Her presenterer vi en protokoll for å skape en immunkompetente ICR (Institute of Cancer Research) murine modell av sentralnervesystemet infeksjon for å vise utviklingen av nevropati. Overvåking av akutte virus encephalitic lidelser med identiske sykdoms resultater kan utføres for å vise Dengue virus induserte nevropati i vivo.
Dengue virus (DENV), en arthropod-borne virus overføres av mygg, kan føre til alvorlig sykdom kjent som Dengue hemoragisk feber, som er preget av dødelige komplikasjoner på grunn av plasma lekkasje, ascites, pleural effusjon, åndedretts nød, alvorlig blødning, og organ verdifall. Noen få tilfeller av DENV infeksjon presentere nevrologiske manifestasjoner; studier har imidlertid ikke utforsket DENV-indusert neuropathogenesis videre. I denne studien presenterer vi en protokoll for å bruke en immunkompetente outbred ICR (Institute of Cancer Research) musen for å undersøke induksjon av sentralnervesystemet (CNS) infeksjon med DENV, etterfulgt av progresjon av akutte viral encefalitt-lignende Sykdom.
DENV, en arthropod-båret virus av hvilken familien, inneholder en positiv-Sense RNA Genova som koder tre viral strukturelle proteiner (kapsid, premembrane og konvolutt) og syv viral nonstructural PROTEINER (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B og NS5). De fire serotypene av DENV (DENV1-4), som infisere ca 390 000 000 mennesker årlig, føre til en global byrde, selv om regjeringene har rettet betydelig innsats mot mygg vektor og sykdom kontroll1. For tiden, beskyttende vaksiner og terapeutiske antivirale medikamenter er under utvikling og krever ytterligere langsiktig validering2. I klinisk praksis, selv om en Dengue pasient med CNS-infeksjon er sjelden, må den undersøkes ytterligere for å forstå mangfoldet av Dengue sykdomsutvikling3. Videre etterforskning og validering er nødvendig; spesielt, verdenshelseorganisasjon (WHO) har inkludert involvering av CNS verdifall, slik som kognitiv svekkelse, kramper, encefalopati, og encefalitt, i klassifiseringen av alvorlig Dengue3,4. Konstruere dyremodeller av DENV infeksjon er uunnværlig for å utforske neuropathogenesis av DENV infeksjon.
For å generere CNS infeksjon av DENV, flere studier har utført ulike ruter av DENV infeksjon, inkludert (1) intracerebrale inoculation av C57BL/6 mus som fikk 4 x 103 plakk-forming enheter (PFU) av nonadapted DENV35, 6, (2) intraperitoneal INOCULATION av BALB/c mus som fikk 7 x 104 PFU av in vitro neuroadapted DENV47, (3) intracerebrale inoculation av sveitsiske mus som fikk 1 x 105 PFU av in vivo neuroadapted DENV18, og (4) intracerebrale og intraperitoneal co-inoculation av ICR patte mus som fikk 1 x 106 PFU av nonadapted DENV29. Ifølge resultatene av disse studiene5,6, 7,8,9, DENV infeksjon i mus resultere i viral replikering i hjernen, fører til akutt viral encefalitt-lignende syndromer, atferdsendringer ledsaget av lem lammelse og postural ustabilitet, CNS nevrotoksisitet og betennelser, generelt og lokaliserte plasma lekkasje gjennom blod-hjerne barriere (BBB), og dødelighet. Alle resultatene fra disse studiene5,6,7,8,9 har vist evne til DENV å infisere CNS og induksjon av akutt viral encefalitt-lignende sykdom etter infeksjon.
Basert på våre nåværende funn9,10,11,12,13,14,15, har vi laget en murine modell av DENV infeksjon som en in vivo plattform for å undersøke terapeutisk effekt av målrettede agenter/faktorer mot viral replikering, samt nevrotoksisitet. Her rapporterer vi protokollen benyttet for å skape en immunkompetente outbred ICR mus for å studere CNS infeksjon og for å overvåke utviklingen av nevropatier med ulike alvorlighetsgradene forårsaket av DENV. Resultatene viser den betydelige utviklingen av encefalitt sykdom i DENV-infiserte mus på en tidsavhengig måte.
DENV infeksjon har blitt påvist i CNS av alvorlig Dengue pasienter3,17, antyder muligheten for manifestasjon av akutte viral encefalitt oppstod under Dengue patogenesen. Her rapporterer vi en in vivo murine modell av DENV infeksjon for å studere involvering av CNS dysfunksjon i alvorlig Dengue, spesielt med fokus på DENV-indusert akutt viral encefalitt-lignende sykdommer. Sammenlignet med tidligere modeller, spesielt for en-rute infeksjon (intravenøs bare, in…
The authors have nothing to disclose.
Denne studien ble støttet av tilskudd fra departementet for vitenskap og teknologi (MOST107-2321-B-038-001) og intramural finansiering 106TMU-CIT-01-2, Taipei, Taiwan.
Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI) | Gibco | 11875-085 | Diluting virus |
0.3-mL Insulin Syringe | BD Ultra-FineII | 328838 | Intracerebral and intraperitoneal injection |
Microbalance | METTLER TOLEDO's LabX | AL104 | Weight mouse |
Non-adapted DENV2 (strain PL046) | The Centers for Disease Control of Taiwan | – | Infect mouse |
Institute of Cancer Research (ICR) suckling mouse | BioLASCO Taiwan Co., Ltd | – | Our murine model |