Summary
यह प्रोटोकॉल चूहे के मॉडल में चेहरे की तंत्रिका सर्जरी के लिए एक प्रजनन दृष्टिकोण का वर्णन करता है, जिसमें चोट के विभिन्न उत्कर्ण पैटर्न का विवरण शामिल है।
Abstract
यह प्रोटोकॉल चूहे के चेहरे की तंत्रिका चोट मॉडल में एक्सोनल पुनर्जनन और अवरोध का अध्ययन करने के लिए सुसंगत और प्रजनन योग्य तरीकों का वर्णन करता है। चेहरे की नर्व को इसकी पूरी लंबाई के साथ हेरफेर किया जा सकता है, इसके इंट्राक्रैनियल सेगमेंट से लेकर इसके इंट्राटेम्पोरल कोर्स तक। पुनर्योजी गुणों के प्रयोगात्मक अध्ययन के लिए तीन प्राथमिक प्रकार की तंत्रिका चोट का उपयोग किया जाता है: तंत्रिका क्रश, ट्रांसेक्शन और तंत्रिका अंतर। संभावित हस्तक्षेपों की सीमा विशाल है, जिसमें तंत्रिका की शल्य चिकित्सा हेरफेर, न्यूरोएक्टिव रिएजेंटया कोशिकाओं की डिलीवरी, और या तो केंद्रीय या अंत-अंग जोड़तोड़ शामिल हैं। तंत्रिका उत्थान का अध्ययन करने के लिए इस मॉडल के फायदे में सादगी, प्रजनन क्षमता, अंतर-प्रजातियों की स्थिरता, चूहे की विश्वसनीय जीवित रहने की दर, और मूत्र मॉडल के सापेक्ष एक बढ़ी हुई शारीरिक आकार शामिल है। इसकी सीमाओं में माउस मॉडल बनाम अधिक सीमित आनुवंशिक हेरफेर और चूहे की अतिशयोक्ति पुनर्योजी क्षमता शामिल है, जैसे कि चेहरे की तंत्रिका वैज्ञानिक को सावधानीपूर्वक वसूली के लिए समय बिंदुओं का आकलन करना चाहिए और क्या उच्च जानवरों और मानव अध्ययन के परिणामों का अनुवाद करना चाहिए। चेहरे की तंत्रिका चोट के लिए चूहा मॉडल तंत्रिका उत्थान की व्याख्या और तुलना के लिए कार्यात्मक, इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल और हिस्टोमॉर्फेमेट्रिक मापदंडों के लिए अनुमति देता है। यह इस तरह मानव रोगियों में चेहरे की तंत्रिका चोट के विनाशकारी परिणामों की समझ और उपचार को आगे बढ़ाने की ओर जबरदस्त क्षमता समेटे हुए है ।
Introduction
सिर और गर्दन क्षेत्र में कपाल तंत्रिका चोट जन्मजात, संक्रामक, आडिओपैथिक, आयट्रोजेनिक, दर्दनाक, न्यूरोलॉजिक, ऑनकोलॉजिक, या प्रणालीगत एटिओलोजन1के लिए माध्यमिक हो सकती है। कपाल तंत्रिका सातवीं, या चेहरे की तंत्रिका, आमतौर पर प्रभावित होता है। चेहरे तंत्रिका रोग की घटनामहत्वपूर्ण हो सकती है, क्योंकि यह हरसाल200,000 लोगों पर 20 से 30 को प्रभावित करती है। चेहरे की तंत्रिका की मुख्य मोटर शाखाएं लौकिक, जाइगोमैटिक, बुक्कल, सीमांत मंडीबुलर और सर्वाइकल शाखाएं हैं; इसमें शामिल शाखा के आधार पर, परिणामों में मौखिक अक्षमता या ड्रॉलिंग, कॉर्नियल सूखापन, दृश्य क्षेत्र बाधा माध्यमिक से टॉसिस, डिस्आर्थरिया, या चेहरे की विषमता2,,3शामिल हो सकती है। दीर्घकालिक रुग्णता में एक अलग चेहरे की मांसपेशी समूह के स्वैच्छिक संकुचन की कोशिश के साथ सिंकिनेसिस, या एक चेहरे की मांसपेशी समूह के अनैच्छिक आंदोलन की घटना शामिल है। नेत्र-मौखिक संश्लेषण चेहरे की तंत्रिका चोट के अगले कड़ी के रूप में गुमराह उत्थान का सबसे आम है और कार्यात्मक हानि, शर्मिंदगी, कम आत्मसम्मान, और जीवन की खराब गुणवत्ता का कारण बनता है3। व्यक्तिगत शाखाओं को चोट उन कार्यों को तय करती है जो चुनिंदा रूप से समझौता किए जाते हैं।
चेहरे की तंत्रिका चोट के नैदानिक उपचार अच्छी तरह से मानकीकृत नहीं है और परिणामों में सुधार करने के लिए आगे अनुसंधान की जरूरत है । स्टेरॉयड तीव्र चेहरे की तंत्रिका सूजन को कम कर सकते हैं, जबकि बोटॉक्स सिंकाइनेटिक आंदोलनों को अस्थायी करने के लिए उपयोगी है; लेकिन, प्रैक्टिशनर के आयुध में प्राथमिक पुनर्निर्माण विकल्पतंत्रिका मरम्मत, प्रतिस्थापन, या पुनर्एनिमेशन3,,44,5,,6के माध्यम से शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप शामिल हैं। चेहरे की तंत्रिका चोट के प्रकार के आधार पर निरंतर, चेहरे तंत्रिका सर्जन विकल्पों में से एक कई का उपयोग कर सकते हैं । सरल ट्रांसेक्शन के लिए, तंत्रिका reanastomosis उपयोगी है जबकि केबल-भ्रष्टाचार की मरम्मत तंत्रिका दोष के लिए बेहतर अनुकूल है; समारोह की बहाली के लिए, सर्जन या तो स्थिर या गतिशील चेहरे के पुनर्एनिमेशन प्रक्रियाओं का चयन कर सकते हैं। चेहरे की तंत्रिका चोट और बाद में मरम्मत के कई मामलों में, यहां तक कि अनुभवी चेहरे तंत्रिका सर्जन के हाथों में, सबसे अच्छा परिणाम अभी भी लगातार चेहरे विषमता और कार्यात्मक समझौता7में परिणाम है ।
इन उप-इष्टतम परिणामों ने चेहरे की तंत्रिका उत्थान पर व्यापक शोध को प्रेरित किया है। ब्याज के व्यापक विषयों में तंत्रिका मरम्मत तकनीकों को सिद्ध करना और नवाचार करना, विभिन्न तंत्रिका उत्थान कारकों के प्रभाव का निर्धारण करना और सिंकिनेसिस8,,9,,10,,11के दीर्घकालिक परिणाम का मुकाबला करने में मदद करने के लिए विशिष्ट तंत्रिका अवरोधकों की क्षमता का आकलन करना शामिल है। जबकि इन विट्रो मॉडल का उपयोग प्रो-ग्रोथ या निरोधात्मक कारकों की कुछ विशेषताओं का आकलन करने के लिए किया जा सकता है, इस विषय पर सच्चे अनुवादात्मक अनुसंधान का अनुवाद करने योग्य पशु मॉडल के माध्यम से सबसे अच्छा पूरा किया जाता है।
जिसका निर्णय पशु मॉडल का उपयोग करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है, क्योंकि शोधकर्ताओं ने चूहों12,,13जैसे भेड़ और छोटे पशु मॉडल जैसे बड़े जानवरों का उपयोग किया है। जबकि बड़े पशु मॉडल आदर्श शारीरिक दृश्य प्रदान करते हैं, उनके उपयोग के लिए विशेष उपकरण और कर्मियों को आसानी से या आसानी से उपलब्ध नहीं होने की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, प्रभाव प्रदर्शित करने के लिए एक अध्ययन शक्ति अत्यधिक लागत निषेधात्मक और संभावित नहीं कई वैज्ञानिक केंद्रों के व्यवहार्य दायरे के भीतर हो सकता है । इस प्रकार, छोटे पशु मॉडल का अक्सर उपयोग किया जाता है। माउस मॉडल चेहरे तंत्रिका सर्जरी से संबंधित परिणामों की एक संख्या का आकलन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है; हालांकि, तंत्रिका की सीमित लंबाई वैज्ञानिक के लिए इस तरह के बड़े अंतर चोट14के रूप में कुछ पैटर्न मॉडल करने की क्षमता को प्रतिबंधित कर सकते हैं ।
इस प्रकार, चूहा मूत्र प्रोटोटाइप वर्कहॉर्स मॉडल के रूप में उभरा है जिसके माध्यम से वैज्ञानिक अभिनव शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं का प्रदर्शन कर सकता है या निरोधात्मक या समर्थक विकास कारकों का उपयोग कर सकता है और परिणाम मापदंडों की एक विस्तृत श्रृंखला में प्रभाव का आकलन कर सकता है। चूहे के चेहरे की तंत्रिका शरीर रचना विज्ञान जाहिर है और आसानी से एक प्रजनन फैशन में संपर्क किया है । माउस मॉडल की तुलना में, इसके बड़े पैमाने पर, सरल ट्रांसेक्शन से लेकर 5 मिमी अंतराल15,,16तक सर्जिकल दोषों की एक विस्तृत श्रृंखला के मॉडलिंग के लिए अनुमति देता है। यह दोष स्थल पर जटिल हस्तक्षेपों के अनुप्रयोग के लिए आगे की अनुमति देता है, जिसमें कारक का सामयिक स्थान, कारक के इंट्रानियल इंजेक्शन, और आइसोग्राफया या पुलों की नियुक्ति17,,18,,19,,20,,21,,22,,23शामिल है।
चूहे की विनम्र प्रकृति, इसकी विश्वसनीय शरीर रचना विज्ञान, और प्रभावी तंत्रिका उत्थान के लिए इसकी प्रवृत्ति चोट24के उपरोक्त सर्जिकल पैटर्न के जवाब में कई परिणाम उपायों के संग्रह के लिए अनुमति देती है। चूहे के मॉडल के माध्यम से, चेहरे की तंत्रिका वैज्ञानिक इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के माध्यम से चोट, तंत्रिका और मांसपेशियों के हिस्टोलॉजिक परिणामों के लिए इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का आकलन करने में सक्षम है, विब्रिसल पैड के ट्रैकिंग आंदोलन के माध्यम से कार्यात्मक परिणाम और आंख बंद होने का आकलन, और फ्लोरोसेंट या कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी के माध्यम से सूक्ष्म और स्थूल परिवर्तन, अन्य के बीच11,,22,,23,,25,,26,,27,28, 28, 28, 28, 28, 28, 28, 28, 28,,29, इस प्रकार, निम्नलिखित प्रोटोकॉल चूहे के चेहरे की तंत्रिका और चोट पैटर्न के लिए एक शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण की रूपरेखा तैयार करेगा जिसे प्रेरित किया जा सकता है।
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Protocol
सभी हस्तक्षेपराष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों (एनआईएच) के दिशा-निर्देशों के अनुसार सख्ती से किए गए । प्रायोगिक प्रोटोकॉल को कार्यान्वयन से पहले मिशिगन विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) द्वारा अनुमोदित किया गया था। दस सप्ताह पुरानी वयस्क महिला स्प्राग-डाले चूहों का उपयोग किया गया ।
1. ऑपरेटिव डे से पहले
- ऑपरेटिंग डे से पहले निष्फल सर्जिकल उपकरणों, एनाल्जेसिक दवाओं, संवेदनाकारी दवा और ऑक्सीजन का उचित स्टॉक सुनिश्चित करें। कृपया एक पूरी सूची के लिए सामग्री की तालिका देखें।
2. प्रीऑपरेटिव सेटअप
- कम से कम दो व्यक्तियों (सर्जन और एक सहायक) के लिए कमरे सहित एक पर्याप्त काम करने की जगह सुनिश्चित करें।
नोट: एक समर्पित ऑपरेटिंग टेबल, संज्ञाहरण मशीन सेटअप के लिए कमरे, और निष्फल और बैकअप आपूर्ति के लिए पर्याप्त भंडारण स्थान की आवश्यकता है। - प्रक्रियाओं के दौरान उपयोग के लिए एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप कैलिब्रेट करें। सुनिश्चित करें कि सर्जन को मिल्ड/बटन पर एक निष्फल कवर रखकर माइक्रोस्कोप और ज़ूम/फोकस बटन के हैंडल को समायोजित करने की क्षमता है
नोट: हम संभालती है/
3. एनेस्थीसिया और तैयारी
- जानवर को संज्ञाहरण कक्ष में रखें और 1.8% आइसोफ्लोरीन और 0.9 एल/मिन ऑक्सीजन के माध्यम से सामान्य संज्ञाहरण को प्रेरित करें।
- सहज श्वास के आकलन और एक पैर की उंगलियों चुटकी के लिए जानवर की मुंह की प्रतिक्रिया का आकलन करके चेतना का मूल्यांकन के माध्यम से संज्ञाहरण के एक पर्याप्त विमान की पुष्टि करें ।
- कॉर्नियल जलन या सूखापन से रक्षा के लिए द्विपक्षीय रूप से आंखों को स्नेहक लागू करें।
- एक उस्तरा या स्वचालित क्लिपर के साथ ऑपरेटिव साइट (एस) दाढ़ी।
- इस समय चूहे की पहचान के लिए एक विधि स्थापित करें, या तो कान टैग या टेल लेबल/मार्किंग के माध्यम से।
- पश्चात दर्द के खिलाफ प्रोफिलैक्सिस के लिए जानवर की पीठ के साथ 0.05 मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन का एक चमड़े का इंजेक्शन प्रशासन।
4. सर्जिकल दृष्टिकोण और चोट पैटर्न
- जानवर को ऑपरेटिंग टेबल पर स्थानांतरित करें और नोसेकोन के माध्यम से गैस प्रवाह जारी रखें। सुनिश्चित करें कि एक वार्मिंग पैड अपने शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए जानवर और बाँझ क्षेत्र के नीचे तैनात है।
- चूहे के लिए गर्दन के रोल के रूप में उपयोग करने के लिए निष्फल धुंध (टेप के साथ लुढ़का और बांधा) रखें; यह सर्जिकल क्षेत्र का एक बढ़ाया जोखिम प्रदान करेगा। ध्यान दें कि कुशल तंत्रिका पहचान और विच्छेदन के लिए जानवर की उपयुक्त स्थिति सर्वोपरि है।
- प्रक्रिया के लिए जानवर के चेहरे की त्वचा तैयार करें। संक्रमण सुनिश्चित करने के लिए सर्जिकल साइट 3x को साफ़ करने के लिए क्लोरहेक्सिडीन या आयोडीन-आधारित समाधान का उपयोग करें।
- यदि वांछित हो तो शल्य चीरा की योजना बनाएं और चिह्नित करें। पोस्टऑरिकुलर त्वचा के प्राकृतिक तह को निर्धारित करने के लिए एक पूर्वकाल-पीछे की दिशा में ipsilateral कान में हेरफेर करें।
- तेज आईरिस कैंची या 15 नंबर ब्लेड का उपयोग करके पोस्ट्यूकुलर क्रीज में 4-5 मिमी चीरा फैशन करें। इसे आवश्यक के रूप में प्रक्रिया में बाद में विस्तारित किया जा सकता है।
- तत्काल चमड़े के नीचे प्रावरणी के माध्यम से स्पष्ट रूप से विच्छेदन करें और एक्सपोजर बढ़ाने के लिए माइक्रो-वीटलनर रिट्रैक्टर रखें। ध्यान दें कि इस क्षेत्र में छोटी कैलिबर रक्त वाहिकाएं हो सकती हैं; इन्हें Weitlaner reट्रैक्टर के माध्यम से बेहतर या अवर रूप से वापस लेने से सबसे अच्छा बचा जाता है।
- पूर्वकाल डिगास्ट्रिक मांसपेशी की पहचान करें क्योंकि यह खोपड़ी आधार के साथ इसके सम्मिलन की ओर एक अवर-से-बेहतर दिशा में यात्रा करता है।
- पूर्वकाल डिएस्ट्रिक पेट के कण्डरा को प्रकट करने के लिए अपने प्रविष्टि बिंदु के साथ मांसपेशियों के पेट के माध्यम से धीरे से फैलाएं। ध्यान दें कि कण्डरा खोपड़ी के आधार पर एक ठोस प्रविष्टि के साथ मांसपेशियों से निकलने वाली एक फिल्मी सफेद प्रक्रिया के रूप में दिखाई देता है।
- पूर्वकाल डिगास्ट्रिक मांसपेशी और उसके कण्डरा की पहचान के बाद, मांसपेशियों के पेट को आगे वापस लेने के लिए Weitlaner reट्रैक्टर समायोजित करें। ध्यान दें कि बाद में उजागर क्षेत्र त्रि-आयामी स्थान है जहां चेहरे की तंत्रिका का मुख्य ट्रंक निहित है।
नोट: इस क्षेत्र को खोपड़ी के आधार से श्रेष्ठ और मध्यस्थता से घिरा हुआ है, पार्श्व रूप से पूर्वकाल डिएस्ट्रिक मांसपेशी द्वारा, कान नहर द्वारा पीछे, और सतही लौकिक धमनी सहित गर्दन की संरचनाओं द्वारा अवर रूप से। - पर्याप्त जोखिम के बाद, चेहरे की तंत्रिका के मुख्य ट्रंक की पहचान करें क्योंकि यह डिएस्ट्रिक मांसपेशी के कण्डरा के नीचे से अवर यात्रा करता है, जहां यह खोपड़ी के आधार से स्टाइलोमैटोइड फोरमेन से बाहर निकलता है। ध्यान दें कि तंत्रिका एक मोती सफेद कॉर्ड के रूप में दिखाई देती है, जो जानवर के पैराटिड-मैसेसेमेरिक प्रावरणी में संलग्न है। निम्नलिखित कारणों से तंत्रिका को और उजागर करते समय सावधानी का अभ्यास करें।
- खिंचाव मध्यस्थता न्यूरोप्राक्सिया चोट से रक्षा करने के लिए आक्रामक विच्छेदन, या लंबवत फैलता से बचें।
- आक्रामक पीछे से बचें और मध्यस्थता का निर्देश दिया कि कान नहर में फैले पतले ऊतकों का उल्लंघन करने से सुरक्षा की जाए क्योंकि यह सर्जिकल क्षेत्र में मध्य कान वनस्पतियों को पेश कर सकता है।
- व्यापक मध्यस्थ और अवर निर्देशित विच्छेदन के माध्यम से सतही लौकिक धमनी को नुकसान पहुंचाने से बचें। ध्यान रहे कि तेज, पुलसती रक्तस्राव से चोट की पहचान की जाएगी।
- यदि धमनी घायल हो जाती है, तो संदंश के माध्यम से कपास-इत्तला देने वाले एप्लिकेटर या बाँझ धुंध के साथ त्वरित दबाव लागू करें। हीमोस्टैटिक एजेंट या लिक्विड फिब्रिन सीलेंट को निकटता के पास रखा जा सकता है। ध्यान रखें कि जानवर को तरल स्थिरीकरण के लिए 0.9% बाँझ खारा के एक चमड़े के इंजेक्शन की आवश्यकता हो सकती है।
- एक अवर दिशा में तंत्रिका के साथ विच्छेदन द्वारा मुख्य ट्रंक का पता लगाएं, स्टाइलोमास्टोइड फोरमेन के बाहर निकलने से दूर।
- तंत्रिका और उसकी शाखाओं के पूर्ण जोखिम के लिए अनुमति देने के लिए मूल चीरा का विस्तार करें। पैराटिड ग्रंथि के व्यवधान से बचने के लिए ध्यान रखें क्योंकि इसके परिणामस्वरूप पश्चात सियालोसेल हो सकता है।
- वांछित चोट पैटर्न को इस प्रकार प्रेरित करें।
- क्रश इंजरी के लिए, तंत्रिका को मजबूती से समझने और9सेक करने के लिए चिकनी-सामने वाले जौहरी के संदंश का उपयोग करें। एक उपयुक्त क्रश चोट सुनिश्चित करने के लिए 30 एस की अवधि के लिए तंत्रिका पर निरंतर और प्रजनन दबाव लागू करें।
- एक साधारण ट्रांसेक्शन के लिए, तंत्रिका, या तत्काल एपिन्यूरियम, ठीक दांतेदार संदंश के साथ, और एक ही कट के साथ वांछित बिंदु पर तंत्रिका को साफ-सुथरा करने के लिए तेज माइक्रोकैंची का उपयोग करें। संदंश के साथ तंत्रिका पर अतिरिक्त कर्षण से बचने के लिए ध्यान रखें।
- एक तंत्रिका अंतर मॉडल के लिए, सरल ट्रांसेक्शन चोट के लिए एक समान विधि का उपयोग करवांछित तंत्रिका अंतर बनाएं। जानवरों के बीच चोट पैटर्न की समानता सुनिश्चित करने के लिए वांछित तंत्रिका अंतर लंबाई-इंट्राऑपरेटिव ली में कपास-इत्तला वाले एप्लिकेटर-कट के निष्फल शाफ्ट का उपयोग करें।
5. घाव बंद
- बाँझ खारा के साथ घाव सिंचाई और बाँझ धुंध के साथ सूखी।
- अवशोषक टांके के साथ एक सरल, चमड़े के नीचे फैशन में त्वचा किनारों का अनुमान है, या त्वचा गोंद या घाव क्लिप का उपयोग करें, जो घाव बंद करने के लिए भी स्वीकार्य हैं। एक त्वचा के किनारे के गहरे से सतही काटने और फिर विपरीत त्वचा के किनारे के एक बाद सतही से गहरे काटने के द्वारा एक दफन सिलाई रखें।
6. पश्चात वसूली
- पोस्टऑपरेटिव दर्द नियंत्रण के लिए नॉनस्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ एनाल्जेसिक (जैसे 0.05 मिलीग्राम/किलोग्राम बुप्रेनोरफिन और 0.5 मिलीग्राम/किलोकार्प्रोफेन) का एक चमड़े का इंजेक्शन प्रशासित करें। इंजेक्शन को जानवर की पीठ के साथ रखें।
- संवेदनाकारएजेंट के प्रशासन को बंद करें और जानवर को अतिरिक्त 1 मिन के लिए ऑक्सीजन श्वास लेने की अनुमति दें।
- आकस्मिक घूस से बचने के लिए जानवर को गर्म (गर्मी दीपक के माध्यम से), बिस्तर सामग्री से रहित एसेप्टिक पिंजरे में रखें। ध्यान दें कि जानवर आम तौर पर 1-2 मिनट के भीतर वसूली के लक्षण प्रदर्शित करेगा और हिंद-लेग फ़ंक्शन की देरी से वसूली के साथ, विकेंद्रित दिखाई दे सकता है।
- उपयुक्त आवास इकाई में अपने पिंजरों के लिए जानवरों को वापस और दर्द के खिलाफ जारी प्रोफिलैक्सिस सुनिश्चित करने के लिए #1 पश्चात दिन पर पश्चात एनाल्जेसिक प्रशासन ।
- कुपोषण, कॉर्नियल जलन, या सर्जिकल साइट संक्रमण के लक्षणों के लिए मूल्यांकन करने और उचित सर्जिकल लॉग बनाए रखने के लिए प्रति दिन जानवरों की निगरानी करें।
- यदि महत्वपूर्ण वजन कम होता है तो एक चमड़े के नीचे फैशन में 0.9% बाँझ खारा प्रशासन करें।
- जानवर की पलक पलटा फिर से स्थापित होने तक रोजाना चिकनाई आंखमर को लागू करें।
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Representative Results
प्रारंभिक शल्य चिकित्सा प्रक्रिया के बाद, दो मुख्य प्रकार के परिणाम उपाय हैं: जीवित जानवर और माप में धारावाहिक माप जो जानवर का त्याग करने की आवश्यकता होती है। धारावाहिक माप के उदाहरणों में इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल परख शामिल हैं, जैसे कि यौगिक मांसपेशी कार्रवाई संभावित माप30,लेजर-असिस्टेड या वीडियोग्राफी के माध्यम से चेहरे की मांसपेशियों के आंदोलन का आकलन9का अर्थ है, या फ्लोरोसेंट ट्रांसजेनिक जानवरों31,,32में चेहरे की तंत्रिका के पुनर्विकास की दोहराव वाली लाइव इमेजिंग भी शामिल है। चित्रा 1 एक वयस्क ट्रांसजेनिक Thy1-GFP चूहे में चेहरे की तंत्रिका के मुख्य ट्रंक की लाइव इमेजिंग दिखाता है । सीमांत मंडीबुलर शाखा पर क्रश इंजरी की गई है, जो पहले पीईएस के ब्रांच प्वाइंट पर लगभग 2-3 मिमी डिस्टल है । मेटामॉर्फ इमेजिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करते हुए, हम चेहरे की तंत्रिका के दौरान किसी भी बिंदु पर फ्लोरोसेंट तीव्रता की मात्रा निर्धारित करने में सक्षम थे। विशेष रूप से, एक चोट साइट पर फ्लोरेसेंस समीपस्थ और डिस्टल की मात्रा निर्धारित करना संभव है, जिससे तंत्रिका उत्थान के लिए एक मार्कर के रूप में फ्लोरेसेंस की वापसी के लिए क्रमिक रूप से आकलन किया जा सकता है। चित्रा 2 फ्लोरेसेंस की क्रमिक वापसी को दिखाता है (एक साधारण ट्रांसेक्शन साइट पर समीपस्थ फ्लोरेसेंस के लिए डिस्टल फ्लोरेसेंस के अनुपात के रूप में मापा जाता है) 1, 2, 3, और 4 सप्ताह के समय-बिंदुओं पर थाय1-जीएफपी चूहे में।
उचित या मांसपेशियों के तंत्रिका के हिस्टोमॉर्फेमेट्रिक विश्लेषण के लिए समूहों में वांछित प्रभाव प्रदर्शित करने के लिए समय की पूर्व निर्धारित लंबाई के बाद जानवर का त्याग करने की आवश्यकता होती है। चित्रा 3 सीमांत मंडीबुलर डिवीजन की क्रॉस-सेक्शनल छवियों को दर्शाता है। इस तकनीक के लिए विभिन्न समूहों में हिस्टोमॉर्फेमेट्रिक विश्लेषण के लिए अनुमति देने के लिए सावधानीपूर्वक ऊतक हैंडलिंग, भंडारण, तैयारी, अनुभागऔर धुंधला होना आवश्यक है। यदि उचित रूप से प्रदर्शन किया जाता है, तो यह तकनीक एक्सोनल व्यास, मलबे की मात्रा, तंत्रिका फाइबर, तंत्रिका का प्रतिशत और घनत्व मापन के परिमाणीकरण के लिए अनुमति देती है।
चित्रा 1:चेहरे तंत्रिका शरीर रचना विज्ञान सीमांत मंडीबुलर तंत्रिका में एक क्रश चोट के बाद 1 सप्ताह Thy1-GFP चूहे में प्रदर्शन किया । क्रश चोट की साइट सफेद तीर से प्रदर्शित होती है। तंत्रिका के वर्गों को एमटी (मुख्य ट्रंक), बी (बुकल), और एमएम (सीमांत मंडीबुलर) शाखाओं के रूप में चिह्नित किया जाता है। स्केल बार 1.5 मिमी का प्रतिनिधित्व करता है. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2:साइट की फ्लोरोसेंट तीव्रता के अनुपात के रूप में फ्लोरेसेंस की वापसी की मात्रा तुरंत साइट की तीव्रता पर ट्रांससेक्शन चोट से ट्रांससेक्शन चोट को दूर करती है। चार जानवरों का अध्ययन किया गया, और एक क्रश चोट मॉडलिंग की गई थी । ग्राफ मतलब अनुपात ± मतलब के मानक त्रुटि के रूप में साजिश रची है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3:toluidine नीले रंग के साथ धुंधला के बाद चूहे चेहरे तंत्रिका की सीमांत मंडीबुलर शाखा के अक्षीय पार अनुभाग । स्केल बार 100 माइक्रोन का प्रतिनिधित्व करता है. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें.
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Discussion
चूहे के चेहरे की तंत्रिका चोट मॉडल अपनी शल्य चिकित्सा पहुंच, शाखाओं में बंटी पैटर्न, और शारीरिक महत्व27,,29,,33,,34,35,,36के कारण न्यूरोट्रोफिक कारकों के मूल्यांकन के लिए सबसे बहुमुखी प्रणाली के रूप में उभरा है।, वीडियो प्रदर्शन और ट्रांसजेनिक पशु डेटा के आवेदन का संयोजन तंत्रिका पुनर्योजी घटनाओं के वैज्ञानिक अध्ययन के लिए नई संभावनाएं खोलता है। यह मॉडल आघात, न्यूरोट्रोफिक प्रभावों, इम्यूनोमोडुलेटरी प्रभावों और माइक्रोएनवायरमेंट के अन्य पहलुओं के लिए तंत्रिका प्रतिक्रिया के व्यवस्थित और विस्तृत लक्षण वर्णन की अनुमति देता है। यद्यपि नैदानिक चेहरे की तंत्रिका अध्ययन का प्राथमिक उद्देश्य मोटोन्यूरॉन फ़ंक्शन की वसूली से संबंधित है, मॉडल का उपयोग न्यूरोमस्कुलर जंक्शन पर घटनाओं को बेहतर ढंग से समझने के लिए भी किया जा सकता है, अक्षीय परिवहन की बारीकियों, और अक्षीय-ग्लियल प्रभावों का परस्पर क्रिया27,,36,,37,,38,,39,,40,,41,,42,,43,,44। चेहरे की नर्व का उपयोग करके मशीनी अध्ययन ने विडंबना यह है कि अल्जाइमर रोग और पार्किंसंस रोग45,,46,,47जैसे केंद्रीय सूजन और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों से संबंधित महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि का नेतृत्व किया गया है। वहां, इस मॉडल में किए गए काम के चिकित्सा निहितार्थ बेहतर समझ के लिए उल्लेखनीय निहितार्थ है और अंततः दोनों परिधीय और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र दोनों सहायक कोशिकाओं और तंत्रिका ऊतकों को प्रभावित विकारों से पीड़ित रोगियों के लिए नैदानिक देखभाल में सुधार ।
चूहा मॉडल में चेहरे की नर्व सर्जरी करने के साथ एक प्रारंभिक सीखने की अवस्था है। हालांकि वैज्ञानिक के लिए शल्य चिकित्सा से प्रशिक्षित होना आवश्यक नहीं है, उन्हें एक ऑपरेटिंग माइक्रोस्कोप के नीचे काम करने और दूरबीन दृष्टि का उपयोग करने में सहज होना चाहिए। वैज्ञानिक को अपने गैर-प्रमुख हाथ से काम करने में सहज होना चाहिए, क्योंकि कॉन्ट्रालेटरल हाथ में Weitlaner रिट्रैक्टर के साथ रिऐक्शन को समायोजित करने से दृश्य में काफी सुधार हो सकता है। यह चेहरे की तंत्रिका के मुख्य ट्रंक की पहचान करने के लिए विशेष रूप से सच है, क्योंकि नौसिखिए सर्जन के लिए स्थलों को खोना और त्रि-आयामी स्थान में विकेंद्रित होना संभव है जहां तंत्रिका खोपड़ी आधार से बाहर निकलती है। हालांकि, एक बार अनुभव प्राप्त हो जाता है और सर्जन लगातार डिगास्ट्रिक मांसपेशी के कण्डरा की पहचान करने में सक्षम है, तो प्रक्रियाएं काफी सीधे-आगे हैं। जहां प्रक्रिया- तंत्रिका का एक साधारण ट्रांसेक्शन- जब वैज्ञानिक शुरू में सीख रहा होता है, तो 30 मिन तक लग सकता है, एक अनुभवी सर्जन के हाथों में, यह चीरा से घाव बंद करने तक 5 मिन के रूप में समीचीन हो सकता है। एक अनुभवी सहायक तैयारी और जानवरों की संज्ञाहरण के साथ-साथ जरूरत के रूप में आपूर्ति restocking प्रबंधन के साथ-यह एक ही बैठे में कई जानवरों पर काम करने के लिए संभव है । यदि जटिल इंट्राऑपरेटिव युद्धाभ्यास किया जाता है, जैसे स्टीरियोटैक्सिक इंट्रान्यूरल इंजेक्शन, तो आवश्यक समय बढ़ जाएगा।
इस समूह में वयस्क लुईस और स्प्राग-डाबले चूहों और वयस्क थाय1-जीएफपी चूहे के साथ काम करने का अनुभव है। इन मॉडलों ने प्रभावशाली लचीलापन का प्रदर्शन किया है, दोनों इंट्राऑपरेटिव और पश्चात। यह जानवर के अनुकूलन के लिए समय की अनुमति समझदारी होगी (आम तौर पर 1 सप्ताह) अगर देखभाल और प्रयोगशाला जानवरों के उपयोग के लिए NIH गाइड द्वारा अधिदेशित के रूप में एक अलग सुविधा से आदेश दिया, के रूप में भी जल्द ही एक हस्तांतरण के बाद काम अत्यधिक तनाव और गरीब पश्चात स्वास्थ्य में परिणाम सकता है । एकतरफा चेहरे की तंत्रिका चोट के साथ, चूहा कुपोषण या कॉर्नियल जलन के अप्रिय लक्षण ों को ठीक-ऑपरेटिव रूप से प्रदर्शित नहीं करता है। इसके अलावा, वे संज्ञाहरण की दोहराव अवधि काफी अच्छी तरह से४८बर्दाश्त, के रूप में पिछले प्रोटोकॉल अंततः बलिदान तक मूंछ समारोह की वापसी के धारावाहिक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल विश्लेषण की मांग की है । हालांकि ऑपरेटरों को अपनी क्षमताओं का सबसे अच्छा करने के लिए इंट्राऑपरेटिव बंध्यता बनाए रखने का प्रयास करना चाहिए, हम संचालित जानवरों में से किसी के साथ पश्चात संक्रमण का उल्लेख नहीं किया है । अवसर पर, जानवर अपने चीरा स्थल पर खरोंच करने का प्रयास करेगा; हालांकि, यह आम तौर पर 1-2 सप्ताह के भीतर बालों के पुनर्विकास के साथ बेसलाइन स्थिति में लौटता है। यदि पैराटिड ग्रंथि घायल हो जाती है या अनजाने में हटा दी जाती है, तो सिलोकेल परिणाम देगा, जिसके लिए जल निकासी के लिए दोहराने संज्ञाहरण की आवश्यकता हो सकती है।
चोट के स्थान, चोट के प्रकार, या किए गए हस्तक्षेप में संशोधन किए जा सकते हैं। चोट चेहरे की तंत्रिका के पाठ्यक्रम के साथ किसी भी बिंदु पर प्रेरित किया जा सकता है, इंट्राक्रैनियल चेहरे तंत्रिका ट्रांससेक्शन से मुख्य ट्रंक या इसकी परिधीय शाखाओं में से किसी को चोट के लिए49। चोट के व्यापक पैटर्न में क्रश इंजरी, मरम्मत के साथ या बिना सरल ट्रांसेक्शन, और मरम्मत या पुल11के बिना गैप-डिफेक्ट शामिल हैं। संभावित हस्तक्षेपों की सीमा संपूर्ण है । संक्षेप में, तंत्रिका के स्तर पर हस्तक्षेप किया जा सकता है उचित17,चोट23की साइट पर, या मांसपेशियों के अंत अंग५०पर । संभावित परिणाम मापदंडों की सूची भी उतनी ही लंबी है । वर्कहॉर्स हिस्टोमॉर्फेमेट्रिक मापदंडों में तंत्रिका गणना, तंत्रिका घनत्व और तंत्रिका का प्रतिशत, अन्य लोगों के बीच अक्षीय-आधारित मात्राकरण शामिल है। अतिरिक्त उपायों में लक्ष्य चेहरे की मांसपेशी51के पुनर्निरथीन ीकरण को प्रदर्शित करने के लिए पुनर्जनन और न्यूरोमस्कुलर जंक्शन परिमाणीकरण की सीमा को दर्शाने के लिए देशीयतर खंडों के हिस्टोलॉजिक विश्लेषण शामिल हैं। परिणामों का आकलन करने के उपन्यास तरीके22विकसित किए जाते रहते हैं । उदाहरण के लिए, हैडलॉक एट अल ने खुशबू या पफ-प्रेरित प्रतिक्रियाओं के माध्यम से स्वतंत्र चेहरे के क्षेत्रों के संकुचन का आकलन करने के लिए एक जटिल विधि का प्रदर्शन किया है; इस मूल्यांकन और परेशानी सिंकाइनेटिक उत्थान11के अंतिम उपचार के लिए क्षमता है .
किसी भी पशु मॉडल के साथ के रूप में, वहां मानव रोगियों के लिए परिणामों का अनुवाद करने में सीमाएं हैं । माउस और चूहे मॉडल दोनों कृंतक तंत्रिका तंत्र में निहित बेहतर पुनर्योजी क्षमता प्रदर्शित करते हैं; इस प्रॉपर्टी कृंतक को रिजेनरेटिव परिणाम प्रदर्शित करने की अनुमति देता है जो संभवतः मनुष्यों और उच्च पशुओं में हासिल नहीं किया जा सकताहै 24. इसलिए, चेहरे की तंत्रिका वैज्ञानिक को तंत्रिका उत्थान और वसूली के मूल्यांकन के लिए उचित समय-बिंदुओं का सावधानीपूर्वक चयन करना चाहिए; यदि एक लंबे समय बिंदु का चयन किया जाता है, अवसर की संकीर्ण खिड़की जहां प्रयोगात्मक समूहों विश्वसनीय उनके अद्वितीय हस्तक्षेप से प्रभाव प्रदर्शित कर सकते हैं24याद किया जा सकता है .
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
एसएए अमेरिकन एकेडमी ऑफ फेशियल प्लास्टिक एंड पुनर्निर्माण सर्जरी लेस्ली बर्नस्टीन ग्रांट प्रोग्राम द्वारा वित्त पोषित है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.8% isoflurane | VetOne | 13985-030-40 | |
| 11-0 nylon microsutures | AROSuture | TK-117038 | |
| 4-0 monocryl suture | VWR | 75982-084 | |
| Buprenorphine SR | ZooPharm | MIF 900-006 | |
| Carprofen | Sigma-Aldrich | MFCD00079028 | |
| Chlorhexidine | VWR | IC19135805 | |
| Jeweler forceps | VWR | 21909-458 | |
| Micro Weitlaner retractor | VWR | 82030-146 | |
| Micro-scissors | VWR | 100492-348 | |
| Mini tenotomy scissors | VWR | 89023-522 | |
| Number 15 scalpel blade | VWR | 102097-834 | |
| Operating microscope | Leica | ||
| Petrolatum eye gel | Pharmaderm | B002LUWBEK | |
| Sterile water | VWR | 89125-834 | |
| Tissue adhesive | Vetbond, 3M | NC9259532 | |
| Water conductor pad | Aqua Relief System | ARS2000B | |
| Bupivacaine | Use as a local analgesic |
References
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