Summary
Bu çalışmada kan örnekleme kuyruk ven gözlük büyüteç ile bir vakum ekstraksiyon tüp sistemi kullanan farelerde gelen raporlar. Bizim Yöntem uygulama için kolay ve tekrar kan örnekleme farelerde için kullanılabilir.
Abstract
Kan örnek koleksiyon deneysel hayvan araştırma temeli budur. Çeşitli araştırma amaçlı yeterli kan örnekleri almak için önem taşıyor. Kuyruk damarlar farelerin küçük, ve bazen gerekli kan hacmi geleneksel ponksiyon yöntemlerle elde etmek zordur. Bu çalışmada kan örnek koleksiyonundan kuyruk damarlar yoluyla farelerin konvansiyonel kan örnekleme yöntemleri (geleneksel grup) göre bir vakum kan toplama sistemi ve gözlük büyüteç (deney grubu) üstünlüğünü inceler , sırasıyla yeni başlayanlar ve uzmanlar tarafından yapılacak. Bir gözlük büyüteç yardımı ile bir kelebek iğne ucu deney grubu her fare kuyruğu ven içine eklenir. Ven başarıyla nüfuz, kan örneği vakum koleksiyonu tüpte kelebek iğne kauçuk sonuna ekleme tarafından vakum kan toplama tüp içine toplanır. Pistonu daha sonra geleneksel grubunda gözlük büyüteç yardımı olmadan kan toplamak için kullanılır. Kan örnek toplama yeni başlayanlar ve uzmanlar tarafından başarı oranları %70 %100 (p < 0,01) vs olmak deney grubu ve %35 %85 (p < 0,01) geleneksel grubunda vs gösterildi. Yeni başlayanlar ve uzmanlar için gerekli kan örneği almak için gerekli ponksiyon deneysel grubunda (2.40 ± 0,75 2.90 ± 0.31 vs, p < 0,05; 1.15 ± 0,37 1,55 ± 0,76, p < 0,05 vs) konvansiyonel grubuna göre anlamlı derecede düşük zamanlardı. Sonuç olarak, sunulan kan örnekleme tekniği mümkün ve pratik kolay ve sigara anestezi fareler birimlerden yeterli kan sık örnekleme sağlar.
Introduction
Deneylerde yer hayvanlardan kan örnekleme temel araştırma tekniğidir. Kullanılabilir bazı teknikler vardır fareler gelen kan toplama için kuyruk bitirim dahil ve kalp, retro-orbital pleksus, juguler ven, kaudal ven ve vena cava delme. İdeal olarak, kan hayvanın sağlık üzerinde en az etki ile minimal invaziv bir şekilde toplanmalıdır. Ancak, en yaygın olarak kullanılan teknikleri genellikle stres hayvanlar indirebilmek ve araştırma sonuçları1etkileyebilir. Retro-orbital pleksus koleksiyonundan kan yeterince kan hacmi fareler2' den elde etmek için kullanılabilir. Ancak, şiddetli doku hasarı neden olabilir ve kısa zaman aralıkları3tekrar tekrar kan almak için izin vermez.
Kaudal ven fareler üzerine en az yaralanma uğratan kan koleksiyonu için üstün bir konumdur. Ancak, farelerin kuyruk damarlar ince ve bazen yeterince kan geleneksel ponksiyon tekniği ile elde etmek zordur. Bazı durumlarda, tekrarlanan delikler istenen kan hacmi elde etmek için gereklidir. Anestezi de genellikle kan örnekleme farelerin kuyruk damarlar üzerinden kolaylaştırmak için önerilir. Ayrıca, bir neşter, düz kenarlı jilet veya keskin makas gerekli kan örnekleri4almak için kuyruk uçları kaldırmak için gerekli olabilir. Daha önce kan kontaminasyon riski azaltılmış ve tekrarlanan delikler5ihtiyacını kaçınılması vakum kan örnek toplama sistemi tarafından sigara anaesthetized sıçan kuyruk damarlar koleksiyonundan başarılı kan bildirdin. Bu çalışmada sigara anestezi farelerde benzer bir kan toplama yöntemi bildirir.
Protocol
1. yetiştirme
- 12 hafta yaşlı Kunming fare kullanın.
Not: Biz fare kullanılan (n = 40, 20 erkek, 37-46 g, demek 42.38 ± 2,39 g) deneysel hayvan merkezi kent tıp Koleji'nden. - Fareler yiyecek ve içme suyu ücretsiz erişim standart koşullar altında ev. Ahşap tıraş ile 530 cm2 kafeste iki fare yatak takımları tutmak.
- 21 – 23 °c arasında bir oda ısısını korumak
- Fareler bir normal tuz diyet ile besleme (% 0,3 NaCl) çalışma boyunca.
2. kan örnek koleksiyonu
- Aşağıdaki donanımları hazırlamak: Vakum tüplü (1 mL), kelebek iğne, gözlük büyüteç ve plastik yasaklama tutucu. Onları (Şekil 1) steril bir yüzeye yerleştirin.
- Bir fare plastik bir yasaklama tutucuya yerleştirin ve kuyruğunu (20-30 °C) ılık suyla yıkayın. Kuyruk damar genişletmeye % 70 etanol doymuş pamuk topları ile silin. Sağ veya sol kuyruk damar kan örnekleme için seçin. Kuyruk alt kısmını hafifçe kavramak ve düz kanı örnek toplama sırasında kuyruk tutun.
- Kan toplamak. Yöntem karşılaştırma Eğer kan iki grupta toplamak: "deney" grubu geliştirildi, aşağıda, yordamı kullanarak ve "geleneksel" Grup aynı zamanda aşağıda sunulan bir geleneksel yöntemle.
- Deneysel koleksiyonu:
- Görüntüleme için kuyruk damarın ponksiyon geliştirmek için bir gözlük büyüteç'i giymek. 22 G kelebek iğne ucu bir pozisyonda yaklaşık yarım mesafe klemple ucundan kuyruk kuyruk Bankası doğru birden çok örnekleri için hareketli bir melek yaklaşık 10°, yanal kuyruk damarlar birinin içine yerleştirin.
- Kelebek iğne kauçuk sonu kan (Şekil 2) toplamak için vakum kan toplama tüp yerleştirin.
Not: iğne açı kan dışarı akan kanı toplama sırasında durursa, hızlı bir şekilde ayarlanmalıdır. 15 sonra dışarı akan kan durursa iğne kan koagülasyon önlemek için başka bir delik pozisyon seçilmelidir s.
- Geleneksel Yöntem:
- Bir şırınga için mesafe yanal damarları yaklaşık üçte birine klemple kuyruk ucu bağlı iğne yerleştirin.
- Kan hub'da bulunan göründüğünde, yavaş yavaş kan (Şekil 3)7toplamak için pistonu geri çek.
Not: daha fazla kan koleksiyonu ile değişen deneyimi etkileri aydınlatmak için bir acemi ve uzman aynı anda deneysel ve geleneksel yöntemleri kullanarak kan örnekleri toplamak için seçilmiştir.
- Deneysel koleksiyonu:
- Kan toplama sonra iğne kaldırmak ve ponksiyon noktası kanamayı durdurmak için tuşuna basın. Sonra plastik yasaklama sahibinden fare düğmesini bırakın ve onun kafes için fareyi dönün.
Not: Bu kadar toplam kan % 10'una birim güvenle olabilir bildirilmiştir 2 hafta aralıklarla8sağlıklı bir hayvandan kaldırıldı, bu yüzden yaklaşık 175 µL kan toplanan etik ilkelere uygun olarak her zaman. - Tüpler EDTA ile plazma toplamak ve serum toplamak için tüpler antikoagülanlar olmadan kullanmak için kullanın. Yavaşça tüp birkaç kez ters çevir ve buz üzerinde dikey olarak koydu.
- Plazma ve serum ayırmak 10 dk 1000 x g de Soğutmalı Santrifüj kan örnek koleksiyon tüplerde santrifüj kapasitesi.
Not: Başarılı kan toplama 175 µL hacmi her zaman elde etme olarak tanımlanır. Üçten fazla delikler denenmesi gerektiğini ve başarısız kan koleksiyonu sonra üçüncü bir delik daha az 175 µL toplam kan hacmi tanımlanmıştır. Örnekleme süresi kuyruk ven ponksiyon vakti iğneyi çıkarıldıktan sonra kan toplama olarak tanımlanır. - Kan iki kez 2 hafta8aralıklarla toplamak.
3. istatistiksel analiz
- Piyasada bulunan istatistiksel yazılım analizi için kullanın. Ortalama değer ± standart sapma, p < 0,05 kesim için istatistiksel anlamlılık kullanarak olarak veri mevcut.
Representative Results
Vücut kitle, kan toplama birimleri ve örnekleme süreleri iki grup
Kan örnekleri 20 fare (10 erkek) 2 hafta aralıklarla iki kez her grupta toplanmıştır. Ortalama beden kitle farelerin sırasıyla deneysel ve geleneksel gruplar için yeni başlayanlar ve uzmanlar arasında benzer (42.40 g ± 1,42 g 42.65 g ± 1,14 g vs, p > 0.05; 42.55 g ± 2,91 g vs 43.20 g ± 2,69 g, p > 0.05). Toplanan kan birimleri ve örnekleme süreleri arasında uzmanlar (184.25 µL ± 11,95 µL 171.75 µL ± 25.61 µL, p > 0.05 vs; 1.85 dk ± 0,68 min vs 2.17 dk ± 0.80 min, p > 0.05) iki grupta benzerdi. Ancak, daha yüksek toplanan kan birimleri ve daha kısa örnekleme süreleri yeni başlayanlar (172.00 µL ± 15.17 µL 148.50 µL ± 30.22 µL, p < 0,01 vs; 3,11 dk ± 0,44 min 4.08 dk ± 0,61 min, p < 0,01 vs) konvansiyonel grubuna göre deney grubu içinde görüldü. Yeni başlayanlar için karşılaştırıldığında, uzmanlar yüksek kan birimleri toplanan ve deneysel ve geleneksel yöntemleri (184.25 µL ± 11,95 µL 172.00 µL ± 15.17 µL, p < 0,01 vs; 171.75 µL ± 25.61 µL 148.50 µL ± 30.22 µL, p < 0,05 vs; 1.85 dk ± 0.68 kullanarak kez alt örnekleme gösterdi Min 3,11 dk ± 0,44 min, p < 0,01 vs; 2.17 dk ± 0.80 min 4.08 dk ± 0,61 min, p < 0,05 vs) (Tablo 1).
Başarı oranları ve ponksiyon kez iki grup
% 100 (20/20) (p < 0,01) deney grubu ve % 35 % 70 (14/20) başarı oranları yeni başlayanlar ve uzmanlar arasında karşılaştırma yapıldı (7/20) %85 (17/20) (p < 0,01) geleneksel grubunda vs. Daha yüksek başarı oranları da yeni başlayanlar konvansiyonel grubuna göre deney grubu içinde görüldü [%70 (14/20) % 35 vs (7/20), p < 0.05]. Hem yeni başlayanlar ve uzmanlar, delikler sayısı deneysel grubunda (2.40 ± 0,75 2.90 ± 0.31 vs, p < 0,05; 1.15 ± 0,37 1,55 ± 0,76, p < 0,05 vs) konvansiyonel grubuna göre anlamlı derecede düşük. Yeni başlayanlar için karşılaştırıldığında, daha düşük bir delik kez uzmanlar için deneysel ve geleneksel yöntemlerle tespit edildi. (1.15 ± 0,37 2.40 ± 0,75 vs, p < 0,01; 1,55 ± 0,76 2.90 ± 0.31, p < 0,01 vs) (Tablo 1).
Şekil 1: ekipman. 1 mL Vakumlu kan toplama tüpler ve 22 G kelebek iğne (solda), bir gözlük büyüteç (orta) ve bir plastik yasaklama tutucu (sağda) gösterilmiştir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 2: deney grubu başarılı kan toplama. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3: geleneksel grup başarılı kan toplama. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
| Deney grubu | Geleneksel grup | |||
| acemi | uzman | acemi | uzman | |
| Vücut kitle (g) | 42.4±1.42 | 42.55±2.91 | 42.65±1.14 | 43.20±2.69 |
| Toplanan kan hacmi (µL) | 172.00±15.17 | 184.25±11.95# | 148.50±30.22* | 171.75±25.61# |
| Örnekleme süresi (dk) | 3.11±0.44 | 1.85±0.68# | 4.08±0.61* | 2.17±0.80# |
| Kan toplama kez | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Delikler ortalama sayısı | 2.40±0.75 | 1.15±0.37# | 2.90±0.31* | 1.55±0.76## * |
| Bir zaman delik | 3 | 17 | 0 | 12 |
| İki kez ponksiyon | 6 | 3 | 2 | 5 |
| Üç kez ponksiyon | 5 | 0 | 5 | 0 |
| Başarısız oldu | 6 | 0 | 13 | 3 |
| Başarı oranı | % 70 | %100# | % 35* | %85# |
Tablo 1: sonuçlar deneysel ve geleneksel gruplar arasında karşılaştırılması. * p < 0,05, ** p < 0,01, deneysel Yöntem geleneksel yöntem vs. #p < 0,05, ##p < 0,01, acemi uzman vs.
Discussion
Bu da çalışmanın geleneksel teknikleri için üstün bir öğrenmek kolay kan toplama yöntemi farelerde açıklar. İlk olarak, yöntem kolayca yüksek başarı oranı ile hakim olamaz. İkinci olarak, Vakum negatif basınç ilkesine dayanmaktadır ve kan sürekli çizim da kirlenme ve hemoliz9olasılığını azaltır doğrudan kan maruz kalma, daha az risk ile sağlar. Üçüncü olarak, bu yöntem yeterli fareler birimlerden kanla sık örnekleme çeşitli araştırma amacıyla kısa bir süre için mümkün olabilir. Ayrıca, yordamı yalnızca fare üzerine en az yaralanma uğratan ve kan toplama anestezi kullanmadan yapılabilir; Böylece, kan örnekleri üzerinde stres tepkisi ve anestezi etkisi önlenebilir.
Kuyruk damar kan örnekleme onaylı protokol7göre üstün bir konumdur. Ancak, her zaman ince kuyruk damarlar düşük kan akışı ile yeterli kan hacmi elde etmek kolay değil. Bu durumda, cilt genellikle açık kesilir ve damar lanset tarafından nüfuz veya kuyruk sonuna hızlı bir ustura ile kaldırıldı.
Bu iletişim kuralı bir vakum kan örnek toplama Tüp, kelebek iğne ve gözlük büyüteç gerektirir vakum kan toplama sistemi kullanarak fare koleksiyonundan kan metodolojisi geliştirmeyi amaçlamaktadır. Bu vakum kan örnekleme sistemi genellikle günlük klinik pratikte10hastadan kan örnekleri toplamak için kullanılır. Bir gözlük büyüteç yardımı ile bir kuyruk damar mükemmel ponksiyon turistik bulmak kolaydır. Bir iğne ucu kuyruk damar içine eklendiğinde, kan negatif basınç nedeniyle vakum tüp içine otomatik olarak akacaktır. İğne kuyruğu damar geri çekilmesi toplama vakum tüplü vakum nedeniyle içine kateter bloke kan akacak.
Aşağıdaki ipuçları yönteminin başarılı uygulama için önemlidir. İlk olarak, vücut ağırlığı her fare ile 40 g olmalıdır veya delinme ve yeterince kan alma güçlüğü azaltmak için daha yüksek. İkinci olarak, başarısız kan toplama söz konusu olduğunda, kan dışarı akmasını devam kadar iğne yavaş yavaş çekilmeye Denemecileri denemelisiniz. Üçüncü olarak, bu kuyruk kan örnekleme sırasında herhangi bir hareketi önlemek için genişletmek için önemlidir. İğneyi yavaşça tutarak fare kuyruk hamle ven iğne ucu tutmaya yardımcı olabilir. Dördüncü olarak, kan dışarı akan kanı toplama sırasında durursa, iğne açı zamanında ayarlanmalıdır. 15 sonra dışarı akan kan durursa iğne kan koagülasyon önlemek amacıyla, başka bir delik pozisyon seçilmelidir s. Son olarak, iki işleç işbirliği fareler kan toplamak için bu tekniği kullanırken önerilir.
Kısacası, farelerde kullanmak için kabul edilen vakum kan toplama yöntemi güvenli, uygun ve kolay uygulama. Bu yöntem, sigara anestezi fareler birimlerden yeterli kan kanla sık örnekleme sağlar.
Disclosures
Yazarlar ifşa gerek yok.
Acknowledgments
Bu eser desteklenmiştir Doğa Bilim Vakfı Hibe Hubei eyaleti, Çin [Grant No 2018CFB761].
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
References
- Grouzmann, E., et al. Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice. European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).
- Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).
- Hoff, J.
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).
