Summary
本手稿描述了一个协议，用于确定暴露于臭氧（一种标准空气污染物）是否会损害体内的藻体细胞体细胞化。该协议利用常用试剂和技术，可适用于多种肺损伤模型，以确定对肺泡巨噬细胞细胞病的影响。
Abstract
臭氧 （O3） 是一种标准空气污染物，它加剧和增加慢性肺病的发病率.O3接触已知会引起肺部炎症，但很少知道接触如何改变对炎症解决重要的过程。细胞凋亡是一个解析过程，其中巨噬细胞噬菌体细胞。此协议的目的是测量O3诱发肺损伤和炎症后的肺泡巨噬细胞细胞化。介绍了几种测量细胞化的方法;然而，大多数需要外生操作。这里详细介绍了在O3接触后24小时测量体内海藻巨噬细胞的一种协议，它避免了对巨噬细胞的体细胞的体外操作，并用作一种简单的技术，可用于准确表示此解析过程。该协议是一种技术上非密集且相对便宜的方法，涉及全身O3吸入，随后在全身麻醉下对凋亡细胞（即Jurkat T细胞）的造血性吸入。然后，通过从支气管（BAL）洗浴中收集的巨噬细胞的光学显微镜评估来测量阿尔韦拉尔巨噬细胞。最后通过计算细胞指数来测量细胞病。总体而言，概述的方法量化肺在体内的排卵细胞活性，同时也有助于分析O3或其他吸入性侮辱对健康的负面影响。
Introduction
肺部经常受到环境侮辱，包括空气颗粒、病毒、细菌和氧化气体，这些气体会引发肺部炎症1，2，3。这些侮辱会损害气体交换，并诱发不可逆转的组织损伤4，5。阿尔韦拉巨噬细胞，约占在母体和人体肺中发现的免疫细胞的95%，是环境侮辱1、2、2、后肺部炎症的重要调节者。3，4，5.在宿主防御过程中，通过噬菌体和消除病原体，阿尔韦拉尔巨噬细胞是必不可少的。最近，阿尔韦拉尔巨噬细胞已被证明促进组织平衡和通过排卵细胞病6，7的炎症的解决。肝细胞化是一种吞噬过程，其中巨噬细胞吞噬和消除凋亡细胞8，9，10。埃塞洛西病还导致生产介质（即IL-10、TGF-+、PGE2和一氧化氮），进一步增强过程，导致炎症9、10、11的解决 ，12，16，18.这个过程是必要的，以防止继发性坏死和促进组织平衡12，13，14。几项研究已经将受损的肺细胞病与各种慢性肺病联系起来，包括哮喘、慢性阻塞性肺病和特发性肺纤维化8、9、15、 16，17.
O3是一种标准空气污染物，它加剧和增加慢性肺病的发病率19、20、21。O3诱发肺部炎症和损伤，已知会损害肺泡巨噬细胞噬菌体细胞化细菌病原体22，23。然而，目前还不清楚O3是否损害藻体细胞细胞化。调查O3诱导的肺泡巨噬细胞病变，将提供潜在的洞察力，了解接触如何导致慢性肺病的发病率和恶化。下面描述是一个简单的方法，以评估急性O3暴露后雌性小鼠肺部的肺泡细胞化。
与该领域常用的其他排卵虫化方案不同，该方法具有多种优势，无需使用昂贵的荧光染料、广泛的流式细胞测量和对藻体巨噬细胞的外体操作24 ， 25.此外，该方案还测量肺小食道在肺微环境中的肺细胞细胞化，从而影响巨噬细胞功能。
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Protocol
所有方法均已获得东卡罗来纳大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准。
1. 臭氧 （O3） 和过滤空气暴露（第 1 天）
- 将最多 12 只 8-12 周大的雌性 C57BL/6J 小鼠放入钢笼（带 12 个独立的隔间），带钢丝网盖放入 O3暴露室。
- 将温度计与保持架放在曝光室中，以准确记录温度和湿度。
- 打开连接到设备的氧气和紫外线 （UV） 光。
注：调节气流（>30 空气变化/小时），温度控制（22-23 °C）和相对湿度（45%-50%）由 O3设备获得。O 3 由暴露室中的系统通过紫外线光发生器引导 100% 氧气，然后与过滤的空气供应混合产生 O3。 - 将 O3浓度调整到 1 ppm，并每 10 分钟定期记录 O3水平 3 小时。 持续监测室内空气的温度和湿度，以及使用紫外线光照度计的 O3浓度。
注： 过滤空气暴露在类似设备中执行，只有过滤的空气供应流经暴露室。 - 在 3 h O3/过滤空气暴露后，将动物送回各自的笼子，并配有床上用品、食物和水。
2. 朱尔卡特T细胞系的制备（第2天）
注：所有程序均应在二级生物安全柜中进行。
- 培养Jurkat T细胞在24 mL的基础细胞培养基 + 10% FBS + 5% 青霉素/链霉素在37°C + 5% CO2 （材料表）。Jurkat T 细胞是一种悬浮细胞系，每 3 天通过传递 1：6-1：8 进入预热培养介质即可维持。不要摇晃。
- 要制备凋亡细胞，将它们生长到每个烧瓶中的90%的汇合（通过后需要3-4天才能达到）。在本研究中，使用来自五个T75烧瓶的细胞来获得该协议中使用的足够数量的细胞。
注：一个结汇瓶包含大约2000万至2400万个细胞。 - 从每个烧瓶（约 24 mL）上移细胞（即整个烧瓶），并使用血清学移液器将细胞转移到无菌的 50 mL 锥形管中。对多个烧瓶使用多个锥形管。
- 从 50 mL 锥形管中取出 11 μL 等分的细胞，并与 11 μL 的锥形蓝色染色和移液器 11 μL 混合到血细胞仪幻灯片上，对细胞计数计数。
- 将幻灯片插入自动细胞计数器并记录活细胞数量，通过将活细胞数乘以 24 来计算每个烧瓶中的细胞总数，因为每个烧瓶包含 24 mL 的介质。
- 在室温 （RT） 下，将细胞悬浮液在 271 x g下 5 分钟，与颗粒细胞分离。
- 通过吸入丢弃上清液，在介质中重新悬浮细胞颗粒，以获得每 mL 3.0 x 106细胞。
- 100 mm x 20 mm 组织培养皿中的 5 mL 细胞（大约使用 9 个培养皿;每盘中的细胞总量应为 ±15 x 106）。
- 使用一个盘进行控制/未曝光，其余菜肴将暴露在紫外线下。
- 将 UV 交联器设置为正确的能量水平，按下能量按钮，并使用数字键盘输入"600"，机器将读取该数字垫为 600 μJ/cm2 x 100。
注：紫外线交联器能量单位为μJ/cm2 x 100;因此，要达到60毫焦耳/厘米2，转换单位以匹配紫外线交联器。 - 使用紫外线交联器以 60 毫焦耳 （mJ）/cm2的细胞（不包括控制）照射所有菜肴。在紫外线照射期间，取下组织培养皿的顶盖，因为紫外线不会穿透塑料盖。
- 在细胞培养箱中孵育所有菜肴，包括未暴露的对照，在37°C，在5%CO2下孵育4小时。
- 通过流动细胞测定检测试剂盒，使用含有附件五和碘化钠（PI）（分别用于凋亡和坏死的标记）的凋亡检测试剂盒，在孵育4小时后，根据制造商的说明26，27.
注：在紫外线交联器中以600μJ/cm2的能量水平照射Jurkat T细胞，经过4小时的孵育后，将导致凋亡细胞（早期和晚期）细胞比晚期凋亡表型更具早期凋亡表型的±75%。这使得阿尔皮拉巨噬细胞更容易识别它们并吞没它们，因为它们的膜是不折不扣的，不像晚期凋亡细胞，导致更高的细胞指数和更准确的造蓝管巨噬细胞细胞的成像在这项研究中。- 汇集 333 μL （1 x 106细胞） 的 Jurkat T 细胞来自多个菜肴（"无紫外线"和"紫外线暴露"），用于补偿分析管。
- Aliquote 333 μL 的 Jurkat T 细胞在未染色的附件五单染色、PI 单染色、无紫外线控制以及 600 μJ/cm2紫外线照射标记流式细胞测定管中。
- 在 RT 处，在 188 x g下离心管 5 分钟，并叶向上清液。
- 通过在500 μL的冷、1倍磷酸盐缓冲盐水（PBS）中重新悬浮来洗涤细胞。
- 离心和颗粒细胞在188 x g下，在RT处5分钟，离心后丢弃上清液。
- 在细胞离心时，用蒸馏水稀释10x结合缓冲液，制备每个流管1x结合缓冲液400μL。
- 根据制造商的说明制备附件五和PI孵育试剂（每个样品/管100μL）。
- 离心后将上清液分化，并在400μL的1x结合缓冲液中轻轻重新悬浮所有管，然后将100μL的附件五培养试剂加入每个样品管。最后，在各自的管中加入100 μL的附件五单染色和PI单染色，但不要将超出1x结合缓冲液的任何内容添加到未染色的管中。
- 在黑暗中孵育管子15分钟，在RT处孵育。
- 在RT和去皮上清液下，在188 x g下将所有细胞离心5分钟。
- 在400μL的1x结合缓冲液中重新悬浮细胞，然后通过流式细胞测定分析样品的凋亡。每个管至少收集 10，000 个事件，以便准确表示染色。
- 在RT处，在271 x g下离心，将洗碗中的所有辐照细胞合并到50 mL锥形管和颗粒细胞中，5分钟。
- 在室温下，在271 x g下离心，在24 mL的无菌磷酸盐缓冲盐水（PBS）和颗粒细胞中重新悬浮细胞，从管中丢弃上清液5分钟。
- 从管子中丢弃上清液，通过吸入物将细胞重新悬浮在经IACUC批准的给药小鼠的PBS量中。使用的剂量在5-10 x 106细胞/50 μL之间每只小鼠;因此，对于10只小鼠，在500μL中重新悬浮（每个剂量的细胞数因用于辐照培养的细胞数量而异）。
注意：至少加入两剂，以考虑任何可能粘在移液器尖端两侧导致细胞损失的液体。
3. 凋亡细胞的毛尿性食管灌输（第2天）
- 在给小鼠麻醉之前，使用P200移液器准备凋亡细胞的给剂接种，以加快手术速度。根据机构指南，50 μL的体积，包含约5-10 x 106细胞用于输卵管（o.p.）的灌输，以确保最佳结果。
- 在透明室中用2%的异常胶对小鼠进行麻醉，流速为1 L/min，或按照机构指南进行麻醉。一次麻醉一至两只小鼠;数字由实验者的舒适度决定。观察呼吸模式，确认深呼吸可见，呼吸之间计数为 2-3 s。检查麻醉的深度，因为对脚趾捏没有反应。
- 将鼠标置于半卧式俯卧位置。使用固定在倾斜丙烯酸板上的钉之间的手术字符串，由上颌切口悬挂。
- 使用一对钝的、无脊的钳子，轻轻抓住并拉取鼠标舌头。用P200移液器将凋亡细胞注入口腔。当小鼠在给予剂量后发出1⁄2s的爆裂声时，剂量是成功的。
注意：注意避免在凋亡细胞灌输前对舌头或食道引起创伤。 - 用戴手套的手指，轻轻挡住鼻子，直到老鼠吸入，而舌头被收回。盖住鼻子，直到口腔中看不到液体，并且小鼠吸入了两次或两次以上。
注：由于小鼠是义务鼻呼吸器，覆盖鼻子有助于确保小鼠将凋亡细胞吸入肺部。 - 将鼠标从接种板中取出，并将其返回到笼子，以便从麻醉中恢复。将鼠标放在其背面，以防止床上用品或碎屑在重新充电时阻塞鼻毛。
- 在小鼠从麻醉中恢复后等待90分钟，让阿尔韦拉巨噬细胞吞没凋亡细胞的涌入后，所有的小鼠都从麻醉中醒来。通常，麻醉后醒来需要1⁄2分钟，这不应影响灌输的结果/时间。
4. 支气管洗漱液的收集和处理（第2天）
- 在小鼠从凋亡细胞的麻醉中醒来后90分钟，每只小鼠的安乐死。在这里，使用氯胺酮和木兰辛的致命注射（分别为90毫克/千克和10毫克/千克），然后切除隔膜。
注：这个时间点允许足够的时间，为球泡巨噬细胞感知和吞噬凋亡细胞38。 - 以刻度称量所有小鼠 （g）并记录重量。使用体重计算 BAL 体积（26.25 mL/kg 体重）。
- 将小鼠放在背上，喷洒70%乙醇，对胸部和颈部区域进行消毒。
- 用手术剪刀沿整个胸腔一侧在胸骨下方进行2"纵向切割，同时用钳子抓住胸骨，刻上隔膜，让肺部回落到胸腔中。
- 沿着肋骨笼的两侧横向切割，让肺在拉网时有更多的空间膨胀，然后用钳子将胸腔折回。
- 通过颈部沿血管进行1"垂直切割，露出气管。
- 使用两个钳子将肌肉和组织从气管中拉出并暴露出来。避免额外的潜在出血和切气管，因为它被血管、纵向肌肉和结缔组织包围。
- 使用针头在气管中做缝（距离从头部向下约四分之一），并将带 1x PBS（26.25 mL/kg 体重，8-10 周雌性 C57Bl/6J 鼠标）的注射器插入管状（18 G x 1.25"），然后放入气管中他。
- 缓慢地将PBS的体积推入肺部，让肺部膨胀，然后将音量拉回注射器。重复此过程共 3 次。
- 在 15 mL 管中收集每个特定小鼠的集中洗漱液。
- 在4°C下将支气管洗漱管在610 x g下离心6分钟，并将上清液收集到1.5 mL管中，在-80°C冷冻。颗粒代表来自支气管活杨空间的细胞。
- 通过在细胞颗粒中加入1 mL的ACK RBC解压缓冲液，去除收集的BAL液体中的残留红血球，然后在冰上涡旋良好和解液1分钟。之后，加入4mL的PBS，以阻止开瓶反应。
- 在610 x g下，在4°C下通过离心细胞6分钟，用真空吸气器吸气上上清液。
- 将细胞重新悬浮在1mL的1xPBS + 10%FBS到每个BAL样品管。在血细胞计上对细胞计数，以定量每个样本的总空域细胞（无锥蓝色）。使用中等加速度和细胞离心将每个样品的120 μL在56 x g下滑动3分钟。擦干幻灯片过夜。
5. 计算白细胞大食道病指数（第3天）
- 用血氧素和欧辛染色幻灯片，以计算出血细胞计数和微分细胞计数，从每张幻灯片中计算至少 200 个细胞。
- 在生物显微镜上的明场设置下查看幻灯片（20 倍或 40 倍目标最正常工作）。
- 在细胞差分滑道上总共200个巨噬细胞中，没有细胞细胞吸收细胞吸收的细胞吸收，根据噬菌体Jurkat T细胞与卵泡巨噬细胞的数量比率计算细胞指数。将比率转换为数据输入的百分比。使用以下公式：
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Representative Results
O3接触已知可诱发肺部炎症和损伤，并且需要排卵细胞化来维持组织平衡。C57BL/6J雌性小鼠暴露于过滤空气（FA）或1ppm O3 3 3小时，并在接触后24小时进行尸检，以检查肺部炎症和损伤。与FA对照组相比，O3暴露小鼠在空气空间中的巨噬细胞和嗜中性粒细胞明显增加（图1A，B）。此外，O3-暴露小鼠的BAL蛋白显著增加，这是阿尔皮拉上皮屏障功能障碍的标记物，暴露后24小时（图1C）。
为了确定O3诱发的肺炎症是否与体内肺泡巨噬细胞缺陷有关，C57BL/6J雌性小鼠通过造血干细胞24 h后FA或后O 3向小鼠灌输凋亡Jurkat T细胞曝光。在给药之前，通过流动细胞学证实Jurkat T细胞凋亡，早期（附件五= PI-和晚期（附件五和PI=）凋亡细胞（图2A，B）有显著增加。暴露水平和孵育时间导致+75%凋亡Jurkat T细胞的重复结果。如图3A所示，这是被确定为有卵细胞巨噬细胞的放大图像。与常规的白细胞（用白色箭头表示）相比，爱塞罗细胞被确定为吞噬Jurkat T细胞（以黑色箭头表示）的巨噬细胞（图3B）。当利用该协议评估藻类细胞化时，与FA对照组相比，O3暴露组的细胞指数在统计学上显著下降（图3B，C）。这些数据表明，O3诱发的肺炎症与凋亡细胞的清除率下降有关，这可能延长肺部损伤和炎症。
图1：O3暴露引起肺部炎症和损伤。 C57BL/6J雌性小鼠在接触后3小时24小时暴露于过滤空气（FA）或1ppm O3，小鼠被尸检以分析肺部炎症和损伤（n = 每组6只）。（A） 计算了支气管性（BAL）细胞差分，然后从每张幻灯片中计算出至少200个细胞，从每个幻灯片中计数的上皮（表）、嗜酸性粒细胞（eos）、淋巴细胞（淋巴）、巨噬细胞（M*）和嗜中性粒细胞（PMN）。（B） 细胞差分的代表性图像.（C） BAL液体中的总蛋白质。数据表示为 = SEM （_p < 0.01）。请点击此处查看此图的较大版本。
图2：尤尔卡特T细胞UV诱导凋亡的确认。Jurkat T 细胞使用 UV 交联剂 （型号 1800） 暴露于 UV （60 mJ/cm2）。紫外线照射后，Jurkat T细胞在37°C下孵育，5%CO2孵育4小时。孵化后，Jurkat T细胞被染色，附着物五和碘化钠（PI），细胞凋亡通过流动细胞学进行评估。早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞分别被确定为附件五+/PI-附件 V=/PI=附件 V-/PI=。代表性流细胞学散射图（记录10，000个事件）未暴露的Jurkat T细胞和（B）紫外线暴露的Jurkat T细胞。请点击此处查看此图的较大版本。
图3：O3暴露可降低白细胞大噬细胞增白症。C57BL/6J雌性小鼠在接触后3小时24小时暴露于过滤空气（FA）或1ppm O3，小鼠口服约5 x 106凋亡Jurkat T细胞。1.5小时后，进行支气管性排泄（BAL），在计数200个巨噬细胞（n = 每组11）后，通过光显微镜在BAL巨噬细胞中计算了体细胞指数。（A） 有代表性的细胞巨噬细胞的代表性图像.（B） FA 或 O3曝光后，识别白细胞（白箭）和体细胞巨噬细胞（黑色箭头）。（C） FA 或 O3暴露后经电化指数的计算（\p < 0.0001）。请点击此处查看此图的较大版本。
图4：使用350纳米磨砂球的Jurkat T细胞凋亡。Jurkat T细胞使用紫外线交联剂照射10分钟，在37°C下孵育5%CO21小时。紫外线照射后，Jurkat T细胞在37°C下孵育，5%CO2孵育4小时。孵化后，Jurkat T细胞被染色的附件五和碘化钠（PI），然后通过流动细胞学评估凋亡。早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞分别被确定为附件五+/PI-、附件 V=/PI=和附件 V-/PI=。显示了具有 350 nm 灯泡的紫外线暴露的 Jurkat T 细胞的代表性流式细胞测定图（记录了 10，000 个事件）。请点击此处查看此图的较大版本。
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Discussion
Efferocytosis是一个抗炎过程，其中巨噬细胞清除细胞和碎片，以及产生多个抗炎介质9，10，11，12，16 ， 18.多模型的细胞化提供了洞察宏噬细胞是如何在炎症6，7的分辨率的关键细胞。最近，慢性肺病的进展与8、9、15、16、17的肺细胞病缺陷有关。然而，目前还不清楚暴露于O3等空气污染物是否导致细胞化缺陷。该协议支持评估O3暴露后的藻体细胞化。它还使用光显微镜对体内的卵细胞测定进行量化，并允许在肺微环境中测量肺细胞测定，无需进行外生操作或昂贵的荧光染料。虽然此协议在 O3暴露环境中执行，但此协议可用于多个肺部炎症和损伤模型，以评估肺泡巨噬细胞细胞化。
与现有方法不同，该方法的优点是能够在生理环境中分析白细胞。对白细胞巨噬细胞的体外分析包括电镀和细胞凋亡细胞的孵育。电镀藻巨噬细胞可以诱发生理和基因组的变化，可能改变二甲细胞生成28，29，30。此外，在肺中，肺泡巨噬细胞存在于微环境中，含有表面活性剂和肺衬里液的成分，已知影响巨噬细胞功能31，32，33， 34，35.我们的方法允许在肺中进行排卵细胞化测量，无需进行外体操作，这在生理上更相关。该协议的未来应用可以导致更深入的研究，研究肺微环境如何改变肺泡巨噬细胞细胞细胞化。
该协议的一个关键组成部分是生成用于评估球泡巨噬细胞的细胞。这包括优化正确的紫外线照射水平，以诱导凋亡，而不是坏死。我们的协议使用具有254nm波长发射灯泡和60mJ/cm2的暴露水平的紫外线交联器。紫外线灯泡的选择对于产生凋亡（而不是坏死）至关重要。350纳米紫外线灯泡是优秀的蛋白质膜交联和灭菌，但不能诱导凋亡35，36，37。图4显示了一个暴露于60 mJ/cm2的Jurkat T细胞的点图，其中350nm灯泡，晚期凋亡和坏死细胞明显增加。此外，该协议使用4小时孵育后紫外线照射。为了优化协议的这一部分，我们之前研究了不同的孵育时间，发现1.5和2小时孵育后暴露只产生约40%的凋亡，其细胞化指数低于5%（未显示数据）。根据目前的文献资料，总凋亡细胞的70%-80%足以测量细胞凋亡38。
该协议的一个限制是，它检查FA或O3接触后空气空间中所有巨噬细胞的体细胞反应，并且不区分组织常驻巨噬细胞和招募的巨噬细胞。称为肺泡巨噬细胞的肺居民巨噬细胞来自胎儿肝脏，而招募的巨噬细胞则来自血液传播的胚胎来源。受伤时，肺可以有一个高度异质的巨噬细胞群，具有独特的遗传学和细胞表面标记的表达28，29，30，31，32，33，34，35.据了解，这些巨噬菌群的免疫反应和功能是不同的;然而，最近的研究表明，组织居民巨噬细胞有更大的排卵反应相比，招募的巨噬细胞29，30，31。确定组织驻日巨噬细胞与招募的巨噬细胞的排卵反应，可以使用当前方案进行评估;然而，巨噬菌体种群需要由FACS进行纯化，并镀在幻灯片上进行分析。此外，此协议仅评估一种近亲繁殖的、市售的小鼠的卵泡巨噬细胞功能。此前有报道称，不同菌株的小鼠对O3接触表现出不同的反应，包括肺部炎症39，40。因此，根据所检查的菌株，在阿尔韦拉尔巨噬细胞细胞细胞内可能存在差异。这是一个变量，在进行体内测定时应考虑。
总之，上述方案允许评估体内的藻体细胞细胞化。该协议经济高效且简单，是一种可广泛使用的测定方法。此外，这种方法可以应用于许多模型的肺损伤和/或炎症，以增加了解如何各种肺损伤可以改变巨噬细胞性细胞增多症。
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Disclosures
提交人声明没有利益冲突。
Acknowledgments
这项研究由健康影响研究所沃尔特·罗森布利斯奖和NIEHS R01ES028829（到K.M.G）资助。我们要感谢DianneWalters博士（ECU生理学系）协助她获得有代表性的阿尔韦拉尔巨噬细胞图像。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Annexin V-FITC Kit | Trevigen | 4830-250-K | The TACS Annexin V-FITC Kit allows rapid, specific, and quantitative identification of apoptosis in individual cells when using flow cytometry. |
| BCL2 Jurkat T Cells | ATCC | ATCC CRL-2899 | The BCL2 Jurkat cell line was derived by transfecting human Jurkat T cells with the pSFFV-neo mammalian expression vector containing the human BCL-2 ORF insert and a neomycin-resistant gene. Has been for models of measuring efferocytosis. |
| Countess II Automated Cell Counter | Thermofisher | AMQAX1000 | It is a benchtop assay platform equipped with state-of-the-art optics, full autofocus, and image analysis software for rapid assessment of cells in suspension. Very easy to use. |
| Cytospin 4 Cytocentrifuge | Thermofisher | A78300003 | Provides economical thin-layer preparations from any liquid matrix, especially hypocellular fluids such as bronchoalveolar lavage fluid. |
| Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated | Thermofisher | 16140071 | Provides Nutrients to cultured cells for them to grow. It is standard for cell culture. |
| Kwik-Diff Reagent 2, Eosin | Thermofisher | 9990706 | Eosin staining that stains cytoplasm. |
| Kwik-Diff Reagent 1, Fixative | Thermofisher | 9990705 | Fixes cells to be stained by H&E. |
| Kwik-Diff Reagent 3, Methylene Blue | Thermofisher | 9990707 | Methylene Blue staining that stains the nucleus. |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma/Aldrich | P0781-100ML | Penicillin-Streptomycin is the most commonly used antibiotic solution for culture of mammalian cells. Additionally it is used to maintain sterile conditions during cell culture. |
| RPMI 1640 Medium, GlutaMAX Supplement | Thermofisher | 61870036 | RPMI 1640 Medium (Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium) was originally developed to culture human leukemic cells in suspension and as a monolayer. RPMI 1640 medium has since been found suitable for a variety of mammalian cells, including HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocytes, and carcinomas. Helps grow Jurkat T cells fast and efficiently. |
| Stratagene UV Stratalinker 1800 UV Crosslinker | Cambridge Scientific | 16659 | The Stratalinker UV crosslinker is designed to induce apoptosis, crosslink DNA or RNA to nylon, nitrocellulose, or nylon-reinforced nitrocellulose membranes. |
| Teledyne T400 ultraviolet light photometer | Teledyne API | T400 | The Model T400 UV Absorption analyzer uses a system based on the Beer-Lambert law for measuring low ranges of ozone in ambient air. |
| Teledyne T703 Ozone calibrator | Teledyne API | T703 | Provides feedback control of the UV lamp intensity, assuring stable ozone output. |
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