Summary
وتفيد هذه الدراسة أخذ عينات الدم من الوريد الذيل في الفئران باستخدام نظام أنبوب استخراج بالمحجم مع النظارات المكبر. لدينا طريقة سهلة للممارسة ويمكن استخدامها لأخذ عينات من الدم تكرار في الفئران.
Abstract
جمع عينات الدم هو الأساس لأبحاث الحيوانات التجريبية. أنها ذات أهمية للحصول على عينات الدم كافية لأغراض بحثية مختلفة. عروق ذيل الفئران الصغيرة، ومن الصعب في بعض الأحيان الحصول على حجم الدم المطلوب بالطرق التقليدية ثقب. وتحقق هذه الدراسة تفوق جمع عينة الدم المتكررة من عروق الذيل من الفئران من خلال استخدام الدم فراغ جمع النظام والنظارات المكبر (المجموعة التجريبية) مقارنة بأساليب أخذ عينات الدم التقليدية (المجموعة التقليدية) ، يؤديها المبتدئين والخبراء، على التوالي. مع المساعدة من النظارات المكبر، يتم إدراج تلميح إبرة فراشة في هذا السياق الذيل من كل الماوس في المجموعة التجريبية. عندما هو اخترق الوريد بنجاح، يتم جمع عينة دم في أنبوب جمع الفراغ بالإدراج من المطاط نهاية إبرة فراشة في أنبوب جمع الدم فراغ. ثم يتم استخدام المكبس لجمع الدم دون مساعدة المكبر النظارات في المجموعة التقليدية. كانت تبين معدلات نجاح جمع عينات دم من المبتدئين والخبراء أن 70% مقابل 100% (ف < 0.01) في المجموعة التجريبية و 35% مقابل 85% (ف < 0.01) في المجموعة التقليدية. للمبتدئين والخبراء على حد سواء، ثقب الأوقات اللازمة للحصول على عينة الدم المطلوبة كانت أقل بكثير في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة التقليدية (2.40 ± 0.75 مقابل 2.90 ± 0.31، ف < 0.05؛ 1.15 ± 0.37 مقابل 1.55 ± 0.76، ف < 0.05). وفي الختام، تقنية أخذ عينات الدم قدم ممكنة وسهلة لممارسة وتمكن المتكررة لأخذ العينات من كميات الدم المناسبة من الفئران غير تخديره.
Introduction
أخذ عينات من الدم من الحيوانات المشاركة في التجارب أسلوب بحوث أساسية. وهناك بعض التقنيات المتاحة لجمع الدم من الفئران، بما في ذلك الذيل القصاصات وثقب في القلب، والضفيرة الرجعية-المداري، حبل الوريد، والذيلية الوريد والوريد الأجوف. ومن الناحية المثالية، ينبغي جمع الدم بطريقة كسبها، مع الحد الأدنى من التأثير على صحة الحيوان. ومع ذلك، التقنيات الأكثر استخداماً كثيرا ما تسبب الإجهاد عند الحيوانات ويمكن أن تؤثر على نتائج البحث1. جمع الدم من الضفيرة الرجعية-المداري يمكن استخدامها للحصول على ما يكفي من حجم الدم من الفئران2. ومع ذلك، يمكن أن يسفر عن تلف الأنسجة شديدة ولا تسمح بالحصول على الدم مرارا وتكرارا في فترات زمنية قصيرة3.
وعلى المنوال والذيلية هو موقع متفوقة لجمع الدم، مما يلحق الضرر الحد الأدنى لدى الفئران. ومع ذلك، عروق ذيل الفئران رقيقة، ومن الصعب في بعض الأحيان للحصول على ما يكفي من الدم من خلال تقنية ثقب التقليدية. وفي بعض الحالات، تلزم ثقوب المتكررة للحصول على حجم الدم المطلوب. كما يشيع ينصح التخدير تيسيرا لأخذ عينات من الدم من عروق ذيل الفئران. وعلاوة على ذلك، قد يلزم المبضع، والحلاقة حافة مستقيمة، أو مقص حاد لإزالة نهايات ذيول للحصول على عينات الدم المطلوبة4. سبق أبلغنا جمع الدم ناجحة من عروق ذيل الفئران غير فظاعتها بنظام جمع عينة الدم الفراغ، التي قللت من خطر تلوث الدم وتفادي الحاجة إلى تكرار ثقوب5. تفيد هذه الدراسة أسلوب جمع دم في الفئران تخديره من غير مشابهة.
Protocol
1-تربية
- استخدام الفئران كونمينغ 12 أسبوع من العمر.
ملاحظة: قمنا باستخدام الفئران (n = 40، 20 الذكور، ز 37 – 46، يعني ± 42.38 ز 2.39) من كلية مركز الحيوانات التجريبية في تونغجى الطبية. - بيت الفئران تحت الظروف القياسية مع حرية الوصول إلى الغذاء ومياه الشرب. الاحتفاظ بالفراش اثنين من الفئران في قفص2 سم 530 مع حلق الخشب.
- الحفاظ على درجة حرارة الغرفة بين 21 – 23 °C.
- تغذية الفئران مع اتباع نظام غذائي ملح عادي (0.3% كلوريد الصوديوم) طوال فترة الدراسة.
2. جمع عينات الدم
- إعداد المعدات التالية: حامل الزجري البلاستيك والمكبر النظارات، فراغ أنبوب (1 مل) وابرة الفراشة. وضعها على سطح عقيمة (الشكل 1).
- ضع ماوس في حامل زجري بلاستيك وتغسل ذيله بالماء الدافئ (20-30 درجةمئوية). مسح الذيل مع كرات القطن المشبعة الإيثانول 70% لتوسيع الوريد. حدد السياق ذيل الأيمن أو الأيسر لأخذ عينات من الدم. فهم الجزء السفلي من الذيل برفق وإبقاء الذيل مباشرة أثناء جمع عينات الدم.
- جمع الدم. إذا كانت المقارنة بين الأساليب، جمع الدم في مجموعتين: مجموعة "تجريبية" باستخدام الإجراء وقد وضعنا، الواردة أدناه، ومجموعة "التقليدية" باستخدام أسلوب التقليدي، كما تعرض أدناه.
- المجموعة التجريبية:
- ارتداء نظارات مكبر لتحسين العرض لثقب الوريد الذيل. إدراج تلميح إبرة الفراشة ز 22 في أحد الأوردة الذيل الأفقي في موقف حوالي نصف المسافة من الحافة ديستالي الذيل في ملاك حوالي 10°، تتحرك نحو قاعدة الذيل لعينات متعددة.
- إدراج نهاية إبرة الفراشة المطاط في أنبوب جمع الدم الفراغ لجمع الدم (الشكل 2).
ملاحظة: إذا توقف الدم يتدفق من خلال جمع الدم، زاوية الإبرة بسرعة تعدل. لتجنب تجلط الدم في الإبرة، يجب تحديد موضع ثقب آخر إذا كان الدم يتوقف تدفق الخروج بعد 15 ثانية.
- الطريقة التقليدية:
- أدخل إبرة متصلة بحقنه في أحد الأوردة الجانبية حوالي ثلث المسافة ديستالي من طرف الذيل.
- عند ظهور الدم في لوحة الوصل، سحب المكبس ببطء لجمع الدم (الشكل 3)7.
ملاحظة: لتوضيح آثار تجربة مختلفة مع جمع الدم، المبتدئين والخبراء قد اختير لجمع عينات الدم باستخدام الأساليب التجريبية والتقليدية في أن واحد.
- المجموعة التجريبية:
- بعد جمع الدم، وإزالة الإبرة واضغط النقطة ثقب لوقف النزيف. ثم حرر زر الماوس من صاحب الزجري البلاستيك والعودة الماوس إلى قفصة.
ملاحظة: قد أفيد أنه يصل إلى 10% من مجموع الدم حجم يمكن بأمان إزالة من حيوان صحية في فترات الأسبوع 28، جمعت حتى حوالي 175 ميليلتر من الدم كل مرة وفقا للمبادئ الأخلاقية. - استخدام أنابيب مع أدتا إلى جمع البلازما واستخدام أنابيب دون مضادات التخثر لتجميع المصل. بلطف قلب الأنبوبة عدة مرات ووضعها على الجليد عمودياً.
- الطرد المركزي أنابيب جمع عينة الدم في أجهزة الطرد مركزي مبردة في 1,000 س ز لمدة 10 دقائق لفصل البلازما والمصل.
ملاحظة: يتم تعريف جمع الدم الناجحة كالحصول على كمية من 175 ميليلتر في كل مرة. ينبغي محاولة ثقوب لا يزيد عن ثلاثة، ومجموعة دم يعرف حجم دم إجمالي أقل من 175 ميليلتر بعد الثقب الثالث. فترة أخذ العينات يعرف الوقت من ثقب الوريد الذيل لإزالة الإبرة وبعد جمع الدم. - جمع الدم مرتين على فترات من 2 أسابيع8.
3. التحليل الإحصائي
- استخدام البرمجيات الإحصائية المتاحة تجارياً للتحليل. عرض البيانات كقيمة يعني ± الانحراف المعياري، باستخدام ف < 0.05 كقطع لدلالة إحصائية.
Representative Results
كتلة، الجسم الدم مجموعة وحدات التخزين، وفترات أخذ العينات من الفريقين
تم جمع عينات الدم من الفئران 20 (10 ذكور) مرتين على فترات الأسبوع 2 في كل مجموعة. كتلة الجسم يعني الفئران كانت مماثلة بين المجموعات التجريبية والتقليدية بالنسبة للمبتدئين والخبراء، على التوالي (± 42.40 ز ز 1.42 مقابل ± 42.65 ز ز 1.14, p > 0.05; ± 42.55 ز ز 2.91 مقابل ± 43.20 ز ز 2.69, p > 0.05). كميات الدم التي تم جمعها والمدد عينات متشابهة بين المجموعتين في الخبراء (184.25 ميليلتر ± 11.95 ميليلتر مقابل 171.75 ميليلتر ± 25.61 ميليلتر، p > 0.05؛ مين 1.85 ± دقيقة 0.68 مقابل 2.17 دقيقة ± 0.80 دقيقة, p > 0.05). ومع ذلك، اعتبرت أعلى كميات الدم التي تم جمعها وأقصر فترات أخذ العينات في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة التقليدية في المبتدئين (172.00 ميليلتر ± 15.17 ميليلتر مقابل 148.50 ميليلتر ± 30.22 ميليلتر، ف < 0.01؛ ± دقيقة 3.11 دقيقة 0.44 مقابل 4.08 دقيقة ± 0.61 دقيقة، ف < 0.01). مقارنة للمبتدئين، الخبراء التي جمعت أعلى حجم الدم وأظهرت العينة أقل مرات باستخدام الأساليب التجريبية والتقليدية (184.25 ميليلتر ± 11.95 ميليلتر مقابل 172.00 ميليلتر ± 15.17 ميليلتر، ف < 0.01 171.75 ميليلتر ± 25.61 ميليلتر مقابل 148.50 ميليلتر ± 30.22 ميليلتر، ف < 0.05; ± دقيقة 1.85 0.68 دقيقة مقابل 3.11 دقيقة ± 0.44 دقيقة، ف < 0.01؛ 2.17 دقيقة ± دقيقة 0.80 مقابل 4.08 دقيقة ± 0.61 دقيقة، ف < 0.05) (الجدول 1).
معدلات النجاح وأوقات ثقب الفريقين
مقارنة معدلات النجاح بين المبتدئين والخبراء كان 70% (14/20) مقابل 100% (20/20) (ف < 0.01) في المجموعة التجريبية و 35% (7/20) مقابل 85 في المائة (17/20) (ف < 0.01) في المجموعة التقليدية. وشوهدت أيضا أعلى معدلات النجاح في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة التقليدية في المبتدئين [70% (14/20) مقابل 35% (7/20)، ف < 0.05]. وكان العدد ثقوب في المبتدئين والخبراء على حد سواء، أقل بكثير في المجموعة التجريبية مقارنة بالمجموعة التقليدية (2.40 ± 0.75 مقابل 2.90 ± 0.31، ف < 0.05؛ 1.15 ± 0.37 مقابل 1.55 ± 0.76، ف < 0.05). مقارنة للمبتدئين، لوحظت مرات الثقب السفلي للخبراء في استخدام الأساليب التجريبية والتقليدية. (1.15 ± 0.37 مقابل 2.40 ± 0.75، ف < 0.01؛ 1.55 ± 0.76 مقابل 2.90 ± 0.31، ف < 0.01) (الجدول 1).
رقم 1: المعدات. يظهر هي أنابيب جمع الدم فراغ 1 مل وابرة فراشة ز 22 (يسار)، ونظارات 'المكبر' (الأوسط) وحامل زجري بلاستيك (يمين). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: جمع الدم ناجحة في المجموعة التجريبية- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: جمع الدم ناجحة في المجموعة التقليدية- الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
| المجموعة التجريبية | المجموعة التقليدية | |||
| مبتدئ | الخبراء | مبتدئ | الخبراء | |
| كتلة الجسم (ز) | 42.4±1.42 | 42.55±2.91 | 42.65±1.14 | 43.20±2.69 |
| حجم الدم التي تم جمعها (ميليلتر) | 172.00±15.17 | 184.25±11.95# | 148.50±30.22* | 171.75±25.61# |
| أخذ العينات المدة (دقيقة) | 3.11±0.44 | 1.85±0.68# | 4.08±0.61* | 2.17±0.80# |
| أوقات جمع الدم | 20 | 20 | 20 | 20 |
| عدد متوسط من ثقوب | 2.40±0.75 | 1.15±0.37# | 2.90±0.31* | 1.55±0.76# # * |
| ثقب مرة واحدة | 3 | 17 | 0 | 12 |
| ثقب مرتين | 6 | 3 | 2 | 5 |
| ثقب ثلاث مرات | 5 | 0 | 5 | 0 |
| فشل | 6 | 0 | 13 | 3 |
| معدل النجاح | 70 في المائة | 100%# | 35%* | 85%# |
الجدول 1: مقارنة النتائج بين المجموعات التجريبية والتقليدية- * ف < 0.05، * * ف < 0.01، الأسلوب التجريبي مقابل الطريقة التقليدية. #p < 0.05، 0.01 ##p <، مبتدئاً مقابل الخبير.
Discussion
تصف هذه الدراسة أسلوب جمع دم سهلة لتعلم في الفئران التي تتفوق على التقنيات التقليدية. أولاً، يمكن بسهولة يتقن الأسلوب مع نسبة نجاح عالية. ثانيا، فإنه يرتكز على مبدأ الضغط السلبي فراغ ويسمح للرسم المستمر للدم مع انخفاض مخاطر التعرض للدم مباشرة، مما يقلل أيضا من فرصة ل التلوث وانحلال الدم9. ثالثا، أن هذا الأسلوب عمليا لعينات متكررة للدم بكميات كافية من الفئران خلال فترة قصيرة من الزمن لأغراض بحثية مختلفة. وعلاوة على ذلك، الإجراء الذي ينجم عنه سوى الحد الأدنى الإصابة لدى الفئران، وجمع الدم يمكن القيام بها دون استخدام المسكنات؛ وهكذا، يمكن تجنب تأثير إجهاد استجابة والمسكنات في عينات الدم.
وعلى المنوال الذيل موقع متفوقة لأخذ عينات من الدم وفقا للبروتوكول المعتمد7. ومع ذلك، ليس دائماً من السهل الحصول على حجم كاف من الدم من الأوردة الذيل رقيقة مع تدفق الدم منخفضة. في هذه الحالة، يتم قطع الجلد عادة مفتوحة والمنطلق هو اخترق بها مجلة لانسيت، أو نهاية الذيل هو إزالتها بسرعة بالشفرة.
يهدف هذا البروتوكول إلى تحسين منهجية جمع الدم من الفئران باستخدام نظام جمع الدم الفراغ، الأمر الذي يتطلب من أنبوب جمع عينة الدم فراغ وابرة الفراشة والنظارات المكبر. عادة ما يستخدم هذا النظام أخذ عينات الدم الفراغ لجمع عينات الدم من المرضى في الممارسة السريرية اليومية10. مع المساعدة من النظارات المكبر، نقطة الكمال ثقب الوريد الذيل أسهل لتحديد موقع. عندما يتم إدراج غيض من إبرة في الوريد الذيل، سيتم تلقائياً تدفق الدم في أنبوب الفراغ نتيجة للضغوط السلبية. بعد سحب الإبرة من الوريد الذيل، سوف يتدفق الدم الذي تم حظره في القسطرة إلى أنبوب جمع بسبب الفراغ.
النصائح التالية هامة لنجاح تطبيق الأسلوب. أولاً، ينبغي أن يكون وزن الجسم كل الماوس ز 40 أو أعلى لتقليل صعوبة في ثقب والحصول على ما يكفي من الدم. ثانيا، في حالة جمع الدم الفاشلة، يجب محاولة المجربون لسحب الإبرة ببطء حتى الدم لا تزال تتدفق. ثالثا، من الضروري توسيع الذيل لتجنب أي حركة أثناء أخذ عينات من الدم. عقد الإبرة برفق يمكن أن تساعد على إبقاء نصيحة إبرة في الوريد كالتحركات ذيل الماوس. رابعا، إذا توقف الدم يتدفق من خلال جمع الدم، ينبغي تعديل زاوية إبرة في الوقت مناسب. تفاديا تخثر الدم في الإبرة، يجب تحديد موضع ثقب آخر إذا كان الدم يتوقف تدفق الخروج بعد 15 ثانية. وأخيراً، يوصي بتعاون الشركتين أثناء استخدام هذه التقنية لجمع الدم من الفئران.
باختصار، أسلوب جمع الدم فراغ المعتمدة للاستخدام في الفئران آمنة ومجدية وسهلة للممارسة. يتيح هذا الأسلوب المتكرر لأخذ العينات من الدم بكميات كافية من الدم من الفئران تخديره من.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل بمنحه "مؤسسة علوم الطبيعة" من مقاطعة هوبي, الصين [رقم المنحة 2018CFB761].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
References
- Grouzmann, E., et al. Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice. European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).
- Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).
- Hoff, J. Methods of blood collection in the mouse. Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).
