Summary
Здесь мы описываем протоколы для применения определенных механических нагрузок к телятам мыши и для мониторинга сопутствующих внутримышечных изменений давления. Экспериментальные системы, которые мы разработали, могут быть полезны для исследования механизма, лежащего в основе благотворного воздействия физических упражнений и массажа.
Abstract
Массаж, как правило, признается полезным для снятия боли и воспаления. Хотя предыдущие исследования сообщили противовоспалительные эффекты массажа на скелетные мышцы, молекулярные механизмы позади плохо изучены. Недавно мы разработали простое устройство для применения локального циклического сжатия (LCC), которое может генерировать внутримышечные волны давления с различной амплитудой. Используя это устройство, мы продемонстрировали, что LCC модулирует воспалительные реакции макрофагов на месте и облегчает иммобилизацию индуцированной атрофии мышц. Здесь мы описываем протоколы для оптимизации и применения LCC как массажное вмешательство против иммобилизации индуцированного воспаления и атрофии скелетных мышц задней части мыши. Разработанный протокол может быть полезен для изучения механизма, лежащего в основе благотворного воздействия физических упражнений и массажа. Наша экспериментальная система является прототипом аналитического подхода к прояснению механической регуляции мышечного гомеостаза, хотя необходимо дальнейшее развитие для более комплексных исследований.
Introduction
Массаж, как правило, признается полезным для облегчения боли и улучшения физической работоспособности среди конкурентоспособных спортсменов и не-спортсменов, так1,2. В самом деле, предыдущие исследования показали, что массаж подавляет местное воспаление3 и подсказывает восстановление после тренировки повреждения мышц4,5. Молекулярные механизмы, лежащие в основе благотворного воздействия массажа остаются в значительной степени неизвестными.
Одна из трудностей с механистическим исследованием массажа связана с воспроизводимостью экспериментальных методов, с помощью которых тестируются массажные вмешательства. В предыдущих исследованиях, экспериментальныепроцедуры,которые имитируют массаж в основном включают в себя применение физических вмешательств с использованием частей тела практикующих, таких как ладони и пальцы6,7,8. Это затрудняет точное воспроизведение их величины, частоты, продолжительности и режима.
Многие устройства были разработаны для нанесения определенных механических нагрузок на ткани-мишени. Например, Цзэн и др. разработали пневматическую систему для длительной механической нагрузки на задние конечности крыс9 и Wang et al. разработали мехатронное устройство, которое может применять массажные механические нагрузки на задние конечности крыс и кроликов с контроль обратной связи в режиме реального времени10. По сравнению с ними, наша местная циклическая система сжатия (LCC) гораздо проще, требуя гораздо меньших затрат на строительство. Тем не менее, мы можем воспроизвести внутримышечное давление изменения, которые генерируются во время мягкого сокращения мышц. Используя это устройство, мы успешно продемонстрировали, что массаж, как механические вмешательства модулировать местные интерстициальной динамики жидкости и облегчить иммобилизации индуцированной мышечной атрофии11.
Здесь мы описываем детали нашего устройства и протокола, которые могут помочь изучить молекулярные механизмы, лежащие в основе положительных эффектов упражнений и массажей. Схемы протокола представлены как дополнительная цифра 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все эксперименты на животных проводились с одобрения Институционального комитета по уходу за животными и использованию Национального реабилитационного центра для инвалидов.
1. Иммобилизация мыши двусторонних задних конечностей
ПРИМЕЧАНИЕ: Мужские мыши C57BL/6 использовались для экспериментов в возрасте 11 - 12 недель после акклиматизации в течение по крайней мере 7 дней.
- Адекватно обезболивать мышь с помощью пентобарбитала натрия (50 мг/кг ит.). Убедитесь, что мыши не реагируют на задний нос щепотку.
ПРИМЕЧАНИЕ: Проведение процедуры иммобилизации между 10 утра и 7 вечера, чтобы свести к минимуму возможные последствия для кормления деятельности мышей. - Нанесите хирургические ленты на двусторонние задние конечности мыши, уложенные в положение лежа с удлиненными коленными суставами и подошвенными суставами голеностопных суставов.
- Поместите алюминиевую проволоку (см. таблицу материалов) на стволе на уровне позвоночника L4-5 и свернуть проволоку в спиральной конфигурации вокруг задних конечностей с 5 мм зазорами между каждым поворотом спирального слоя(рисунок 1A). Убедитесь в том, чтобы не скручивать провод слишком плотно и избежать нарушения местного кровотока.
- Чтобы свести к минимуму возможность побега от проводки, обездвижить тазобедренные суставы в положении 90 "похищение путем ручной настройки конфигурации алюминиевой проволоки.
- Верните мышей в их оригинальные клетки. 3 ч спустя, убедитесь, что они оправиться от анестезии и доступ к пище и воде, как обычно.
- Дом 3 - 6 обездвижемых мышей на клетку, как и до иммобилизации.
2. Измерение внутримышечного давления мышц желудочно-кишечного желудка мыши
ПРИМЕЧАНИЕ: Несколько различных весов цилиндрических единиц (36 г, 66 г и 200 г) были протестированы в экспериментах по мониторингу давления в сочетании с LCC. Это измерение проводилось отдельно от экспериментов по анализу воспаления и атрофии мышц (см. шаг 3 - 5 для более подробной информации), т.е. мыши, подвергающиеся измерению давления, не использовались для гистологического анализа.
- Поскольку измерение давления включает в себя более инвазивные процедуры (например, разрез кожи и вставка иглы) по сравнению с проводкой и LCC, используйте смесь из трех анестезирующих агентов (медетомидин 0,75 мг/кг, мидазолам 4,0 мг/кг, и бутафанфол 5,0 мг/кг, т.п.). Убедитесь, что мыши не реагируют на задний нос щепотку.
- Положите мышь в логовое положение, сделать 2-мм разрез с скальпелем на задней теленка после депилирования с электрической бритвой и полустерилизации поверхности кожи с 70% этанола и хлоргексидин пропитанной абсорбирующий хлопок.
- Вставьте 20 G жилой иглы в гастрокнемиоз мышцы под тупым углом (150 " - 170") на поверхность кожи.
- Используя пластиковую оболочку иглы в качестве направляющего, поместите датчик телеметра кровяного давления (см. Таблица Материалов)в середине живота гастрокнемии мышцы, а затем удалить оболочку из мышцы.
- После зашву кожи с 4-0 нейлоновый шов, применять LCC с несколькими различными весами цилиндрических единиц для теленка в мышах (см. шаг 3 для более подробной информации), и контролировать внутримышечное давление с помощью программного обеспечения для биологического анализа сигнала (см. Таблица Материалы).
- Верните мышей в их оригинальные клетки. 3 ч спустя, убедитесь, что они оправиться от анестезии / анальгезии и имеют доступ к пище и воде, как обычно.
3. Местное циклическое сжатие (LCC) на мышах телят
- За исключением измерения внутримышечного давления и эвтаназии (т.е. вывихшей шейки матки), для анестезии используйте пентобарбитал натрия (50 мг/кг т.п.).
- Отлините мышь от проводки задних конечностей и положите ее в логовое положение с удлиненными коленными суставами и подошвенными суставами голеностопных суставов, так что икры выходили вверх. Не фиксировать мышь задние конечности на сцене.
- Нанесите LCC на теленка, вертикально двигаясь цилиндрической единицы веса(рисунок 1B) покрыты подушки площадку (Рисунок 1С) на 1 Гц в течение 30 минут в день, 7 дней.
- После каждого боя ежедневно LCC, повторно провода мыши задние конечности.
4. Иммуногистохимический анализ гастрокнемии
- Эвтанизировать мышь путем вывиха шейки матки при адекватной анестезии/анальгезии путем интраперитонеальной инъекции смеси из трех анестезиологических агентов (медетомидин 0,75 мг/кг, мидазолам 4,0 мг/кг и буторфанол 5,0 мг/кг).
- После депиаляции задней поверхности теленка, сделать разрез кожи, и вскрыть гастрокнемии мышц, отделяясь от тибио-фибулярной кости с помощью хирургических ножницами и быстро заморозить их в оптимальном решении соединения резки.
- С помощью криостата приготовьте криосекционные образцы гастрокнемиозных мышц на стеклянных слайдах. Храните образцы в морозильной камере -80 градусов до анализа.
- Выньте образцы криосеции гастрокнемия для анализа из морозильной камеры и обезвоживают их путем высыхания воздуха при комнатной температуре.
- Используйте жидкую ручку-блокатор, чтобы нарисовать область, которая включает в себя все крио-секции на слайде. Круг предотвратит поток решений со слайда.
- Избегайте сушки образцов, поместив горки в лоток, в котором влажная среда создается с пропитанной водой бумажной тканью.
- Нанесите 100 qL блокирующего буфера (фосфат-буферированный солевым раствором (PBS), содержащим 0,25% казеина, несущего белка и 0,015 М азида натрия) на 30 мин при комнатной температуре.
- Промыть слайды дважды путем инкубации с PBS-T (PBS, содержащий 0,1% полиоксиэтилен сорбитанского монолаурата (см. Таблица материалов)в течение 5 мин.
- Нанесите 100 л первичных антител, разбавленных PBS, на каждый образец, накройте лоток крышкой и инкубируете на ночь при комнатной температуре.
- Вымойте 3 раза pbS-T (5 мин для каждой стирки).
- Нанесите 100 л вторичных антител, разбавленных PBS, на каждый образец и инкубировать в течение 1 ч при комнатной температуре.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для анти-ламинин окрашивания, используйте Alexa Fluor 568-конъюгированных вторичных антител. Для анти-F4/80, анти-MCP-1, и анти-TNF-я, используйте Alexa Fluor 568- или 488-конъюгированных вторичных антител. - Вымойте 3 раза pbS-T (5 мин для каждой стирки).
- Нанесите 100 л раствора DAPI, разбавленного PBS-T, на каждый образец и инкубировать в течение 3 мин при комнатной температуре.
- Вымойте 3 раза pbS-T (5 мин для каждого).
- Смонтировать образцы с монтажной средой и покрыть их крышками.
5. Гисто-морфометрический анализ гастрокнемии
- Поместите образец слайдов на флуоресцентный микроскоп (см. Таблица материалов)и просмотрите образцы с помощью 20-й цели с соответствующими фильтрами (DAPI-B, 360/40 нм для возбуждения и 460/50 нм для выбросов; GFP-B, 470/40 нм для возбуждения и 535/50 нм для выбросов; FRITC, 540/25 нм для возбуждения и 605/55 нм для выбросов.
- Используя программное обеспечение для анализа изображений (см. Таблица Материалов),измерьте поперечную область (CSA) каждого миофибра, и подсчитайте количество F4/80-, MCP-1-, и TNF-я-положительные клетки.
ПРИМЕЧАНИЕ: Определите CSA каждого миофибра путем отслеживания внутреннего края мембраны подвала визуализированы с анти-ламинин-2 иммуно-2 иммуно-2 иммуно-2 иммуно-сточки.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В соответствии с нашими предыдущими наблюдениями12, CSA гастрокнемий миофиберов были значительно снижены на hindlimb иммобилизации(Рисунок 2A,B). Кроме того, наш иммунофлуоресцентный анализ окрашивания показал, что клетки, выражающие MCP-1 и TNF-з, оба из которых играют ключевую роль в регулировании воспалительных процессов13,14, значительно увеличилось в гастрокнемии мышцы ткани обездвижемых задних конечностей (MCP-1: Рисунок 2C,F,H; TNF-З: Рисунок 2D,G,I). Вместе с увеличением клеток положительно окрашенных F4/80, маркер для макрофагов (Рисунок 2C-E,H,H, I), hindlimb иммобилизации, как представляется, спровоцировать атрофию икроножной мышцы с участием местных воспалительных реакций в том числе накопление макрофагов. Затем мы попытались изучить ли LCC, массаж, как механическое вмешательство, модулировал это иммобилизации индуцированного воспаления мышц и атрофии.
Среди нескольких различных величин LCC, которые мы тестировали, изменив вес цилиндрического блока, один, соответствующий 50 мм ртн/ внутримышечной волны давления (LCC с 66 г, Рисунок 3A) по-видимому, наиболее эффективно облегчить иммобилизации индуцированного снижения миофибра CSA и увеличение накопления макрофагов в гастрокнемии мышц(рисунок 3B). Основываясь на результатах накопления миофибра CSA и макрофагов, мы использовали 66 g LCC для дальнейших исследований. Примечательно, что индуцированные LCC внутримышечные волны давления, пиковые величины которых зависели от цилиндрической массы единицы, были очень однородными(рисунок 3A),что указывает на последовательность и воспроизводимость LCC в качестве механического вмешательства скелетных мышц.
LCC (1 Гц, 30 мин в день, 7 дней) значительно смягчил иммобилизации индуцированных снижение миофибра CSA гастрокнемии мышц(Рисунок 4A, B). Кроме того, LCC частично умерил иммобилизации индуцированного снижения сокращающейся силы трицепса суре мышцы(рисунок 4C). Кроме того, LCC умерил увеличение F4/80-положительных, TNF-я-положительный, F4/80-, MCP-1-, и TNF-я-положительные клетки в гастрокнемии мышечных тканей обездвиженных задних конечностей (F4/80, Рисунок 4D, F; MCP-1, Рисунок 4D, G; ТНФ-З, Рисунок 4E,H). В совокупности, LCC, который генерирует внутримышечное давление волн с амплитудой 50 мм рт. ст., облегчить иммобилизации индуцированной мышечной атрофии и местных воспалительных реакций, включая накопление макрофагов.
Рисунок 1: Мышь двусторонней иммобилизации задних конечностей и местного циклического сжатия (LCC) применения.
(A) Двусторонние мыши задние конечности были обездвижены спиральной проводки с тазобедренных суставов похищены, коленные суставы расширены, и голеностопных суставов подошвенный согнуты. (B) LCC устройство. (C) Экспериментальная настройка для LCC на мыши теленка. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 2: Мышь задняя иммобилизация, которая атрофирует икроножные мышцы, вызывает местную воспалительную реакцию.
(A) Поперечные микрографические изображения анти-ламинин-2 иммунофлуоресцентного окрашивания гастрокнемии мышц. Изображения с высоким увеличением (справа) относятся к областям, указанным прямоугольниками на изображениях с низким увеличением (слева). Шкала баров, 100 мкм. (B) Иммобилизация индуцированной атрофии мышц. CSA гастрокнемий миофиберов уменьшилась с периодом hindlimb иммобилизации. Для количественной оценки CSA, 100 миофибы были выбраны случайным образом. Данные представлены в качестве средств s.D. q, P qlt; 0,05, односторонней ANOVA с пост-хос-тестом Bonferroni (n no 3 мышей для каждой группы). (C и D) Микрографические изображения анти-MCP-1 (зеленый в C) и анти-TNF-з (зеленый в D) и анти-F4/80 (красный) иммуно-пятно. Для объединенной презентации (зеленой и красной) изображения низкого и высокого увеличения закладываются как в (A). Стрелки указывают на двойные положительные клетки для F4/80 и MCP-1 (C) или TNF-я (D) Шкала баров, 100 мкм. (E-I) Количественная оценка анти-MCP-1, анти-TNF-я, и анти-F4/80 иммуно-пятно. Последствия иммобилизации были проанализированы со ссылкой на период двусторонней иммобилизации задних конечностей. Статистический анализ проводился со ссылкой на образцы «День 0» (гастрокнемиозные мышцы у мышей, которые не подвергались иммобилизации). Данные представлены в качестве средств s.D. q, P qlt; 0,05, односторонней ANOVA с пост-хос-тестом Bonferroni (n no 3 мышей для каждой группы). Эта цифра была изменена с разрешения11. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 3: Влияние LCC с различными величинами на иммобилизации индуцированной атрофии мышц и воспаления ответ.
(A)Применение различных величин LCC путем изменения веса цилиндрического блока. Шкала бар, 1 с. 36 г, 66-г и 200 г цилиндрических единиц производится 45 мм Рт, 50 мм ртн и 140 мм ртн, соответственно. (B) Сравнение эффектов применения LCC для обездвиженного hindlimbs с 36-g, 66-g и 200-g цилиндрическими блоками. CSA гастрокнемий миофиберов (слева) и F4/80-положительных клеток (справа) LCC-прикладной теленка были количественно относительные значения для тех, контроля hindlimb, который не подвергался LCC, в каждой мыши. Данные представлены в качестве средств s.D. q, P qlt; 0,05, односторонней ANOVA с пост-хос-тестом Bonferroni (n no 4 мышей для каждой группы). Эта цифра была изменена с разрешения11. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Рисунок 4: LCC смягчает иммобилизации индуцированной мышечной атрофии и воспалительной реакции.
(A, B) Облегчение иммобилизации индуцированной атрофии мышц с помощью применения LCC. CSA гастрокнемий миофибир (B) был проанализирован как на рисунке 2B. Данные представлены в качестве средств s.D. q, P qlt; 0.05; В.П.л.; 0,01, одностороннее ANOVA с пост-хос-тестом Bonferroni (n no 6 мышей для каждой группы). (C) Снижение сокращающейся силы трицепсов сюр мышц после иммобилизации и его частичного восстановления LCC. Данные представлены в качестве средств s.D. q, P qlt; 0,05, парный тест студента t (n no 4 мышей для управления, n no 5 мышей для группы иммобилизации). (D,E) Микрографические изображения анти-MCP-1 (зеленый в D), анти-TNF-я (зеленый в E) и анти-F4/80 (красный) иммунофлуоресценции окрашивание гастрокнемии мышц мобилизованных (вверху) и обездвиженных задних конечностей без (средний) и с (снизу) LCC применения представлены как на рисунке 2C,D. Шкала баров, 100 мкм. (F-H) Количественная оценка анти-MCP-1, анти-TNF-з, и анти-F4/80 иммуно-пятно. Мы сравнили икроножные мышцы обездвиженные задние конечности с применением LCC и без них. Данные представлены в качестве средств s.D. q, P qlt; 0.05; В.П.л.; 0,01, одностороннее ANOVA с пост-хос-тестом Bonferroni (n no 6 мышей для каждой группы). Эта цифра была изменена с разрешения11. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.
Дополнительная диаграмма 1: Схематическое представление экспериментальных протоколов. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы загрузить фигуру.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Мы описали метод применения массажа, как механический стимул, который имеет противовоспалительные эффекты. Наша система имеет следующие преимущества даже по сравнению с теми, о которых сообщалось ранее. Во-первых, предыдущие исследования не количественно определить механические силы применяется2 или определить их величины на основе измерения на поверхности тела, но не внутри тканей10. В отличие от этого, мы измеряли внутримышечное давление с помощью телеметра артериального давления. Во-вторых, простая структура нашего устройства(рисунок 1B) позволила нам построить систему с высокой консистенцией и воспроизводимостью(рисунок 3A) при относительно низкой стоимости. В-третьих, наше вмешательство (LCC) относится к физической активности (мягкое сокращение мышц) в связи с внутримышечным давлением изменения (50 мм рт. с.15). Наш подход обеспечит научную основу для массажа, как вмешательство в качестве возможной терапевтической / профилактической процедуры, которая уменьшает недостаток физической бездеятельности16.
Наиболее важным шагом в нашем протоколе является позиционирование задней мыши (Протокол шаг 3.3). Мы должны применять LCC в направлении перпендикулярно икроножных мышц; в противном случае, мышечные ткани будут частично сжаты и повреждены, даже когда 66-г цилиндрический блок используется.
Ограничение метода LCC включает в себя требование анестезии, которые могут иметь некоторые последствия для метаболизма мышц. Кроме того, мы не можем полностью исключить влияние крошечных сокращения мышц, которые могут быть вызваны как рефлекс на резкие удары во время применения LCC.
В заключение, мы показали, что интерстициальное движение жидкости опосредует эффекты LCC11. Мы можем быть в состоянии вызвать интерстициальный поток более эффективно, изменяя режим циклического сжатия. Например, сжатие синусоидального режима может быть лучше по сравнению с резкими инсультами, используемыми в нашем текущем исследовании.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что нет конкурирующих интересов, связанных с рукописью.
Acknowledgments
Мы благодарим К. Наканиши, К. Хамамото, Н. Куме и К. Цуруми за их постоянную поддержку на протяжении всего проекта. Эта работа частично была поддержана Фондом внутренних исследований министерства здравоохранения, труда и социального обеспечения Японии; Гранты в помощь научным исследованиям от Японского общества содействия науке; Программа MEXT для Фонда стратегических исследований частных университетов на 2015-2019 годы от Министерства образования, культуры, спорта, науки и техники (S1511017).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aluminum wire | DAISO JAPAN | B028 | An aluminum wire is used to avoid escaping restriction by the wire |
| Blood pressure telemeter | Millar | SPR-671 | A blood pressure telemeter is used to mesure intramuscular pressure. |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI is a fluorescent probe which is commonly used to stain DNA for fluorescent microscopy. |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 (Dilution ratio, 1:500) | Invitrogen | A11034 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Goat anti-rat Alexa Fluor 568 (Dilution ratio, 1:500)) | Invitrogen | A11077 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| ImageJ | NIH | N/A | Analysis software for image |
| LabChart8 | ADInstrumens | Analysis software for acquiring biological signals. | |
| Prolong gold | Thermo Fisher Scientific | P36930 | Prolong gold is for mounting stained samples. |
| Protein Block Serum-Free | Dako | X090930-2 | For blocking non-specific background staining in immunohistochemical procedures. |
| Rat monoclonal anti-laminin-2 antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Sigma Aldrich | L0663 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rat monoclonal anti-F4/80 antibody (Dilution ratio, 1:500) | Abcam | ab6640 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rabbit polyclonal anti-MCP-1 antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Abcam | ab25124 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rabbit polyclonal anti-TNF-α antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Abcam | ab66579 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Surgical tape | 3M Japan | 1530EP-0 | Surgical tape is used to restrict joint movement. |
References
- Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group. Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).
- Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R. Effects of leg massage on recovery from high intensity cycling exercise. British Journal of Sports Medicine. 38 (2), 173-176 (2004).
- Waters-Banker, C., Butterfield, T. A., Dupont-Versteegden, E. E. Immunomodulatory effects of massage on nonperturbed skeletal muscle in rats. Journal of Applied Physiology. 116 (2), 164-175 (2014).
- Haas, C., et al. Massage timing affects postexercise muscle recovery and inflammation in a rabbit model. Medicine & Science in Sports & Exercise. 45 (6), 1105-1112 (2013).
- Crane, J. D., et al. Massage therapy attenuates inflammatory signaling after exercise-induced muscle damage. Science Translational Medicine. 4 (119), 119ra113 (2012).
- Bove, G. M., Harris, M. Y., Zhao, H., Barbe, M. F. Manual therapy as an effective treatment for fibrosis in a rat model of upper extremity overuse injury. Journal of the Neurological Sciences. 361, 168-180 (2016).
- Andrzejewski, W., et al. Increased skeletal muscle expression of VEGF induced by massage and exercise. Folia Histochemica et Cytobiologica. 53 (2), 145-151 (2015).
- Mantovani Junior, N., et al. Effects of massage as a recuperative technique on autonomic modulation of heart rate and cardiorespiratory parameters: a study protocol for a randomized clinical trial. Trials. 19 (1), 459 (2018).
- Zeng, H., Butterfield, S., Agarwal, F., Haq, T., Zhao, Y. An engineering approach for quantitative analysis of the lengthwise strokes in massage therapies. Journal of Medical Devices. 2 (4), (2008).
- Wang, Q., et al. A mechatronic system for quantitative application and assessment of massage-like actions in small animals. Annals of Biomedical Engineering. 42 (1), 36-49 (2014).
- Saitou, K., et al. Local cyclical compression modulates macrophage function in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Clinical Science. 132 (19), 2147-2161 (2018).
- Onda, A., et al. A New mouse model of skeletal muscle atrophy using spiral wire immobilization. Muscle Nerve. 54 (4), 788-791 (2016).
- Luster, A. D.
- Reid, M. B., Li, Y. P. Tumor necrosis factor-α and muscle wasting: a cellular perspective. Respiratory Research. 2 (5), 269-272 (2001).
- Baumann, J. U., Sutherland, M. D., Hangg, A. Intramuscular pressure during walking: An experimental study using the wick catheter technique. Clinical Orthopaedics Related Research. 145, 292-299 (1979).
- Lee, I., et al. Effect of physical inactivity on major non-communicable diseases worldwide: an analysis of burden of disease and life expectancy. Lancet. 380, 219-229 (2012).
