 h.
  2. Remover o meio de cultura e enxagúe a amostra de células com 100 µ l de PBS-D duas vezes. Fornecer a amostra de células com 200 µ l de EMEM (10% FBS).
  3. Para a translocação nuclear do Cagedcola-QD, expor a amostra de célula à luz por 2 min através de uma fibra óptica usando uma fonte de luz xenon de 100 W, equipada com um filtro de passa-banda 365 nm UV. Para uma amostra de células de referência sem exposição aos raios UV, manter a amostra de células escuras.
  4. Para visualização dos núcleos, adicionar 1 µ l de Hoechst 33342 (1 mg/mL) para o meio de cultura e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 10 min.
  5. Submeter a amostra de células para a microscopia eletrônica de varredura a laser confocal e gravar as micrografias sobre excitação em 405 nm (λobs = 430-520 nm) e 488 nm (λobs = 625-680 nm) para Hoechst 33342 e QDs, respectivamente.

6. ensaio da viabilidade celular

  1. Manter as células de carcinoma Hep3B hepatocelular humano no EMEM (10% FBS) a 37 ° C abaixo de 5% de CO2.
  2. As células no dia anterior o experimento de semente. Células de3 Hep3B semente 5,0 × 10 por bem de uma placa de 96 poços de cultura no EMEM (10% FBS, 200 µ l) e incubar a amostra de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 24 h.
  3. Remover o meio de cultura e enxagúe a amostra de células com 100 µ l de PBS-D duas vezes.
  4. Fornecer a amostra de células com 200 µ l de EMEM FBS-livre contendo Cagedcola-NBD (0,1-100 µM) e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 3 h.
  5. Expor a amostra de célula à luz UV para 2 min através de uma fibra óptica usando uma fonte de luz xenon de 100 W, equipada com um filtro de passa-banda 365 nm. Para uma amostra de células análogas sem exposição aos raios UV, manter a amostra de células escuras.
  6. Adicionar 10 µ l de reagente de célula contando Kit-8 (10 µ l) para o meio de cultura e incubar a amostra resultante de célula a 37 ° C abaixo de 5% de CO2 por 2 h.
  7. Submeter a amostra de célula a espectroscopia de absorção (λ = 450 nm) usando um leitor de microplacas.

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Representative Results

Antes de photoirradiation, Hep3B células incubadas com Cagedcola-NBD exibiram a emissão de fluorescência punctate de seu interior (λext = 488 nm; Figuras 4A e 4C, verde). Uma micrografia análoga foi obtida em cima de excitação em 543 nm para corante vermelho-fluorescente (figuras 4B e 4C, vermelho), indica que o Cagedcola-NBD localizada nos endossomos. Consequentemente, a emissão de fluorescência pode ser atribuída ao Cagedcola-NBD (Figura 4, verde) observou-se fora do núcleo da célula, que foi visualizado com Hoechst 33342 (λext = 710 nm, dois fotões; Figura 4, azul). Após a irradiação UV, a fluorescência emitidas de células devido NBD (Figura 4E, verde) também do núcleo (Figura 4E, azul), sugerindo que Cagedcola-NBD era uncaged para rendimento Uncagedcola-NBD, que migrou para o citoplasma, seguido pelo núcleo da célula. Essa translocação nuclear do Cagedcola-NBD pode ser induzida local-seletivamente pela luz NIR dois fotões (Figura 5A e 1 filme, círculo tracejado branco). Como mostrado na Figura 5B e 1 filme, Cagedcola-NBD em aerobiose áreas não escapou dos endossomos e permaneceu como punctate fluorescência. Não apreciável citotoxicidade foi observada para as células tratadas com Cagedcola-NBD, antes e mesmo após a exposição aos raios UV (Figura 6).

As marcas de cola-R Cagedtambém podem fornecer macromoleculares convidados como QDs até ao núcleo celular. O QD /Cagedconjugado de colagem-R (Cagedcola-QD, Figura 3) pode ser tomado até em células Hep3B (Figura 7A). Visualização do núcleo celular com Hoechst 33342 indica que Cagedcola-QD permanece fora do núcleo antes de photoirradiation (Figura 7A). Após a exposição aos raios UV por 2 min, a emissão de fluorescência de QDs surgiu no núcleo (figuras 7B e 7C). Uma imagem transversal das células demonstrou que a emissão de fluorescência pode ser atribuída ao QDs realmente é emitida de dentro do núcleo (Figura 7).

Figure 4
Figura 4: Fuga da CDDP e translocação nuclear do Cagedcola-NBD desencadeada pela luz UV. Confocal laser de varredura micrografias de células Hep3B após 3 h incubação a 37 ° C no EMEM contendo Cagedcola-NBD (10 µM), seguido por lavagem com D-PBS. (A, B) Micrografias foram gravadas sobre excitação na (A) 488 nm (λobs = 500-530 nm, verde) e (B) 543 nm (λobs = 565-620 nm, vermelho) após incubação 20 min no EMEM (10% FBS) contendo corante vermelho-fluorescente (100 nM) . (C) mesclada de imagem do (A) e (B). (D, E) Micrografias gravado em cima de excitação em 488 nm (λobs = 500-530 nm, verde) e 710 nm (dois fotões; Λ OBS = 390-465 nm, azul). As células Hep3B, tratadas com cola Caged-NBD, foram incubadas a 37 ° C no EMEM (10% FBS) contendo Hoechst 33342 (5 µ g/mL) antes de (D) e depois da exposição a UV 2-min (E) a 365 nm. Escala de barras = 20 µm. reproduzido com permissão de referência20. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 5
Figura 5: Translocação Nuclear do Cagedcola-NBD desencadeada pela luz de dois fotões NIR. Confocal laser de varredura micrografias de células Hep3B após 3 h incubação a 37 ° C no EMEM contendo Cagedcola-NBD (10 µM), seguido por lavagem com D-PBS. Micrografias foram gravadas em cima de excitação em 488 nm (λobs = 500-530 nm) antes de (A) e após a irradiação de dois fotões (B) em 710 nm por 2 min (30 s × 4). O círculo tracejado branco no (A) representa a área irradiada. Escala de barras = 20 µm. reproduzido com permissão de referência20. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 6
Figura 6: ensaio da viabilidade celular. Realidades de Hep3B células após incubação no EMEM contendo Cagedcola-NBD (0,1-100 µM) antes de (A) e após a exposição a UV 2-min (B) a 365 nm. Reproduzido com permissão da referência20. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 7
Figura 7: Translocação Nuclear do Cagedcola-QD acionado pela luz UV. Confocal laser de varredura micrografias de células de Hep3B após a excitação em 405 nm (λobs = 430-520 nm) e 488 nm (λobs = 625-680 nm). Hep3B células foram incubadas a 37 ° C por 3 h no EMEM contendo Cagedcola-QD (10 nM), lavadas com D-PBS e então incubadas a 37 ° C por 10 min no EMEM (10% FBS) contendo Hoechst 33342 (5 µ g/mL) antes (A) e depois (B, C) 2-min de exposição aos raios UV Leve a 365 nm. (D) imagem transversal ao longo da linha amarela em (C). Escala de barras = 20 µm. reproduzido com permissão de referência20. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Movie
Filme de 1. Translocação nuclear de Cagedcola-NBD desencadeada pela luz de dois fotões NIR. Time-Lapse laser confocal, microscopia das células Hep3B após 3 h incubação a 37 ° C no EMEM contendo Cagedcola-NBD (10 µM), seguido por lavagem com D-PBS. Micrografias foram gravadas com intervalos de 3-s em cima de excitação em 488 nm (λobs = 500-530 nm). As células localizadas no círculo tracejado branco foram irradiadas com dois fotões NIR luz em 710 nm por 2 min (30 s × 4). Reproduzido com permissão da referência20. Por favor clique aqui para ver este vídeo. (Botão direito do mouse para fazer o download.)

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Discussion

Inquéritos anteriores de luz-acionou translocação de proteínas para o núcleo da célula foram obtidos usando enjaulado NLS7,8,9. Como mencionado anteriormente, esses métodos exigem técnicas adicionais para incorporar as proteínas NLS-marcados para o citoplasma. Em contraste, a nossa marca de cola-R Cagedpermite não só a translocação nuclear induzida por foto, mas também a captação celular dos convidados. Esta característica da marca de cola-R do Cagedé vantajosa para aplicações em vivo .

A marca de cola-R Cagedpode entregar macromoleculares convidados como QDs até ao núcleo celular. As QDs empregados aqui são maiores em diâmetro (DH = 15-20 nm) do que os poros nucleares (~ 5 nm)24, sugerindo a possibilidade de entregar outras macromoléculas que não podem difundir passivamente para o núcleo. Protocolos para functionalization das superfícies biomacromolecular com grupos de azida são bem estabelecidos,25; Além disso, a síntese de marcas de cola-R Cagedtendo outros grupos funcionais tais como maleimides, ésteres de N- Hidroxisuccinimida (NHS) e assim por diante como uma unidade de ancoragem vai alargar a aplicabilidade do Cagedcola-R tags para vários macromoléculas.

Escusado será dizer, a etapa crítica desse método é a incorporação dos convidados com cola de Caged-R através de endocitose. A eficiência de captação celular dos convidados etiquetados depende de sua concentração e o tempo de incubação. Se convidados de interesse, quando marcados com cola Caged-R, são endocytosed de forma ineficiente, Incube as celulas mais com maior concentração dos convidados marcados. Uma possível alternativa é aumentar o número de Cagedcola-R incorporada o comentários.

Os convidados utilizados neste protocolo são conjugados covalentemente a marca de cola-R do Caged. Esta é uma desvantagem potencial especialmente para a entrega da pequeno-molécula ligantes, desde sua ligação com as alvo de biomoléculas pode ser inibida pela tag dendrítica volumosa. Incorporação de um vinculador responsivo a estímulos26 entre a tag Cagedcola-R e a molécula visitante pode permitir a liberação dos convidados após translocação nuclear.

Em resumo, temos demonstrado luz-acionou translocação nuclear de convidados usando marcas de cola molecular (Cagedcola-R) photoactivatable enjaulado. Os hóspedes com cola de Caged-R são retomados em vivo células através de endocitose e permanecem nos endossomos. Após photoirradiation, Cagedcola-R é convertido em Uncagedcola-R, que facilita a fuga de CDDP e translocação nuclear subsequente dos convidados. Mais longa data observações podem ser importantes para investigar o destino dos convidados que permanecem os endossomos, bem como aqueles entregues até ao núcleo celular. Expressão do gene spatiotemporally controlado usando marcas de cola-R Cagedé um assunto interessante, digno de uma investigação futura.

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Disclosures

Os autores não têm nada para divulgar.

Acknowledgments

Reconhecemos o centro para a integração de NanoBio, da Universidade de Tóquio. Este trabalho foi apoiado por subsídio para jovens cientistas (B) (26810046) K.O. e parcialmente financiado por subsídio para pesquisa especialmente promovido (25000005) T.A. R.M. graças a bolsas de pesquisa de Japão sociedade para a promoção da ciência (JSPS ) para jovens cientistas e o programa para as principais escolas de pós-graduação (GPLLI).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Azide-PEG4-NHS ester Click Chemistry Tools AZ103
Q-dot 655 ITK Invitrogen Q21521MP
Regenerated cellulose membrane (MWCO 3,500) NIPPON Genetics TOR-3K
Regenerated cellulose membrane (MWCO 25,000) Harvard Apparatus 7425-RC25K
Hep3B Cells ATCC HB-8064
8-chambered glass substrate Nunc 155411JP
96-well culture plate Nunc 167008
Eagle's minimal essential medium (EMEM) Thermo Fisher Scientific 10370-021
Fetal bovine serum (FBS) GE Healthcare SH30406.02
Dulbecco's phosphate buffer saline (D-PBS) Wako Pure Chemical Industries 045-29795
LysoTracker Red Lonza Walkersville PA-3015
Hoechst 33342 Dojindo H342
Cell Counting Kit-8 Dojindo CK04
Confocal laser scanning microscope Carl-Zeiss LSM 510 Equipped with two-photon excitation laser (Mai Tai laser, Spectra-Physics)
Confocal laser scanning microscope Leica TCS SP8
Xenon light source Asahi Spectra LAX-102
Microplate reader Molecular Devices SpectraMax Paradigm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Química questão 143 colas Molecular photoactivation núcleo celular fuga CDDP translocação nuclear da excitação de dois fotões pontos quânticos
Spatiotemporally controlado translocação Nuclear de convidados em células vivas, usando cola Molecular enjaulada como Photoactivatable Tags
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Mogaki, R., Okuro, K., Arisaka, A.,… More

Mogaki, R., Okuro, K., Arisaka, A., Aida, T. Spatiotemporally Controlled Nuclear Translocation of Guests in Living Cells Using Caged Molecular Glues as Photoactivatable Tags. J. Vis. Exp. (143), e58631, doi:10.3791/58631 (2019).

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