Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Измерение активности читиназа в биологических образцах

doi: 10.3791/60159 Published: August 22, 2019
* These authors contributed equally

Summary

Здесь представлен простой метод измерения активности хитиназы в биологических жидкостях, таких как бронхоальвеолярная лаваж или сыворотка.

Abstract

Читиназа являются ферментами, которые расщепляют хитин. Даже при отсутствии хитина млекопитающие имеют значительное количество хитиназах, присутствующих в организме, в том числе на исходном уровне. Точная роль хитиназа не известна, однако считалось, что она играет важную роль в пищеварении и защите организма от содержания хитина и патогенов, соответственно. Последние работы, в том числе наша, показали важную роль хитиназа и хитиназа, как белки в иммунитет хозяина и аллергических заболеваний. Важно отметить, что хитиназа деятельности служат важными биомаркерами тяжести заболевания в широком диапазоне заболеваний, включая тип 2 воспалительных заболеваний, таких как астма и легочный фиброз. Аналогичным образом, пациенты с генетическими расстройствами, как болезнь Гоше имеют значительно повышенный уровень хитиназа, которые не только коррелируют с тяжестью заболевания, но и служат надежным биомаркером для терапевтической эффективности. В описанном здесь протоколе описывается простой, быстрый и простой способ измерения активности хитиназы в образцах БАТ или сыворотки мышей и может быть широко адаптирован к человеческим субъектам и другим типообразуя организмам из-за высокосохранительной природы ферментов.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Читин является вторым наиболее распространенным полисахаридом на земле после целлюлозы, выступающей в качестве основного структурного компонента различных организмов, включая экзоскелет насекомых, грибов, дрожжей и водорослей; некоторые позвоночные также имеют хитин1. Читиназы представляют собой семейство ферментов, которые способны разрушать хитин и высоко сохраняются на протяжении всей эволюции в видах, начиная от бактерий до млекопитающих2,3. В дополнение к хитиназы, млекопитающие также имеют хитиназы, как белки, которые похожи на хитиназы в их способности связывать хитин, но отличаются тем, что они не имеют ферментатической способности расщеплять хитин4.

Хотя хитин и хитиназы уже давно изучены, исследования датируются началом 1900-х годов, основное внимание уделяется их роли в насекомых и других беспозвоночных. В самом деле, он не был до 1960-х годов, когда позвоночные были найдены, что хитиназа на всех. Использование цитобиазного анализ, хитиназы были показаны, чтобы быть найдены в пищеварительном тракте ряда позвоночных, включая ящериц и черных дроздов-наблюдение предположил, что из-за потребления хитина содержащих организмов, таких как насекомые5 .

Млекопитающие имеют две ферментативно активные формы хитиназы: кислую хитиназу млекопитающих (AMCase; также известный как CHIT2 и CHIA) и chitotriosidase (CHIT1)4. Оба этих белка способны гидролизовать хитин. Тем не менее, CHIT1 более ферментативно активен у людей, где почти вся активность хитиназы происходит от CHIT1. 4 У мышей, как Chit1 и AMCase почти в равной степени способствовать общей активности хитиназы6. С другой стороны, хитиназоподобные белки не имеют хитиназной активности.

Chit1 в основном выделяется макрофагами и часто считается иммунным ответом на хитинсодержащие патогены7. Фермент также было показано, что участвует в созревании моноцитов в обоих M1 и M2 макрофаг подтипов, даже без присутствия субстрата хитина8. Кроме того, он также может быть вовлечен в созревание других иммунных клеток, включая T помощник типа 2 (Th2) клетки и эозинофилы, как было показано в случае криптококковой инфекции легких9. Эти исследования указывают на сложную роль хитиназав в иммунной системе.

В последние годы, Chit1 уровни были найдены в качестве важного биомаркера прогрессирования для более чем 40 различных заболеваний человека, включая лисосомальные заболевания хранения, инфекционные заболевания, респираторные заболевания, эндокринологические заболевания, сердечно-сосудистые заболеваний, неврологических заболеваний и др. (обзор10). Во многих из этих заболеваний, уровни Chit1 являются сильным предиктором тяжести заболевания и терапевтической эффективности10.

Как хитиназа приобрели репутацию биомаркера для многочисленных заболеваний, включая болезнь Гоше, инструменты и анализы были разработаны для облегчения тестирования на наличие хитиназа. Более старые методы включают процедуру Schales, протокол приспособленный от испытания глюкозы крови, и метод 3.5 динитрозалиловной кислоты (DNS). Тем не менее, эти методы часто чувствительны к времени и технически трудно11. Процедура для обоих из этих испытаний требует уменьшения неорганических окислителей, ferricyanide в случае процедуры Schales например, производя изменение цвета которое можно только измерить спектрофотометрическо. Кроме того, оба теста включают нагревание или кипячение шаг, который является одновременно трудоемким и необходимым для цвета развиваться12,13.

Описано здесь быстрый и простой фторметрический анализ для определения уровня хитиназы в образцах млекопитающих14,15. Два из используемых здесь образцов включают сыворотку и бронхоальвеолярные лавовые жидкости (BAL); хитиназа активность также измеряется в грудном молоке и моче образцов, и техника может быть выполнена в этих типах образцов, а также в любой другой биологической жидкости16,17.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Все процедуры для животных были выполнены в соответствии с протоколом, утвержденным IACUC в Медицинской школе йельского университета.

1. Коллекция образцов мышей

  1. Анестезия
    1. Анестезия мышей с использованием кетамина и ксилазина (100 мг/кг кетамина и 10 мг/кг ксилазина).
  2. Сбор образцов крови
    1. Подтвердите глубину анестезии неотзывчивостью к щепотке ног.
    2. Хирургически открыть грудную полость, чтобы разоблачить сердце.
    3. Вставьте 26,5 G иглу в левый желудочек и соберите кровь в шприц.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Как правило, около 0,5-1 мл крови можно собрать из здорового 20-25 г мыши.
    4. Сбор крови в гепаринизированных трубах, для сбора плазмы, или негепаринизированных труб для сбора сыворотки.
  3. Коллекция бронхоальвеолярной жидкости для лаважа (BAL)
    1. Чтобы собрать BAL, сделать вертикальный разрез на шее, чтобы разоблачить трахеи.
    2. Cannulate трахеи с 22 G катетер и закрепите его твердо с помощью строки для того, чтобы предотвратить утечку из носа мыши.
    3. Медленно введите два аликота стерильного фосфатного солей (PBS, 0,75 мл каждый) в легкие через трахею и извлекайте обратно.
    4. Бассейн aliquots и держать на льду для дальнейшего анализа.
  4. Обработка биологических образцов.
    1. Образец крови: либо свежий (плазма) или после разрешения свертывания в течение 4 ч (сыворотка), центрифуга при 600 х г в течение 10 мин. Возьмите супернатант и либо заморозить для хранения или использовать для эксперимента.
    2. BAL: Центрифуга образец на 350 х г в течение 5 мин. Возьмите супернатант и либо заморозить для хранения или использовать для эксперимента.

2. Читиназа Ассей

ПРИМЕЧАНИЕ: Наука, лежащая в основе асссея, относительно проста. Нефлуоресцентный субстрат расщепляется ферментативно активной хитиназы для производства флуоресцентного продукта, который затем измеряется как косвенный маркер активности хитиназы. Хитиназа в образцах сломать субстрата 4-метилумбелайлилл-D-N, N'-diacetylchitobiose присутствует в буфере 1x McIlvain. Высвобождается флуоресцентная молекула 4-метилумбелийрил. Измеряя общую флуоресценцию каждой скважины, мы получаем точное измерение активной хитиназы в каждом образце. Поскольку распад хитина за хитиназой является гидролитической реакцией, стоп-буфер, смесь 0,3 М глицина и NaOH (12,0 г/л при рН 10,6), завершает распад хитина, создавая среду, которая слишком базова для работы фермента.

  1. Подготовьте субстраты, стандарты и решения.
    1. Подготовьте буфер McIlvain. McIlvain Buffer состоит из 0,1 М цитрат и 0,2 М фосфата при рН 5,2. Разбавить в соотношении 1:1 для буфера 1x McIlvain.
    2. Растворите как 4-метилумвелайлайлайл-D-N, N'-diacetylchitobiose и 4-метилумбелайлил з-Д-Н, N', N"-triacetylchitotriose в 1x McIlvain буфера до концентрации 500 мкм каждый.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Стоковое решение может храниться при -20 градусов по Цельсию для дальнейшего использования; лучше всего хранить в aliquots.
    3. Растворите стандартный, 4-метилюмбеллиферон, до концентрации 0,1 мМ в стоп-буфере (смесь 0,3 М глицина и NaOH (12,0 г/л при рН 10,6)) для создания стандартного раствора кривой запаса.
  2. Создайте и наплитуйте рабочее решение.
    1. Комбинат 1x McIlvain буфера и хитина субстрата 4-метилумбелиферил-D-N, N'-diacetylchitobiose для создания рабочего решения. На каждые 10 образцов смешайте 100 кЛ субстрата с 2,17 мл 1x буфера McIlvain. См таблица 1 для дополнительных расчетов на основе размера выборки.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Используйте 4-метилумбелиферил ю-D-N, N', N"-триацетилхитотиоз для человеческих образцов. Хотя оба субстрата могут быть расщеплены либо человеческими или мышиными ферментами, они были назначены для образцов человека или мыши на основе эффективности расщепления6.
    2. Пипетка 95 л рабочего раствора в каждую скважину пластины из 96 колодцев.
  3. Добавьте образцы биоспециции к рабочему раствору.
    1. Затем добавьте 5 кЛ испытательного образца (кровь/BAL/tissue lysate/other биологическая жидкость) к каждому колодцу.
    2. Смешайте образец в рабочее решение для получения наиболее точных и надежных результатов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Образцы должны быть запущены в дубликаты / трипликаты с особым вниманием к потенциальным эффектам края. Все образцы должны быть предварительно разогреты, чтобы свести к минимуму эффект края. Поскольку анализ включает в себя реакцию между хитиназами в образце и субстратом в рабочем растворе, лучше всего работать относительно быстро, чтобы свести к минимуму разницу во времени, когда первый образец покрылся и последний образец покрыли. Рекомендуется многоканальный пипетка.
  4. Инкубировать при 37 градусах Цельсия.
    1. Накройте тарелку и встряхните кратко (5 с).
    2. Инкубировать тарелку при 37 градусах по Цельсию в течение 15 мин. Это позволяет проводить ферментативную реакцию.
  5. Подготовьте стандартную кривую.
    1. В то время как образцы инкубации, подготовить серийное разбавление 4-метилумбеллиферон, стандарт часто используется в фторметрическом определении активности фермента.
    2. Разбавить запас стандартного раствора в стоп-буфере до концентрации 5 мкм.
    3. Выполните серию разбавлений, как указано в таблице 2. Добавить компоненты в указанном количестве и хорошо перемешать.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Стандартная кривая помогает гарантировать, что измеренные образцы попадают в линейный диапазон стандартной кривой.
  6. Остановите реакцию стоп-буфером.
    1. Добавьте 200 юл стоп-буфера к каждой скважине, чтобы остановить реакцию.
  7. Плита стандартов.
    1. Добавьте 300 кл.с каждого стандарта в колодец в дубликатах на одной тарелке.
  8. Прочитайте пластину с помощью флюорометрического считывателя.
    1. Прочитайте пластину при возбуждении 360 нм, а выброс 455 нм.

3. Анализ данных

  1. Вычесть пробелы
    1. Среднее значение дубликатов стандартных разбавлений, которые не имеют 4-метилюмбеллиферона. Вычесть это значение из всех других зарегистрированных значений.
  2. Возьмите в среднем технические реплики и график стандартов.
    1. Среднее два показания для каждой концентрации и график среднего чтения по концентрации.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Полученный участок должен выглядеть линейным и иметь значение R 2, близкое к 1. В противном случае может возникнуть необходимость переделать стандарты и перечитать табличку, чтобы обеспечить качество анализа данных.
  3. Стандартизировать значения считываемого.
    1. Создайте наиболее подходящее для данных о начертанных стандартах. Разделите считывательные образцы по склону наиболее подходящей линии.
  4. Сравните значения из контрольной и переменной группы.
    1. Используйте t-test или ANOVA для более чем двух групп, чтобы определить, является ли разница между группами статистически значимой. Значения будут принимать единицы nmol/mL'h.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Результаты, показанные здесь, взяты из исследования, измеряя активность хитиназы в сыворотке крови и BAL образцах дикого типа (C57BL/6) и chit1 трансгенных мышей (на фоне C57BL/6), которые переэкспрессируют ген Chit1 на промоторизме доксициклина. Наши данные показывают, что оба образца сыворотки и БАЛ имеют обнаруживаемую активность хитиназы на базовом уровне 698,2 и 189,9 нмоль/моль и 485,7 и 114 нмоль/мл/х, соответственно. Переэкспрессия гена Chit1 с использованием доксициклина в питьевой воде в течение 4 недель привела к повышению активности хитиназы, которая наблюдалась как в BAL (4,575 г. - 673,8 нмоль/мл,х, стр. 0,003) и сыворотке 1556 г. 251,2 нмоль/мл/ч, р.022. ) образцы.

Используя описанный здесь протокол, результаты исследования подтверждают, что переэкспрессия гена Chit1 у мышей приводит к повышенной активности хитиназы. Для сравнения средств этих двух групп был использован t-тест. Каждая группа содержала по 5 мышей.

Figure 1
Рисунок 1: Активность читиназа. Активность читиназы измеряласьв сыворотке сыворотки а ( (B)бронхоальвеолярной лавовой жидкости дикого типа (WT) и хитотриозидазы (ChitTg) чрезмерного выражения трансгенных мышей. Каждая точка представляет собой отдельный образец мыши. (C) Значения были стандартизированы с использованием линейности стандартной кривой, как описано в протоколе. Уровни флуоресценции были измерены с помощью считывателя пластин на длине волны 360 нм для возбуждения и 455 нм для выбросов и представлены как АС. АС - произвольное подразделение "Пр эт"; 0,05, зюп-лт; 0,001. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Количество образцов скважин Субстрат (КЛ) Макилвен Баффер (мЛ)
20 100 2.17
50 250 5.425
100 500 10.85

Таблица 1: Расчеты образцов для создания рабочего решения.

(КЛ) 1 2 3 4 5 6 7 8
Конк. (nM) 0 125 250 375 500 625 750 875
Стандартный 0 20 40 60 80 100 120 140
2x Макилвиан 200 200 200 200 200 200 200 200
Дистиллированная H2O 200 180 160 140 120 100 80 60
Остановить буфер 400 400 400 400 400 400 400 400

Таблица 2: Разбавления для стандартных измерений кривой.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Активность читиназа стала важным биомаркером для прогнозирования тяжести заболевания, прогрессирования заболевания, терапевтической эффективности и наличия специфических патогенов18. Хотя многие из давно постулируемых теорий о роли хитиназ не были экспериментально доказаны19, новые исследования предоставили важные идеи о роли хитиназов и хитиназ, как белки при различных заболеваниях2, 9,20.

Описанный здесь протокол представляет собой простой, быстрый и эффективный способ измерения активности хитиназы в биологических образцах. Практически никаких изменений требуется для измерения активности хитиназы в широком спектре биологических образцов и видов из-за высокой сохранности природы хитиназы. В этом протоколе перечислены два субстрата, один из которых был предназначен для образцов мыши, а один - для образцов человека; однако оба субстрата могут быть использованы на любом виде, так как они были назначены как таковые на основе демонстрации предыдущих работ эффективности, с которой ферменты могут расщеплять субстрат.

По сравнению с ранее существующими методами, такими как процедура Schales и метод DNS, изложенный здесь, устраняет необходимость в интенсивных шагах, таких как кипячение или нагревание, которые были необходимы в старых методах. Кроме того, асссеможно менее сложным с технической топорой и требует меньше сложных шагов, чем предыдущие методы измерения. Для достижения наилучших результатов следует использовать как биологические, так и технические репликации.

Если активность хитиназа слишком высока, разбавления биологического образца достаточны для уменьшения активности хитиназа для измерения, а истинные значения могут быть рассчитаны на основе разбавления. При выполнении этого эксперимента на новых биологических образцах, это может быть полезно для выполнения повторных измерений на той же пластине с течением времени до насыщения, чтобы обеспечить надлежащее время инкубации для достижения наилучших результатов. Кроме того, протокол может быть масштабирован вверх или вниз до тех пор, пока сохраняется согласованность между группами. Будущие применения этого протокола далеко идущие, как исследования только собирание в роли хитиназа деятельности в ряде заболеваний.

Одной из первых категорий заболеваний, которые хитиназа деятельности было установлено, что имеют отношение к был лисосомальных заболеваний хранения, включая болезнь Гоше, Ниманн-Пик A / B и C, ГМ-1 ганглиозидоза, и многие другие21. Болезнь Гоше является лизосомальной болезни хранения, вызванной недостаточной активностью глюкозеброзидазы и характеризуется накоплением глюкозильцерамида, субстрата глюкоцеррозидазы, в лизосоме макрофагов15. Это генетическое заболевание, с клиническими симптомами, которые включают селезенку и увеличение печени, низкий уровень тромбоцитов, анемия, усталость, и кости проблемы22. Клинические исследования показали, что большинство людей, страдающих от болезни Гоше имеют медианную активность хитиназа, что более чем в 600 раз превышает медианное значение нормальных добровольцев контроля; кроме того, когда люди с болезнью Гоше были поставлены на фермента добавок терапии-текущее лечение болезни-их уровни хитиназа значительно снизился кредитование хитиназа деятельности, чтобы быть отличным маркером обоих заболеваний прогрессирование и лечение мониторинга15. Никакая роль пока не была найдена для Chit1 в заболевании однако. Аналогичные исследования привели к мониторингу активности Chit1 для многих других лизосомальных заболеваний хранения10.

Кроме того, дальнейшие исследования показали потенциальную роль для деятельности Chit1 во время различных патогенных инфекций, включая грибковую инфекцию, малярию, туберкулез и K. pneumoniae, чтобы назвать несколько2,3,10 . Исследование 2012 года показало, что активность хитиназа была повышена у пациентов с активной туберкулезной (ТБ) инфекцией даже тогда, когда мазок вспутывания был отрицательным, что указывает на то, что активность хитиназа может быть использована в качестве эффективного биомаркера при диагностике туберкулеза, особенно во время долгое время ожидания, что часто необходимо для точной диагностики заболевания23. Аналогичные выводы были замечены во время инфекции Plasmodium falciparum, с уровнем сыворотки chitotriosidase значительно увеличилось у тех, с острой инфекцией24. Хотя многие из этих заболеваний занять несколько дней, чтобы диагностировать, быстрые измерения уровня активности хитиназы в крови может обеспечить благотворное понимание в диагностике. Кроме того, поскольку малярийные паразиты и бактерии туберкулеза становятся все более устойчивыми к лечению, измерение уровня активности хитиназа в сыворотке крови может помочь в мониторинге лечения для ее эффективности в режиме реального времени.

Все больше и больше исследований начали фокусироваться на роли хитиназа и хитиназа- как белки в иммунном ответе, особенно его роль в воспалительных путей. По мере того как это исследование продолжается, этот протокол позволит для быстрого и точного измерения этой деятельности chitinase к более дальнеишным исследованиям. Протокол легко корректируется для любого количества видов образцов, включая как мышь, так и человека, что делает его широко применимым.

В дополнение к исследовательской выгоде, более эффективные методы для обнаружения и измерения активности хитиназа в образцах будут полезны в клинической сфере. Недавние исследования продемонстрировали роль хитиназа в качестве биомаркера в патологии многочисленных хронических заболеваний, включая болезнь Гоше, сахарный диабет, саркоидоз, атеросклероз, воспалительные заболевания кишечника и рак3, 21,25,26.

Из-за этой роли в качестве биомаркера, быстрое и точное измерение активности хитиназы, как показано здесь, невероятно актуально для области медицины, что позволяет поставщикам медицинских услуг иметь больше информации для правильного диагноза и плана лечения.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ни один.

Acknowledgments

Это исследование было поддержано Американской ассоциацией легких и Американского торакального общества награды LS. Авторы искренне хотят поблагодарить доктора Джека Элиаса и доктора Чун Кын Ли за предоставление трансгенных штаммов мыши.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
4-methylumbelliferone Sigma M1381 Standard: commonly used in flourimetric assays for determination of enzyme activity
4MU-GlcNAc2 Sigma M9763 fluorescent chitinase substrate for use in mouse samples
4MU-GlcNAc3 Sigma M5639 fluorescent chitinase substrate for use in human samples
Citric Acid-monohydrate for use in McIlvain Buffer
Glycine for use in Stop Buffer at a concentration of 0.3 M
Na2HPO4xH2O for use in McIlvain Buffer
NaOH for use in Stop Buffer at a concentration of 12 g/L
Vision Plate: Non-sterile, untreated black 96 well plate 4titude 4ti-0224

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hamid, R., Khan, M. A., Ahmad, M. Chitinases: An update. Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences. 5, (1), 21-29 (2013).
  2. Sharma, L., et al. Regulation and Role of Chitotriosidase during Lung Infection with Klebsiella pneumoniae. Journal of Immunology. 201, (2), 615-626 (2018).
  3. Kanneganti, M., Kamba, A., Mizoguchi, E. Role of chitotriosidase (chitinase 1) under normal and disease conditions. Journal of Epithelial Biology & Pharmacology. 5, Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3579558/ 1-9 (2012).
  4. Lee, C. G., et al. Role of Chitin and Chitinase/Chitinase-Like Proteins in Inflammation, Tissue Remodeling, and Injury. Annual Review of Physiology. (73), 479-501 (2011).
  5. Jeuniaux, C. Chitinase: An Addition to the List of Hydrolases in the Digestive Tract of Vertebrates. Nature. 192, (4798), 135-136 (1961).
  6. Boot, R. G., et al. Identification of a Novel Acidic Mammalian Chitinase Distinct from Chitotriosidase. Journal of Biological Chemistry. 276, (9), 6770-6778 (2000).
  7. Arndt, S., Hobbs, A., Sinclaire, I., Lane, A. B. Chitotriosidase Deficiency: A Mutation Update in an African Population. JIMD Reports. 10, 11-16 (2013).
  8. Di Rosa, M., Malaguarnera, G., De Gregorio, C., Drago, F., Malaguarnera, L. Evaluation of CHI3L-1 and CHIT-1 Expression in Differentiated and Polarized Macrophages. Inflammation. 36, (2), 482-492 (2013).
  9. Wiesner, D. L., et al. Chitin Recognition via Chitotriosidase Promotes Pathologic Type-2 Helper T Cell Responses to Cryptococcal Infection. PLOS Pathogens. 11, (3), e1004701 (2015).
  10. Elmonem, M. A., vanden Heuvel, L. P., Levtchenko, E. N. Immunomodulatory Effects of Chitotriosidase Enzyme. Enzyme Research. 2016, 1-9 (2016).
  11. Ferrari, A. R., Gaber, Y., Fraaije, M. W. A fast, sensitive and easy colorimetric assay for chitinase and cellulase activity detection. Biotechnol Biofuels. 7, (37), 1-8 (2014).
  12. Schales, O., Schales, S. S. Simple method for the determination of glucose in blood. Proc Am Fed Clin Res. 2, Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20275623 78 (1945).
  13. Zarei, M., et al. Characterization of Chitinase with Antifungal Activity from a Native Serratia Marcescens B4A. Brazilian Journal of Microbiology. 42, (297), 1017-1029 (2011).
  14. Zhu, Z., et al. Acidic Mammalian Chitinase in Asthmatic Th2 Inflammation and IL-13 Pathway Activation. Science. 304, (5677), 1678-1682 (2004).
  15. Hollak, C. E., van Weely, S., van Oers, M. H., Aerts, J. M. Marked elevation of plasma chitotriosidase activity. A novel hallmark of Gaucher disease. Journal of Clinical Investigation. 93, (3), 1288-1292 (1994).
  16. Musumeci, M., Malaguarnera, L., Simpore, J., Barone, R., Whalen, M., Musumeci, S. Chitotriosidase activity in colostrum from African and Caucasian women. Clinical Chemistry and Laboratory. 43, (2), 198-201 (2005).
  17. Maddens, B., et al. Chitinase-like Proteins are Candidate Biomarkers for Sepsis-induced Acute Kidney Injury. Mol Cell Proteomics. 11, 1-13 (2012).
  18. Hector, A., et al. Chitinase activation in patients with fungus-associated cystic fibrosis lung disease. Journal of Allergy and Clinical Immunology. 138, (4), 1183-1189 (2016).
  19. Hall, A. J., Morroll, S., Tighe, P., Götz, F., Falcone, F. H. Human chitotriosidase is expressed in the eye and lacrimal gland and has an antimicrobial spectrum different from lysozyme. Microbes and Infection. 10, (1), 69-78 (2008).
  20. Kim, L. K., et al. AMCase is a crucial regulator of type 2 immune responses to inhaled house dust mites. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112, (22), e2891-e2899 (2015).
  21. Olkhovych, N. V. Chitotriosidase activity as additional biomarker in the diagnosis of lysosomal storage diseases. Ukrainian Biochemical Journal. 88, (1), 69-78 (2016).
  22. Bouayadi, O., et al. Disease: An Underdiagnosed Pathology in the Eastern Moroccan Population. eJIFCC. 30, (1), 82-87 (2019).
  23. Tasci, C., et al. Efficacy of serum chitotriosidase activity in early treatment of patients with active tuberculosis and a negative sputum smear. Therapeutics and Clinical Risk Management. 8, 369-372 (2012).
  24. Barone, R., Simporé, J., Malaguarnera, L., Pignatelli, S., Musumeci, S. Plasma chitotriosidase activity in acute Plasmodium falciparum malaria. Clinica Chimica Acta. 331, (1-2), 79-85 (2003).
  25. Kitamoto, S., et al. Chitinase inhibition promotes atherosclerosis in hyperlipidemic mice. American Journal of Pathology. 183, (1), 313-325 (2013).
  26. Kzhyshkowska, J., Gratchev, A., Goerdt, S. Human Chitinases and Chitinase-Like Proteins as Indicators for Infl Ammation and Cancer. Biomark Insights. 2, 128-146 (2007).
Измерение активности читиназа в биологических образцах
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Amick, A. K., Liu, Q., Gautam, S., Chupp, G., Dela Cruz, C. S., Sharma, L. Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples. J. Vis. Exp. (150), e60159, doi:10.3791/60159 (2019).More

Amick, A. K., Liu, Q., Gautam, S., Chupp, G., Dela Cruz, C. S., Sharma, L. Measurement of Chitinase Activity in Biological Samples. J. Vis. Exp. (150), e60159, doi:10.3791/60159 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter