Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Standardisering af en ikke-dødelig metode til karakterisering af den reproduktive status og larval udvikling af ferskvands muslinger (Bivalvia: Unionida)

Published: October 4, 2019 doi: 10.3791/60244
Automatic Translation
1, 2, 1
1Wetland and Aquatic Research Center, United States Geological Survey, 2Garcon Point Aquatic Research Center, Florida Fish and Wildlife Conservation Commission

Summary

Ferskvands muslinge bevaring er afhængig af at overvåge arternes reproduktive mønstre og processer. Denne undersøgelse standardiserer en ikke-dødelig protokol for prøvetagning af Gill indhold, karakterisering larve udvikling, og giver en digital repository for indsamlede data. Denne protokol-databasepakke vil være et vigtigt redskab for muslinge forskere til genopretning af utætte arter.

Abstract

Aktivt at overvåge timing, udvikling og reproduktive mønstre af truede arter er afgørende, når de forvalter for befolknings genopretning. Ferskvands muslinger er blandt de mest uigennemtrænget organismer i verden, men der mangler stadig oplysninger om tidlige larve (glochidial) udvikling og rugende perioder for mange arter. Tidligere undersøgelser har fokuseret på den komplekse livshistorie scene, når kvindelige muslinger er klar til at parasitisere værts fisk, men få undersøgelser har fokuseret på den ynkelige periode og timing af larve udvikling. Den protokol, der er beskrevet her, giver forskerne mulighed for ikke-dødelighed at evaluere tilstanden af graviditet for kvindelige muslinger. Resultaterne af denne undersøgelse viser, at denne metode ikke påvirker en kvindelig musling evne til at blive gravid eller blive gravid igen efter prøvetagning er udført. Fordelen ved denne metode kan gøre det muligt at anvende den på føderalt truede eller udryddelsestruede arter eller andre populationer med høj bevarings interesse. Denne protokol kan tilpasses til brug på både konserverede eller levende individer og blev testet på en række Mussel arter. Den leverede database er et opbevaringssted for en bredde af oplysninger om tidspunktet for de reproduktive vaner og vil lette fremtidens ferskvands muslinge forskning, bevaring og genopretningsbestræbelser.

Introduction

Persistens af befolkninger i ferskvandssystemer afhænger af, om reproduktion og rekruttering lykkes. For parasitære organismer, identificere de snørklede af livscyklus (f. eks stadier af larve udvikling og vært attraktion strategier) kan give indsigt i en organismens reproduktive vaner og kritiske processer, der påvirker rekruttering. Sådanne oplysninger bliver vigtige, når arter er uigennemtrængede, og vellykket rekruttering er nødvendig for at opretholde de resterende populationer, eller hvis nyttiggørelse nødvendiggør brug af fangenskab formering for genetablering af udærede populationer.

Ferskvands muslinger (Bivalvia: unionida) betragtes som en af de mest utætte grupper af organismer på verdensplan, og en samling af artsspecifikke reproduktions vaner kan støtte i forskningsindsatsen1,2,3 ,4,5. Med over 800 i øjeblikket anerkendte arter fordelt over hele kloden, ferskvands muslinger har hotspots af mangfoldighed i nord-og Sydamerika, og Sydøstasien, men væsentlige livshistorie oplysninger er ukendt for mange arter2, 5,6,7. Familier inden for denne rækkefølge er karakteriseret ved at have parasitære larvestadier, at fuldføre metamorfose til fri-levende ungfisk under fastgørelse til en vært7,8. Denne unikke livshistorie fase bidrager til biodiversiteten i ferskvandssystemer, som i øjeblikket er i krise9. En høj grad af imperilment kan tilskrives mange menneskeskabte trusler, herunder forurening af vandveje, ændring og ødelæggelse af habitater, reduktioner i overflod og mangfoldighed af værts fisk, og indførelse af invasive arter1, 10. Som bentiske filter foderautomater, muslinger burrow ind i substratet og er modtagelige for forurenende stoffer og forurenende stoffer, der afløb i vandskel11. Genvinding af muslinge arter er relevant, da de giver en bred vifte af økosystemtjenester, herunder kulstofbinding, en fødekilde, og vandrensning ved filter fodring11. Desuden er det blevet konstateret, at muslingerne viser økosystemernes sundhed, fremmer biodiversiteten og igen øger robustheden af et økosystem12.

Mange ferskvands muslinge studier har fokuseret på at undersøge tidlige livshistorie krav for bedre at informere arter status vurderinger og ledelsesstrategier. De ferskvands muslinge familier, der er relevante for denne undersøgelse (f. eks. hyriidae, margaritiferidae, unionidae), har en unik livshistorie strategi, hvor hunnerne Brood larver (glochidia) i deres pungdyr Gills8. Gennem en række strategier, den kvindelige Mussel ekskluderer modne glochidia fra pungdyr Gills at parasitize en hvirveldyr vært med glochidia13. Forskning i glochidial udvikling inden for gællerne blev modificeret fra en teknik, der udnytter hypodermiske sprøjter til at prøve gonadale væske fra levende muslinger og evaluere gamet produktion14,15,16. Som forskere valideret denne ikke-dødbringende metode til gonade prøvetagning, det blev tilpasset til pungdyr Gill prøvetagning til at evaluere yngel udvikling15,16. Brood udvikling kan bruges til at dechifrere phylogenetiske relationer som nogle Mussel arter kan Brood glochidia i kun de ydre to gæller (ectobranchus), kun de indre to gæller (endobranchus), eller i alle fire gæller (tetrabranchus), men denne egenskab er ikke kendt for hver art17. Der er tidligere blevet anvendt brokodnings mønstre til at klassificere muslinge arter ved, om kvindelige muslinger Brood glochidia over vinteren (bradytictic) eller i en kort periode om sommeren (tachytictic)18. Over overvinning af muslingeyngel blev understøttet, da den reproduktive cyklus af anodonta blev undersøgt19. Men, grundlæggende reproduktive biologi blev undersøgt mere grundigt i årenes løb og fandt denne dikotomi var en grov generalisering og rugende perioder af nogle arter er langt mere komplekse end oprindeligt antaget20,21. For eksempel er arter af slægten hyridella (familie hyriidae), glebula og elliptio (Family unionidae) blevet observeret med op til tre yngel pr. avls sæson22,23, 24. Kompleksiteten af artsspecifikke, og undertiden endda befolknings specifikke20, reproduktive vaner har ført til et hul i viden om timing og varighed af brokodning, og antallet af yngel en kvindelig Mussel kan producere.

Selv om der er anvendt hypodermiske sprøjter til at udtrække Gill indhold, er rapporteringen af resultaterne kompliceret på grund af den manglende standardisering for at sikre sammenlignelige resultater på tværs af alle undersøgelser. Tidligere er der identificeret fire udviklingsmæssige stadier af glochidia (dvs. æg, embryo, umoden, fuldt udviklet) i unionidae, men de er ikke blevet vedtaget i standardprocedure16,25,26. Andre undersøgelser, som observerede medlemmer af margaritiferidae, har erstattet klassificeringen af» umoden glochidia «med» udvikling af glochidia «, hvilket fører til potentiel forvirring27,28. Den manglende sammenhæng i karakteriserende de forskellige larve udviklingsstadier har forladt mange forskere til generelt at beskrive rugende hunner som ' gravid ', som ikke omfatter snørklede af larve udvikling. Livshistorie undersøgelser gennemfører vært-fisk forsøg har prioriteret behovet for gravid kvinder med fuldt udviklet glochidia, men denne information er spredt over hele offentliggjorte og ikke offentliggjort litteratur29,30. I øjeblikket mangler der data om de reproduktive vaner af mange muslinge arter, herunder timing af overgangen mellem æg, umodne glochidia, og fuldt udviklet glochidia klar til fastgørelse til værter. For de fleste arter er det uklart, hvor længe hunnerne Brood glochidia og hvor hurtigt befrugtede æg fuldt ud udvikle. Videnshuller er ofte bredere for arter af bevaringshensyn, som præsenterer behovet for en standardiseret metode til udvinding af Gill indhold, der er blevet testet for ikke-dødelige virkninger og kan fremmes til det videnskabelige samfund for at supplere mainstream dataindsamlingsmetoder uden at udgøre en trussel mod beskyttede befolkninger24,31,32.

Denne undersøgelse havde tre mål: 1) formalisere en Gill sampling teknik og teste det for dødelige og ikke-dødbringende virkninger på kvindelig muslinger in situ, 2) karakterisere forskellige stadier af glochidial udvikling og beskrive en standardiseret metode til at identificere og rapportering af forskellige larvestadier, og 3) oprette et offentligt lager for de indsamlede data. Feltundersøgelser, langtids overvågningsprojekter og museumssamlinger repræsenterer alle muligheder for, at den her beskrevne protokol kan gennemføres, og at der indsamles yderligere data til en bredere interesse. Den formaliserede protokol indeholder visuelle elementer og tegn beskrivelser til at differentiere hver fase af larve udvikling. Ved at standardisere kategorierne kan de indsamlede resultater sammenlignes mellem alle forekomster og arter. Når data er indsamlet, kan alle indsendes til ferskvands Mussel graviditet Almanac (FMGA), som er en database for graviditet oplysninger indsamlet ved hjælp af denne protokol. Et endeligt produkt til at gemme og kompilere alle de graviditet indsamlede oplysninger vil give et forskningsværktøj til at lette fremtidige forskning, bevaring og nyttiggørelse indsats. Indarbejdelsen af denne metode i forskellige Mussel-projekter og indsendelse af data til FMGA vil udvide den brede viden om Mussel arters graviditetsstatus i løbet af året. Denne protokol og den resulterende database om ferskvands muslenes reproduktive vaner er som en meget uigennemtrænget gruppe af organismer afgørende for at forstå befolkningens dynamik og lette bevarelsen af disse arter.

Protocol

1. gravid kvindelig samling

Bemærk: der henvises til fiske-og dyrelivs tjenestens ferskvands Mussel-Undersøgelsesprotokol33 for vejledning i, hvordan man i tilstrækkelig grad opsøger et prøvetagningssted for truede eller udryddelsestruede arter. Passende føderale tilladelser skal indhentes før felt indsamling af beskyttede arter og stats tilladelser for alle arter til stede.

  1. Saml levende muslinger fra marken ved hjælp af taktile-visuelle metoder (trin 1,2) eller udnytte bevarede prøver fra et Museum (trin 1,3).
    Bemærk: det er vigtigt at holde levende muslinger kølige og våde efter opsamling for at forhindre udtørring og reducere stress, og minimal håndtering af gravid muslinger er vigtigt for at undgå, at kvinder for tidligt frigiver Gill indhold34.
  2. Evaluer den kvindelige graviditet enten ved visuel inspektion under samlingen (f. eks. tilstedeværelse af kappe lokke, konglutinater osv.) eller ved visuel inspektion efter opsamling (f. eks. forsigtigt at nysgerrige åbne ventiler nok til at kigge ind og se, om Gills er oppustet, se Figur 1).
    Bemærk: arterne varierer i, hvordan glochidia er brokodet inden for de pungdyr gæller som undertiden kun de to ydre gæller (ectobranchus), kun de to indre gæller (endobranchus), eller alle fire gæller (tetragenous) er pungdyr17. Protokollen kan sættes på pause her, og gravid hunner kan transporteres tilbage til laboratoriet for Gill sampling.

Figure 1
Figur 1: forsigtigt nysgerrige individer åbne. For at kontrollere graviditet af en levende musling, forsigtigt lirk åbne ventilerne med tommelfingre (a) eller forsigtigt bruge et Spekulum eller omvendt tænger til at lirk åbne ventilerne (B). Gennemgå trin 2,3 i protokollen for advarsler, der er knyttet til denne metode. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

  1. Foretag en visuel inspektion af konserverede prøver ved at åbne ventilerne og inspicere gællerne for at afgøre, om den enkelte er en gravid kvinde (figur 2).

Figure 2
Figur 2: hvordan man identificerer en gravid kvinde. Kvindelige Mussel pungdyr gæller vises oppustet, når kvinden er gravid og brokodning. Fotos A og C viser Gills fra et lateralt perspektiv, mens fotos B og D giver en ventrale visning af gællerne. Røde kasser skitserer gællerne for at fremhæve forskellene mellem en gravid (A/B) og ikke gravid (C/D) kvindelig Lampsilis straminea Mussel. De samlede længder af personerne er 79 mm (A/B) og 88 mm (C/D). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

2. prøvetagning af Gill-indhold

Bemærk: denne protokol kan tilpasses, uanset om der forekommer prøveudtagning på levende muslinger i marken og laboratoriet eller på konserverede prøver.

  1. Forbered et 1,5 mL plast mikrocentrifuge opsamlings glas med ca. 1 mL af enten sterilt vand, hvis Gill-indholdet vil blive evalueret inden for 24 timer fra ekstraktion35 eller ethanol (EtOH), hvis prøve vurderingen ikke kan finde sted inden for 24 timer efter indsamlingen, eller hvis Gill indholdet er fra et Museums eksemplar bevaret i EtOH. Hvis glochidia er beregnet til scanning af elektronmikroskop (SEM) billeddannelse, brug 70% EtOH, og hvis glochidia vil blive anvendt til genetisk testning, brug ikke-denatureret 95% EtOH36.
  2. Fjern papir indpakningen for en steril 20 G-nålekanyle på en 10 mL sprøjte. Skru hætten af for at udsætte nålen og forberede et 1,5 mL plastictube til Gill Content Collection. Skub håndtaget på sprøjten helt ned, så den sorte prop er på 0 mL/CC-linjen.
    Bemærk: en steril sprøjte skal anvendes, hver gang der udtages prøver af Gill-indholdet. En brugt sprøjte kan steriliseres i marken ved at dyppe spidsen i en 10% blegemiddel opløsning og derefter skylle sprøjten ved at fylde den med 1 mL sterilt vand og trykke stemplet tilbage til 0 mL/CC og endelig tørre sprøjten med en ren klud.
  3. Pick up den gravid kvindelige og forsigtigt lirk åbne de to ventiler ved hjælp af spidsen af tommelfingrene.
    Forsigtig: Vær omhyggelig med ikke at skade dyret. Åbning af ventilerne for bredt eller for hurtigt kan over udvide adductor muskler og forårsage dødelighed. Tynde afskallede prøver (f. eks. arter af Anodonta, leptodea, utterbackiaosv.) og unge individer er særligt udsatte i dette trin. Kraftigt håndtering af skrøbelige, afskallede arter kan knække skaller og forårsage dødelighed. I nogle tilfælde, klemme tynde afskallede dyr fra den forreste og posterior Shell margener, mens du ser på den ventrale overflade, vil forårsage skallen til at bøje og gape lidt, så man kan observere de gæller eller PRY åbne skaller og undgå at beskadige den skrøbelige Shell margin.
    Bemærk: værktøj kan bruges til at hjælpe med dette trin, men kan også forårsage dødelighed, hvis det ikke anvendes med omhu og bør undgås, når det er muligt. For eksempel kan et Spekulum eller modificeret sæt af omvendte tænger bruges til at hjælpe lirk den enkelte åben og en kile kan bruges til at hjælpe prop ventilerne åbne. Disse instrumenter er måske ikke nødvendige, hvis en anden person er til rådighed til at hjælpe (dvs. en person holder dyret åbent, mens en anden manøvrer sprøjten til ekstraktion). Beskadigelse eller adskillelse af kappe vævet fra periostracum kan forårsage vækst deformiteter og dødelighed37; Derfor er det vigtigt at undgå at afskære forbindelsen mellem kappe vævet og udvendig margin af skallen.
  4. Brug kanylespidsen af sprøjten til forsigtigt at trænge ind i et enkelt vandrør af den oppustet pungdyr Gill. Derefter forsigtigt scoop Gill indholdet ud ved at udnytte den skrå spidsen af nålen.
    Bemærk: Gill indhold har normalt en mælkeagtig-hvid konsistens, som skal være synlig på den skrå spids af nålen.
    1. Indbetal indholdet af sprøjten direkte i en Petri skål, hvis der er let adgang til et mikroskop. Ellers opbevares indholdet i et 1,5 mL plastik mikrocentrifuge glas med angivet væske (Se trin 2,1) til senere evaluering.
      Bemærk: Minimer forstyrrelse og håndtering af glochidia prøver under transport for at undgå skader og nedsat levedygtighed32,35.
  5. Registrere oplysninger om slægten-art identifikation, graviditet status, længde af kvindelige (mm), samler og kontaktoplysninger, stat, Amt, dræning, specifik indsamling placering, bredde og længde, en entydig identifikator for Gill prøve, en entydig identifikator for undersøgelsesstedet og indsamlingsdatoen, hvis Gill-indholdet blev ekstraheret (figur 3). Registrer en entydig identifikator på hver opsamlingsbeholder for at sikre nøjagtige dataregistreringer under transporten.
    1. Fotografi den udvendige højre ventil af Mussel til identitets validering og omfatter røret mærket med den entydige identifikator læselig i billedet. Eventuelt, indsamle andre abiotiske og biotiske parametre for at supplere de oplysninger om miljøet og samfund Mussel blev fundet i (Se figur 3 for forslag).

Figure 3
Figur 3: eksempel på et dataark for et felt graviditet. Nøjagtig dataindberetning er nødvendig, hvis der udtages en Gill-prøve for at frembringe pålidelige oplysninger. Dette er et eksempel på et felt dataark med de minimale felter og ekstra abiotiske parametre, der skal indsamles sammen med hver Gill-prøve. For mere omfattende information, se venligst trin 4,1 i protokollen. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

3. laboratorie evaluering af Gill-indhold

  1. Hvis Gill indhold er i et 1,5 mL rør, overføre dem til en Petri skål og fylde bunden af skålen med vand. Drej forsigtigt Petri skålen i en cirkulær bevægelse for at samle indholdet i midten af skålen for at få en mere koncentreret visning af prøven.
    Bemærk: 1,5 mL røret kan være nødvendigt at blive skyllet ud ved hjælp af en sprøjte flaske eller overføre pipet fyldt med vand, hvis Gill indholdet klæber til rørvægge.
  2. Placer Petri skålen under et dissekere mikroskop for at evaluere prøven. Tag om muligt et fotografi af Gill-prøven under mikroskopet, og mærk den med den entydige identifikator for prøven.
    1. Rekord resultater, som udviklingsstadier er til stede i hver Gill-prøve. Brug figur 4 som en guide til at karakterisere hver udviklingsmæssige fase. I nogle tilfælde kan hunnerne være brokodning larver på flere udviklingsstadier; Derfor rapportere alle udviklingsstadier observeret inden for en given prøve (f. eks, "æg/DG/IMG/FDG"). Når den konserverede glochidia er blevet evalueret, fortsættes til afsnit 4. Hvis fuldt udviklet glochidia identificeres og EtOH ikke blev brugt til bevaring, Fortsæt til trin 3,3.
      Bemærk: æg, ægge masser; GD for udvikling af glochidia; IMG, umoden glochidia; FDG, fuldt udviklet glochidia.

Figure 4
Figur 4: repræsentationer for forskellige stadier af glochidia udvikling i de pungdyr gæller. (A) ægge masser (æg) har en membran, der gør æggene klumper sammen. Inden for hver ægge membran er der en uigennemsigtig sfærisk masse af differentierende celler. Den uigennemsigtige sfæriske masse kan opdeles i flere sfæriske masser under tidlig celledeling, men skal stadig registreres som æg, indtil der observeres en særskilt toskallede form. B) umoden glochidia (IMG) har en særskilt toskallede formet masse, der er indeholdt i ægmembranen. C) udvikling af glochidia (DG) har en distinkt toskallede form, ingen ægge membran og uorganiseret væv indeni, ofte fuzzy i udseende. Udviklingen af glochidia (DG) er ikke reaktiv, når den udsættes for NaCl og klassificeres som» DG (T) «, når der registreres data. D) fuldt udviklede glochidia (FDG) har den distinkte toskallede form og det indlysende adductor muskelvæv, som giver glochidia mulighed for at lukke. Fuldt udviklet glochidia (FDG) er ofte observeret som to åbne ventiler efter konservering. To åbne ventiler vil normalt blive lukket, eller snap åbne og lukkede, når de udsættes for NaCl og er klassificeret som ' FDG (T) '. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

  1. Foretage en natriumklorid (NaCl) test for yderligere at evaluere levedygtigheden af alle fuldt udviklede glochidia ved at tilføje en krystal af NaCl til en delmængde dråbe af Gill prøve35. Holdbar glochidia vil reagere på NaCl ved at lukke deres ventiler fra en åben position. At indberette alle salt testede glochidia med ' (T) ' ved slutningen af betegnelsen, når der registreres data.
    Bemærk: fuldt udviklet glochidia kan også observeres aktivt snapping åben og lukket uden udsættelse for NaCl.

4. rapport til database

  1. Få adgang til fmga web (http://arcg.is/089uee), som blev udviklet ved hjælp af online softwareprogrammer38,39,40. FMGA-siden indeholder et link til skrivebordets dataindtastningsformular og en programoverførsel til mobilenheder. Mobilappen aktiverer dataindtastning i marken og automatiseret georeferencing41.
    Bemærk: graviditet kalender og anden grafik, der er forbundet med ferskvands muslinge arter livshistorie begivenheder kan også findes på FMGA Dashboard.
    1. Brug mobilappen eller webstedet på skrivebordet til at registrere resultater i dataindtastningsformularen ved at bruge rullemenuer og tekst indtastningsfelter. Kontakt forfatterne til skabelonregnearketfor store, allerede eksisterende datasæt. Indtast optagede data under de relevante kolonneoverskrifter, idet du skal huske på, at hver post eller række i regnearket repræsenterer observationer af en Gill-prøve fra en gravid enkelt person.
    2. Indsend resultaterne, og de vil blive føjet til FMGA-databasen efter at være blevet valideret af en administrator, som kan kontakte kollektoren for at anmode om yderligere oplysninger eller billeder.
      Bemærk: når data er valideret og kompileret i FMGA-databasen, vil alle graviditetskalendere og anden interaktiv grafik, der vises på FMGA-dashboardet, blive opdateret.

Representative Results

Denne protokol blev anvendt under en Capture-Mark-recapture undersøgelse, der overvågede ferskvands muslinge samfund inden for en 750 m2 strækning af Bruce Creek (Walton County, Florida) fra januar 2015 til december 2015. Mark prøvetagning var planlagt til at finde sted hver fjerde uge; på grund af hændelser med høj strømning blev prøveudtagningen imidlertid ikke gennemført i april eller september 2015. Stats-og føderale agenturer, herunder U.S. Geological Survey, U.S. Fish and Wildlife Service, og Florida Fish and Wildlife Conservation Commission bistået i feltundersøgelser og Gill sampling. Hver gravid kvinde stødte på under undersøgelsen blev udsat for in-Field Gill indhold prøveudtagning ved hjælp af den ovenfor beskrevne protokol, Tagged (Se tabel over materialer), og placeres tilbage i floden substrat. Gill prøverne blev opbevaret i 95% EtOH og transporteret til den amerikanske geologiske undersøgelse vådområde og akvatiske Forskningscenters laboratorium til evaluering af Gill indhold.

Ved at tagge hunnerne og genvinde dem med månedlige intervaller i løbet af året vurderede vi både dødbringende og ikke-dødelige virkninger af Gill sampling-protokollen på i alt 90 individer. Følgende syv arter blev generobret i løbet af dette studie: Elliptio pullata (n = 5), fusconaia burkei (n = 1), hamiota Australis (n = 19), obovaria Choctawensis (n = 1), strophitus williamsi (n = 1), Villosa lienosa (n = 60) og villosa vibex (n = 3). Vores prøveudtagning inkluderede individer, der spænder fra 24 mm til 80 mm i Total længde og to arter (F. burkei og H. Australis) beskyttet af U.S. udryddelsestruede arter Act. Alle data, der udnyttes i denne undersøgelse, er offentligt tilgængelige vi har givet adgang til vores datasæt på ScienceBase (https://doi.org/10.5066/P90VU8EN)42.

Overlevelvorship blev vurderet af, hvor mange individer der blev generobret i live efter Gill Sample Collection. Vi observerede høj overlevelse (97%) under studiet med en vis dødelighed, eventuelt bidraget til prædation, indikeret af observationer på stedet. Resultaterne viste, at ca. 51% af personerne (46 af 90) blev gravid mellem på hinanden følgende prøvetagnings hændelser. Yderligere 10% af individer (9 af 90) blev fundet gravid, generobret ikke gravid, og fandt gravid igen. Omkring 39% af individer (35 af 90) i denne undersøgelse blev fundet gravid, en Gill prøve blev taget, men når generobret igen i løbet af året, de blev aldrig fundet gravid en anden gang. Resultaterne viser, at den her beskrevne protokol hverken er dødelig eller subdødelig og ikke i væsentlig grad forstyrrer den nuværende brokodnings periode, efter at Gill blev udtaget.

Selv om stikprøvestørrelser i denne undersøgelse er ulige på tværs af arter, fremhæver resultaterne af denne undersøgelse de gavnlige og praktiske anvendelser af denne protokol. Graviditet kalenderen for V. lienosa illustrerer gravid hunnerne rugende FDG blev fundet i næsten hver måned af året undtagen august, hvor kun hunnerne rugende æg blev fundet (figur 5a). Kvindelige H. Australis blev fundet ikke gravid (ng) i juli, august, og december. En større del af hunnerne var i januar og februar til at brodere FDG, men blev også fundet i oktober og november (figur 5b). Ingen individer af E. pullata blev fundet rugende FDG selvom hunnerne var opfosterende æg fra maj til juni, og en gravid kvindelig indspillet (GFR) i juni (figur 5c). Den eneste gravid F. burkei kvinde blev fundet GFR i juni og generobret ng i juli. Den samme O. choctawensis person blev indsamlet FDG i februar og generobret ng i juli. Kun én S. williamsi blev fundet og blev generobret tre gange. Denne kvinde blev fundet FDG i marts, NG i maj, GFR i juni, og æg i august (figur 5c). Gravid kvinder af V. vibex rugende FDG blev fundet mellem februar og juni (figur 5c).

Figure 5
Figur 5: resultater af undersøgelsen i Bruce Creek, fl vises i en graviditet kalenderformat. (A) graviditet kalender for villosa lienosa fanger/generhververne . (B) graviditet kalender for hamiota Australis fanger/genererer. C) graviditetskalendere for alle arter med mindre end 10 individer, som udtages prøver af. Y-aksen indeholder forkortelser for månederne januar (ja), februar (F), marts (hr.), maj (My), juni (JN), juli (JL) august (A), oktober (O), november (N) og december (D). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Discussion

Betydning

Bevarelsen af ubeskyttede arter afhænger af en vellykket rekruttering inden for de eksisterende populationer. I nogle tilfælde kan kunstig formering være nødvendig for at forøge rekrutteringen af disse udsatte populationer. Dette kræver, at forskerne informeres om tidspunktet for aktiv reproduktion for hver art og eventuelt anvender forskellige metoder eller ledelsespraksis for at afbøde indvirkningen på rekrutteringen. Som en mest gruppe af organismer, er det altafgørende at etablere en standardiseret og ikke-dødelig tilgang til at studere reproduktive vaner, og at tilvejebringe en platform, hvor at indsamle og visualisere data til at informere det videnskabelige samfund med den mest up-to-date tilgængelige oplysninger. Denne undersøgelse indeholder en trin-for-trin-protokol for at sikre, at der træffes forholdsregler, og at Gill-indholdet kan udtages på passende vis og evalueres fra kvindelige muslinger. Denne protokol blev testet for dødelige og ikke-dødelige virkninger, så forskere og ledere til ansvarligt at implementere denne metode. Vi har også udviklet en række database styringsværktøjer og-programmer, der letter indsamlingen af graviditetsoplysninger på et offentligt tilgængeligt, brugervenligt Dashboard. Undersøgelser af epidemiologi, glochidia morfologi, livshistorie, fylogenetik, formering, og omplaceringer kan alle gavne og udnytte denne repository af tidsmæssige graviditet information for alle arter af ferskvands muslinger.

Denne undersøgelse alene støttede tidligere undersøgelser ' fund af nogle arter reproduktive vaner, men også afsløret nye oplysninger om andre. Selv om v. vibex blev indsamlet i færre tal end v. lienosa, ligheder kan findes mellem de to baseret på graviditet data. Begge arter af villosa synes at Brood fuldt udviklet glochidia i en stor del af året, som karakteriserer dem som en overvintrer brooder. Dette er i overensstemmelse med tidligere undersøgelser af andre villosa arter43,44,45. Resultaterne af denne undersøgelse tyder på H. Australis kan findes gravid fra oktober og overvintrer til juni, undtagen ingen fanger blev fundet gravid i december. En tidligere offentliggjort undersøgelse identificerede kongener H. altilis med en graviditet periode på fire måneder, marts til juni46,47. Denne konstatering illustrerer en længere graviditets periode end tidligere antaget og generelt grupper H. Australis som en overvintrer brooder. Som føderalt beskyttede arter kan varierende yngletid for h. altilis og h. Australis påvirke ledelsens beslutninger for bedre at beskytte befolkningerne under reproduktivt aktive tider. Elliptio pullata blev kun fundet gravid med æg i maj og juni, hvilket svarer til deres karakterisering som en tachytictic art med en meget kort fordærvnings periode24,48,49, 50. Som data er udarbejdet på Elliptio arter ved hjælp af denne protokol, kan detaljerede oplysninger gøre felt indsats mere effektiv, når visse glochidial udviklingsstadier er målrettet, da glochidia kun findes et par måneder ud af året. Slutninger fra de andre arter med lavere stikprøvestørrelser er begrænsede, men da data indsamles i databasen, vil højere stikprøvestørrelser give indblik i de reproduktive vaner for yderligere muslinge arter.

Proceduremæssige bemærkninger

Ferskvands muslinger og deres glochidia er kendt for at være modtagelige for menneskeskabte stressorer10,35. Ved graviditetsinspektion kan Mussel ventilerne ikke være nemme at åbne, og uforsigtigt at tvinge ventilerne åbne kan forårsage utilsigtet skade og resultere i stress eller dødelighed. Nogle skrøbelige-afskallede arter (f. eks arter af Anodonta, leptodea, utterbackia, etc.) og mindre store individer kan have meget skrøbelige skaller og svage adductor muskler, der kan bryde og rive let. Gill-prøvetagning kan betragtes som en stressor, hvis håndteringen ikke udføres ansvarligt og med forsigtighed. En tidligere undersøgelse viste, at håndtering og luft eksponering af muslinger under reproductivt aktive tider kan forårsage forskellige fysiologiske belastninger, herunder for tidlig frigivelse af Gill indhold34. Men en undersøgelse, der udnytter en lignende metode som beskrevet her, fandt håndtering gravid kvindelige muslinger under Gill sampling ikke afbryde den nuværende yngel eller forårsage for tidlig frigivelse i både kort-og lang sigt yngleart16. Desuden skal der anvendes en steril sprøjte i løbet af denne protokol for at forhindre utilsigtet infektion eller krydskontaminering ved punktering af flere personer. Desuden er glochidia skrøbelige og yngel kan modnes og stressede, men ikke udvist. Ældre glochidia i dårligt helbred kan resultere i færre individer reagerer på salt tests35. Ved sondringen mellem GD (T) og FDG (T) er det vigtigt at foretage en salt test med en stor stikprøvestørrelse, at notere sig observationer for nøje at identificere sondringer mellem GD og FDG glochidia ved hjælp af beskrivelserne i denne undersøgelse. Når der tages ordentlig pleje, den minimale stress induceret af denne procedure kan gøre det muligt for kvindelige muslinger til at fortsætte rugende glochidia naturligt og reducere virkningerne på rekruttering i befolkningen.

Yderligere data kan optages for at supplere databasen og give en bred sammenhæng for de reproduktive vaner af ferskvands muslinger. Nogle arter (f. eks arter af Fusconaia), er blevet observeret for at have gyller af forskellige farver baseret på udviklingen fase af glochidia51. Under en indledende graviditet kontrol af kvinden, en beskrivelse af Gill farve kan indgå i de rapporterede data for at muliggøre fremtidig undersøgelse. Også på dette punkt i protokollen, kan forskerne konstatere, om den brokodning kvinde blev fundet rugende glochidia i de to ydre gæller (ectobranchus), to indre gæller (endobranchus), eller alle fire gæller (tetragenous)17. Disse oplysninger kan tilføjes til FMGA og hjælpe med at udfylde datahuller vedrørende fokodning for hver art, der undersøges. Miljøforhold, specifikt vandtemperatur, kan opsamles og registreres i marken for en mere omfattende observation af graviditet status og timing af arter i forskellige bredde-intervaller. Forskning viser, at miljøparametre, såsom temperatur, fotoperiode, strømningshastighed og fødevaretilgængelighed, kan fremkalde reproduktive hændelser i ferskvands muslinger52,53,54,55 ,56. Der kan tilføjes yderligere felter til databasen, da de indsendes for at fremme fremtidig forskning i abiotiske faktorer, der påvirker graviditeten. En Capture-Mark-recapture modifikation modelleret efter vores undersøgelse kan også føjes til denne protokol, som vil give forskerne mulighed for at overvåge en bestemt Mussel reproduktive vaner og afsløre oplysninger om flere kuld om året.

Nøjagtigheden af oplysningerne i FMGA afhænger af kilden. F. eks. er fejlidentifikation af ferskvands muslinger almindelig på grund af mange arter med lignende ydre karakteristika, som gør det vanskeligt at skelne mellem arterne57. En Gill-prøve fra en forkert identificeret person kan skabe forvirring og urigtige oplysninger om en Arts yngletid. Hvis der udtages en Gill-prøve, skal der tages fotografier af indersiden af begge ventiler (hvis personen ikke er i live), uden for højre ventil, og umbo (hængsel, hvor to ventiler tilsluttes) og indsendes med graviditetsdata via desktop-webstedet eller mobilapplikationen. Vi glæder os også over billeder af Gill indholdet. Inden for Indsendelses formularerne findes en rullemenu, der gør det muligt for opkøberen at angive deres konfidensniveau med hensyn til identifikation af arterne. Før registreringen valideres, vil disse oplysninger blive taget i betragtning ved kontrol af opsamler identifikation i forhold til plausibel distribution osv. På grund af den høje grad af intraspecifik morfologiske variation i arter af Unionidae tilskyndes der til indsendelse af vævsprøver, og det kan være nødvendigt for at lette Molekylær identifikation.

Fremtidige konsekvenser

Som en ikke-dødelig metode, denne protokol kan anvendes til både fælles og mest arter. Graviditetskalenderne for ubeskyttede arter kan hjælpe bevarings ledere, der er involveret i lovgivning om udryddelsestruede arter og genopretningsplanlægning, ved at give oplysninger om tidsperioder, hvor arterne er reproduktivt aktive. De statslige og føderale agenturer, der forvalter udsatte arter kan bedre rådgive tilladelse tildelinger til tidspunkter, hvor arten ikke er sårbar og reproduktion, og endda begrænse høsten af værts fisk i løbet af gange muslinger er rugende fuldt udviklet glochidia. Desuden kan feltundersøgelser målrette arter i ikke-reproduktive perioder for at minimere indvirkningen på rekrutteringsprocesserne. Den offentligt tilgængelige database, FMGA, er et redskab for forskere og ledere til at opnå vigtige reproduktive oplysninger om alle målferskvands muslinge arter. Databasen vil også fremhæve huller i dataene og tilskynde til yderligere forskning i artsspecifikke brokodnings mønstre. Da forståelse af en Arts reproduktive mønster giver mulighed for passende ledelsesbeslutninger, der skal gennemføres, håber vi, at vores protokol og database letter fremtidig ferskvands muslinge forskning, bevaring og nyttiggørelse.

Disclosures

Forfatterne har intet at afsløre.

Acknowledgments

Forfatterne vil gerne takke finansieringskilderne: U.S. Fish and Wildlife Service og U.S. Geological Survey. En særlig tak til Andrew hartzog og Sandra Pursifull for at organisere felt besætninger og dataindsamling, sammen med Lauren Patterson og Chris Anderson for deres værdifulde bidrag til database udvikling. Vi vil også gerne takke alle, der hjalp i marken og laboratoriet, herunder sherry Bostick, Mark Cantrell, Sahale Casebolt, Jordan Holcomb, Howard Jelks, Gary Mahon, John McLeod, Kyle Moon, Cayla Morningstar, Emma Pistole, Matt Rowe, Channing St. Aubin og Jim Williams. Enhver brug af handels-, firma-eller produktnavne er kun til beskrivende formål og indebærer ikke godkendelse fra den amerikanske regering.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL snap cap centrifuge tubes USA Scientific 1615-5510 Snap cap tubes are important in the field so the loose screw cap is not lost.
20 G needle on 10 mL disposable syringe Exelint International 26255 sterile 10 mL disposable syringe with needle Model: 10ml Luer Lock Tip W/20G X 1 1/2"
Dissecting Microscope any any
Marking Pen Fisher Scientific 13-379-4 This is what we used but any marker that can write on small plastic tubes will do. This one is fairly ethanol and water proof.
Molecular grade ethanol any any Needed if preserving gill contents. Non-denatured 95% is needed for genetic work, 70% is needed for SEM imaging work.
Paper any any Needed to record information on samples collected.
Pen/pencil any any If in the field, better to write on waterproof paper with pencil so it doesn't smear. If in the museum/lab, any writing utensil is fine.
Petri dish DWK Life Sciences (Kimble) 23000-9050 This is what we used but any petri dish available is fine. It is nicer to have the taller walls in case too much water is used.
Sodium Chloride any any Needed for NaCl test for reactive glochidia. Preserved samples do not need this.
Speculum any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.
Sterile water any any Added to gill samples to be evaluated for reactivity within 24 hours of collection.
Super glue Gorilla Gorilla super glue gel Used to apply tags and only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Tags Hallprint FPN 8x4 Only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Transfer Pipet Thermo Scientific Samco 225 This is what we use but any transfer pipet or squirt bottle is applicable.
Tweezers any any Needed to move crystals of NaCl for salt test. Preserved samples do not need this.
Waterproof paper RainWriter any Only needed if conducting work in the field. This allows you to record information on each individual gill contents are extracted from.
Wooden pick any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Williams, J. D., Warren, M. L., Cummings, K. S., Harris, J. L., Neves, R. J. Conservation status of freshwater mussels of the United States and Canada. Fisheries. 18 (9), 6-22 (1993).
  2. Lopes-Lima, M., et al. Conservation status of freshwater mussels in Europe: state of the art and future challenges. Biological Reviews. 92 (1), 572-607 (2017).
  3. Zieritz, A., et al. Diversity, biogeography and conservation of freshwater mussels (Bivalvia: Unionida) in East and Southeast Asia. Hydrobiologia. 810 (1), 29-44 (2018).
  4. Haag, W. R., Williams, J. D. Biodiversity on the brink: an assessment of conservation strategies for North American freshwater mussels. Hydrobiologia. 735 (1), 45-60 (2014).
  5. Ferreira-Rodríguez, N., et al. Research priorities for freshwater mussel conservation assessment. Biological Conservation. 231, 77-87 (2019).
  6. Graf, D. L., Cummings, K. S. Review of the systematics and global diversity of freshwater mussel species (Bivalvia: Unionoida). Journal of Molluscan Studies. 73 (4), 291-314 (2007).
  7. Lydeard, C., Cummings, K. Freshwater mollusks of the world: a distribution atlas. , Johns Hopkins University Press. Baltimore, MD. (2019).
  8. Wächtler, K., Dreher-Mansur, M. C., Richter, T. Larval types and early postlarval biology in naiads (Unionoida). Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. Bauer, G., Wächtler, K. , Springer. Berlin, Heidelberg. 93-125 (2001).
  9. Dudgeon, D., et al. Freshwater biodiversity: importance, threats, status and conservation challenges. Biological Reviews. 81 (2), 163-182 (2006).
  10. Downing, J. A., Van Meter, P., Woolnough, D. A. Suspects and evidence: a review of the causes of extirpation and decline in freshwater mussels. Animal biodiversity and Conservation. 33 (2), 151-185 (2010).
  11. Vaughn, C. C. Ecosystem services provided by freshwater mussels. Hydrobiologia. 810 (1), 15-27 (2018).
  12. Aldridge, D. C., Fayle, T. M., Jackson, N. Freshwater mussel abundance predicts biodiversity in UK lowland rivers. Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 17 (6), 554-564 (2007).
  13. Barnhart, M. C., Haag, W. R., Roston, W. N. Adaptations to host infection and larval parasitism in Unionoida. Journal of the North American Benthological Society. 27 (2), 370-394 (2008).
  14. Saha, S., Layzer, J. B. Evaluation of a nonlethal technique for determining sex of freshwater mussels. Journal of the North American Benthological Society. 27 (1), 84-89 (2008).
  15. Tsakiris, E. T., Randklev, C. R., Conway, K. W. Effectiveness of a nonlethal method to quantify gamete production in freshwater mussels. Freshwater Science. 35 (3), 958-973 (2016).
  16. Gascho, L., Andrew, M., Stoeckel, J. A. Multi-stage disruption of freshwater mussel reproduction by high suspended solids in short-and long-term brooders. Freshwater Biology. 61 (2), 229-238 (2016).
  17. Bauer, G., Wächtler, K. Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. , Springer Science and Business Media. Berlin, Germany. (2012).
  18. Ortmann, A. E. Notes upon the families and genera of the najades. Annals of the Carnegie Museum. 8 (2), 222 (1912).
  19. Heard, W. H. Sexuality and other aspects of reproduction in Anodonta (Pelecypoda: Unionidae). Malacologia. 15, 81-103 (1975).
  20. Heard, W. H. Brooding patterns in freshwater mussels. Malacological Review. 7, Supplement 7: Bivalvia 105-121 (1998).
  21. Watters, G. T., O'Dee, S. H. Glochidial release as a function of water temperature: beyond bradyticty and tachyticty. Proceedings of the Conservation, Captive Care, and Propagation of Freshwater Mussels Symposium. , 135-140 (1998).
  22. Parker, R. S., Hackney, C. T., Vidrine, M. F. Ecology and Reproductive Strategy of a South Louisiana Freshwater Mussel, Glebula Rotundata (Lamarck) (Unionidae: Lampsilini). Freshwater Invertebrate Biology. 3 (2), 53-58 (1984).
  23. Jones, H. A., Simpson, R. D., Humphrey, C. L. The reproductive cycles and glochidia of fresh-water mussels (Bivalvia: Hyriidae) of the Macleay River, Northern New South Wales, Australia. Malacologia. 27 (1), 185-202 (1986).
  24. Price, J. E., Eads, C. B. Brooding patterns in three freshwater mussels of the genus Elliptio in the Broad River in South Carolina. American Malacological Bulletin. 29 (1), 121-126 (2011).
  25. Haag, W. R., Staton, J. L. Variation in fecundity and other reproductive traits in freshwater mussels. Freshwater Biology. 48 (12), 2118-2130 (2003).
  26. Soler, J., Wantzen, K. M., Jugé, P., Araujo, R. Brooding and glochidia release in Margaritifera auricularia (Spengler, 1793) (Unionoida: Margaritiferidae). Journal of Molluscan Studies. 84 (2), 182-189 (2018).
  27. Smith, D. G. Notes on the biology of Margaritifera margaritifera margaritifera (Lin.) in Central Massachusetts. American Midland Naturalist. , 252-256 (1976).
  28. O'Brien, C., Nez, D., Wolf, D., Box, J. B. Reproductive biology of Anodonta californiensis, Gonidea angulata, and Margaritifera falcata (Bivalvia: Unionoida) in the Middle Fork John Day River, Oregon. Northwest Science. 87 (1), 59-73 (2013).
  29. Haag, W. R., Warren, M. L. Host fishes and reproductive biology of 6 freshwater mussel species from the Mobile Basin, USA. Journal of the North American Benthological Society. 16 (3), 576-585 (1997).
  30. O'Dee, S. H., Watters, G. T. New or confirmed host identifications for ten freshwater mussels. Proceedings of the Conservation, Captive Care, and Propagation of Freshwater Mussels Symposium. , 77-82 (1998).
  31. Johnson, N. A., McLeod, J. M., Holcomb, J., Rowe, M., Williams, J. D. Early life history and spatiotemporal changes in distribution of the rediscovered Suwannee moccasinshell Medionidus walkeri (Bivalvia: Unionidae). Endangered Species Research. 31, 163-175 (2016).
  32. McLeod, J. M., Jelks, H. L., Pursifull, S., Johnson, N. A. Characterizing the early life history of an imperiled freshwater mussel (Ptychobranchus jonesi) with host-fish determination and fecundity estimation. Freshwater Science. 36 (2), 338-350 (2017).
  33. Carlson, S., Lawrence, A., Blalock-Herod, H., McCafferty, K., Abbott, S. Freshwater mussel survey protocol for the Southeastern Atlantic Slope and Northeastern Gulf drainages in Florida and Georgia. US Fish and Wildlife Service, Ecological Services and Fisheries Resources Offices and Georgia Department of Transportation, Office of Environment and Location. , Atlanta, Georgia. (2008).
  34. Waller, D. L., Rach, J. J., Cope, G. W., Miller, G. A. Effects of handling and aerial exposure on the survival of unionid mussels. Journal of Freshwater Ecology. 10 (3), 199-207 (1995).
  35. Fritts, A. K., et al. Assessment of toxicity test endpoints for freshwater mussel larvae (glochidia). Environmental Toxicology and Chemistry. 33 (1), 199-207 (2014).
  36. Christian, A. D., Monroe, E. M., Asher, A. M., Loutsch, J. M., Berg, D. J. Methods of DNA extraction and PCR amplification for individual freshwater mussel (Bivalvia: Unionidae) glochidia, with the first report of multiple paternity in these organisms. Molecular Ecology Notes. 7 (4), 570-573 (2007).
  37. Henley, W. F., Grobler, P. J., Neves, R. J. Non-invasive method to obtain DNA from freshwater mussels (Bivalvia: Unionidae). Journal of Shellfish Research. 25 (3), 975-978 (2006).
  38. ESRI. ArcGIS Desktop 10.6.1.9270. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2017).
  39. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Survey123 Field Application for ArcGIS 3.3.64. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  40. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Survey123 Connect for ArcGIS 3.3.51. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  41. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Operations Dashboard for ArcGIS. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  42. Johnson, N. A., Beaver, C. E. Empirical data supporting a non-lethal method for characterizing the reproductive status and larval development of freshwater mussels (Bivalvia: Unionida). U.S. Geological Survey data release. , (2019).
  43. Ortmann, A. E. A monograph of the naides of Pennsylvania. Memoirs of the Carnegie Museum. 8, (1919).
  44. Posey, W. R. Life History and Population Biology of the State Special Concern Ouachita Creekshell, Villosa arkansasensis (I. Lea 1862). Arkansas Game and Fish Commission. , (2007).
  45. Asher, A. M., Christian, A. D. Population characteristics of the mussel Villosa iris (Lea) (rainbow shell) in the Spring River watershed, Arkansas. Southeastern Naturalist. 11 (2), 219-239 (2012).
  46. Haag, W. R., Warren, M. L., Shillingsford, M. Host fishes and host-attracting behavior of Lampsilis altilis and Villosa vibex (Bivalvia: Unionidae). The American Midland Naturalist. 141 (1), 149-158 (1999).
  47. Roe, K. J., Hartfield, P. D. Ham,iota a new genus of freshwater mussel (Bivalvia: Unionidae) from the Gulf of Mexico drainages of the southeastern United States. Nautilus-Sanibel. 119 (1), 1-10 (2005).
  48. Williams, J. D., Butler, R. S., Warren, G. L., Johnson, N. A. Freshwater mussels of Florida. , University of Alabama Press. Tuscaloosa, AL. (2014).
  49. Jirka, K. J., Neves, R. J. Reproductive biology of four species of freshwater mussels (Molluscs: Unionidae) in the New River, Virginia and West Virginia. Journal of Freshwater Ecology. 7 (1), 35-44 (1992).
  50. Watters, G. T., O'Dee, S. H., Chordas, S. Patterns of vertical migration in freshwater mussels (Bivalvia: Unionoida). Journal of Freshwater Ecology. 16 (4), 541-549 (2001).
  51. Richardson, F., Martínez, P. Anodonta propagation studies: determination of mussel sexual maturity and Glochidia release agents. Proceedings of the Gulf and Caribbean Fisheries Institute. 48, 535-538 (2004).
  52. Heinricher, J. R., Layzer, J. B. Reproduction by individuals of a nonreproducing population of Megalonaias nervosa (Mollusca: Unionidae) following translocation. The American Midland Naturalist. 141 (1), 140-148 (1999).
  53. Watters, G. T., O'Dee, S. H. Glochidia of the freshwater mussel Lampsilis overwintering on fish hosts. Journal of Molluscan Studies. 65 (4), 453-459 (1999).
  54. Hastie, L. C., Young, M. R. Timing of spawning and glochidial release in Scottish freshwater pearl mussel (Margaritifera margaritifera) populations. Freshwater Biology. 48 (12), 2107-2117 (2003).
  55. Galbraith, H. S., Vaughn, C. C. Temperature and food interact to influence gamete development in freshwater mussels. Hydrobiologia. 636 (1), 35-47 (2009).
  56. Kobayashi, O., Kondo, T. Reproductive ecology of the freshwater pearl mussel Margaritifera togakushiensis (Bivalvia: Margaritiferidae) in Japan. Venus (Japan). 67 (3-4), 189-197 (2009).
  57. Shea, C. P., Peterson, J. T., Wisniewski, J. M., Johnson, N. A. Misidentification of freshwater mussel species (Bivalvia: Unionidae): contributing factors, management implications, and potential solutions. Journal of the North American Benthological Society. 30 (2), 446-458 (2011).

Tags

Biologi utætte arter udryddelsestruede arter bevaring livshistorie glochidia gravid reproduktion
Standardisering af en ikke-dødelig metode til karakterisering af den reproduktive status og larval udvikling af ferskvands muslinger (Bivalvia: Unionida)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, … More

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, N. A. Standardizing a Non-Lethal Method for Characterizing the Reproductive Status and Larval Development of Freshwater Mussels (Bivalvia: Unionida). J. Vis. Exp. (152), e60244, doi:10.3791/60244 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter