Summary
इस अध्ययन ताल ताल के साथ एक निर्वात निष्कर्षण ट्यूब प्रणाली का उपयोग चूहों में पूंछ नस से रक्त नमूना रिपोर्ट. हमारे विधि अभ्यास करने के लिए आसान है और चूहों में दोहराने रक्त नमूने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Abstract
रक्त नमूना संग्रह प्रयोगात्मक पशु अनुसंधान का आधार है । यह विभिंन अनुसंधान प्रयोजनों के लिए पर्याप्त रक्त के नमूने प्राप्त करने के लिए महत्व का है । चूहों की पूंछ नसों छोटे होते हैं, और यह पारंपरिक पंचर तरीकों से आवश्यक रक्त की मात्रा प्राप्त करने के लिए कई बार मुश्किल है । इस अध्ययन में एक वैक्यूम रक्त संग्रह प्रणाली और ताल ताल (प्रयोगात्मक समूह) के उपयोग के माध्यम से चूहों की पूंछ नसों से दोहराया रक्त नमूना संग्रह की श्रेष्ठता की जांच पारंपरिक रक्त नमूना तरीकों (पारंपरिक समूह) की तुलना में , क्रमशः शुरुआती और विशेषज्ञों द्वारा प्रदर्शन किया । एक ताल ताल की मदद से, एक तितली सुई टिप प्रयोगात्मक समूह में प्रत्येक माउस की पूंछ नस में डाला जाता है । जब नस सफलतापूर्वक प्रवेश किया है, एक रक्त नमूना निर्वात संग्रह ट्यूब में वैक्यूम रक्त संग्रह ट्यूब में एक तितली सुई के रबर अंत की प्रविष्टि द्वारा एकत्र की है । इसके बाद गोताख़ोर का इस्तेमाल पारंपरिक समूह में ताल ताल की मदद के बिना रक्त एकत्रित करने के लिए किया जाता है । शुरुआती और विशेषज्ञों द्वारा रक्त नमूना संग्रह की सफलता की दर प्रयोगात्मक समूह में ७०% बनाम १००% (पी < ०.०१) और पारंपरिक समूह में ८५% (पी < ०.०१) बनाम ३५% हो दिखाया गया है । दोनों beginners और विशेषज्ञों के लिए, पंचर आवश्यक रक्त का नमूना प्राप्त करने के लिए आवश्यक समय के पारंपरिक समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में काफी कम थे (२.४० ± ०.७५ बनाम २.९० ± ०.३१, पी < ०.०५; १.१५ ± ०.३७ बनाम १.५५ ± ०.७६, पी < ०.०५) । अंत में, प्रस्तुत रक्त नमूना तकनीक व्यावहारिक और अभ्यास करने के लिए आसान है और गैर anesthetized चूहों से पर्याप्त रक्त की मात्रा के लगातार नमूने सक्षम बनाता है ।
Introduction
प्रयोगों में शामिल पशुओं से रक्त का नमूना एक बुनियादी अनुसंधान तकनीक है. वहां चूहों से रक्त संग्रह के लिए कुछ उपलब्ध तकनीक, पूंछ गोली चलाना और दिल की puncturing, रेट्रो कक्षीय जाल, jugular नस, caudal नस, और वेना कावा शामिल हैं । आदर्श रूप में, रक्त एक न्यूनतम इनवेसिव तरीके से एकत्र किया जाना चाहिए, पशुओं के स्वास्थ्य पर न्यूनतम प्रभाव के साथ । हालांकि, सबसे अधिक इस्तेमाल किया तकनीक अक्सर जानवरों पर तनाव को दण्ड और अनुसंधान के परिणाम1प्रभाव कर सकते हैं । रेट्रो कक्षीय जाल से रक्त संग्रह चूहों2से पर्याप्त रक्त की मात्रा प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हालांकि, यह गंभीर ऊतकों को नुकसान में परिणाम कर सकते है और कम समय अंतराल में रक्त बार-3प्राप्त करने के लिए अनुमति नहीं है ।
caudal नस रक्त संग्रह है, जो चूहों पर ंयूनतम चोट दण्ड के लिए एक बेहतर स्थान है । हालांकि, चूहों की पूंछ नसों पतली कर रहे हैं, और यह पारंपरिक पंचर तकनीक के माध्यम से पर्याप्त रक्त प्राप्त करने के लिए कई बार मुश्किल है । कुछ मामलों में, दोहराया पंचर वांछित रक्त की मात्रा प्राप्त करने के लिए आवश्यक हैं । संज्ञाहरण भी आमतौर पर चूहों की पूंछ नसों से रक्त के नमूने की सुविधा के लिए सिफारिश की है । इसके अलावा, एक स्केलपेल, सीधे किनारे उस्तरा, या तेज कैंची पूंछ के सिरों को दूर करने के लिए आवश्यक रक्त के नमूनों को प्राप्त करने की जरूरत हो सकती है4. हम पहले वैक्यूम रक्त नमूना संग्रह प्रणाली है, जो रक्त संदूषण का खतरा कम और दोहराया पंचर5के लिए की जरूरत से बचा द्वारा गैर anaesthetized चूहों की पूंछ नसों से सफल रक्त संग्रह की सूचना दी । यह अध्ययन गैर anesthetized चूहों में एक समान रक्त संग्रह विधि रिपोर्ट ।
Protocol
1. पशुपालन
- 12 सप्ताह पुराने कुनमिंग चूहों का प्रयोग करें ।
नोट: हम चूहों का इस्तेमाल किया (n = ४०, 20 पुरुषों, 37-46 जी, ४२.३८ ± २.३९ ग्राम मतलब) Tongji मेडिकल कॉलेज के प्रायोगिक पशु केंद्र से. - भोजन और पीने के पानी के लिए मुफ्त पहुंच के साथ मानक शर्तों के तहत चूहों घर । लकड़ी शेविंग बिस्तर के साथ एक ५३० cm2 पिंजरे में दो चूहों रखो ।
- 21 – 23 डिग्रीसेल्सियस के बीच एक कमरे का तापमान बनाए रखें ।
- एक सामांय नमक आहार के साथ चूहों फ़ीड (०.३% NaCl) पूरे अध्ययन में ।
2. रक्त नमूना संग्रह
- वैक्यूम ट्यूब (1 मिलीलीटर), तितली सुई, ताल ताल, और प्लास्टिक निरोधक धारक: निम्नलिखित उपकरण तैयार करें । उंहें एक बाँझ सतह (चित्रा 1) पर रखें ।
- एक प्लास्टिक निरोधक धारक में एक चूहा प्लेस और गर्म पानी के साथ अपनी पूंछ धो (20-30 डिग्रीसेल्सियस) । ७०% इथेनॉल संतृप्त कपास गेंदों के साथ पूंछ पोंछ नस का विस्तार करने के लिए । रक्त नमूना के लिए सही या बाएँ पूंछ नस का चयन करें । धीरे पूंछ के निचले हिस्से को समझ और रक्त नमूना संग्रह के दौरान सीधे पूंछ रखने के लिए ।
- खून लीजिए । यदि तरीकों की तुलना, दो समूहों में रक्त इकट्ठा: "प्रयोगात्मक" प्रक्रिया हम विकसित की है, नीचे प्रस्तुत का उपयोग कर समूह, और "पारंपरिक" एक पारंपरिक विधि का उपयोग कर समूह, भी नीचे प्रस्तुत किया ।
- प्रायोगिक संग्रह:
- पूंछ नस के पंचर के लिए देखने में सुधार करने के लिए एक ताल ताल पहनते हैं । एक स्थिति में पार्श्व पूंछ नसों में से एक में 22 जी तितली सुई टिप डालें लगभग आधा दूरी एक परी में पूंछ की नोक से लंबा लगभग 10डिग्री, कई नमूनों के लिए पूंछ के आधार की ओर बढ़ रहा है ।
- रक्त इकट्ठा करने के लिए वैक्यूम रक्त संग्रह ट्यूब में तितली सुई के रबर अंत डालें (चित्रा 2) ।
नोट: रक्त संग्रह के दौरान खून बाहर बह बंद हो जाता है, सुई कोण जल्दी से समायोजित किया जाना चाहिए । सुई में रक्त जमावट से बचने के लिए, एक और पंचर की स्थिति का चयन किया जाना चाहिए अगर रक्त बंद हो जाता है 15 एस के बाद बाहर बह ।
- परम्परागत विधि:
- पार्श्व नसों में से एक में एक सिरिंज से जुड़े सुई डालें लगभग एक पूंछ की नोक से लंबी दूरी के तीसरे ।
- जब रक्त हब में दिखाई देता है, गोताख़ोर वापस खींच धीरे खून (चित्रा 3)7इकट्ठा करने के लिए ।
नोट: आगे रक्त संग्रह के साथ अनुभव बदलती के प्रभाव स्पष्ट करने के लिए, एक शुरुआत है और विशेषज्ञ एक साथ प्रयोगात्मक और पारंपरिक तरीकों का उपयोग कर रक्त के नमूनों को इकट्ठा करने के लिए चुना गया था.
- प्रायोगिक संग्रह:
- रक्त संग्रह के बाद, सुई निकालें और खून बह रहा बंद करने के लिए पंचर बिंदु दबाएँ । फिर, प्लास्टिक निरोधक धारक से माउस को रिलीज करने और उसके पिंजरे के लिए माउस वापस ।
नोट: यह बताया गया है कि कुल रक्त की मात्रा का 10% तक सुरक्षित रूप से 2 सप्ताह के अंतराल8पर एक स्वस्थ जानवर से हटा दिया जा सकता है, तो के बारे में १७५ रक्त की µ एल नैतिक सिद्धांतों के अनुसार हर बार एकत्र किया गया था । - EDTA के साथ ट्यूबों का प्रयोग करें anticoagulants के बिना प्लाज्मा और उपयोग ट्यूबों इकट्ठा करने के लिए सीरम इकट्ठा । धीरे ट्यूब कई बार उलटा और उंहें खड़ी बर्फ पर डाल दिया ।
- १,००० एक्स जी में एक प्रशीतित केंद्रापसारक में रक्त नमूना संग्रह ट्यूबों 10 प्लाज्मा और सीरम अलग करने के लिए मिनट के लिए केंद्रापसारक ।
नोट: सफल रक्त संग्रह १७५ µ एल का एक खंड हर बार प्राप्त करने के रूप में परिभाषित किया गया है । कोई तीन से अधिक पंचर का प्रयास किया जाना चाहिए, और एक असफल रक्त संग्रह तीसरे पंचर के बाद १७५ µ एल से कम की कुल रक्त मात्रा के रूप में परिभाषित है । नमूना अवधि रक्त संग्रह के बाद सुई को हटाने के लिए पूंछ नस पंचर से समय के रूप में परिभाषित किया गया है । - 2 सप्ताह के अंतराल पर दो बार रक्त लीजिए8.
3. सांख्यिकीय विश्लेषण
- विश्लेषण के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सांख्यिकीय सॉफ़्टवेयर का उपयोग करें । सांख्यिकीय महत्व के लिए कटऑफ के रूप में पी < ०.०५ का उपयोग कर, मतलब मूल्य ± मानक विचलन के रूप में वर्तमान डेटा ।
Representative Results
शरीर द्रव्यमान, रक्त संग्रह की मात्रा, और दो समूहों की अवधि के नमूने
प्रत्येक समूह में २ सप्ताह के अंतराल पर २० चूहों (१० पुरुषों) से रक्त के नमूने एकत्र किए गए. चूहों का मतलब शरीर द्रव्यमान शुरुआती और विशेषज्ञों के लिए प्रयोगात्मक और पारंपरिक समूहों के बीच समान था, क्रमशः (४२.४० g ± १.४२ g बनाम ४२.६५ g ± १.१४ g, p > ०.०५; ४२.५५ g ± २.९१ g बनाम ४३.२० g ± २.६९ g, पृ > ०.०५). एकत्र रक्त की मात्रा और नमूना अवधि के विशेषज्ञों में दो समूहों के बीच समान थे (१८४.२५ µ एल ± ११.९५ µ एल बनाम १७१.७५ µ एल ± २५.६१ µ एल, पी > ०.०५; १.८५ मिनट ± ०.६८ मिनट बनाम २.१७ मिनट ± ०.८० मिनट, पी > ०.०५) । हालांकि, उच्च एकत्र रक्त की मात्रा और कम नमूना अवधि के शुरुआती में पारंपरिक समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में देखा गया (१७२.०० µ एल ± १५.१७ µ एल बनाम १४८.५० µ l ± ३०.२२ µ l, p < ०.०१; ३.११ मिनट ± ०.४४ मिनट बनाम ४.०८ मिनट ± ०.६१ मिनट, पी < ०.०१) । शुरुआती की तुलना में, विशेषज्ञों उच्च रक्त की मात्रा एकत्र की और कम नमूना बार दिखाया प्रयोगात्मक और पारंपरिक तरीकों का उपयोग (१८४.२५ µ एल ± ११.९५ µ एल बनाम १७२.०० µ l ± १५.१७ µ l, p < ०.०१; १७१.७५ µ l ± २५.६१ µ l बनाम १४८.५० µ l ± ३०.२२ µ l, p < ०.०५; १.८५ मिनट ± ०.६८ मिन बनाम ३.११ मिनट ± ०.४४ मिनट, पी < ०.०१; २.१७ ंयूनतम ± ०.८० मिनट बनाम ४.०८ मिनट ± ०.६१ मिनट, पी < ०.०५) (तालिका 1) ।
सफलता दर और दो समूहों के पंचर बार
शुरुआती और विशेषज्ञों के बीच सफलता दरों की तुलना प्रयोगात्मक समूह में ७०% (14/20) बनाम १००% (20/20) (पी < ०.०१) और पारंपरिक समूह में ३५% (7/20) बनाम ८५% (17/20) (पी < ०.०१) थी । उच्च सफलता दर भी शुरुआती में पारंपरिक समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में देखा गया [७०% (14/20) बनाम ३५% (7/20), पी < ०.०५] । दोनों शुरुआती और विशेषज्ञों में, पंचर की संख्या पारंपरिक समूह की तुलना में प्रयोगात्मक समूह में काफी कम था (२.४० ± ०.७५ बनाम २.९० ± ०.३१, पी < ०.०५; १.१५ ± ०.३७ बनाम १.५५ ± ०.७६, पी < ०.०५) । शुरुआती की तुलना में, विशेषज्ञों के लिए कम पंचर बार प्रयोगात्मक और पारंपरिक तरीकों का उपयोग कर मनाया गया । (१.१५ ± ०.३७ बनाम २.४० ± ०.७५, पी < ०.०१; १.५५ ± ०.७६ बनाम २.९० ± ०.३१, पी < ०.०१) (तालिका 1) ।
चित्र 1: उपकरण । दिखाया गया है 1 मिलीलीटर वैक्यूम रक्त संग्रह ट्यूबों और एक 22 जी तितली सुई (बाएँ), एक ताल ताल (मध्य), और एक प्लास्टिक निरोधक धारक (सही). कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: प्रयोगात्मक समूह में सफल रक्त संग्रह । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: पारंपरिक समूह में सफल रक्त संग्रह । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
| प्रायोगिक समूह | परम्परागत समूह | |||
| शुरुआत | विशेषज्ञ | शुरुआत | विशेषज्ञ | |
| शरीर द्रव्यमान (g) | 42.4 ± 1.42 | 42.55 ± 2.91 | 42.65 ± 1.14 | 43.20 ± ा |
| एकत्र रक्त मात्रा (µ l) | 172.00 ± 15.17 | 184.25 ± 11.95# # | 148.50 ± 30.22* * | 171.75 ± 25.61# |
| नमूना अवधि (min) | 3.11 ± 0.44 | 1.85 ± 0.68# # | 4.08 ± 0.61* * | 2.17 ± 0.80# # |
| रक्त संग्रह बार | 20 | 20 | 20 | 20 |
| पंचर की औसत संख्या | 2.40 ± 0.75 | 1.15 ± 0.37# # | ि * े े | 1.55 ± 0.76# # * |
| एक बार पंचर | 3 | 17 | 0 | 12 |
| दो बार पंचर | 6 | 3 | 2 | 5 |
| तीन बार पंचर | 5 | 0 | 5 | 0 |
| विफल | 6 | 0 | 13 | 3 |
| सफलता दर | ७०% | १००%# # | ३५%* | ८५%# # |
तालिका 1: प्रयोगात्मक और पारंपरिक समूहों के बीच परिणामों की तुलना । * पी < ०.०५, * * पी < ०.०१, प्रयोगात्मक विधि बनाम पारंपरिक विधि । #p < ०.०५, # #p < ०.०१, शुरुआत बनाम विशेषज्ञ ।
Discussion
वर्तमान अध्ययन का वर्णन एक आसान चूहों कि पारंपरिक तकनीक से बेहतर है में रक्त संग्रह विधि जानने के लिए । सबसे पहले, विधि आसानी से एक उच्च सफलता दर के साथ महारत हासिल किया जा सकता है । दूसरा, यह वैक्यूम नकारात्मक दबाव सिद्धांत पर आधारित है और प्रत्यक्ष रक्त जोखिम है, जो भी संदूषण और hemolysis9की संभावना कम कर देता है की एक कम जोखिम के साथ रक्त की सतत ड्राइंग के लिए अनुमति देता है । तीसरा, इस विधि के विभिंन अनुसंधान प्रयोजनों के लिए समय की एक छोटी अवधि में चूहों से पर्याप्त मात्रा के साथ रक्त की लगातार नमूने के लिए संभव है । इसके अलावा, प्रक्रिया केवल चूहों पर ंयूनतम चोट दण्ड, और रक्त संग्रह निश्चेतक के उपयोग के बिना किया जा सकता है; इस प्रकार, तनाव प्रतिक्रिया और रक्त के नमूनों पर निश्चेतक के प्रभाव से बचा जा सकता है ।
पूंछ नस अनुमोदित प्रोटोकॉल7के अनुसार रक्त नमूने के लिए एक बेहतर स्थान है । हालांकि, यह हमेशा कम रक्त प्रवाह के साथ पतली पूंछ नसों से पर्याप्त रक्त की मात्रा प्राप्त करने के लिए आसान नहीं है । इस मामले में, त्वचा आमतौर पर खुला है और नस एक नुकीला द्वारा प्रवेश किया है, या पूंछ के अंत में एक उस्तरा से जल्दी से हटा दिया है ।
इस प्रोटोकॉल के लिए वैक्यूम रक्त संग्रह प्रणाली है, जो एक वैक्यूम रक्त नमूना संग्रह ट्यूब, तितली सुई, और ताल ताल की आवश्यकता का उपयोग चूहों से रक्त संग्रह की कार्यप्रणाली में सुधार करना है । इस वैक्यूम रक्त नमूना प्रणाली आमतौर पर दैनिक नैदानिक अभ्यास10में रोगियों से रक्त के नमूनों को इकट्ठा करने के लिए प्रयोग किया जाता है । एक ताल ताल की मदद से, एक पूंछ नस का सही पंचर बिंदु का पता लगाने के लिए आसान है । जब एक सुई की नोक पूंछ नस में डाला जाता है, रक्त स्वचालित रूप से नकारात्मक दबाव के कारण वैक्यूम ट्यूब में प्रवाह होगा । पूंछ नस से सुई वापस लेने के बाद, कैथेटर में बंद कर दिया है कि रक्त वैक्यूम के कारण संग्रह वैक्यूम ट्यूब में प्रवाह होगा ।
विधि के सफल आवेदन के लिए निम्नलिखित सुझाव महत्वपूर्ण हैं । सबसे पहले, प्रत्येक माउस के शरीर के वजन ४० ग्राम या उच्च puncturing में कठिनाई कम करने के लिए और पर्याप्त रक्त प्राप्त करने के लिए होना चाहिए । दूसरा, असफल रक्त संग्रह के मामले में, प्रयोग करने वालों को सुई धीरे से वापस लेने के लिए जब तक रक्त बाहर प्रवाह जारी रखने की कोशिश करनी चाहिए । तीसरा, यह पूंछ का विस्तार करने के लिए रक्त नमूने के दौरान किसी भी आंदोलन से बचने के लिए महत्वपूर्ण है । सुई धीरे धारण करने के लिए माउस पूंछ चाल के रूप में नस में सुई टिप रखने में मदद कर सकते हैं । चौथा, रक्त संग्रह के दौरान बाहर बह बंद हो जाता है, तो सुई कोण एक समय पर ढंग से समायोजित किया जाना चाहिए । आदेश में सुई में रक्त जमावट से बचने के लिए, एक और पंचर स्थिति का चयन किया जाना चाहिए अगर रक्त बंद हो जाता है 15 एस के बाद बाहर बह । अंत में, चूहों से रक्त एकत्र करने के लिए इस तकनीक का उपयोग करते समय दो ऑपरेटरों के सहयोग की सिफारिश की है ।
संक्षेप में, चूहों में उपयोग के लिए अपनाया वैक्यूम रक्त संग्रह विधि सुरक्षित, संभव है, और अभ्यास करने के लिए आसान है । इस विधि गैर anesthetized चूहों से पर्याप्त रक्त की मात्रा के साथ रक्त की लगातार नमूना सक्षम बनाता है ।
Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस कार्य को हुबेई प्रांत, चीन [ग्रांट No. 2018CFB761] के नेचर साइंस फाउंडेशन ग्रांट ने समर्थन दिया ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
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