इस अध्ययन में एक घाव भरने के विट्रो मॉडल में केंद्रित (खरोंच परख) कैसे ऐसे आर्सेनिक प्रभाव सेलुलर प्रवास के रूप में पर्यावरण contaminants का निर्धारण करने के लिए एक तंत्र के रूप में । परिणाम प्रदर्शित करता है कि इस विट्रो में परख सेलुलर प्रवास में परिवर्तन के तेजी से और जल्दी संकेत प्रदान करता है vivo प्रयोग में पहले ।
घाव भरने के शारीरिक तंत्र को समझना कई वर्षों के लिए चल रहे अनुसंधान का ध्यान केंद्रित किया गया है । यह अनुसंधान सीधे घावों और कम रुग्णता और रोगियों के लिए मृत्यु दर के इलाज के लिए इस्तेमाल नैदानिक मानकों में परिवर्तन में तब्दील हो । घाव भरने एक जटिल प्रक्रिया है कि रणनीतिक सेल और ऊतक बातचीत और समारोह की आवश्यकता है । घाव भरने के कई गंभीर रूप से महत्वपूर्ण कार्यों में से एक व्यक्तिगत और सामूहिक सेलुलर प्रवास है । चोट पर, रक्त से विभिन्न कोशिकाओं, आसपास के संयोजी, और उपकला ऊतकों तेजी से रासायनिक और/या शारीरिक उत्तेजकों के माध्यम से घाव साइट के लिए पलायन । इस प्रवास प्रतिक्रिया काफी हद तक परिणाम और एक चिकित्सा घाव की सफलता हुक्म कर सकते हैं । इस विशिष्ट सेलुलर समारोह को समझना शोधों दवा है कि सुधार घाव भरने के परिणाम के लिए नेतृत्व कर सकते हैं के लिए महत्वपूर्ण है. यहां, हम एक बेहतर सेलुलर प्रवास को समझने के लिए इस्तेमाल प्रोटोकॉल का वर्णन के रूप में यह घाव भरने से संबंधित है, और कैसे सेलुलर पर्यावरण में परिवर्तन काफी इस प्रक्रिया को बदल सकते हैं । इस उदाहरण के अध्ययन में, चमड़े की फाइब्रोब्लास्टर्स भ्रूण गोजातीय सीरम के साथ पूरक मीडिया में बड़े हो गए थे (fbs) ऊतक संस्कृति flasks में monolayer संस्कृतियों के रूप में. कोशिकाओं को aseptically ऊतक संस्कृति में स्थानांतरित 12-अच्छी तरह से प्लेटों का इलाज किया और १००% संगम के लिए हो गया । संगम तक पहुँचने पर, मोनोलेयर में कोशिकाएं एक p200 पिपेट टिप का उपयोग करते हुए ऊर्ध्व खरोंच थीं । संस्कृति में पतला आर्सेनिक fbs के साथ पूरक मीडिया को पर्यावरण की दृष्टि से संबंधित खुराक में व्यक्तिगत कुओं को जोड़ा गया 0.1-10 एम । छवियों को हर 4 घंटे (एच) एक 24 एच अवधि में एक औंधा प्रकाश खुर्दबीन का उपयोग करने सेलुलर प्रवास (घाव का पालन पर कब्जा कर लिया गया बंद) । छवियां व्यक्तिगत रूप से छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग कर विश्लेषण किया गया, और प्रतिशत घाव बंद गणना की गई थी । परिणाम प्रदर्शित करता है कि आर्सेनिक घाव भरने को धीमा कर देता है । यह तकनीक घाव भरने पर contaminants के प्रभाव के मूल्यांकन के लिए एक तेजी से और सस्ती पहली स्क्रीन प्रदान करता है ।
घाव हीलिंग अतिव्यापी कदम है कि विभिंन प्रकार के सेल शामिल की एक जटिल श्रृंखला के होते हैं, अणुओं संकेतन, और extracellular मैट्रिक्स अवयव1। एक साथ, इन घटकों के संगीत कार्यक्रम में काम करने के लिए घाव संकल्प या मरंमत, जो अंततः एक सुरक्षात्मक फाइब्रोटिक निशान के गठन की ओर जाता है प्राप्त करने के लिए आघात1की डिग्री पर निर्भर करता है । व्यक्तिगत प्रक्रियाओं और एक प्रयोग में घाव भरने के कार्यों को पकड़ने के लिए मुश्किल है; घाव भरने की प्रक्रिया के भीतर व्यक्तिगत कदम की पहचान की और अलग से परीक्षण करने की आवश्यकता है । घाव भरने के कई चरणों में, सेलुलर माइग्रेशन की प्रक्रिया को महत्वपूर्ण माना गया है जब उपचार दर2का मूल्यांकन किया गया है । सेलुलर प्रवास घाव भरने के सभी चरणों में देखा जा सकता है, और इस प्रकार सेल माइग्रेशन में परिवर्तन घाव बंद को प्रभावित कर सकते हैं के बारे में और समझ आवश्यक है । उदाहरण के लिए, सेलुलर माइग्रेशन दोनों को शुरुआती और देर से चरण सूजन में देखा जाता है, रक्त के जमाव और घाव साइट3पर प्लेटलेट एकत्रीकरण के साथ । इन घटनाओं को एक अस्थाई रुकावट के गठन के लिए घाव3ऊतक से रहित क्षेत्रों को भरने के द्वारा अत्यधिक रक्त की हानि को रोकने के । संचलन में प्लेटलेट्स synthesize और chemotactic कारकों के साथ vasoactive मध्यस्थों छिपाना, जो एक साथ सूजन ल्यूकोसाइट माइग्रेशन के लिए संकेत (सफेद रक्त कोशिकाओं) की मरम्मत के लिए घायल ऊतक के लिए4. पुनः उपकला ऊतक चोट के घंटे के भीतर होता है और गतिविधि और उपकला keratinocytes के प्रवास के माध्यम से घाव साइट को कवर करने के लिए आगे संदूषण या विदेशी कणों के आक्रमण को रोकने के लिए घाव साइट2शामिल है । ये उदाहरण घाव भरने के साथ जुड़े कई सेल माइग्रेशन फ़ंक्शंस के केवल कुछ कैप्चर करते हैं ।
खरोंच परख का वर्णन किया गया है और बेहतर सेल माइग्रेशन और घाव हीलिंग5,6में अपनी कई भूमिकाओं को समझने के लिए इस्तेमाल किया । इस परख सरलीकृत माना जाता है, उच्च throughput प्रदान करता है, और जांचकर्ता प्रतिनिधि सेल माइग्रेशन डेटा एकत्र करने के लिए सक्षम बनाता है । माइग्रेशन assays ने सफलतापूर्वक प्रदर्शित किया है कि कुछ यौगिकों में तेजी लाने या सेलुलर माइग्रेशन6की दर को धीमा कर सकते हैं । इसके अलावा, इन परख परिणाम शोधों शारीरिक जानकारी है कि लक्ष्य उपचार तैयार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है प्रदान करते हैं, सांद्रता खुराक, और ब्याज के जीन से पहले vivo प्रयोग में । परख बुनियादी सेल संस्कृति तकनीकों और आपूर्ति, पसंद की एक सेल लाइन, और इमेजिंग प्रौद्योगिकी के लिए समय या आंदोलन के उपचार के जवाब में आंदोलन पर कब्जा की आवश्यकता है ।
परख आसानी से हेरफेर या अन्वेषक की जरूरतों के अनुरूप करने के लिए सिलवाया जा सकता है । हालांकि, प्रयोग करने से पहले विचार करने के लिए चार बुनियादी सवाल हैं । क्या सामांय या विशिष्ट प्रश्न है/जांचकर्ता (ओं) को जवाब देने की कोशिश कर रहे हैं? यह सबसे hypotheses संचालित अनुसंधान के लिए सच रखती है; हालांकि, यह इस परख के लिए महत्वपूर्ण है क्योंकि यह सही और पूरी तरह से सवाल (ओं) का जवाब जरूरत मापदंडों के कई निर्धारित करेगा । क्या सेल लाइन या सेल लाइनों (यदि एकाधिक) का अध्ययन किया जा रहा शारीरिक प्रणाली का प्रतिनिधित्व करने के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए? उदाहरण के लिए, एक त्वचीय घाव चिकित्सा अध्ययन में, एक चमड़े का फ़ाइब्रोब्लास्ट5,6,7, स्टेम सेल8, या एपिडर्मल केराटिनोसाइट9 को सेल की आबादी का प्रतिनिधित्व करने के लिए माना जा सकता है जो सामान्य रूप से पाए जाते हैं त्वचा के ऊतकों में बहुतायत में10. वैकल्पिक रूप से, न्यूट्रोफिल, मैक्रोफेज या अन्य भड़काऊ कोशिकाओं को त्वचा के ऊतकों के भीतर घाव भरने के अन्य घटकों के सेल माइग्रेशन का प्रतिनिधित्व करने के लिए इस प्रणाली में मूल्यांकन किया जा सकता है10. इसके अतिरिक्त, विशिष्ट सेल लाइन का मूल्यांकन किया जा रहा पहचान करने के लिए जो अभिकर्मकों सेल चयापचय गतिविधि को बढ़ावा देने के लिए उपयोग करने के लिए इष्टतम है मदद मिलेगी । सेल माइग्रेशन को कैसे ट्रैक किया जाएगा/ एक थाली या फ्लास्क के भीतर सेल माइग्रेशन का निरीक्षण करने के लिए उपयोग की जाने वाली कई तकनीकें हैं । उदाहरण के लिए, रंगाई या प्रतिदीप्ति कोशिकाओं को ट्रैक करने के लिए और प्रतिदीप्ति या संनाभि इमेजिंग का उपयोग करने के लिए एक मजबूत विपरीत प्रदान करता है, जो जांचकर्ता स्पष्ट रूप से सेलुलर बनाम गैर सेलुलर स्थानों और सेलुलर आंदोलन को परिभाषित करने की अनुमति देता है11 . एक अंय आम तकनीक, इस अध्ययन में वर्णित है, विपरीत चरण6,7के साथ उल्टे प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग है । सेल रंगों और प्रतिदीप्ति के लिए इस विकल्प के लिए उपयोगकर्ता को समाप्त करने की अनुमति देता है बिना ट्रैक कोशिकाओं को जीवित करने के लिए पहले से कोशिकाओं को ठीक करने के लिए इमेजिंग और भी एक ही व्यक्ति की छवियों पर कब्जा करने के लिए अनुमति देता है कुओं के घायल monolayers युक्त समय अंक में कोशिकाओं । विश्लेषण के लिए क्या परिणाम उपायों का उपयोग किया जाएगा? अध्ययन के दौरान इकट्ठे किए गए चित्रों का उपयोग करके डेटा जेनरेट किया जा सकता है जिसमें सेलुलर माइग्रेशन दरों में परिवर्तन को समझा जा सकता है । हमारी प्रयोगशाला में, सूक्ष्म छवियों पर कब्जा कर लिया उल्टे प्रकाश माइक्रोस्कोप छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर और प्रतिशत घाव बंद करने और अभिव्यक्त किया क्षेत्र वक्र (auc) के तहत गणना कर रहे हैं करने के लिए अपलोड कर रहे हैं ।
हम इस परख के विशिष्ट उपयोग को उजागर करने के लिए एक ज्ञात पर्यावरण contaminant, आर्सेनिक की उपस्थिति में त्वचीय फाइब्रोब्लास्ट प्रवास को स्पष्ट करना होगा । आर्सेनिक पृथ्वी की पपड़ी के भीतर पाया जाने वाला एक स्वाभाविक रूप से उत्पन्न होने वाला धातु-रूप है । विभिन्न स्थानों आर्सेनिक के ऊंचा स्तर के साथ पाया गया है, जो व्यक्तियों जो इन स्थानों के पास रहने के लिए एक जोखिम बन गया है. नतीजतन, खाद्य और जल स्रोतों में आर्सेनिक संदूषण का स्तर बढ़ गया है, जो व्यक्तियों के लिए आर्सेनिक के संपर्क में आने की संभावना बढ़ जाती है । पर्यावरण आर्सेनिक एक्सपोजर के ऊपर या यहां तक कि वर्तमान संयुक्त राज्य अमेरिका पर्यावरण संरक्षण एजेंसी (usepa) 10 पीपीबी के मैक्स contaminant स्तर (mcl) के नीचे मानव आबादी में दीर्घकालिक स्वास्थ्य परिणाम है दिखाया गया है (10 μg/ 13. हालांकि usepa इस mcl सेट है और इसे पीने की सीमा के लिए सुरक्षित समझा, आर्सेनिक सांद्रता कि इस सीमा से अधिक दुनिया भर में पानी के स्रोतों में असामांय नहीं हैं । पश्चिमी संयुक्त राज्य अमेरिका में, कई भू-जल, अच्छी तरह से पानी, और स्प्रिंग्स आर्सेनिक14के विषय के स्तर को शामिल करने के लिए प्रलेखित किया गया है । उदाहरण के लिए, verde घाटी में, AZ, montezuma अच्छी तरह से आर्सेनिक15के २१० μg/ verde नदी के आसपास भूजल, AZ औसत पर आर्सेनिक के 16 μg/l शामिल हैं, पीक मूल्यों तक पहुंचने के साथ १.३ mg/l15,16. विशेष रूप से, verde नदी के पानी में कई कुओं में आर्सेनिक सांद्रता शेड से अधिक ५० μg/ इस ज्ञान के साथ, पर्यावरण की दृष्टि से प्रासंगिक आर्सेनिक सांद्रता का चयन किया गया है कि सीमा से नीचे mcl पर ०.१ μm (७.५ ppb), mcl के ऊपर करने के लिए 10 μm (७५० ppb) वर्तमान अध्ययन में14,15,16 , 17 , 18 , 19 , 20 .
इन प्रयोगों से एकत्रित जानकारी को सेलुलर माइग्रेशन दरों में संभावित परिवर्तनों के एक प्रारंभिक संकेतक के रूप में इस्तेमाल किया जाएगा, जिसमें वीवो घाव में आर्सेनिक के साथ प्रदूषित होता है । इसके बाद, सिग्नलिंग अणुओं को घाव भरने और सेलुलर माइग्रेशन को सुविधाजनक बनाने में उनकी भूमिका के आधार पर चुना जा सकता है, और वर्तमान के पूरा होने पर भविष्य मात्रात्मक पॉलीमलेस चेन रिएक्शन (qpcr) आधारित जीन अभिव्यक्ति प्रयोगों को स्थापित किया जा सकता है अध्ययन. यदि आर्सेनिक की उपस्थिति में इस परख परिवर्तन में माइग्रेशन दरें, सेलुलर प्रवास में शामिल विशिष्ट जीन लक्ष्य आर्सेनिक के हानिकारक प्रभावों के लिए लक्ष्य हो सकता है, और इस प्रकार व्यवधान की व्यवस्था हो सकती है ।
इस परख के आवेदन सेलुलर प्रवास के एक उच्च throughput और समय पर मूल्यांकन प्रदान करता है और सीधे जटिल शारीरिक प्रणालियों के लिए अनुवाद कर सकते है5,6,7। इस कारण से, प्रस्तावित बेंच-टॉप मॉडल को देखते हुए और घाव हीलिंग6पर विभिन्न चिकित्सीय एजेंटों और पर्यावरणीय विषाक्त पदार्थों के प्रभावों का मूल्यांकन करने के लिए अभ्यास किया गया है । वर्तमान अध्ययन में इस्तेमाल आर्सेनिक की सांद्रता ज्ञात जोखिम के स्तर की व्यापक साहित्य खोज के माध्यम से पर्यावरण की दृष्टि से प्रासंगिक समझा रहे थे, और विभिन्न डेटा ठिकानों की पूर्वव्यापी समीक्षा से14,15, 16,17,18,19,20,21. इस का उपयोग करें इन विट्रो खरोंच परख का प्रदर्शन किया है कि उच्च के भीतर एक आर्सेनिक एकाग्रता के लिए जोखिम, लेकिन पर्यावरण की दृष्टि से प्रासंगिक रेंज, घाव बंद करने में देरी (सेलुलर प्रवास) ।
इस बेंच शीर्ष मॉडल भी अलग करने के लिए नियोजित किया गया था और एक व्यक्तिगत सेल लाइन (रेशकोरक) का अध्ययन करने के लिए आगे कैसे रेशकोरक माइग्रेशन घाव भरने के परिणामों के लिए योगदान देता है समझने के लिए. इसके अलावा, कई अन्य कोशिकाओं और ऊतकों मौजूद है कि विश्लेषण के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं के साथ vivo प्रणालियों में जटिल में एक व्यक्तिगत सेल लाइन के कार्यों का अध्ययन करने के लिए मुश्किल है । इसके अतिरिक्त, परख अर्द्ध मात्रात्मक प्रतिशत घाव बंद करने के डेटा है कि विशिष्ट सेलुलर तंत्र के माध्यम से जो यौगिकों घाव भरने को प्रभावित कर सकते है लक्ष्य इस्तेमाल किया जा सकता है प्राप्त करने का एक साधन प्रदान करता है । उदाहरण के लिए, खरोंच परख में इस्तेमाल किया कोशिकाओं को एकत्र किया जा सकता है और एक वांछित अभिकर्मक में संग्रहीत और जीन अभिव्यक्ति में इस्तेमाल किया (संकेत mrna) या प्रोटीन अभिव्यक्ति22assays । यह जानकारी जांचकर्ता के लिए उपयोगी हो सकता है अगर वे समझने की क्या संकेतों या प्रोटीन मोटे तौर पर अलग उपचार (यानी, आर्सेनिक)22की उपस्थिति में सेलुलर प्रवास में परिवर्तन करने के लिए योगदान हो सकता है की तलाश कर सकते हैं ।
मानव नवजात त्वचीय फाइब्रोब्लास्टर्स को घाव भरने में उनकी प्रमुख भूमिका के आधार पर इस काम के लिए चुना गया था । हालांकि, इस खरोंच परख प्रोटोकॉल विभिंन प्रकार के सेल का उपयोग कर लागू किया गया है और अनुसंधान प्रयोजनों की एक सीमा के लिए । उदाहरण के लिए, खरोंच परख रसायन चिकित्सा दवाओं के प्रवासन निषेध का अध्ययन करने के लिए ऑन्कोलॉजी के क्षेत्र में अपनाया गया है23; कंकाल मांसपेशी सेल प्रवास, प्रसार, और प्रसार के लिए24; सेलुलर माइग्रेशन25पर संयंत्र निष्कर्षों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए; और समझने के लिए कैसे केराटिनोसाइट माइग्रेशन और प्रसार के लिए योगदान घाव हीलिंग9. इसके अतिरिक्त, pinto एट अल द्वारा एक पिछले कागज, यूरेनियम के प्रभाव का मूल्यांकन (यू) और प्लेटलेट रिच प्लाज्मा (prp) hdfn माइग्रेशन पर खरोंच परख6का उपयोग कर । इस काम का उद्देश्य हद तक जो इस परख एक एजेंट के प्रभाव का परीक्षण करने के लिए सेलुलर माइग्रेशन (यू) धीमा करने के लिए सोचा था, साथ ही एक एजेंट सेलुलर माइग्रेशन (पीआरपी) की गति के लिए सोचा था समझ गया था । के रूप में aforementioned काम और अंय जांचकर्ताओं द्वारा अनुसंधान में देखा जा सकता है, खरोंच परख के आवेदन विभिंन प्रायोगिक26मॉडलों में उपयोग के लिए उच्च क्षमता है । तरीकों के भीतर प्रदान की विस्तार के बावजूद, प्रसरण जांचकर्ताओं और प्रयोगों के बीच की उंमीद की जानी चाहिए । उदाहरण के लिए, सेलुलर प्रवास दरों की संभावना अद्वितीय सेल प्रकार के लिए आवश्यक माइक्रोंयूट्रेंट्स के अलावा, उपयोग में सेल लाइन के आधार पर उतार चढ़ाव होगा । सेल उपज और व्यवहार्यता में सहायता करने के लिए महत्वपूर्ण टिप्पणियों के कई इस प्रोटोकॉल के दौरान नोटों के रूप में सूचीबद्ध हैं । हालांकि, यह पुरजोर अनुशंसित है कि जांचकर्ताओं इष्टतम वृद्धि शर्तों के लिए निर्माता की सिफारिशों का पालन करें, और सामांय सेल कल्चर कार्य के लिए अनुपूरक अनुदेश के रूप में इस पद्धति का उपयोग करें ।
हालांकि खरोंच परख सेलुलर गतिविधि के अध्ययन के लिए अत्यंत बहुमुखी है; अप्रत्याशित पूर्वाग्रहों की तकनीक मापने में उत्पन्न हो सकती है । उदाहरण के लिए, imagej का उपयोग करते समय मैंयुअल रूप से कक्ष माइग्रेशन मोर्चों का पता लगाने के लिए, भिन्नता उपयोगकर्ताओं के बीच मौजूद हो सकती है, जो सटीकता और प्रतिनिधि डेटा संग्रह को सीमित कर सकते हैं. यह भी ध्यान दिया जाना चाहिए कि माइग्रेशन मोर्चों उपयोगकर्ता पूर्वाग्रह को कम करने के लिए इलाज के लिए अंधा पढ़ा जाना चाहिए. इसके अलावा, मैन्युअल रूप से माइग्रेशन मोर्चों की पहचान करने के परिणामस्वरूप कोशिकाओं द्वारा स्यूटोपॉड गठन के कारण यात्रा की औसत दूरी की गलत गणना हो सकती है और फोकल आसंजन बनाने के लिए बाहर पहुंचने की उनकी क्षमता है, जो नेत्रहीन भ्रामक हो सकते हैं । तरह में, फ्लोरोसेंट सेल ट्रैकर का उपयोग “सेल सतह या परमाणु प्रोटीन का पता लगाने के लिए प्रवास पर रंजक अनजाने में समय के साथ सेलुलर प्रवास को मापने जब inaccuracies में जिसके परिणामस्वरूप कोशिकाओं को ठीक कर सकते हैं । यह अनुशंसित है कि उपयुक्त धनात्मक और/या ऋणात्मक नियंत्रणों को कक्ष रेखाओं पर उपचार के प्रभाव को पूरी तरह से गधों में प्रयोग के भीतर नामांकित किया जाए । इस परख का अभ्यास अपनी सीमाओं की मांयता में पूरा किया जाना चाहिए । इस परख गारंटी नहीं है कि सेलुलर प्रवास के परिणाम में विट्रो प्रयोग से प्राप्त सीधे vivo परिणामों में अनुवाद करेंगे। एक जटिल जीवन प्रणाली में घाव भरने और सेलुलर प्रवास में सेल प्रकार और आणविक संकेतों की एक भीड़ शामिल है; जिनमें से प्रत्येक के लिए चिकित्सा प्रतिक्रियाओं को प्रभावित करने की क्षमता है ।
संक्षेप में, खरोंच परख को बदलने के वातावरण6,25के जवाब में सेलुलर प्रवास के उच्च throughput स्क्रीनिंग प्रदान पाया गया है । हम विशेष रूप से सफलतापूर्वक विभिन्न पर्यावरण की दृष्टि से प्रासंगिक खुराक पर आर्सेनिक जोखिम का एक परिणाम के रूप में सेलुलर प्रवास में परिवर्तन का पता लगाने के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग किया. इन आंकड़ों के लिए खरोंच परख का उपयोग करने के लिए आगे अध्ययन और इस परख में सेलुलर प्रवास के यंत्रवादी रास्ते का मूल्यांकन और कैसे इन रास्ते आर्सेनिक एक्सपोजर द्वारा बदल रहे है औचित्य प्रदान की है ।
The authors have nothing to disclose.
इस प्रकाशन में अनुसंधान की रिपोर्ट राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के अल्पसंख्यक स्वास्थ्य और स्वास्थ्य के अपार्टीज पर नेशनल इंस्टीट्यूट द्वारा पुरस्कार संख्या U54MD012388 के तहत समर्थन किया गया था । सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिंमेदारी है और जरूरी नहीं कि स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करते हैं ।
Class II A/B3 Biological Safety Cabinet | Forma Scientific | 15201-816 | |
Nitrile Gloves | Kimberly-Clark | 55082 | |
Water Bath | Precision | Model 182 | |
Inverted Microscope | Leica | Q080318 | |
CPR Centrifuge | Beckman | 349702 | |
Analytical Scale | Ohaus | I093 1125062111P | |
Weighting paper | VWR | H351125781212A | |
Biohazard bags | Fisherbran | 01-830A | |
Water Jacketed CO2 Incubator | Thermo Scientific | 309739-31053 | |
Hanks Balanced Salt Solution | Gibco | 14175-095 | |
Dulbecco's Modified Eagle Medium | Gibco | 10566-016 | |
Fetal Bovine Serum | Gibco | 26140-079 | |
Automatic Pipettor | Drummond | 140685 | |
p200 Pipette | Gilson | ||
p20 Pipette | Gilson | ||
Denominator | Fisher Scientific | D59707 | |
Trypan Blue Stain | Gibco | 15250-061 | |
T75 tissue flask | Corning | 430725U | |
15 mL Conical Tube | Fisherbrand | 05-539-5 | |
50 mL Conical Tube | VWR | 21008-178 | |
5 mL Pipette | Fisherbrand | 13-678-11D | |
10 mL Pipette | Fisherbrand | 13-678-11E | |
Tissue Marker | Securline | 92167 | |
Wipes | Kintech | 34155 | |
70% Ethanol | Fisher | 63-67-0 | |
Non-Filter Pipet Tips | Fisherbrand | 16160210 | |
Bleach | Great Value | 220-04 | |
96-well | Falcon | 353915 | |
Cryovial Rack | Nalgene | 5030-0505 | |
Hemacytometer | Gizmo Supply | B00SCOGY56 | |
TrypLE Express | Gibco | 12605-028 | |
Conical Tube Rack | n/a | n/a | |
12-well plate | Corning | 3598 | |
Waste Beaker | n/a | n/a | |
1 mL Pipette | Fisherbrand | 13-678-11B | |
Straight Edge Ruler | n/a | n/a | |
Human neonatal dermal fibroblasts (hDFn) | lot: 1734, 2902 | 106-05n | |
Rstudio Statistical Software | ver: 3.5.1 | ||
Image J | NIH | ver: 1.8.0_112 |