Summary
כאן אנו מציגים פרוטוקול כדי לגרום TBI חמורה עם פציעה לרוחב הכלי נקישה (FPI) מודל בוגרים, גברים וויסטאר חולדות. אנו גם להדגים את השימוש של מערכת טלמטריה אלחוטית לאסוף רציפה הקלטות וידאו EEG ולפקח על אפילפטית בעקביות פוסט טראומטית epileptogenesis.
Abstract
פציעת הקשה נוזלית לרוחב (FPI) מודל מבוססת היטב ושימש לחקר TBI ו אפילפסיה פוסט טראומטית (PTE). עם זאת, השונות הניכרת דווחה על הפרמטרים הספציפיים המשמשים במחקרים שונים שהשתמשו במודל זה, מה שמקשה על הרמוניה ופענוח התוצאות בין מעבדות. לדוגמה, דווח על השונות בנוגע לגודל ולמיקום של הניתוח בגולגולת, כיצד ממוקם רכזת הנעילה של Luer ביחס לניתוח הגולגולת, הלחץ האטמוספרי המוחל על הדורא ומשך הדופק בלחץ. כל אחד מהפרמטרים הללו יכול להשפיע על חומרת הפציעה, התואם ישירות לשכיחות של PTE. זה כבר ביטוי כמו מגוון רחב של שיעורי התמותה, הצתה זמני רפלקס ושכיחות של ותקפים מוכי דווח. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט לשיטה בה נהגנו לסייע בשיפור ההרמוניה בין הלימודים. השתמשנו FPI בשילוב עם מערכת טלמטריה EEG אלחוטית כדי לפקח ברציפות על שינויים אלקטרוגרפיים ולגלות פעילות תפיסה. FPI נגרמת על ידי יצירת כריתת גולגולת 5 מ"מ מעל האונה השמאלית, בין הברגמה למדא ובצמוד לרכס הצדדי. הרכזת מאובטחת על הגולגולת. מעל כריתת הגולגולת רכזת זו מחוברת להתקן ה-FPI, ופעימת לחץ של 20 מילי-שניה מועברת ישירות אל הדורא השלם דרך צינורות הלחץ המחוברים לרכזת באמצעות מחבר מנעול טוויסט. בעקבות ההחלמה, חולדות מורדם מחדש כדי להסיר את הרכזת. חמישה 0.5 מ"מ, ברגים מפלדת אל-חלד EEG ממוקמים במגע עם הדורא דרך הגולגולת ומשמשים כארבעה אלקטרודות הקלטה אחד התייחסות אלקטרודה. חוטי האלקטרודה נאספים לתוך מחבר המעמד אשר מאובטח למקום עם מלט העצם. וידאו רציף/הקלטות EEG נאספים עד 4 שבועות post TBI.
Introduction
בדיווח 2015 לקונגרס, המרכזים לבקרת מחלות דיווחו כי כ-2,500,000 אנשים בשנה סובלים מנזק מוחי טראומטי (TBI) בארה ב1. מעריכים כי tbi גורם 20% של epilepsies סימפטומטי ו 5% של כל epilepsies2,3,4. בנוסף, כ -20% מהחולים TBI לפתח אפילפסיה פוסט טראומטית5. חשוב מכך, כרונית, ויהיו חוזרים ונשנים המתרחשים כתוצאה של TBI הם לעתים קרובות pharmacoresistant הגדלת הנטל של המחלה6. המנגנונים המדויקים המובילים לאפילפסיה פוסט-טראומטית (PTE) נותרים לא ברורים. עם זאת, כמה מחקרים לאפידמיולוגיה מפתח בחנו את השכיחות ואת הסיכון הפוטנציאלי לפתח אפילפסיה פוסט טראומטית (PTE)2,4,7,8,9 ,10,11. לימודי אפידמיולוגיה אלה מחוזקים כל אחד מהקורלציה של חומרת הפציעה בסיכון לepileptogenesis.
שיטות נוכחיות ששימשו בהרחבה כדי לזהות טיפולים הרומן נגד אפילפסיה יש להסתמך בכבדות על מודלים המשתמשים כימותרפיה-פרכוסים או הלהצית חשמל כדי לגרום לאפילפסיה12. בהינתן שכיחות גבוהה של פרמקוטינואו התנגדות תרופות שפותחו במודלים אלה על ידי חולים TBI, אנחנו ההשערה כי התקפים TBI עשויים להיות שונים מתוך כימופרכוסים או להצית התקפים ועשויים לכלול מסלולים שונים או תהליכים של epileptogenesis. לכן, מודל TBI עשוי להיות מתאים יותר לפיתוח טיפולים יעילים יותר למניעת epileptogenesis פוסט-טראומטית.
פגיעה בכלי ההקשה הנוזלית (fpi) של tbiהייתה בשימוש במשך עשרות שנים, והיא שיטה מבוססת היטב לחקור הן את tbi והן את PTE13,14,15,16,17, 18. עם זאת, כפי שנסקרו לאחרונה, יש מידה גבוהה של שינויים בשיטות fpi שדווחו על פני מעבדות19,20. חוסר עקביות בין מעבדות מונע העדר ממצאים פרה-קליניים והופך את הפרשנות של תוצאות אתגר. כתוצאה מכך, הריבית המוגברת והמאמצים הוחלו לקראת הקמת הרמוניה גדולה יותר עבור סוגי מחקרים אלה21,22,23,24.
במאמץ להגביר עוד יותר את העקביות וההרמוניה בין המעבדות המתמקדות בלמידה פוסט-טראומטית epileptogenesis, אנו מספקים כאן מתודולוגיה מפורטת של הגישה שלנו. אנו דיווחו בעבר 60% שכיחות של ויהיו בתוך שישה שבועות לאחר TBI20חמור. אנו משתמשים כעת בגישה זו כדי לנטר חולדות החל את היום של פציעה וברציפות לעקוב אחריהם 24 שעות ביממה עד 4 שבועות. בחרנו להשתמש במערכת טלמטריה אלחוטית הנותנת מספר יתרונות. ראשית, חולדות מסוגלים בחופשיות לנוע על הכלוב שלהם, וכך מפחית את הלחץ. שנית, ירידה ברעש האותות. כאשר החולדה משמשת כקרקע בנוסף, המערכת הנוכחית שלנו מעסיקה תאוצה אשר מזהה תנועה מהירה בכל שלושת המטוסים (X, Y ו-Z) והוא יכול להיות מועיל כדי לזהות אירועים התקף העוויתיים. בסופו של דבר, מערכת הטלמטריה האלחוטית מאפשרת ניהול קל יותר של חולדות כגון זריקות מלוחים משלימה, שקילה וביצוע של עשרות חומרה נוירולוגית, אשר מסובך כאשר חולדות מצורפות לקשר. עם זאת, גישה זו יש גם מספר מגבלות. ראשית, העלות ההתחלתית של מערכת להקליט בין עד שמונה חולדות בו יכול להיות בטווח של $60,000. שנית, הכוח מוגבל על-ידי מקור סוללה. זה דורש ניטור יומי והחלפת סוללות. הזמן הנדרש בין שינויי הסוללה יכול להיות מושפע מקצב הדגימה. עם זאת, עבור קצב דגימה של 1000 Hz, סוללות משתנות בדרך כלל פעם בשבוע. אספקת החשמל המוגבלת גם מגבילה את המערכת להקלטה מארבעה אותות EEG בלבד. לבסוף, הירידה באות מוגבלת אך מתרחשת לעתים. עם זאת, גישה זו מספקת שיטה עקבית ואמינה לניטור פוסט-טראומטית epileptogenesis והיא יכולה לסייע בזיהוי טיפולים טיפוליים חדשניים.
Protocol
כל ההליכים אושרו על ידי ובעקבות ההנחיות של אוניברסיטת באפלו טיפול בעלי חיים מוסדיים והוועדה השתמש.
1. פגיעה בכלי ההקשה הזורמים
- ללבוש חלוק מעבדה או שמלת כירורגי, מסכה כירורגית, כפפות כירורגי, ראש כיסוי ולעקר את כל הכלים והחומרים הקשר את האתר כירורגי.
- להברג 10-12 בן שבוע, זכר, עכברוש וויסטאר (350-400 g) עם 3% isofלוריאן ו 1 L/min חמצן בחדר אינדוקציה בגודל המתאים עבור חולדות. להסיר את העכברוש מן התא אינדוקציה ולהעביר אותו לאזור ההכנה ברגע שהוא מחוסר הכרה. שים את המשחה האופטלמולוגית. הסטרילית בשתי העיניים
- לגלח את השיער על ראש החולדה עם קוצץ חשמלי עם להב40 ממעל העיניים אל בסיס caudal של האוזניים כדי לייצר מספיק שדה ניתוח. הסר שיער משוחרר וחתוך מהאתר.
- לנקות את האתר כירורגי על ידי החלת 2% כלורוהקקין לשפשף את הקרקפת מגולח ואחריו 70% אתנול. התחל במרכז ונוע החוצה במעגלים קונצנטריים הרחק מאתר החתך. חזור על תהליך זה 3 פעמים. החילו את פתרון הבטאדין על האתר באותה צורה ומותר להתייבש.
- הניחו את העכברוש המיורדם בתוך המסגרת הסטריאוטיפית ושמרו על הרדמה ב-2-3% isoflurane-1 L/דקות חמצן באמצעות nosecone. בדוק אובדן רפלקס הנסיגה של הגוף השמור ואובדן של רפלקס palpebral כדי להבטיח את החולדה היא במישור כירורגי של הרדמה.
- נטר את קצב הנשימה, קצב הלב, טמפרטורת הגוף ורווית החמצן במהלך הניתוח. שמור על קצב הלב בין 300-400 bpm, ו SpO2 מעל 90%.
הערה: מחמצן דופק מוצמד לרגל אחורית ניתן להשתמש כדי לספק את הקבוע לקרוא מתוך קצב הלב SpO2. קצב לב מעל 400 בדקה מציין שהעכברוש אינו מורדם במידה מספקת. כרית התחממות עצמית, בשילוב למדחום רקטלי, מוגדרת ב 37 ° c, ניתן למקם תחת החולדה לאורך הניתוח כדי לשמור על טמפרטורת הגוף. Stereomicroscope עם מקור אור בשילוב עם מנורת סיבים אופטיים מועילים להמחיש את ההליך. - השתמש במחט 23 גרם להזריק 0.5% בופיטין הידרוכלוריד בתוך הקרקפת באתר החתך של כאבים מקומיים 10-15 דקות לפני ביצוע חתך.
- הפוך את החתך של 1.5-2.5 ס מ דרך העור ואת השריר של הקרקפת באמצעות להב אזמל10. משכי את העור ואת השריר כדי לחשוף את הגולגולת ולספק שדה כירורגי ברור. משקפים את הfascia הבסיסית ואת רקמת השומן הרחק מן העצם עם מטליות כותנה סטרילית.
הערה: יחידת קואטרי חשמלית שימושית להשגת הומוקיפאון מהיר. - לגלח את הרכס לרוחב של עצם הקודקוד השמאלי באמצעות גרד כירורגית כדי לייצר משטח שטוח חלקה, כך בסיס הנשי נקבה לנעול הרכזת יכול לנוח עם הגולגולת.
- השטמים את פני הגולגולת ואת הרקמות הסובבות עם 2.0 mg/mL gentamicin פתרון תמיסת מלח סטרילי. למחוק את הפתרון העודף עם מטליות סטרילי.
- למרוח 3% מי חמצן לגולגולת. כדי לייבש את העצם
הערה: אם העצם אינו יבש מספיק מלט שיניים לא לדבוק כראוי וליצור חותם מוצק. - ליצור אתר כריתת גולגולת בקוטר 5 מ"מ. דרך עצם הקודקוד השמאלי
הערה: סיבית של השפין מונחת לתוך מקדח חשמלי המחובר למסגרת הסטריאוטקטיקה ומסייעת ליזום את כריתת הגולגולת. השתמש בתרגיל יד עם מקדחה בקוטר 5 מ"מ כדי לסיים לאט את כריתת הגולגולת דרך העצם הנותרת. כאשר הוא קרוב להשלמת הניתוח, סובב את הפין ברוורס כדי למנוע קרע בקרום השכבה המשמש כבסיס. יהיה דילול של הגולגולת סביב היקף הדיסק ואת כנף הגולגולת ירגיש רופף כאשר לחצה בקלילות. - להסיר את כנף העצם עם גרד כירורגי מלקחיים רקמה חלקה.
הערה: דימום מסוים עלול להתרחש, אך ניתן להשיג הומוסטזיס במהירות על ידי הפעלת לחץ עדין עם מטליות כותנה סטרילי. - השתמש בstereomicroscope ובתאורה כדי לבדוק באופן חזותי את הדורה על כל סימן של קרע. שפה דקה של עצם תישאר סביב ההיקף של האתר כריתת הגולגולת. בעדינות להסיר את השפה עם מלקחיים רקמה חלקה מטפלת לא לקרוע את הדורה.
- לנגב את הגולגולת עם 70% אתנול להסיר כל אבק העצם כדי לייבש את הגולגולת.
- החלת שכבה דקה של דבק מסוג ג'ל ציאנואקרילי סביב הקצה התחתון של רכזת נעילת לופה ולאבטח אותו לגולגולת על כריתת הגולגולת מבלי לעצור את הפתיחה. השתמשו בזהירות כדי לא להביא את הדבק במגע עם הדורא. יתר על כן, לאטום את נעילת Luer במקום עם שכבה דקה נוספת של דבק סביב הבסיס החיצוני של הרכזת.
- הכינו שאיפה של מלט שיניים. החל את המלט על פני השטח של הגולגולת סביב ומעל הבסיס של הרכזת נועל Luer לאבטח אותו במקום.
- למלא את רכזת נעילת Luer עם נוזל שימור סטרילי מלאכותי המוח השדרה (pH. a) פתרון (חומציות 7.4) באמצעות מזרק ומחט כך בולוס קמורה של תמיסת מלח ניתן לראות מעל החלק העליון של השפה.
הערה: הפתרון ישמור על לחות הדורא כחומר לייבש שיניים כמו גם משמש אינדיקציה לשלמות החותם. אם רמת הפתרון נופלת כלל, כלומר, האינדיקציה לדליפה במערכת ונעילת Luer חייבת להיות מוסרת ומוחלפת. - ברגע שהמלט שיניים נרפא לחלוטין, להפסיק הרדמה גז ולהסיר את החולדה מהמסגרת הסטריאוטקאית.
- מניחים את החולדה על מצע ליד המכשיר FPI.
- המכשיר FPI יש טיפ מתכת מעוקל המשתרע מן מתמר הלחץ בסוף מאגר הנוזלים. מאובטח אורך 12 ס מ של צינורות הלחץ עד לסוף הקצה המעוקל עם הקצה הנגדי מסתיימת ב 2 ס מ מחבר למנעול לנעול זכר. אבטח את החולדה למכשיר FPI על ידי חיבור הקצה הנשי של הרכזת על הגולגולת של החולדה למחבר הגברי.
הערה: ודא שהחיבור מאובטח היטב ושכל בועות האוויר הוסרו מהמערכת. - מניחים את בעל החיים ברציפות שכיבה ובדוק שוב ושוב להחזרת רפלקס הנסיגה. ברגע החולדה חוזר רפלקס הנסיגה אבל הוא עדיין הרגעה, לשחרר את המטוטלת של המכשיר FPI לגרום אחד 20 ms הדופק הלחץ ולגרום לפציעה.
הערה: חשוב לא לגרום לפציעה בעוד החיה מורדם עמוקות כמו זה נוטה לגרום לתמותה מוגברת עקב בצקת ריאות נוירוגניים. כל ההתקנים מציגים שינויים. עם זאת, על המכשיר המשמש לניסוי זה, מיקום בזווית 17 ° של הפטיש מייצרת הדופק 2.2-2.3 האטמוספירה האטמוספרית. לא נפגע, חיות דמה לעבור את כל ההליכים אותם למעט הדופק נוזל בפועל כדי לגרום לפציעה. - מיד לנתק את העכברוש מהמכשיר FPI לאחר הפציעה, למקם אותו שכיבה sternal, ולספק חמצן משלים (1 L/דקות) באמצעות חרוט האף עד נשימה ספונטנית חוזר. דום נשימה היא תוצאה צפויה של הפציעה. במקרה הצורך, מספקים נשימות ידניות תקופתיות באמצעות מסכת שסתום לשקית עד שהעכברוש מתחיל לנשום באופן ספונטני מעצמו.
הערה: בדרך כלל, דום נשימה נמשך פחות מ-2 דקות. עלייה מהירה חולף בקצב הלב (> 500 bpm) הוא נצפתה מיד לאחר הממשל של הדופק הלחץ עקב פרץ קטכולאמין. זה יכול להיות מנוטר עם אוקסימטר דופק מוצמד לרגל החולדה והוא יכול לשמש אינדיקטור אפשרי כי פציעה חמורה התרחשה. - מפקחים על החולדה ברציפות ומקליטים את זמן החזרה של רפלקס הצתה (אמבולציה יציבה על כל ארבעת הגפיים).
- הסדר הגודל של הדופק הלחץ אטמוספרי עבור חולדה כל צריך להיות בתוך ± 0.05 האטמוספריים אחד את השני. ודא כי כל אחד מפעימות הלחץ מייצר אות חלק על האולוסקופ עם משרעת עקבית ומשך זמן.
הערה: אות רועש עשוי להצביע על בועות אוויר במערכת שיש להסירה לפני העברת דופק הפציעה. פולסים בלחץ אטמוספריים המייצרים פציעה חמורה, בניסוי זה, הם אלה שבדרך כלל גורמים לזמני הצתה בעלי חיים של 30-60 דקות. מגוון זמני הצתה אלה משויכים לשיעור תמותה של כ-40-50%). - מנהל 10 מ ל של תת-עורי מלוחים prewarmed כטיפול תומך.
- להחזיר את העכברוש לכלוב הבית שלה ולאפשר לו להתאושש לפחות 4 h.
הערה: התמותה מוגברת נצפתה כאשר החולדות ממוקמות מיד חזרה תחת הרדמה.
2. השרשה של אלקטרודות קליפת מוח ווידאו הקלטה EEG
- ב-4 שעות לאחר הפציעה, להסיר את החולדה כפי שתוארה קודם לכן ולמקם אותו בחזרה לתוך מסגרת סטריאוטקטיקה להסרת רכזת מנעול Luer ושיניים מלט.
הערה: הרכזת והמלט בקלות לצאת עם לחץ מתון. בשעת הסרת הרכזת, בדקו היטב אם יש קרע או נזק בדורא. המתת חסד לכל בעל חיים בפגיעה בדורא. - החל טיפה קטנה של 0.5% בופיטין הידרוכלוריד לגולגולת בכל אחד מהמיקומים בהם 5 חורים טייס יש לקדוח (ראה איור 1).
- קידוח חורים טייס בתוך הגולגולת עם יד שנערך 0.1 מ"מ מקדחה סיבית.
- מאובטח בורג האלקטרודה פלדת אל-חלד לתוך כל חור טייס במיקומים הבאים: בורג התייחסות ממוקם caudal כדי למדא מעל המוח השני. אלקטרודות ההקלטה ממוקמות: 1) מעל לחצי הכדור החוצה ומrostral לניתוח הגולגולת; 2) מעל האונה החצי-שצלעות והקדל לניתוח הגולגולת; 3) מעל לחצי הכדור המחצית הצלעות והrostral לניתוח הגולגולת; 4) מעל לחצי הכדור המחצית הצלעות והקדל לניתוח הגולגולת.
- לנגב את הגולגולת עם 70% אתנול להסיר כל אבק העצם.
- כסו את האתר כריתת גולגולת עם שכבה דקה של שעוות עצם סטרילית כדי לכסות את השכבה החשופה.
- לחבר מערך אלקטרודה ל 5 אלקטרודות EEG על ידי גלישת הקצה החשוף של תיל אלקטרודה מקודד צבע הדוק סביב בורג האלקטרודה המיועד נירוסטה.
הערה: הקצוות הנגדיים של כל חוט אלקטרודה ממוקם לתוך מיקום ספציפי, ייעודי בתוך מחבר המעמד. - הכינו שאיפה של מלט העצם.
- לאסוף את חוטי האלקטרודה לתוך סליל מתחת למעמד ולאבטח את חוטי המעמד למקום עם מלט העצם. להחזיק את המעמד בעמדה עד מלט העצם נרפא.
הערה: העצם חייב להיות יבש במיוחד וריק של כל דם שרידי כדי להשיג הדבקה נאותה ולמנוע הסרה מוקדמת של המשדר. - חברו את המשדר האלחוטי עם סוללות טריות למעמד לפני הסרת בעל החיים ממסגרת הסטריאוטקטיקה.
- מניחים את בעל החיים בכלוב הבית שלו ומניחים את הכלוב בסמיכות למקלט ולאור מצלמת וידאו ייעודית. ליזום וידאו/הקלטה EEG.
3. אוסף הקלטות וידאו EEG
- לפני איסוף אותות EEG, לעשות לטאטא תדירות של החדר שבו חולדות יהיה שוכנו אוסף EEG כדי לזהות כל תדרים הפרעה פוטנציאליים כדי למנוע את האוסף של הקלטת EEG עם כל תדר כי יש רעש רקע.
- הגדר את כל המשדרים לתדרים ספציפיים החופשיים מהפרעות.
- הגדר את תדר הדגימה ואת טווח הקלט של כל משדר ניתן לתיכנות.
הערה: ניתן לעשות זאת באמצעות כלי חכם המסופק על-ידי יצרן המערכת. משדרים יכולים לדגום בקצב מירבי של 1000 Hz, וטווח קלט מירבי של ± 10 mV. בניסוי זה, הקלטות EEG בין 0.5 הרץ ל -30 Hz נותחו. לפיכך, התעריף לדוגמה הוגדר ב-250 Hz. אנחנו בדרך כלל מתבוננים. בהגברה של פחות מ-1 לי לכן, טווח הקלט שנקבע היה ב-± 2 mV. - השתמש בתוכנה אוסף EEG שסופקו על ידי היצרן ברציפות להקליט וידאו-EEG החל ביום הפציעה המקשר כל משדר אלחוטי באמצעות תדר ייחודי למקלט מסוים.
הערה: כל זוג מקלט משדר מסוגל ניטור 4 ערוצי EEG מונואולאר, והאצה במטוסים X, Y ו-Z. נתוני EEG יכולים להיכתב לשרת אחסון. יש לשמור את נתוני הווידאו בהתקן NAS המקושר לשרת האחסון. תוכנת ניתוח EEG מסנכרן את הווידאו ואת ההקלטה EEG מבוסס על הזמן המתוחזק על ידי שרת האחסון. - השתמש בתוכנת אוסף וידאו להקליט וידאו של כל עכברוש עם משלו 2 מצלמה MP רזולוציה (1920 x 1080) מוגדר להקליט ב 30 מסגרות/s.
הערה: לכל מצלמה יש תאורה אינפרא-אדום משלה לאיסוף וידאו בלילה. - קבע את תצורת המערכת כך שתשמור באופן אוטומטי את כל ההקלטות וידאו ו-EEG לשרת אחסון כל 24 שעות. סרטי הווידאו מייצרים קבצים גדולים למדי.
4. ניתוח וידאו/EEG
- סנכרן את הווידאו עם כל הקלטה EEG ברזולוציה של 1/10 s. לעשות את זה באמצעות יצרני מערכת ניתוח וידאו/EEG היוצר קובץ metafile עם חותמת של הזמן המדויק של שני ה-EEG ואת הווידאו.
- מסך ידני באמצעות הקלטות EEG כדי לזהות אירועי אינדקס המגדירים פעילות תפיסה.
- שימוש בתוכנת ניתוח וידאו/EEG ובאירועי ה-EEG, צור קובץ תצורה המשתמש בפרמטרים מרכזיים (כלומר, כוח בלהקות תדר ספציפיות, היחס בין רצועות תדר לעוצמה הכוללת, סף האצה וכו ') כדי להגדיר את המאפיינים של אירועי הפרכוס הפוטנציאליים.
- הפעל את תוכנת ניתוח EEG כדי לזהות אזורים פוטנציאליים של הקלטת EEG הזכאים להתבסס על הפרמטרים שנבחרו בקובץ התצורה.
הערה: תוכנת ניתוח EEG מאפשר זיהוי תפיסה אוטומטית ומדגיש אזורים של עניין אותות EEG ומספק FFT ספקטרום הכוח ניתוח לאורך האות. - אשר באמצעות הקלטות וידאו שנאספו במהלך הרכישה, אשר מסונכרנים עם כל הקלטות EEG בהתאמה.
Representative Results
עם המודל הזה, הבאנו TBI חמורים לתוך מבוגר, זכר, חולדות Wistar. תחת התנאים שאנו מתארים כאן, אנו בדרך כלל להתבונן שיעורי התמותה של 40-50%, והורדה זמני רפלקס של 30-60 דקות כפי שתוארו בעבר20. הצלחנו לאסוף הקלטות וידאו/EEG 24 שעות ביממה החל ביום הפציעה. דיאגרמה המציגה את המיקום של ארבע מונואולאר אלקטרודות EEG ו אלקטרודה התייחסות יחידה מוצג באיור 1א. תמונות הממחישים את המיקום והמראה של הנגעים TBI הצפויים עם התנאים המתוארים כאן מוצגים באיור 1ב-D. תחת התנאים המתוארים כאן, אנו רואים בעקביות דלתא האטה בתוך שלושת הימים הראשונים שלאחר TBI. חולדות באופן חמור פחות מציגים האטה חד צדדית, דלתא לסירוגין (דמויות 2C-D). לעומת זאת, באופן רציף, האטת דלתא דו-צדדית מנצפתה לאחר פציעות חמורות יותר (איור 3C-D). מידה מסוימת של האטה של דלתא נצפתה בעקביות בכל עכברי ה-TBI, אך לא זוהתה בשום מפעל המזויף (כריתת גולגולת בלבד) שליטה בחולדות (דמויות 2A-b; 3A-b). במהלך שלושת הימים הראשונים, לאחר הפגיעה ברוב עכברי הגוף, ההאטה הייתה מאיטה בדלתא. מעניין, חולדות בדרך כלל להראות ירידה במשקל במהלך שלושת הימים הראשונים לאחר הפציעה. התקפים לא מנוצעי מדי פעם בשבוע הראשון לאחר TBI (איור 4 C-D). התקפים קליניים, הצגת כמו אשכולות ספייק הקשורים לגידול וליפול, כמו גם האמה קלונוס ניתן לצפות לאחר 1-שבוע post tbi (איור 5C-D). לבסוף, איור 6 מציג תמונות מייצגות של האות לסירוגין מזדמנים החוצה ואיבוד האות עקב כשל בסוללה.
איור 1 . מיקום כריתת גולגולת, מיקום אלקטרודה ופצע. (א) מציג תרשים סכמטי של גולגולת החולדה עם המיקומים של כריתת הגולגולת (מעגל אפור באונה השמאלית), ארבעה אלקטרודות מונואולאר (נקודות שחורות; 1, 2, 3, 4) ממוקם בין הברגמה לבין למדא ואלקטרודה התייחסות (נקודה שחורה, R) מוצב בקו האמצע, האחורי ללאמבדה; (ב) מראה בסריקות MRI שלאחר המוות באמצעות מיקום הנגעים שזוהו על ידי עיגול אדום; (ג) מראה מפה דו-ממדית של קליפת המוח שבה מזוהה המיקום והגודל של הנגע (אזור כחול). (ד) מראה סעיף מוכתם nissl עם הפצע, נגע הוא 100x מוגדל בתמונה ימינה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 2 . דלתא חד צדדית, האטה לסירוגין. שנאסף ביום של TBI מתון (א) מראה את העקבות EEG 90 s מעכברוש שליטה מופעל, בלתי נפגע ביום הניתוח. . כל ארבעת הערוצים מוצגים מעקב של 10 שנים (נלקח מהארגז) חולץ מערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית EEG הבסיסית. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ב) ניתוח FFT של 2048 ms שנבחרו מתוך החיה המזויף הבלתי נפגעת ביום הניתוח. (ג) מראה את מעקב ה-EEG של 90 s, המציג את תבנית ההאטה הקטועה של בעל החיים הפצוע ביום הפציעה. מעקב של 10 ס מ (נלקח מהארגז) הופק מערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית ה-EEG ההאטה של הדלתא. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ד) FFT ניתוח של 2048 ms שנבחרו מתוך החיה tbi מתון ביום הפציעה. 90 s EEG, מלמעלה למטה הם ביואוטניום 1, 2, 3, 4, המתאים למיקומים שלהם סביב כריתת הגולגולת באתר כפי שנראה באיור 1. סימונים אנכיים אפורים מגדירים. מרווחי זמן של 1 על עקבות EEG כל עקבות EEG מוצגים בקנה מידה של (± 500 μV). בתוך תרשימי ניתוח FFT, טווח התדרים הכולל שנותח היה 0.5-30 Hz. הדבר הופר בנוסף ל -4 להקות תדרים נפרדות של דלתא (צהוב, 0.5-4 Hz), תטא (סגול, 4-8 Hz), אלפא (אדום, 8-12 Hz) וביתא (ירוק, 12-30 Hz). הגרף% (Power) המוצג בתוך ניתוח FFT מראה איזה אחוז מכלל הכוח הכולל באזור האפוקסי שנותח מגיע מכל להקה בתדר שצוינה קודם לכן, ומאפשר אפיון מתמטי נוסף של דפוסי צורת גל של EEG. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 3 . . שנאסף ביום של TBI חמור (א) מציג עקבות EEG 90 s מעכברוש שליטה מופעל, בלתי נפגע ביום הניתוח. . כל ארבעת הערוצים מוצגים מעקב של 10 שנים (נלקח מהארגז) חולץ מערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית EEG הבסיסית. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ב) ניתוח FFT של 2048 ms שנבחרו מתוך החיה המזויף הבלתי נפגעת ביום הניתוח. (ג) מציג את מעקב ה-EEG של 90, המציג את תבנית ההאטה הרציפה, האטת הדלתא הדו של בעל חיים פצוע קשה ביום הפציעה. מעקב של 10 ס מ (נלקח מהארגז) הופק מערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית ה-EEG ההאטה של הדלתא. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ד) FFT ניתוח של 2048 ms בחר מתוך החיה tbi חמור ביום הפציעה. 90 s EEG, מלמעלה למטה הם ביואוטניום 1, 2, 3, 4, המתאים למיקומים שלהם סביב כריתת הגולגולת באתר כפי שנראה באיור 1. סימונים אנכיים אפורים מגדירים. מרווחי זמן של 1 על עקבות EEG כל עקבות EEG מוצגים בקנה מידה של (± 500 μV). בתוך תרשימי ניתוח FFT, טווח התדרים הכולל שנותח היה 0.5-30 Hz. הדבר הופר בנוסף ל -4 להקות תדרים נפרדות של דלתא (צהוב, 0.5-4 Hz), תטא (סגול, 4-8 Hz), אלפא (אדום, 8-12 Hz) וביתא (ירוק, 12-30 Hz). הגרף% (Power) המוצג בתוך ניתוח FFT מראה איזה אחוז מכלל הכוח הכולל באזור האפוקסי שנותח מגיע מכל להקה בתדר שצוינה קודם לכן, ומאפשר אפיון מתמטי נוסף של דפוסי צורת גל של EEG. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 4 . התקף אלקטרוגרפי לא נזעי. שנאסף 3 ימים פוסט-TBI חמור (א) מציג עקבות EEG 90 s מעכברוש שליטה מופעל, בלתי נפגע 3 ימים25 לאחר הניתוח. . כל ארבעת הערוצים מוצגים מעקב של 10 שנים (נלקח מהארגז) חולץ מערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית EEG הבסיסית. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ב) ניתוח FFT של 2048 אלפיות שלישית, מתוך החיה הפעילה המזויפת ביום השלישי,25 לאחר הניתוח. (ג) מראה 90 s EEG מעקב שלושה 25 ימים לאחר פציעה חמורה. זה בניין להראות, דפוס מהיר העולה הנוכחי בקיעים ועל פני כל 4 איסוף ערוצים. מעקב 10 s ארוך (נלקח מתוך הקופסה) הופק מן הערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית ה-EEG העולה. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ד) FFT ניתוח של 2048 ms בחר מתוך החיה tbi חמור ביום הפציעה. 90 s EEG, מלמעלה למטה הם ביואוטניום 1, 2, 3, 4, המתאים למיקומים שלהם סביב כריתת הגולגולת באתר כפי שנראה באיור 1. סימונים אנכיים אפורים מגדירים. מרווחי זמן של 1 על עקבות EEG כל עקבות EEG מוצגים בקנה מידה של (± 500 μV). בתוך תרשימי ניתוח FFT, טווח התדרים הכולל שנותח היה 0.5-30 Hz. הדבר הופר בנוסף ל -4 להקות תדרים נפרדות של דלתא (צהוב, 0.5-4 Hz), תטא (סגול, 4-8 Hz), אלפא (אדום, 8-12 Hz) וביתא (ירוק, 12-30 Hz). הגרף% (Power) המוצג בתוך ניתוח FFT מראה איזה אחוז מכלל הכוח הכולל באזור האפוקסי שנותח מגיע מכל להקה בתדר שצוינה קודם לכן, ומאפשר אפיון מתמטי נוסף של דפוסי צורת גל של EEG. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 5 . התקף חשמלי מסיבי. שנאסף 9 ימים בפוסט-TBI (א) מציג עקבות EEG 90 s מתוך עכברוש שליטה בלוף, בלתי נפגע 9 (9) ימים לאחר הניתוח. . כל ארבעת הערוצים מוצגים מעקב של 10 שנים (נלקח מהארגז) חולץ מערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית EEG הבסיסית. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ב) ניתוח FFT של 2048 ms שנבחרו מתוך החיה המזויף הבלתי נפגעת ביום 9 (9) לאחר הניתוח. (ג) מראה 90 s EEG מעקב 9 (9) ימים פוסט פציעה חמורה. זה בניין להראות, דפוס מהיר העולה הנוכחי בקיעים ועל פני כל 4 איסוף ערוצים. מעקב 10 s ארוך (נלקח מתוך הקופסה) הופק מן הערוץ 3 כדי להמחיש טוב יותר את תבנית ה-EEG העולה. חלק 2048 ms בסעיף זה היה אז נבחר להיות מנותח ב FFT המקביל. (ד) FFT ניתוח של 2048 ms שנבחרו מתוך בעלי חיים tbi חמורים 9 (9) ימים לאחר הפגיעה. 90 s EEG, מלמעלה למטה הם ביואוטניום 1, 2, 3, 4, המתאים למיקומים שלהם סביב כריתת הגולגולת באתר כפי שנראה באיור 1. סימונים אנכיים אפורים מגדירים. מרווחי זמן של 1 על עקבות EEG כל עקבות EEG מוצגים בקנה מידה של (± 500 μV). בתוך תרשימי ניתוח FFT, טווח התדרים הכולל שנותח היה 0.5-30 Hz. הדבר הופר בנוסף ל -4 להקות תדרים נפרדות של דלתא (צהוב, 0.5-4 Hz), תטא (סגול, 4-8 Hz), אלפא (אדום, 8-12 Hz) וביתא (ירוק, 12-30 Hz). הגרף% (Power) המוצג בתוך ניתוח FFT מראה איזה אחוז מכלל הכוח הכולל באזור האפוקסי שנותח מגיע מכל להקה בתדר שצוינה קודם לכן, ומאפשר אפיון מתמטי נוסף של דפוסי צורת גל של EEG. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
איור 6 . . האיתות התגלה אלה הם 3 דוגמאות נפרדות של איזה אות לנשור בשל בעיות משדר או מקלט מופיע כמו בהקלטת EEG. (א) זוהי דוגמה לנושרת לסירוגין של אות EEG בהקלטה. (ב) זוהי דוגמה של צניחה החוצה עקב כשל בסוללה במהלך טלמטריה אלחוטית רציפה מופיע כמו על מעקב EEG. (ג) בתוך אזור הקיפו, ניתן לראות כי כאשר איכות האות (QoS) טיפות מ 100 אל 0, מעקב EEG הופך משוטח ומלא הקפואה ב 0 μv. סימונים אנכיים אפורים מגדירים. מרווחי זמן של 1 על עקבות EEG כל עקבות EEG מוצגים בקנה מידה של (± 500 μV). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.
Discussion
השונות הניכרת דווחה בין מעבדות לגבי הפרמטרים הספציפיים והשיטות המשמשות לדגם fpi tbi 14,26,27,28. חוסר עקביות זה גרם לתוצאות סותרות ולהקשות על הרמוניה של מאמצים ותוצאות בין מעבדות. כאן, הצגנו מתודולוגיה מפורטת המתארת את הגישה שלנו לטווח ארוך, הקלטה רציפה של וידאו/EEG כדי לפקח על פעילות אפילפטית פוסט טראומטית. מספר שלבים הם קריטיים ליצירת תוצאות שאינן מתקבלות באמצעות השיטה המתוארת.
ראשית, בהתחשב בשכיחות של אפילפסיה פוסט טראומטית התואם חומרת הפציעה, להחיל תנאים הנובעים TBI חמור ביותר. באופן ספציפי, השתמשו בניתוח גולגולת של 5 מ"מ כדי לוודא שאזור גדול מספיק של דורא נחשף. בנוסף, יש לאבטח את מכשיר נעילת הנקבה לואור על פני הגולגולת, כשהפתח מוצב ישירות על פני כריתת הגולגולת. זה שונה ממעבדות אחרות אשר השתמשו בניתוח גולגולת קטן יותר (3 מ"מ) ו/או מניחים רכזת מחט שונה בתוך הניתוח הגולגולת, אשר למעשה מפחית את גודל הפתיחה. על ידי הצבת נעילת Luer מחוץ לניתוח הגולגולת, הפתיחה 5mm נשמר. פרמטרים ספציפיים אלה משפיעים על הכוח הכולל המוחל על הדורא. ללחץ האטמוספרי המוחל על הדורא יש גם השפעה גדולה על חומרת הפציעה שנצפתה. למרבה הצער, לחץ אטמוספרי הוא משתנה מאוד נראה להיות תלוי התקן. כמה מעבדות דיווחו על החלת דופק הלחץ של 8-10 ms18. לעומת זאת, השיטה המתוארת כאן גורמת לדופק 20 ms הלחץ. זה מתאים למעבדות אחרות שנראות. כשהן מייצרות פציעה חמורה יותר 14,28 ברור כי הדופק ממריץ את הפציעה הוא פרמטר המראה שינויים ניכרים בין מעבדות ויש להגדיר מדעית. עם זאת, חומרת הפציעה עשויה להיקבע על בסיס שילוב של שיעורי תמותה (40-50%), הורדה של זמני רפלקס (> 30 דקות)26. כמו-כן, יש לכלול בחדר העבודה רק בעלי חיים עם השכבה הקשה ביותר. בנוסף, אם הניתוח של הגולגולת מושפע מדבק או ממלט כזה שחלק מהשכבה שמתחת לניתוח הגולגולת אינו נחשף למלוא העוצמה של דופק הלחץ הנוזלי, יש לסלק את החיה מהמחקר. כמו כן, דבק עודף מתחת למנעול Luer יכול לדבוק בדורא ולהסיר אותו עם כובע בטון גם לאחר פציעה מוצלחת. לבסוף, את הצורה החלקה של עקומת הדופק לחץ על מעקב האולוסקופ נותן אינדיקציה כי אין בועות אוויר בתא הנוזל ומציין את הבוכנה נע ללא עכבה.
הרדמה היא גורם קריטי נוסף. שיש לשלוט בו חשיפה של איזוof, יש לשמור על הרמות הנמוכות ביותר האפשרי לשמור על מישור כירורגי של הרדמה. חולדות חשופות לרמות גבוהות יותר של isof, או עבור משכים ארוכים נוטים יותר לפתח בצקת ריאתי המושרה נוירוגניים. הכנת הגולגולת מייצגת היבט ביקורתי נוסף של השיטה. במיוחד, ייבוש הגולגולת והסרת אבק העצם מסייעת למנוע את החולדות מפני הסרת המשדר בטרם עת.
מיקום הברגים והחיבור של חוטי ה-EEG הם בהחלט קריטיים להפקת הקלטות הקיימות בעקביות. חשוב כי הברגים לא מונחים עמוק מדי כדי לגרום לפגיעה במוח. כנף העצם התאושש מניתוח הגולגולת של מבוגר (12 שבועות) זכר חולדות Wistar הוא בעקביות 2 מ"מ עובי. השימוש ברגים EEG עם פיר 2.5 מ"מ. זה עוזר להשתמש בקצות מלקחיים נגד יתושים מעוקל כמרחב כדי להבטיח כי הברגים רק להאריך לבסיס העצם ולא לבלוט לתוך המוח.
לגישה המוצגת כאן יש כמה מגבלות. יש לשנות את הסוללות על בסיס קבוע. תדירות השינויים בסוללה תלויה בקצב הדגימה. סוללות משתנות בדרך כלל פעם בשבוע עבור קצב דגימה של 1000 Hz. ניתן להרחיב את מסגרת הזמן על-ידי הפחתת קצב הדגימה. המערכת מוגבלת גם הקלטה של ארבעה מונואולאר אלקטרודות EEG. עם זאת, זה מספק שני ערוצים לחצי הכדור והוא יכול להבדיל בין אירועים מוקד וכללית והוא יכול להבדיל בין השינויים הקדמי והאחורי. למרות מגבלות אלה, גישה זו מספקת שיטה סבירה לבצע ניטור וידאו/EEG רציפה וזיהוי של שינויים אפילפטית בעקבות TBI חמור.
השיטה המתוארת כאן גורמת להתקפים אלקטרו-גרפיים ומנזעי-חשמל בתוך חודש אחד אחרי TBI. לפיכך, גישה זו מספקת מסגרת זמן סבירה שבה יש ללמוד therapeutics פוטנציאליות למניעת הepileptogenesis בעקבות TBI חמורים. גישה זו מספקת גם שיטה לחקור את המנגנונים המולקולריים הקשורים ל-PTE ועלול להוביל לזיהוי של סמנים פוטנציאליים שניתן להשתמש בהם כדי לזהות חולים הנמצאים בסיכון רב יותר לפתח PTE.
Disclosures
מלון צ'לסי ר ריצ'רדסון הוא עובד של emka מדעי, הספק של מערכת טלמטריה אלחוטית זו מתוארת.
Acknowledgments
אנו רוצים להודות לפול דרזל על התמיכה הרבה שלו בעיצוב גרפי והכנת דמויות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.00 mm Drill Bits | Drill Bit City: New Carbide Tools | 05M200 | |
| 3M ESPE Durelon Carboxylate Cement | 3M , Neuss Germany | 38019 | Dental Cement |
| 4-0 Suture | Ethicon, Sommerville, NJ | K831H | 4-0 Ethicon Perma-hand Silk, 26mm 1/2c Taperpoint, 30" (75cm), Black Braided non-absorbable suture |
| 5 mm outer diameter trephine | Fine Science Tools | 18004-50 | |
| Bonewax | Medline Industries, Mendelcin, IL | REF DYNJBW25 | |
| Buprenorphine HCL, Injection (0.3 mg/mL) 1 mL vial | Par Pharmalogical, Chestnut Ridge NY | 3003706 | NDC 42023-179-01 |
| Dumont #6 Forceps | Fine Science Tools | 11260-20 | |
| Dumont #7b Forceps | Fine Science Tools | 11270-20 | |
| ecgAUTO | EMKA Technologies, Falls Church, VA | ||
| Female Luer Thread Style Coupler Clear Polycarbonare | Cole-Palmer instrument | SKO#45501-22 | Order lot #214271 |
| Foot Power Drill | Grobet USA, Carlstadt, NJ | Model C-300 | |
| GentaMax 100 (Gentamicin, Sulfate Solution) | Phoenix, Manufactured by Clipper Distributing Company LLC, St. Joseph, MO | NDC 57319-520-05 | |
| Hill's Prescription Diet a/d Canine/Feline | Hill's Pet Nutrition, Inc. , Topeka, KS | ||
| IOX2 Software | EMKA Technologies, Falls Church, VA | ||
| Isoflorane, USP | Piramal Enterprise Limited, Andhra, India | NDC 66794-013-25 | |
| IsoTech Anesthesia machine | SurgiVet | WWV9000 | |
| Lateral FPI device | AmScien | 302 | curved tip, with pressure tubing extension. connected via screw lock connector (Cole-Palmer; #4550-22) |
| Leica A60 Stereomicroscope | Leica Biosystems, Richmond, VA | PN: 10 450 488 | |
| Marcaine (0.5%) Bupivacaine hcl injection usp 5 mg/mL | Hospira, Lake Forest, IL | CA-3627 | 50mL multiple dose vial; NDC 0409-1610-50 |
| Micro-Adson Forceps | Fine Science Tools | 11018-12 | |
| Olsen-Hegar Needle Holders with Suture Cutters | Fine Science Tools | 12002-14 | |
| PALACOS R+G bone cement with gentamicin | Heraeus, | REF: 5036964 | Radiopaque bone cement containing 1 x 0.5g Gentamicin |
| Physio Suite | Kent Scientific, Terrington, CT | ||
| Povidone-iodine solution | Betadine | ||
| Puralube Vet Ointment | Dechra Veterinary Products, Overland Park KS | NDC 17033-211-38 | |
| Scalpel blade (#10) and holder | Integra Miltex, York, PA | REF: 4-110 | |
| Scalpel Handle - #4 | Fine Science Tools | 10004-13 | |
| Sickle Knife | Bausch + Lomb Storz Instruments | N1705 HM | 5mm curved blade. Round handle. Overall length 168mm, 6.6 inches. |
| Silverstein Micro Mirror | Bausch + Lomb Storz Instruments | N1706 S8 | 3mm diameter. Angled 45 degrees. Overall length 180mm, 7.2 inches |
| Storage NAS | Synology Inc. | DS3615xs | |
| Synology Assistant | Synology Inc. | ||
| Thermal Cautery Unit | Geiger Medical Technology, Delasco Council Bluffs, IA | Model NO: 150 | |
| Vetivex | Dechra Veterinary Products, Overland Park KS | Veterinary pHyLyteTM Injection pH 7.4 (Multiple Electrolytes Injection, Type 1, USP) | |
| Video Cameras | TRENDnet, Torrance, CA | TV-IP314PI | Indoor/Outdoor 4MP H.265 WDR PoE IR Bullet Network Cameral |
| Video NAS | Synology Inc. | DS916 | |
| Wistar IGS rats | Charles River | strain code 003 | 12 wk old at the time of injury |
| Wullstein Retractor | Fine Science Tools | 17018-11 |
References
- Flanagan, S. R. Invited Commentary on Centers for Disease Control and Prevention Report to Congress: Traumatic Brain Injury in the United States: Epidemiology and Rehabilitation. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 96, 1753-1755 (2015).
- Annegers, J. F., Coan, S. P., Hauser, W. A., Leestma, J., Duffell, W., Tarver, B. Epilepsy, vagal nerve stimulation by the NCP system, mortality, and sudden, unexpected, unexplained death. Epilepsia. 39, 206-212 (1998).
- Lowenstein, D. H. Epilepsy after head injury: an overview. Epilepsia. 50, Suppl 2 4-9 (2009).
- Englander, J., et al. Analyzing risk factors for late posttraumatic seizures: a prospective, multicenter investigation. Archives of Physical Medicine and Rehabilitation. 84, 365-373 (2003).
- Faul, M. X. L., Wald, M. M., Coronado, V. G. Traumatic Brain Injury in the United States: Emergency Department Visits, Hospitalizations and Deaths 2002-2006. Centers for Disease Control and Prevention, National Center for Injury Prevention and Control. , Atlanta (GA). (2010).
- Herman, S. T. Epilepsy after brain insult: targeting epileptogenesis. Neurology. 59, 21-26 (2002).
- Annegers, J. F., Coan, S. P. The risks of epilepsy after traumatic brain injury. Seizure. 9, 453-457 (2000).
- Christensen, J., Pedersen, M. G., Pedersen, C. B., Sidenius, P., Olsen, J., Vestergaard, M. Long-term risk of epilepsy after traumatic brain injury in children and young adults: a population-based cohort study. Lancet. 373, 1105-1110 (2009).
- Webb, T. S., Whitehead, C. R., Wells, T. S., Gore, R. K., Otte, C. N. Neurologically-related sequelae associated with mild traumatic brain injury. Brain Injury. 29, 430-437 (2015).
- Mahler, B., Carlsson, S., Andersson, T., Adelow, C., Ahlbom, A., Tomson, T. Unprovoked seizures after traumatic brain injury: A population-based case-control study. Epilepsia. 56, 1438-1444 (2015).
- Wang, H., et al. Post-traumatic seizures--a prospective, multicenter, large case study after head injury in China. Epilepsy Research. 107, 272-278 (2013).
- Simonato, M., French, J. A., Galanopoulou, A. S., O'Brien, T. J. Issues for new antiepilepsy drug development. Current Opinion in Neurology. 26, 195-200 (2013).
- Xiong, Y., Mahmood, A., Chopp, M.
- Kharatishvili, I., Nissinen, J. P., McIntosh, T. K., Pitkanen, A. A model of posttraumatic epilepsy induced by lateral fluid-percussion brain injury in rats. Neuroscienc. 140, 685-697 (2006).
- McIntosh, T. K., et al. Traumatic brain injury in the rat: characterization of a lateral fluid-percussion model. Neuroscience. 28, 233-244 (1989).
- Thompson, H. J., et al. Lateral fluid percussion brain injury: a 15-year review and evaluation. Journal of Neurotrauma. 22, 42-75 (2005).
- Curia, G., Eastman, C. L., Miller, J. W., D'Ambrosio, R. Modeling Post-Traumatic Epilepsy for Therapy Development. Translational Research in Traumatic Brain Injury. Laskowitz, D., Grant, G. , Boca Raton (FL). (2016).
- D'Ambrosio, R., Fairbanks, J. P., Fender, J. S., Born, D. E., Doyle, D. L., Miller, J. W. Post-traumatic epilepsy following fluid percussion injury in the rat. Brain. 127, 304-314 (2004).
- Saatman, K. E., et al. Classification of traumatic brain injury for targeted therapies. Journal of Neurotrauma. 25, 719-738 (2008).
- Smith, D., Brooke, D., Wohlgehagen, E., Rau, T., Poulsen, D. Temporal and Spatial Changes in the Pattern of Iba1 and CD68 Staining in the Rat Brain Following Severe Traumatic Brain Injury. Modern Research in Inflammation. 4, 9-23 (2015).
- Ndode-Ekane, X. E., et al. Harmonization of lateral fluid-percussion injury model production and post-injury monitoring in a preclinical multicenter biomarker discovery study on post-traumatic epileptogenesis. Epilepsy Research. 151, 7-16 (2019).
- Ciszek, R., et al. Informatics tools to assess the success of procedural harmonization in preclinical multicenter biomarker discovery study on post-traumatic epileptogenesis. Epilepsy Research. 150, 17-26 (2019).
- Immonen, R., et al. Harmonization of pipeline for preclinical multicenter MRI biomarker discovery in a rat model of post-traumatic epileptogenesis. Epilepsy Research. 150, 46-57 (2019).
- Kamnaksh, A., et al. Harmonization of pipeline for preclinical multicenter plasma protein and miRNA biomarker discovery in a rat model of post-traumatic epileptogenesis. Epilepsy Research. 149, 92-101 (2019).
- Redell, J. B., Moore, A. N., Ward, N. H., Hergenroeder, G. W., Dash, P. K. Human traumatic brain injury alters plasma microRNA levels. Journal of Neurotrauma. 27, 2147-2156 (2010).
- Smith, D., et al. Convulsive seizures and EEG spikes after lateral fluid-percussion injury in the rat. Epilepsy Research. 147, 87-94 (2018).
- Eastman, C. L., Fender, J. S., Temkin, N. R., D'Ambrosio, R. Optimized methods for epilepsy therapy development using an etiologically realistic model of focal epilepsy in the rat. Experimental Neurology. 264, 150-162 (2015).
- Shultz, S. R., et al. Can structural or functional changes following traumatic brain injury in the rat predict epileptic outcome. Epilepsia. 54, 1240-1250 (2013).
