Isolamento, purificazione e differenziazione dei precursori dell'osteoclast dal midollo osseo del ratto

Lining Wang; Suyang Zheng; Yang Guo; Yalan Pan; Jie Sun; Weimin Xu; Jinlan Lu; Weidong Li; Yong Ma

doi:10.3791/58895

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Articolo metodologico

Isolamento, purificazione e differenziazione dei precursori dell'osteoclast dal midollo osseo del ratto

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DOI:

10.3791/58895

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19 maggio 2019

Lining Wang¹^,² , Suyang Zheng¹^,² , Yang Guo¹^,² , Yalan Pan¹^,² , Jie Sun¹^,² , Weimin Xu¹^,² , Jinlan Lu³ , Weidong Li³ , Yong Ma¹^,²^,⁴

¹Laboratory of New Techniques of Restoration & Reconstruction, Institute of Traumatology & Orthopedics, Nanjing University of Chinese Medicine, ²TCM Nursing Intervention Laboratory of Chronic Disease Key Laboratory, Nanjing University of Chinese Medicine, ³Jiangsu Key Laboratory of Chinese Medicine Processing, Engineering Center of State Ministry of Education for Standardization of Chinese Medicine Processing, Nanjing University of Chinese Medicine, ⁴Department of Traumatology and Orthopedics, Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine

In questo articolo

Sommario

Gli osteoclasti sono polykaryons di macrofage specifici del tessuto derivato dal lignaggio dei monociti-macrofage delle cellule staminali ematopoietiche. Questo protocollo descrive come isolare le cellule del midollo osseo in modo da ottenere grandi quantità di osteoclasti riducendo il rischio di incidenti riscontrati nei metodi tradizionali.

Abstract

Gli osteoclasti sono cellule grandi, multinucleate e di riassorbimento osseo del lignaggio dei monociti-macrofage che sono formate dalla fusione di monociti o precursori di macrofage. Un eccessivo riassorbimento osseo è uno dei meccanismi cellulari più significativi che portano a malattie osteolitiche, tra cui l'osteoporosi, la parodontite e l'osteolisi periprotesica. La principale funzione fisiologica degli osteoclasti è quella di assorbire sia la componente minerale di idrossiapatite che la matrice organica dell'osso, generando l'aspetto caratteristico del riassorbimento sulla superficie delle ossa. Ci sono relativamente pochi osteoclasti rispetto ad altre cellule del corpo, soprattutto nelle ossa adulte. Studi recenti si sono concentrati su come ottenere osteoclasti più maturi in meno tempo, che è sempre stato un problema. Diversi miglioramenti nelle tecniche di isolamento e cultura si sono sviluppati nei laboratori al fine di ottenere osteoclasti più maturi. Qui, introduciamo un metodo che isola il midollo osseo in meno tempo e con meno sforzo rispetto alla procedura tradizionale, utilizzando un dispositivo speciale e semplice. Con l'uso di centrifugazione a gradiente di densità, otteniamo grandi quantità di osteoclasti completamente differenziati dal midollo osseo del ratto, che sono identificati con metodi classici.

Introduzione

L'omeostasi ossea è un processo fisiologico complesso che è regolato da osteoclasti di riassorbimento osseo e osteoblast che formano ossa¹. Un equilibrio tra attività osteoblastica e osteoclastica mediata attraverso osteoblasti e osteoclasti, rispettivamente, è altamente essenziale per mantenere la salute ossea e l'omeostasi, perché le perturbazioni nell'omeostasi ossea possono portare a malattie ossee, come come crescita ossea anormale o perdita di densità ossea. Come cellule di riassorbimento osseo uniche, gli osteoclasti sono importanti nelle malattie legate alla distruzione ossea anormale, tra cui l'osteoporosi, la parodontite e l'osteolisi....