Summary
Denne studien rapporterer blod utvalg fra halen blodåre i mus bruker vakuum utvinning rør system med øyeglasset Forstørrelsesprogram. Vår metode er lett å praksis og kan brukes for gjenta blod prøvetaking i mus.
Abstract
Eksempel blodgivning er grunnlaget for eksperimentell Forsøksdyrutvalget. Det er viktig å få tilstrekkelig blodprøver for ulike forskningsformål. Hale venene mus er små, og det er noen ganger vanskelig å få den nødvendige blodvolum konvensjonelle punktering metoder. Denne studien undersøker overlegenhet gjentatte blod prøvetaking fra halen årer av musene gjennom bruk av et vakuum blod samling system og øyeglasset forstørrelsesglass (forsøksgruppen) sammenlignet med konvensjonelle blod Prøvetaking metoder (konvensjonelle gruppe) , utført av nybegynnere og eksperter, henholdsvis. Med hjelp av en øyeglasset forstørrelsesglass settes en sommerfugl pinne-spissen i halen venen hver mus i forsøksgruppen. Når venen er gjennomsyret med hell, samles det en blodprøve i vakuum samling røret ved innsetting av gummi slutten av en sommerfugl nål inn i vakuum blod samling røret. Stempelet brukes deretter til å samle blod uten hjelp av øyeglasset forstørrelsesglasset i den konvensjonelle gruppen. Suksessrate av blod eksemplar innsamling av kollekt av nybegynnere og eksperter ble vist å være 70% vs 100% (p < 0,01) i forsøksgruppen og 35% vs 85% (p < 0,01) i konvensjonelle gruppen. For både nybegynnere og eksperter var punktering ganger kreves for å oppnå nødvendig blodprøve betydelig lavere i forsøksgruppen forhold til den konvensjonelle gruppen (2.40 ± 0,75 vs 2,90 ± 0.31, p < 0,05, 1,15 ± 0,37 vs 1.55 ± 0.76, p < 0,05). Avslutningsvis presentert blod prøvetaking teknikken er mulig og lett å praksis og gir hyppige utvalg av tilstrekkelig blod volumer fra ikke-anesthetized mus.
Introduction
Blodprøve er fra dyr involvert i eksperimenter en grunnleggende forskningsteknikk. Det er noen tilgjengelige teknikker for blod samling fra mus, inkludert halen klipp og punktering av hjertet, retro-orbital plexus, vena jugularis, caudal vene og vena cava. Ideelt sett bør blod samles i en minimalt invasiv måte, med minimal innvirkning på dyrets helse. Men den mest brukte teknikker ofte stress påføre dyr og kan påvirke forskning resultater1. Blod samling fra retro-orbital plexus kan brukes til å få nok blodvolum fra mus2. Men det kan føre til alvorlig vevsskade og tillater ikke å få blodet gjentatte ganger i kort tid intervaller3.
Caudal venen er en overlegen plassering for blod samling, som påfører minimal skade på mus. Imidlertid hale venene mus er tynne, og noen ganger er det vanskelig å få nok blod gjennom konvensjonelle punktering teknikken. I noen tilfeller må gjentatte punkteringer få ønsket blod volumet. Anestesi er også ofte anbefalt å lette blod utvalg fra halen årer av mus. Videre kan en skalpell, rette kant razor eller skarp saks være nødvendig å fjerne endene av mynt å få den nødvendige blod prøver4. Vi har tidligere rapportert vellykket blod samling fra halen årer av ikke-anaesthetized rotter av vakuum blod prøve samling systemet, som redusert risikoen for blod forurensning og unngås behovet for gjentatt punkteringer5. Denne studien rapporterer en lignende blod samling metoden i ikke-anesthetized mus.
Protocol
1. dyrehold
- Bruk 12 uker gammel Kunming mus.
Merk: Vi brukte mus (n = 40, 20 menn, 37 – 46 g, mener 42.38 ± 2.39 g) fra Experimental dyr Center for Tongji medisinsk College. - Huset musene under standard betingelser med fri tilgang til mat og drikkevann. Holde to mus i 530 cm2 bur med tre barbering sengetøy.
- Opprettholde en romtemperatur mellom 21-23 °C.
- Feed mus med en vanlig salt diett (0,3% NaCl) gjennom hele studiet.
2. blod prøvetaking
- Klargjør følgende utstyr: vakuumrør (1 mL), butterfly nål, øyeglasset Forstørrelsesprogram og plast begrensende holderen. Plass dem på en steril overflate (figur 1).
- Plasser musen i en plast begrensende holder og vask halen med varmt vann (20-30 °C). Tørk halen med 70% etanol-mettet bomull baller å utvide venen. Velg høyre eller venstre hale venen for blodprøve. Hold den nedre delen av halen forsiktig og holde halen rett under blod prøvetaking.
- Samle blod. Hvis sammenligne metoder, samle blod i to grupper: "eksperimentelle" grupper ved hjelp av prosedyren har vi utviklet, nedenfor, og "vanlige" gruppe ved hjelp av en vanlig metode, også presentert nedenfor.
- Eksperimentell samling:
- Bruk en øyeglasset forstørrelsesglass for å forbedre visningen for punktering av halen venen. Sett inn 22 G sommerfugl pinne-spissen i en av lateral hale på en posisjon omtrent halve avstanden distally fra spissen av halen på en engel ca 10°, flytte mot bunnen av halen for flere eksempler.
- Gummi slutten av sommerfugl nålen inn vakuum blod samling røret å samle blod (figur 2).
Merk: Hvis blodet slutter å strømme ut under blod samling, nål vinkelen bør raskt justeres. For å unngå blodpropp i nålen, punktering Stilgalleri bør velges hvis blodet slutter å strømme ut etter 15 s.
- Tradisjonell metoden:
- Sett inn nålen koblet til en sprøyte inn i en av lateral venene omtrent en tredjedel av avstanden distally fra spissen av halen.
- Når blodet vises i senteret, skyv stempelet sakte å samle blod (Figur 3)7.
Merk: For å ytterligere belyse effekten av varierende erfaring med blod samling, en nybegynner og ekspert var valgt å samle blodprøvene bruke eksperimentelle og konvensjonelle metoder samtidig.
- Eksperimentell samling:
- Etter blod samling, Fjern nålen og trykk punktering poenget å opphøre blø. Deretter slipper museknappen fra plast begrensende holderen og returnere musen til buret sitt.
Merk: Det har blitt rapportert at opp til 10% av total blod volum kan trygg fjernet fra en sunn dyr på 2 ukers mellomrom8, så ca 175 µL av blod ble samlet inn hver gang i samsvar med etiske prinsipper. - Bruke rør med EDTA samle plasma og bruke rør uten antikoagulanter samle serum. Forsiktig Inverter røret flere ganger og satte dem på is loddrett.
- Sentrifuge blod prøve samling rør i en nedkjølt sentrifuge 1000 x g i 10 min å skille plasma og serum.
Merk: Vellykket blod samling er definert som å få et volum på 175 µL hver gang. Mer enn tre punkteringer bør forsøkes, og en mislykket blod samling er definert som en total blodvolum til mindre enn 175 µL etter den tredje punktering. Prøvetaking varigheten er definert som tiden fra halen blodåre punktering til fjerning av nålen etter blod samling. - Samle blod to ganger i intervaller på to uker8.
3. statistisk analyse
- Bruke kommersielt tilgjengelige statistisk programvare for analyse. Presentere data som middelverdien ± standardavvik, bruker p < 0,05 som cut-off for statistisk betydning.
Representative Results
Kroppens masse, blod samling volumer og prøvetaking varigheten for de to gruppene
Blodprøver ble samlet fra 20 mus (10 menn) to ganger med 2 ukers mellomrom i hver gruppe. Gjennomsnittlig masse mus var likt mellom eksperimentelle og konvensjonelle gruppene for nybegynnere og eksperter, henholdsvis (42.40 g ± 1,42 g g. 42.65 g ± 1.14 g, p > 0,05, 42.55 g ± 2,91 g g. 43.20 g ± 2,69 g, p > 0,05). Samlet blod volum og prøvetaking varigheter lignet mellom de to gruppene i eksperter (184.25 µL ± 11.95 µL vs 171.75 µL ± 25.61 µL, p > 0,05, 1,85 min ± 0.68 min g. 2.17 min ± 0.80 min, p > 0,05). Imidlertid ble høyere samlet blod volum og kortere prøvetaking varigheter sett i forsøksgruppen forhold til den konvensjonelle gruppen i beginners (172.00 µL ± 15.17 µL vs 148.50 µL ± 30.22 µL, p < 0.01; 3.11 min ± 0.44 min g. 4.08 min ± 0,61 min, p < 0,01). Sammenlignet med nybegynnere, eksperter samlet høyere blod volum og viste lavere prøvetaking timene benytter eksperimentelle og konvensjonelle metoder (184.25 µL ± 11.95 µL vs 172.00 µL ± 15.17 µL, p < 0.01, 171.75 µL ± 25.61 µL vs 148.50 µL ± 30.22 µL, p < 0,05, 1,85 min ± 0,68 min g. 3.11 min ± 0.44 min, p < 0.01; 2.17 min ± 0.80 min g. 4.08 min ± 0,61 min, p < 0,05) (tabell 1).
Suksess priser og punktering ganger to gruppene
Sammenligning av suksess priser mellom nybegynnere og eksperter var 70% (14/20) vs 100% (20/20) (p < 0,01) i forsøksgruppen og 35% (7/20) vs 85% (17/20) (p < 0,01) i konvensjonelle gruppen. Høyere suksessrate ble også sett i forsøksgruppen sammenlignet med konvensjonelle gruppen i nybegynnere [70% (14/20) vs 35% (7/20), p < 0,05]. I både nybegynnere og eksperter var antall punkteringer betydelig lavere i forsøksgruppen forhold til den konvensjonelle gruppen (2.40 ± 0,75 vs 2,90 ± 0.31, p < 0,05, 1,15 ± 0,37 vs 1.55 ± 0.76, p < 0,05). Sammenlignet med nybegynnere, ble lavere punktering ganger for eksperter observert med eksperimentelle og konvensjonelle metoder. (1,15 ± 0,37 vs 2.40 ± 0,75, p < 0.01, 1.55 ± 0.76 vs 2,90 ± 0.31, p < 0,01) (Tabell 1).
Figur 1: utstyr. Vises 1 mL vakuum blod samling rør og en 22 G sommerfugl nål (venstre), en øyeglasset forstørrelsesglass (midten) og en plast begrensende holderen (høyre). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: vellykket blodgivning i forsøksgruppen. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: vellykket blodgivning i gruppen konvensjonelle. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Forsøksgruppen | Konvensjonelle gruppen | |||
| nybegynner | ekspert | nybegynner | ekspert | |
| Kroppsmasseindeks (g) | 42.4±1.42 | 42.55±2.91 | 42.65±1.14 | 43.20±2.69 |
| Samlet blodvolum (µL) | 172.00±15.17 | 184.25±11.95# | 148.50±30.22* | 171.75±25.61# |
| Prøvetaking varighet | 3.11±0.44 | 1.85±0.68# | 4.08±0.61* | 2.17±0.80# |
| Blod samling ganger | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Gjennomsnittlig antall punkteringer | 2.40±0.75 | 1.15±0.37# | 2.90±0.31* | 1.55±0.76## * |
| En gang punktering | 3 | 17 | 0 | 12 |
| To ganger punktering | 6 | 3 | 2 | 5 |
| Tre ganger punktering | 5 | 0 | 5 | 0 |
| Mislyktes | 6 | 0 | 13 | 3 |
| Suksessraten | 70% | 100%# | 35%* | 85%# |
Tabell 1: sammenligning av resultater mellom eksperimentelle og konvensjonelle. * p < 0,05, ** p < 0.01, eksperimentell metode vs tradisjonell metoden. #p < 0,05, ##p < 0.01, nybegynner vs ekspert.
Discussion
Studien beskriver en enkel å lære blod samling metoden i mus som er bedre enn konvensjonelle teknikker. Først kan metoden være lett mestrer med høy suksessrate. Andre, det er basert på vakuum negative trykket og tillater kontinuerlig tegning blod med mindre utsatt for direkte blod eksponering, som også reduserer sjansen for forurensning og hemolyse9. Tredje, denne metoden er gjennomførbar for hyppige utvalg av blod med tilstrekkelig volumer fra mus over en kort periode for ulike forskningsformål. Videre fremgangsmåten påfører bare minimal skade på mus, og blod samling kan utføres uten bruk av bedøvelse; Dermed kan påvirker stressrespons og bedøvelse blodprøver unngås.
Hale venen er en overlegen plassering for blod prøvetaking etter godkjent protokollen7. Men er det ikke alltid lett å få tilstrekkelig blodvolum fra tynne hale årer med lav blod strømmer. I dette tilfellet huden er vanligvis klippes og vene er gjennomsyret av lancet, eller slutten av halen fjernes raskt av en barberhøvel.
Denne protokollen mål å forbedre metodene for blod samling fra mus ved hjelp av vakuum blod samling system, som krever et vakuum blod prøve samling rør, butterfly nål og øyeglasset Forstørrelsesprogram. Dette vakuum blod prøvetaking systemet brukes vanligvis til å ta fra pasienter i daglige praksis10. Med hjelp av en øyeglasset forstørrelsesglass er perfekt punktering poenget med en hale blodåre enklere å finne. Når spissen av en nål settes i halen venen, vil automatisk blod strømme inn vakuumrør på grunn av negative trykket. Etter uttak nålen fra halen blodåre, vil blod som er blokkert i kateter strømme inn samle vakuumrør på grunn av vakuum.
Følgende tips er viktig for bruk av metoden. Først kroppsvekten av hver musen bør være 40 g eller høyere for å redusere problemer med punktering og få nok blod. Andre ved mislykkede blod samling, bør forskere prøve å trekke nålen sakte til blod fortsetter å strømme ut. Tredje er det viktig å utvide halen for å unngå enhver bevegelse under blodprøve. Holde nålen forsiktig kan bidra til å holde pinne-spissen i venen som musen halen beveger seg. Hvis blodet slutter å strømme ut under blod samling, bør fjerde nål vinkelen justeres i tide. For å unngå blodpropp i nålen, punktering Stilgalleri bør velges hvis blodet slutter å strømme ut etter 15 s. Til slutt, i samarbeid med to operatører anbefales når du bruker denne teknikken for å samle blod fra mus.
Kort sagt, er adopterte vakuum blod samling metoden for bruk i mus sikker, mulig og enkel å praktisere. Dette gjør hyppige utvalg av blod med tilstrekkelig blod volumer fra ikke-anesthetized mus.
Disclosures
Forfatterne ikke avsløre.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av natur Science Foundation innvilgelse av Hubei Province, Kina [Grant No. 2018CFB761].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
References
- Grouzmann, E., et al. Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice. European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).
- Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).
- Hoff, J.
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).
