Summary
Her beskriver vi protokollene for påføring av definerte mekaniske belastninger på muse kalver og for å overvåke samtidig intramuskulær trykk endringer. Den eksperimentelle systemer som vi har utviklet kan være nyttig for å undersøke mekanismen bak den gunstige effekten av fysisk trening og massasje.
Abstract
Massasje er generelt anerkjent for å være gunstig for lindrende smerte og betennelser. Selv om tidligere studier har rapportert antiinflammatoriske effekter av massasje på skjelettmuskulatur, den molekylære mekanismer bak er dårlig forstått. Vi har nylig utviklet en enkel enhet for å bruke lokale syklisk kompresjon (LCC), som kan generere intramuskulær trykkbølger med varierende amplituder. Ved hjelp av denne enheten, har vi demonstrert at LCC modulerer inflammatoriske reaksjoner av makrofager in situ og lindrer immobilisering-indusert muskel atrofi. Her beskriver vi protokoller for optimalisering og anvendelse av LCC som en massasje-lignende intervensjon mot immobilisering-indusert betennelse og atrofi av skjelettmuskulatur mus hindlimbs. Protokollen som vi har utviklet kan være nyttig for å undersøke mekanismen underliggende gunstige effekter av fysisk trening og massasje. Vårt eksperimentelle system gir en prototype av den analytiske tilnærmingen til å belyse den mekaniske reguleringen av muskel homeostase, selv om videre utvikling må gjøres for mer omfattende studier.
Introduction
Massasje er generelt anerkjent for å være gunstig for både smertelindring og forbedring av den fysiske ytelsen blant konkurransedyktige idrettsutøvere og ikke-utøvere alike1,2. Faktisk, tidligere studier har vist at massasje undertrykker lokal betennelse3 og ber om utvinning fra post-øvelsen muskel skade4,5. Molekylære mekanismer underliggende de gunstige virkningene av massasje fortsatt i stor grad ukjent.
En av vanskelighetene med mekanistisk etterforskning av massasje gjelder reproduserbarhet av eksperimentelle teknikker som massasje-lignende intervensjoner er testet. I tidligere studier, eksperimentelle prosedyrer som etterligner massasje meste innebære anvendelse av fysiske intervensjoner ved hjelp av utøvere ' kroppsdeler, slik som palmer og fingre6,7,8. Dette gjør det vanskelig å gjengi størrelsesorden, frekvens, varighet og modus presist.
Mange enheter er utviklet for å bruke definerte mekaniske belastninger til målet vev. For eksempel, Zeng et al. har utviklet et pneumatisk system for lang-klok mekanisk lasting til rotter ' hindlimbs9 og Wang et al. har utviklet en mekatroniske enhet som kan bruke massasje-lignende mekaniske belastninger til hindlimbs av rotter og kaniner med tilbakemeldings kontroll10i sanntid. Sammenlignet med dem, våre lokale syklisk kompresjon (LCC) systemet er mye enklere, krevende langt mindre kostnader for bygging. Likevel, vi kan reprodusere intramuskulær trykk endringer som genereres under milde muskel sammentrekning. Ved hjelp av denne enheten, har vi med hell vist at massasje-lignende mekaniske intervensjoner modulere lokale interstitiell væske dynamikk og lindre immobilisering muskel atrofi11.
Her beskriver vi detaljene for enheten vår og protokollen, som kan bidra til å utforske de molekylære mekanismene bak de positive effektene av øvelser og massasje. Det skjematisk av protokollen er forevist idet supplerende skikkelsen 1.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr eksperimenter ble utført under godkjenning av institusjonelle Animal Care og bruk komité av National Rehabilitation Center for personer med nedsatt funksjonsevne.
1. immobilisering av musen bilaterale hindlimbs
Merk: mann C57BL/6 mus ble brukt til eksperimenter i en alder av 11-12 uker etter acclimation i minst 7 dager.
- Adekvat bedøve en mus ved hjelp av natrium pentobarbital (50 mg/kg IP). Sørg for at mus ikke reagerer på en hindlimb bentap tå knipe.
Merk: gjennomføre prosedyren for immobilisering mellom 10 am og 7 pm for å minimere mulige effekter på fôring aktivitet av mus. - Påfør kirurgiske kassetter til bilaterale hindlimbs av musen lagt i en liggende posisjon med kneet leddene utvidet og ankel leddene plantar-flexed.
- Plasser en aluminiumstråd (se tabell over materialer) på stammen på L4-5 ryggrad nivå og coil ledningen i en spiral konfigurasjon rundt hindlimbs med 5 mm gap mellom hver sving på spiral laget (figur 1a). Sørg for å ikke spole ledningen for stramt og unngå å forstyrre den lokale blodstrømmen.
- For å minimere muligheten for å flykte fra ledninger, nakkens hofte leddene på plasseringen av 90 ° bortføring ved å manuelt justere konfigurasjonen av aluminium wire.
- Returner musene til de opprinnelige burene. 3 h senere, sørg for at de gjenoppretter fra anestesi og tilgang til mat og vann som vanlig.
- House 3-6 immobilisert mus per bur som før immobilisering.
2. måling av intramuskulær trykk av mus gastrocnemius muskler
Merk: flere forskjellige vekter av sylindriske enheter (36 g, 66 g, og 200 g) ble testet i trykk-overvåking eksperimenter kombinert med LCC. Denne målingen ble utført separat fra eksperimentene for å analysere muskel betennelse og atrofi (se trinn 3-5 for flere detaljer) dvs, musene utsatt for trykkmåling ble ikke brukt for histologiske analyser.
- Fordi trykkmåling innebærer mer invasive prosedyrer (f. eks, hud snitt og nål innsetting) i forhold til hindlimb bentap ledninger og LCC, bruk en blanding av tre anestesimidler (medetomidine 0,75 mg/kg, midazolam 4,0 mg/kg, og butorphanol 5,0 mg/kg, IP). Sørg for at mus ikke reagerer på hindlimb bentap tå knipe.
- Lay musa i en utsatt posisjon, lage en 2 mm snitt med en skalpell på bakre kalv etter depilating med en elektrisk barbermaskin og semi-sterilisering hudoverflaten med 70% etanol-og klorheksidin-gjennomvåt absorberende bomull.
- Sett en 20 G indwelling nål inn i gastrocnemius muskelen ved en stumpe vinkel (150 ° – 170 °) til hudoverflaten.
- Ved hjelp av plast skjede av nålen som en guide, plassere en sensor av blodtrykket måleren (se tabell av materialer) i midten av magen av gastrocnemius muskel, og deretter fjerne skjede fra muskelen.
- Etter suturing av huden med 4-0 nylon Sutur, Påfør LCC med flere forskjellige vekter av sylindriske enheter til kalven i mus (se trinn 3 for mer detaljer), og overvåke intramuskulær trykk ved hjelp av programvare for biologisk signal analyse (se tabell over Materialer).
- Returner musene til de opprinnelige burene. 3 h senere, sørg for at de gjenoppretter fra anestesi/analgesi og har tilgang til mat og vann som vanlig.
3. lokale sykliske kompresjon (LCC) på musen kalver
- Med unntak av intramuskulær trykkmåling og euthanizing (dvs. cervical forvridning), bruk natrium pentobarbital (50 mg/kg IP) for anestesi.
- Løsne musen fra hindlimb bentap ledninger og legg den i en utsatt posisjon med kne leddene utvidet og ankelen leddene plantar-flexed slik at kalver møtte oppover. Ikke fest muse hindlimbs på scenen.
- Påfør LCC på leggen ved å vertikalt flytte en sylindrisk vekt enhet (figur 1B) dekket med en pute pad (figur 1C) ved 1 Hz i 30 min per dag, 7 dager.
- Etter hver bout av daglig LCC, re-wire musen hindlimbs.
4. immunhistokjemiske analyse av gastrocnemius
- Euthanize musen ved cervical forvridning under tilstrekkelig anestesi/analgesi ved intraperitoneal injeksjon av en blanding av tre anestesimidler (medetomidine 0,75 mg/kg, midazolam 4,0 mg/kg, og butorphanol 5,0 mg/kg).
- Etter depilating den bakre kalv overflaten, gjør en hud snitt, og analysere gastrocnemius musklene ved å skille fra tibio-fibular bein ved hjelp av en kirurgisk saks og raskt fryse dem i en optimal skjæring temperatur sammensatte løsning.
- Ved hjelp av en kryostaten, forberede fryse-delen prøver av gastrocnemius muskler på glass lysbilder. Oppbevar prøvene i en-80 ° c fryser til analyse.
- Ta ut de gastrocnemius som skal analyseres fra fryseren og tørke dem ved lufttørking ved romtemperatur.
- Bruk en flytende blokkerings penn til å tegne et område som inneholder alle fryse delene på lysbildet. Sirkelen vil hindre at løsningene strømmer ut av lysbildet.
- Unngå tørking av prøvene ved å plassere lysbildene i et brett der et fuktig miljø er opprettet med papir klut fuktet med vann.
- Påfør 100 μL av blokkerings buffere (fosfat-bufret saltvann (PBS) som inneholder 0,25% kasein, bære protein og 0,015 M natrium Natriumazid) i 30 min ved romtemperatur.
- Skyll lysbildene to ganger ved incubating med PBS-T (PBS inneholder 0,1% polyoksyetylensorbitanmonooleat sorbitan sorbierittmonolaurat (se tabell over materialer) i 5 min.
- Påfør 100 μL av primær antistoff fortynnet med PBS på hver prøve, dekk skuffen med et lokk, og ruge over natten ved romtemperatur.
- Vask 3 ganger med PBS-T (5 min for hver vask).
- Påfør 100 μL av sekundært antistoff fortynnet med PBS på hver prøve og ruge for 1 time ved romtemperatur.
Merk: for anti-laminin farging, bruk Alexa fluor 568-bøyd sekundært antistoff. For anti-F4/80, anti-MCP-1 og anti-TNF-α, bruk Alexa fluor 568-eller 488-bøyd sekundært antistoff. - Vask 3 ganger med PBS-T (5 min for hver vask).
- Påfør 100 μL av DAPI-løsning fortynnet med PBS-T på hver prøve og ruge i 3 minutter ved romtemperatur.
- Vask 3 ganger med PBS-T (5 min for hver).
- Monter prøvene med festemiddel og dekk dem med coverslips.
5. histo-morphometric analyse av gastrocnemius
- Plasser prøve lysbildene på et fluorescens mikroskop (se tabell over materialer) og se prøvene med et mål på 20 × med egnede FILTRE (DAPI-B, 360/40 nm for eksitasjon og 460/50 NM for utslipp; GFP-B, 470/40 nm for eksitasjon og 535/50 NM for utslipp; FRITC, 540/25 NM for eksitasjon og 605/55 NM for utslipp.
- Bruke programvaren til bildeanalyse (se tabell over materialer), måle tverrsnitt området (CSA) for hver myofiber, og telle antall F4/80-, MCP-1-, og TNF-α-positive celler.
Merk: Bestem CSA av hver myofiber ved å spore den interne marginen av kjeller membranen i en visualisere med anti-laminin-2 immunostaining.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I samsvar med våre tidligere observasjoner12, ble CSA av gastrocnemius myofibers signifikant redusert med hindlimb bentap immobilisering (figur 2A, B). Videre avslørte vår immunofluorescence farging analyse at cellene uttrykker MCP-1 og TNF-α, som begge spiller sentrale roller i regulering av inflammatoriske prosesser13,14, betydelig økt i gastrocnemius muskel vev av immobilisert hindlimbs (MCP-1: figur 2C, F, H; TNF-α: figur 2D, G, I). Sammen med økningen i cellene positivt farget med F4/80, en markør for makrofager (figur 2C-E, H, I), hindlimb bentap immobilisering syntes å egge kalv muskel atrofi involverer lokale inflammatoriske responser inkludert macrophage akkumulering. Deretter forsøkte vi å undersøke om LCC, en massasje-lignende mekanisk intervensjon, modulert denne immobilisering-indusert muskel betennelse og atrofi.
Blant flere forskjellige LCC-magnitudes som vi testet ved å endre vekten på den sylindriske enheten, hadde den tilsvarende 50 mmHg intramuskulær trykkbølger (LCC med 66 g, figur 3a) for å effektivt lindre immobilisering-indusert nedgang i myofiber CSA og økning i macrophage akkumulering i gastrocnemius muskler (figur 3b). Basert på resultatene av myofiber CSA og macrophage akkumulering, brukte vi 66 g LCC for videre studier. Spesielt var LCC-indusert intramuskulær trykkbølger, hvis peak magnitudes var avhengig av sylindrisk enhet vekt, svært ensartet (figur 3a), som indikerer konsistens og reproduserbarhet av LCC som en mekanisk intervensjon på skjelettmuskulatur.
LCC (1 Hz, 30 min per dag, 7 dager) signifikant lindres den immobilisering-indusert nedgang i myofiber CSA av gastrocnemius muskler (Figur 4A, B). Videre, LCC delvis herdet immobilisering-indusert nedgang i kontraktørselskaper kraft av Triceps surae muskler (figur 4c). I tillegg har LCC herdet økningen i F4/80-positive, TNF-α-positive, F4/80-, MCP-1-, og TNF-α-positive celler i gastrocnemius muskel vev av immobilisert hindlimbs (F4/80, Figur 4D, F; MCP-1, Figur 4D, G; TNF-α, Figur 4E, H). Kollektivt, LCC, som genererer intramuskulær trykkbølger med en amplitude på 50 mmHg, lindres immobilisering-indusert muskel atrofi og lokale inflammatoriske responser inkludert macrophage akkumulering.
Figur 1: mus bilaterale hindlimb bentap immobilisering og lokale sykliske kompresjon (LCC) søknad.
(A) bilateral mus hindlimbs ble immobilisert av spiral ledninger med hofte leddene bortført, kneet leddene utvidet, og ankelen leddene plantar-flexed. (B) LCC enheten. (C) eksperimentell oppsett for LCC på musen kalv. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: mus hindlimb bentap immobilisering, som atrofier kalv musklene, induserer en lokal inflammatorisk respons.
(A) Cross-Seksjons hhv bilder av anti-laminin-2 immunofluorescence farging av gastrocnemius muskler. Bilder med høy forstørrelse (til høyre) viser til områdene som indikeres av rektangler i bilder med lav forstørrelse (venstre). Skala barer, 100 μm. (B) immobilisering indusert muskel atrofi. CSA av gastrocnemius myofibers redusert med perioden av hindlimb bentap immobilisering. For å kvantifisere CSA ble 100 myofibers tilfeldig valgt. Data presenteres som betyr ± S.D. *, P < 0,05, enveis Anova med post hoc Bonferroni test (n = 3 mus for hver gruppe). (C og D) Hhv bilder av anti-MCP-1 (grønn i C) og anti-TNF-α (grønn i D) og anti-F4/80 (rød) immunostaining. For sammenslåtte presentasjoner (grønne og røde) legges bilder med lav og høy forstørrelse som i (A). Piler peker til doble positive celler for F4/80 og MCP-1 (C) eller TNF-α (D) skala bars, 100 μm. (E-I) kvantifisering av anti-MCP-1, anti-TNF-α, og anti-F4/80 immunostaining. Effekter av immobilisering ble analysert med henvisning til perioden av bilaterale hindlimb bentap immobilisering. Statistisk analyse ble utført med henvisning til "dag 0"-prøvene (gastrocnemius muskler fra mus som ikke ble utsatt for immobilisering). Data presenteres som betyr ± S.D. *, P < 0,05, enveis Anova med post hoc Bonferroni test (n = 3 mus for hver gruppe). Dette tallet er endret med tillatelse11. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: effekter av LCC med ulike magnitudes på immobilisering-indusert muskel atrofi og betennelse respons.
(A) anvendelse av forskjellige MAGNITUDES av LCC ved å endre vekten til den sylindriske enheten. Scale bar, 1 s. 36-g, 66-g og 200-g sylindriske enheter produsert 45 mmHg, 50 mmHg og 140 mmHg intramuskulær trykkbølger, henholdsvis. (B) sammenligning av VIRKNINGENE av LCC programmet til immobilisert hindlimbs med 36-g, 66-g og 200-g sylindriske enheter. CSA av gastrocnemius myofibers (venstre) og F4/80-positive celler (til høyre) av LCC-anvendt kalv ble kvantifisert som relative verdier til de av kontroll hindlimb bentap, som ikke var eksponert for LCC, i hver mus. Data presenteres som betyr ± S.D. *, P < 0,05, enveis Anova med post hoc Bonferroni test (n = 4 mus for hver gruppe). Dette tallet er endret med tillatelse11. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: LCC attenuates immobilisering-indusert muskel atrofi og inflammatorisk respons.
(A, B) Lindring av immobilisering-indusert muskel atrofi av LCC programmet. CSA av gastrocnemius myofibers (B) ble analysert som i figur 2b. Data presenteres som betyr ± S.D. *, P < 0,05; * *, P < 0,01, enveis Anova med post hoc Bonferroni test (n = 6 mus for hver gruppe). (C) nedgangen i kontraktørselskaper kraft av Triceps surae musklene etter immobilisering og delvis restaurering av LCC. Data presenteres som betyr ± S.D. *, P < 0,05, sammenkoblede student t test (n = 4 mus for kontroll, n = 5 mus for immobilisering gruppe). (D, E) Hhv bilder av anti-MCP-1 (grønn i D), anti-TNF-α (grønn i E) og anti-F4/80 (rød) immunofluorescence farging av gastrocnemius muskler av mobilisert (øverst) og immobilisert hindlimbs uten (midten) og med (nederst) LCC programmet er presentert som i figur 2C, D. Vektstenger, 100 μm. (F-H) kvantifisering av anti-MCP-1, anti-TNF-α, og anti-F4/80 immunostaining. Vi sammenlignet kalv musklene i immobilisert hindlimbs med og uten LCC programmet. Data presenteres som betyr ± S.D. *, P < 0,05; * *, P < 0,01, enveis Anova med post hoc Bonferroni test (n = 6 mus for hver gruppe). Dette tallet er endret med tillatelse11. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Supplerende figur 1: skjematisk fremstilling av eksperimentelle protokoller. Vennligst klikk her for å laste ned figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vi har beskrevet en metode for å bruke en massasje-lignende mekanisk stimulans, som har anti-inflammatoriske effekter. Systemet vårt har følgende fordeler selv sammenlignet med de som er rapportert tidligere. Først tidligere studier ikke kvantitativt definere mekaniske krefter anvendt2 eller definert deres magnitudes basert på måling på kroppens overflate, men ikke inne i vev10. I kontrast målte vi intramuskulær trykk ved hjelp av et blodtrykksmåleren. For det andre, den enkle strukturen i vår enhet (figur 1B) tillot oss å konstruere systemet med høy konsistens og reproduserbarhet (figur 3a) til en relativt lav kostnad. For det tredje er vår intervensjon (LCC) relatert til fysisk aktivitet (mild muskel sammentrekning) med hensyn til intramuskulær trykk endringer (50 mmHg15). Vår tilnærming vil gi et vitenskapelig grunnlag for massasje-lignende intervensjon som en mulig terapeutisk/forebyggende prosedyre som reduserer DeMerit av fysisk inaktivitet16.
Det mest kritiske steget i vår protokoll er plasseringen av muse hindlimbs (protokoll trinn 3,3). Vi må bruke LCC i retning vinkelrett på kalv musklene; ellers vil muskel vev bli delvis klemt og skadet selv når 66-g sylindriske enheten brukes.
Begrensningen av LCC metoden inkluderer kravet om anestesi, som kan ha noen effekt på muskel metabolisme. Dessuten kan vi ikke helt utelukke påvirkninger av ørsmå muskel sammentrekning som kan være forårsaket som en refleks til skarpe virkninger under LCC programmet.
Som konklusjon har vi demonstrert at interstitiell væske bevegelse formidler LCC effekter11. Vi kan være i stand til å indusere interstitiell flyt mer effektivt ved å endre modus for syklisk komprimering. For eksempel kan komprimering av sinusformet modus være bedre i forhold til skarpe slag som brukes i vår nåværende studie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer at det ikke er noen konkurrerende interesser knyttet til manuskriptet.
Acknowledgments
Vi takker K. Nakanishi, K. Hamamoto, N. Kume, og K. Tsurumi for deres konsistent støtte gjennom hele prosjektet. Dette arbeidet var delvis støttet av intramural Forskningsfond fra det japanske helse-, arbeids-og Velferdsdepartementet; Grants-i-Aid for vitenskapelig forskning fra Japan Society for fremme av vitenskap; MEXT-støttet program for Strategic Research Foundation ved private universiteter, 2015-2019 fra det japanske Utdanningsdepartementet, kultur, sport, vitenskap og teknologi (S1511017).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Aluminum wire | DAISO JAPAN | B028 | An aluminum wire is used to avoid escaping restriction by the wire |
| Blood pressure telemeter | Millar | SPR-671 | A blood pressure telemeter is used to mesure intramuscular pressure. |
| DAPI | Thermo Fisher Scientific | D1306 | DAPI is a fluorescent probe which is commonly used to stain DNA for fluorescent microscopy. |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 (Dilution ratio, 1:500) | Invitrogen | A11034 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Goat anti-rat Alexa Fluor 568 (Dilution ratio, 1:500)) | Invitrogen | A11077 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| ImageJ | NIH | N/A | Analysis software for image |
| LabChart8 | ADInstrumens | Analysis software for acquiring biological signals. | |
| Prolong gold | Thermo Fisher Scientific | P36930 | Prolong gold is for mounting stained samples. |
| Protein Block Serum-Free | Dako | X090930-2 | For blocking non-specific background staining in immunohistochemical procedures. |
| Rat monoclonal anti-laminin-2 antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Sigma Aldrich | L0663 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rat monoclonal anti-F4/80 antibody (Dilution ratio, 1:500) | Abcam | ab6640 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rabbit polyclonal anti-MCP-1 antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Abcam | ab25124 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Rabbit polyclonal anti-TNF-α antibody (Dilution ratio, 1:1000) | Abcam | ab66579 | Antibody for immunohistochemical staining. |
| Surgical tape | 3M Japan | 1530EP-0 | Surgical tape is used to restrict joint movement. |
References
- Furlan, A. D., Imamura, M., Dryden, T., Irvin, E. Massage for low back pain: an updated systematic review within the framework of the Cochrane Back Review Group. Spine. 34 (16), 1669-1684 (2009).
- Robertson, A., Watt, J. M., Galloway, S. D. R. Effects of leg massage on recovery from high intensity cycling exercise. British Journal of Sports Medicine. 38 (2), 173-176 (2004).
- Waters-Banker, C., Butterfield, T. A., Dupont-Versteegden, E. E. Immunomodulatory effects of massage on nonperturbed skeletal muscle in rats. Journal of Applied Physiology. 116 (2), 164-175 (2014).
- Haas, C., et al. Massage timing affects postexercise muscle recovery and inflammation in a rabbit model. Medicine & Science in Sports & Exercise. 45 (6), 1105-1112 (2013).
- Crane, J. D., et al. Massage therapy attenuates inflammatory signaling after exercise-induced muscle damage. Science Translational Medicine. 4 (119), 119ra113 (2012).
- Bove, G. M., Harris, M. Y., Zhao, H., Barbe, M. F. Manual therapy as an effective treatment for fibrosis in a rat model of upper extremity overuse injury. Journal of the Neurological Sciences. 361, 168-180 (2016).
- Andrzejewski, W., et al. Increased skeletal muscle expression of VEGF induced by massage and exercise. Folia Histochemica et Cytobiologica. 53 (2), 145-151 (2015).
- Mantovani Junior, N., et al. Effects of massage as a recuperative technique on autonomic modulation of heart rate and cardiorespiratory parameters: a study protocol for a randomized clinical trial. Trials. 19 (1), 459 (2018).
- Zeng, H., Butterfield, S., Agarwal, F., Haq, T., Zhao, Y. An engineering approach for quantitative analysis of the lengthwise strokes in massage therapies. Journal of Medical Devices. 2 (4), (2008).
- Wang, Q., et al. A mechatronic system for quantitative application and assessment of massage-like actions in small animals. Annals of Biomedical Engineering. 42 (1), 36-49 (2014).
- Saitou, K., et al. Local cyclical compression modulates macrophage function in situ and alleviates immobilization-induced muscle atrophy. Clinical Science. 132 (19), 2147-2161 (2018).
- Onda, A., et al. A New mouse model of skeletal muscle atrophy using spiral wire immobilization. Muscle Nerve. 54 (4), 788-791 (2016).
- Luster, A. D.
- Reid, M. B., Li, Y. P. Tumor necrosis factor-α and muscle wasting: a cellular perspective. Respiratory Research. 2 (5), 269-272 (2001).
- Baumann, J. U., Sutherland, M. D., Hangg, A. Intramuscular pressure during walking: An experimental study using the wick catheter technique. Clinical Orthopaedics Related Research. 145, 292-299 (1979).
- Lee, I., et al. Effect of physical inactivity on major non-communicable diseases worldwide: an analysis of burden of disease and life expectancy. Lancet. 380, 219-229 (2012).
