Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

Standardisering av en icke-dödlig metod för att karakterisera reproduktions status och larv utveckling av sötvatten musslor (Bivalvia: Unionida)

Published: October 4, 2019 doi: 10.3791/60244
Automatic Translation
1, 2, 1
1Wetland and Aquatic Research Center, United States Geological Survey, 2Garcon Point Aquatic Research Center, Florida Fish and Wildlife Conservation Commission

Summary

Skyddet av sötvatten musslan är beroende av övervakning av reproduktions mönster och art processer. Denna studie standardiserar ett icke-dödligt protokoll för provtagning av Gills innehåll, karaktäriserande larv utveckling och tillhandahållande av en digital databas för insamlade data. Detta protokoll-databas paket kommer att vara ett viktigt verktyg för mus SEL forskare i återhämtningen av imperiled arter.

Abstract

Att aktivt övervaka de utrotningshotade arternas timing, utveckling och reproduktions mönster är avgörande när det gäller att hantera befolknings återhämtning. Sötvatten musslor är bland de mest imperiled organismer i världen, men information om tidig larv (glochidial) utveckling och rusnings perioder är fortfarande saknas för många arter. Tidigare studier har fokuserat på den komplexa livshistoria skede när kvinnliga musslor är redo att snylta värd fisk, men få studier har fokuserat på grubbler period och tidpunkten för larv utveckling. Det protokoll som beskrivs här gör det möjligt för forskare att icke-lethally utvärdera tillståndet för graviditet för kvinnliga musslor. Resultaten av denna studie visar att denna metod inte påverkar en kvinnlig mussla förmåga att stanna dräktig eller bli gravid igen efter provtagning har utförts. Fördelen med denna metod kan tillåta dess användning på federalt hotade eller utrotningshotade arter eller andra populationer av hög bevarande oro. Detta protokoll kan anpassas för användning på både konserverade eller levande individer och testades på en mängd olika musselarter. Den databas som tillhandahålls är en databas för en mängd information om tidpunkten för reproduktiva vanor och kommer att underlätta framtida sötvatten mus SEL forskning, bevarande, och återhämtningsinsatser.

Introduction

Populationernas persistens i sötvattensystem beror på framgången för reproduktion och rekrytering. För parasitära organismer, identifiera krångligheter i livscykeln (t. ex. stadier av larv utveckling och värd attraktion strategier) kan ge insikt i en organism ' s reproduktiva vanor och kritiska processer som påverkar rekrytering. Sådan information blir viktig när arter är imperiled, och lyckad rekrytering behövs för att upprätthålla kvarvarande populationer, eller om återhämtning kräver användning av fångenskap förökning för återupprättandet utrotade populationer.

Sötvatten musslor (Bivalvia: unionida) anses vara en av de mest imperiled grupper av organismer i världen och en sammanställning av artspecifika reproduktiva vanor kan stöd i forskningsinsatser1,2,3 ,4,5. Med över 800 för närvarande erkända arter spridda över hela världen, sötvatten musslor har hotspots av mångfald i Nord-och Sydamerika, och sydöstra Asien men grundläggande livshistoria information är okänd för många arter2, 5,6,7. Familjer inom denna ordning kännetecknas av att ha parasitiska larvstadier som komplett metamorfos till fritt levande juvenila under fastsättning till en värd7,8. Denna unika livshistoria skede bidrar till den biologiska mångfalden i sötvattensystem, som för närvarande i kris9. Höga nivåer av imperilment kan hänföras till många antropogena hot, inklusive förorening av vattenvägar, förändring av livsmiljöer och förstörelse, minskning av överflöd och mångfald av värd fiskar, och införande av invasiva arter1, 10. Som bentiska filter matare, musslor håla in i underlaget och är mottagliga för föroreningar och föroreningar som rinner ut i vattendelare11. Återvinning av musselarter är relevant eftersom de erbjuder ett brett utbud av ekosystemtjänster, inklusive kolupptagning, en livsmedelskälla, och vattenrening genom filtrering utfodring11. Dessutom har man funnit musslor för att indikera ekosystemens hälsa, främja biologisk mångfald och i sin tur öka återhämtningsförmågan hos ett ekosystem12.

Många sötvatten mus SEL studier har fokuserat på att utreda tidiga livshistoria krav för att bättre informera artstatus bedömningar och förvaltningsstrategier. De sötvatten mus SEL familjer som är relevanta för denna studie (t. ex. Hyriidae, Margaritiferidae, Unionidae) har en unik livshistoria strategi där honor Brood larver (glochidia) i sina pungdjur gälar8. Genom en mängd olika strategier, den kvinnliga musslan utvisar mogna glochidia från pungdjur gälar att parasitisera en ryggradsdjur värd med glochidia13. Forskning om glochidial utveckling inom gälarna ändrades från en teknik som använder Hypodermic sprutor för att prova gonadala vätska från levande musslor och utvärdera könscell produktion14,15,16. Som forskare validerat denna icke-dödliga metod för gonad provtagning, var det anpassas för pungprov Gill provtagning för att utvärdera häcknings utveckling15,16. Brood utveckling kan användas för att dechiffrera fylogenetiska relationer som vissa musselarter kan grubbla glochidia i endast de yttre två gälar (ektobranchus), endast de inre två gälar (endobranchus), eller i alla fyra gälar (tetrabranchus) men denna egenskap är inte känd för varje art17. Brooding mönster har tidigare använts för att klassificera mussla arter av om kvinnliga musslor grubbla glochidia över vintern (bradytictic) eller under en kort period i sommar (tachytictic)18. Över övervintring av mussla kullar stöddes när den reproduktiva cykeln av anodonta studerades19. Men grundläggande reproduktionsbiologi studerades mer grundligt under årens lopp och fann denna dikotomi var en grov generalisering och rusnings perioder av vissa arter är mycket mer komplexa än ursprungligen förmodade20,21. Till exempel, arter av släktet hyridella (familj Hyriidae), glebula, och Elliptio (familj unionidae) har observerats med uppemot tre kullar per häckningssäsong22,23, 24. Komplexiteten i artspecifika, och ibland även befolkningsspecifika20, reproduktiva vanor har lett till en brist på kunskap om tidpunkten och varaktigheten av grubling, och antalet kullar en kvinnlig mussla kan producera.

Även om Hypodermiska sprutor har använts för att extrahera Gills innehåll, är rapporteringen av resultaten komplicerad på grund av bristande standardisering för att säkerställa jämförbara resultat i alla studier. Tidigare har fyra utvecklingsstadier av glochidia (dvs. ägg, embryo, omogna, fullt utvecklade) identifierats i unionidae men har inte antagits till standardförfarande16,25,26. Andra studier som observerade medlemmar av margaritiferidae har ersatt klassificeringen av "omogen glochidia" med "utveckla glochidia", vilket leder till potentiell förvirring27,28. Bristen på konsekvens i att karakterisera de olika larv utvecklingsstadierna har lämnat många forskare för att generellt beskriva rusande honor som "dräktig", vilket inte omfattar krångligheter larv utveckling. Livs historiska studier som genomför värd-Fish prövningar har prioriterat behovet av dräktiga honor med fullt utvecklad glochidia, men denna information är spridda över publicerad och opublicerad litteratur29,30. För närvarande saknas uppgifter om reproduktiva vanor hos många musselarter, inklusive tidpunkten för övergången mellan ägg, omogna glochidia, och fullt utvecklad glochidia redo för fastsättning till värdar. För de flesta arter är det oklart hur länge honor grubbla glochidia och hur snabbt befruktade ägg utvecklas fullt ut. Kunskapsluckorna är ofta bredare för arter av bevarande oro, som presenterar behovet av en standardiserad metod för att utvinna Gills innehåll som har testats för icke-dödliga effekter och kan främjas till det vetenskapliga samfundet att komplettera traditionella metoder för insamling av uppgifter, utan att utgöra ett hot mot de skyddade befolkningarna24,31,32.

Denna studie hade tre mål: 1) formalisera en Gill provtagningsteknik och testa den för dödliga och icke-dödliga effekter på kvinnliga musslor in situ, 2) karakterisera olika stadier av glochidial utveckling och beskriva en standardiserad metod för att identifiera och rapportera olika larvstadier, och 3) skapa en offentlig lagringsplats för insamlade data. Fältundersökningar, långsiktiga övervakningsprojekt och museisamlingar representerar alla möjligheter för det protokoll som beskrivs här att implementeras och ytterligare uppgifter som ska samlas in för ett bredare intresse. Den formaliserade protokoll innehåller visuella och tecken beskrivningar för att differentiera varje steg av larv utveckling. Genom att standardisera kategorierna kan de insamlade resultaten jämföras mellan alla förekomster och arter. När uppgifter har samlats in, kan alla lämnas till sötvatten mus SEL graviditet almanacka (FMGA), som är en databas för graviditet information som samlats in med hjälp av detta protokoll. En slutprodukt för att lagra och sammanställa all graviditet information som samlas in kommer att ge ett forskningsverktyg för att underlätta framtida forskning, bevarande, och återhämtning insatser. Införlivandet av denna metod i olika mus SEL projekt och inlämning av uppgifter till FMGA skulle öka bredden på kunskapen om mus SEL arternas graviditet under hela året. Som en mycket imperiled grupp av organismer, detta protokoll och resulterande databas om reproduktiva vanor sötvatten musslor är viktigt att förstå populationsdynamik och underlätta bevarandet av dessa arter.

Protocol

1. dräktig kvinnlig samling

Anmärkning: hänvisa till Fish and Wildlife Service ' s sötvatten mussel Survey Protocol33 för vägledning om hur man på ett adekvat sätt kartlägga en provtagningsplats för hotade eller utrotningshotade arter. Riktiga federala tillstånd måste erhållas innan fältsamling av skyddade arter och tillstånd för alla arter närvarande.

  1. Samla levande musslor från fältet med taktila-visuella metoder (steg 1,2) eller utnyttja bevarade exemplar från ett museum (steg 1,3).
    Obs: det är viktigt att hålla levande musslor svala och blöta efter samlingen för att förhindra uttorkning och minska stressen, och minimal hantering av dräktiga musslor är viktigt för att undvika att honor för tidigt frigör Gill innehåll34.
  2. Utvärdera kvinnlig graviditet antingen genom visuell inspektion under uppsamling (t. ex. förekomst av mantel lockbete, conglutinates, etc.) eller genom visuell inspektion efter insamling (t. ex. försiktigt nyfikna öppna ventiler tillräckligt för att titta inuti och se om gälar är uppblåsta, se Figur 1).
    Obs: arter varierar i hur glochidia är grubbliven inom pungdjur gälar som ibland bara de två yttre gälarna (ektobranchus), endast de två inre gälarna (endobranchus), eller alla fyra gälar (tetragenous) är pungdjur17. Protokollet kan pausas här, och dräktiga honor kan transporteras tillbaka till labbet för Gill provtagning.

Figure 1
Figur 1: att försiktigt nyfikna individer öppna. För att kontrollera graviditet av en levande mussla, försiktigt bända öppna ventilerna med tummen (a) eller försiktigt använda ett spekulum eller omvänd tång för att bända öppna ventilerna (B). Granska steg 2,3 i protokollet för försiktighetsåtgärder som är associerade med den här metoden. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

  1. Utför en visuell inspektion på konserverade exemplar genom att öppna ventilerna och inspektera gälarna för att avgöra om individen är en dräktig hona (figur 2).

Figure 2
Figur 2: hur man identifierar en dräktig hona. Kvinnlig mussla pungdjur verkar uppblåst när honan är dräktig och ruvling. Bilder A och C visar gälar från ett lateralt perspektiv medan bilder B och D ger en ventrala syn på gälarna. Röda lådor beskriva gälarna för att belysa skillnaderna mellan en dräktig (a/B) och inte dräktig (C/D) kvinnliga Lampsilis Auktor mussla. De totala längderna hos individerna är 79 mm (A/B) och 88 mm (C/D). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

2. provtagning av Gills innehåll

Anmärkning: detta protokoll kan anpassas om provtagning sker på levande musslor i fält och laboratorium, eller på konserverade exemplar.

  1. Förbered en 1,5 mL plastmikrocentrifug uppsamlings rör med cirka 1 mL av antingen sterilt vatten om Gills innehåll kommer att utvärderas inom 24 h extraktion35 eller etanol (EtOH) om prov utvärderingen inte kan förekomma inom 24 h av insamling eller om Gill tillfredsställer är från ett museum prov bevarat i EtOH. Om glochidia är avsedda för Scanningelektronmikroskop (SEM) avbildning, Använd 70% EtOH, och om glochidia kommer att användas för genetisk testning, Använd icke-denaturerad 95% EtOH36.
  2. Ta bort pappers emballaget för en steril 20 G avfasnings nål på en 10 mL spruta. Skruva loss locket för att exponera nålen och förbereda en 1,5 mL plaströr för Gill Content Collection. Tryck handtaget på sprutan hela vägen ner så den svarta proppen är på 0 mL/CC linje.
    Obs: en steril spruta ska användas varje gång Gills innehåll samplas. En begagnad spruta kan steriliseras i fält genom att doppa spetsen i en 10% blekmedel lösning, sedan skölja sprutan genom att fylla den med 1 mL sterilt vatten och deprimerande kolven tillbaka till 0 mL/CC, och slutligen torkning sprutan med en ren trasa.
  3. Plocka upp den dräktiga kvinnliga och försiktigt bända öppna två ventiler med hjälp av tips av tummen.
    FÖRSIKTIGHET: var noga med att inte skada djuret. Öppna ventilerna för breda eller för snabba kan överutvidga adductor muskler och orsaka dödlighet. Tunna skalade prover (t. ex. arter av anodonta, leptodea, utterbackia, etc.) och unga individer är särskilt sårbara i detta steg. Med kraftfull hantering av ömtåliga skalade arter kan skalen spricka och orsaka dödlighet. I vissa fall, klämma tunna skalade djur från främre och bakre skal marginaler, medan man tittar på den ventrala ytan, kommer att orsaka skalet till Flex och gapa något, vilket gör att man kan observera gälarna eller bända öppna skalen och undvika att skada den bräckliga skal marginal.
    Obs: verktyg kan användas för att hjälpa till med detta steg men kan också orsaka dödlighet om det inte används med försiktighet och bör undvikas när det är möjligt. Till exempel kan ett spekulum eller modifierad uppsättning av omvänd tänger användas för att hjälpa bända individen öppna och en kil kan användas för att stötta ventilerna öppna. Dessa instrument kanske inte är nödvändiga om en annan person är tillgänglig för att bistå (dvs. en person håller djuret öppet medan en annan manövreras sprutan för extraktion). Skada eller separera mantel vävnad från Periostracumen kan orsaka tillväxt missbildningar och dödlighet37; Därför är det viktigt att undvika att bryta kopplingen mellan mantel vävnaden och utsidan marginalen av skalet.
  4. Använd sprutspetsen på sprutan för att försiktigt tränga in i ett enda vatten rör av den uppblåsta punghinnan Gill. Därefter försiktigt skopa Gill innehållet ut genom att använda avfasade spetsen av nålen.
    Anmärkning: Gill innehåll har oftast en mjölkaktig vit konsistens, som bör vara synlig på avfasade spetsen av nålen.
    1. Deponera innehållet i sprutan direkt i en petriskål om ett Mikroskop är lätt tillgänglig. Annars, Förvara innehållet i en 1,5 mL plast microcentrifug röret med avsedd vätska (se steg 2,1) för senare utvärdering.
      Obs: minimera störningar och hantering av glochidia prover under transporten för att undvika skador och minskad lönsamhet32,35.
  5. Registrera information om släktet-artidentifiering, graviditet status, längd av hona (mm), samlare och kontaktinformation, stat, län, dränering, särskilda insamlingsplats, latitud och longitud, en unik identifierare för Gill prov, en unik identifierare för undersökningsiten och datum för insamlingen om Gills innehåll extraherades (figur 3). Registrera en unik identifierare på varje insamlings fartyg för att säkerställa korrekta dataposter under transporten.
    1. Fotografera musslans utvändiga högra ventil för identitets validering och ta med röret märkt med den unika identifieraren läsbar i bilden. Du kan också samla in andra abiotiska och biotiska parametrar för att komplettera den information om miljön och samhället som musslan hittades i (se figur 3 för förslag).

Figure 3
Figur 3: exempel på ett fält graviditet datablad. Korrekt datarapportering är nödvändig om ett Gill-prov tas för att producera tillförlitlig information. Detta är ett exempel på ett fält data blad med de minsta fält och extra abiotiska parametrar som ska samlas in tillsammans med varje Gill-prov. Mer utförlig information finns i steg 4,1 i protokollet. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

3. laboratorie utvärdering av Gills innehåll

  1. Om Gills innehåll är i en 1,5 mL tub, överför dem till en petriskål och fyll botten av skålen med vatten. Snurra försiktigt petriskål i en cirkelrörelse för att samla in innehåll i mitten av skålen för en mer koncentrerad bild av provet.
    Anmärkning: 1,5 mL röret kan behöva spolas ut med hjälp av en spruta flaska eller överföra Pipettera fylld med vatten om Gill innehållet fastnar på rörväggar.
  2. Placera petriskål under ett dissekera Mikroskop för att utvärdera provet. Om möjligt, ta ett fotografi av Gill provet under mikroskopet och Märk det med den unika identitetsbeteckningen för provet.
    1. Registrera resultaten av vilka utvecklingsstadier som finns i varje givarprov. Använd figur 4 som en guide för att karakterisera varje utvecklingsstadium. I vissa fall kan honor vara grubbiska larver på flera utvecklingsstadier; rapportera därför varje utvecklingsstadium som observerats inom ett givet prov (t. ex. "EGG/DG/IMG/FDG"). När konserverade glochidia har utvärderats, Fortsätt till avsnitt 4. Om fullt utvecklad glochidia identifieras och EtOH inte användes för bevarande, gå vidare till steg 3,3.
      Anmärkning: ägg, ägg massor; GD, utveckling av glochidia; IMG, omogen glochidia; FDG, fullt utvecklad glochidia.

Figure 4
Figur 4: representationer för olika stadier av glochidia utveckling i pungkulor gälar. (A) ägg MASSORNA (ägget) har ett membran som gör ägg klumpar ihop. Inom varje ägg membran finns en ogenomskinlig sfärisk massa av differentierande celler. Den ogenomskinliga sfäriska massan kan delas upp i flera sfäriska massor under den tidiga celldelningen, men bör fortfarande registreras som ägg tills en distinkt tvåskaliga form observeras. (B) omogna glochidia (IMG) har en distinkt musslor-formad massa som finns i ägg membranet. C) utveckling av glochidia (DG) har en distinkt tvåskaliga form, inget ägg membran, och oorganiserad vävnad inuti, ofta luddiga utseende. Att utveckla glochidia (DG) är inte reaktiva när de exponeras för NaCl och klassificeras som "DG (T)" när data registreras. (D) fullt utvecklad glochidia (FDG) har den distinkta musslor form och uppenbara adductor muskelvävnad låta glochidia att stänga. Fullt utvecklad glochidia (FDG) observeras ofta som två öppna ventiler efter konservering. Två öppna ventiler kommer vanligtvis att snäppa stängda, eller knäppa öppna och stängda, när de utsätts för NaCl och klassificeras som "FDG (T)". Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

  1. Genomför en natriumklorid (NaCl) test för att ytterligare utvärdera lönsamheten för alla fullt utvecklade glochidia genom att tillsätta en kristall av NaCl till en delmängd droppe av Gill provet35. Livskraftiga glochidia kommer att reagera på NaCl genom att stänga sina ventiler från ett öppet läge. Rapportera varje salttestad glochidia med "(T)" i slutet av beteckningen när data registreras.
    Obs: fullt utvecklad glochidia kan också observeras aktivt knäppa öppna och stängda utan exponering för NaCl.

4. rapportera till databasen

  1. Få tillgång till fmga Web (http://arcg.is/089uee), som utvecklades med hjälp av programvara online38,39,40. På FMGA-sidan finns en länk till skrivbords datainmatningsformuläret och en program nedladdning för mobila enheter. Mobilappen möjliggör datainmatning på fältet och automatiserad georeferering41.
    Obs: graviditet kalender och annan grafik i samband med sötvatten musselarter liv historia händelser kan också hittas på FMGA Dashboard.
    1. Använd mobilappen eller skrivbordet för att registrera resultat i datainmatningsformuläret genom att använda rullgardinsmenyerna och text inmatningsfälten. För stora, befintliga datauppsättningar, Kontakta författarna för mallkalkylbladet. Ange inspelade data under rätt kolumnrubriker, med tanke på att varje post, eller rad i kalkylarket, representerar observationer av ett Gill prov från en dräktig individ.
    2. Skicka resultaten och de kommer att läggas till FMGA databasen efter att ha validerats av en administratör, som kan kontakta insamlaren att begära ytterligare information eller bilder.
      Anmärkning: när data har validerats och sammanställts i FMGA databasen, alla graviditet kalendrar och annan interaktiv grafik som visas på FMGA Dashboard kommer att uppdateras.

Representative Results

Detta protokoll tillämpades under en Capture-mark-recapture studie som övervakade sötvatten mussla gemenskap inom en 750 m2 sträcka av Bruce Creek (Walton County, Florida) från januari 2015 till december 2015. Fält sampling var planerad att ske var fjärde vecka; på grund av händelser med Högflödes förlopp genomfördes dock inte provtagning i april eller september 2015. Statliga och federala myndigheter inklusive USA: s geologiska undersökning, U.S. Fish and Wildlife Service, och Florida Fish and Wildlife Conservation provision biträdas i fältundersökningar och Gill provtagning. Varje dräktig hona som påträffades under undersökningen utsattes för in-Field-innehåll provtagning med hjälp av det protokoll som beskrivs ovan, märkt (se tabell över material), och placeras tillbaka i floden substrat. Gills proven lagrades i 95% EtOH och transporterades till US Geological Surveys våt Marks laboratorium för utvärdering av Gills innehåll.

Genom att tagga honor och återta dem på månadsintervaller under hela året utvärderade vi både dödliga och icke-dödliga effekter av Gill sampling-protokollet på totalt 90 individer. Följande sju arter återerövrades under denna studie: Elliptio Auktor (n = 5), Fusconaia burkei (n = 1), hamiota australis (n = 19), Obovaria Auktor (n = 1), Strophitus williamsi (n = 1), Villosa lienosa (n = 60), och villosa vibex (n = 3). Vårt urval inkluderade individer från 24 mm till 80 mm i total längd och två arter (F. burkei och H. australis) skyddas av US utrotningshotade arter Act. Alla data som används i denna studie är allmänt tillgängliga vi har gett tillgång till vår datauppsättning på ScienceBase (https://doi.org/10.5066/P90VU8EN)42.

Survivorship bedömdes av hur många individer återerövrades levande efter Gill provinsamling. Vi observerade hög efterlevande (97%) under studien med viss dödlighet, möjligen bidrags bar till predation, som anges av observationer på plats. Resultaten visade att omkring 51% av individerna (46 av 90) befanns vara dräktiga mellan på varandra följande provtagnings händelser. Ytterligare 10% av individerna (9 av 90) hittades dräktig, återerövrades inte dräktig, och hittade dräktig igen. Omkring 39% av individerna (35 av 90) i denna studie hittades dräktig, en Gill prov togs, men när återerövras igen under hela året, de hittades aldrig dräktig en andra gång. Resultaten tyder på att det protokoll som beskrivs här varken är dödligt eller subdödligt och inte stör den nuvarande perioden efter att Gill provtagits.

Även om urvalsstorlekarna i denna studie är ojämlika mellan olika arter, belyser resultaten från denna studie de nyttiga och praktiska tillämpningarna av detta protokoll. Graviditetskalender för V. lienosa illustrerar dräktiga honor som RUVAR FDG hittades i nästan varje månad av året utom i augusti, då endast honor GRUBBLEANDE ägg hittades (figur 5a). Kvinnliga H. australis hittades inte dräktig (ng) i juli, augusti och december. En större andel kvinnor ruvar i januari och februari men hittades också i oktober och november (Figur 5b). Inga individer av E. Auktor hittades ruinande FDG trots att honor var grubblekande ägg från maj till juni, och en dräktig hona inspelad (GFR) i juni (figur 5c). Den enda dräktiga F. burkei Female hittades GFR i juni och ÅTERERÖVRADES ng i juli. Samma O. Auktor individ samlades FDG i februari och återerövrades ng i juli. Endast en S. williamsi hittades och återerövrades tre gånger. Denna hona hittades FDG i mars, NG i maj, GFR i juni, och ägg i augusti (figur 5c). Dräktiga honor av V. vibex ruvande FDG hittades mellan februari och juni (figur 5c).

Figure 5
Figur 5: resultaten av studien i Bruce Creek, fl visas i en graviditet kalenderformat. (A) graviditet kalender för villosa lienosa fångar/recaptures. (B) graviditet kalender för hamiota australis fångar/recaptures. C) graviditetkalendrar för alla arter med färre än 10 individer som ingick i urvalet. Y-axeln inkluderar förkortningar för månaderna januari (Ja), februari (F), mars (herr), maj (min), juni (Joh), juli (JL) augusti (A), oktober (O), november (N) och december (D). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Discussion

Betydelse

Bevarandet av imperiled arter beror på framgångsrik rekrytering inom bevarade populationer. I vissa fall kan artificiell förökning behövas för att öka rekryteringen av dessa riskpopulationer. Detta kräver att forskare informeras om tidpunkten för aktiv reproduktion för varje art och eventuellt tillämpar olika metoder eller förvaltningsmetoder för att mildra effekterna på rekryteringen. Som en imperiled grupp av organismer, är det av största vikt att etablera en standardiserad och icke-dödlig strategi för att studera reproduktiva vanor, och att tillhandahålla en plattform för att sammanställa och visualisera data för att informera det vetenskapliga samfundet med de mest up-to-date information som finns tillgänglig. Denna studie ger ett steg-för-steg-protokoll för att säkerställa försiktighetsåtgärder vidtas, och Gills innehåll kan vara adekvat provtagning och utvärderas från kvinnliga musslor. Detta protokoll testades för dödliga och icke-dödliga effekter, vilket gör det möjligt för forskare och chefer att ansvarsfullt genomföra denna metod. Vi utvecklade också en uppsättning databas hanteringsverktyg och program för att underlätta sammanställning av graviditet information på en allmänt tillgänglig, användarvänlig instrumentpanel. Studier om epidemiologi, glochidia morfologi, livshistoria, Phylogenetics, förökning, och translokationer kan alla gynna och utnyttja denna databas av temporala graviditet information för alla arter av sötvatten musslor.

Denna studie stödde enbart tidigare studier ' fynd av vissa arter reproduktiva vanor men också avslöjade ny information om andra. Även om v. vibex samlades in i färre antal än v. lienosa, kan man hitta likheter mellan de två baserat på graviditet data. Båda arterna av villosa verkar grubbla helt utvecklade glochidia under en stor del av året, som kännetecknar dem som en övervintrande brooder. Detta är förenligt med tidigare studier på andra villosa arter43,44,45. Resultaten av denna studie tyder H. australis kan hittas dräktig från oktober och övervintrande i juni, utom inga fångar hittades dräktig i december. En tidigare publicerad studie identifierade kongen H. altilis med en graviditet period på fyra månader, mars till46juni,47. Denna slutsats illustrerar en längre graviditet period än man tidigare trott och i allmänhet grupper H. australis som en övervintrande brooder. Som federalt skyddade arter, varierande grubblande perioder för h. altilis och h. australis kan påverka ledningens beslut att bättre skydda populationer under reproducerbara aktiva tider. Elliptio Auktor hittades endast dräktig med ägg i maj och juni vilket motsvarar deras karakterisering som en tachytictic art med en mycket kort grubling period24,48,49, 50. Eftersom data sammanställs på Elliptio arter som använder detta protokoll, kan detaljerad information göra fältarbete effektivare när vissa glochidial utvecklingsstadier är riktade, eftersom glochidia bara finns några månader av året. Inferens från andra arter med lägre urval storlekar är begränsad, men eftersom data sammanställs i databasen, högre urvalsstorlekar kommer att ge insikt i reproduktiva vanor av ytterligare musselarter.

Procedurmässiga kommentarer

Sötvatten musslor och deras glochidia är kända för att vara mottagliga för antropogena stressorer10,35. Under graviditet inspektion, mussla ventiler kan inte vara lätt att öppna, och slarvigt tvingar ventilerna öppna kan orsaka oavsiktlig skada och resultera i stress eller dödlighet. Vissa bräckliga-skalade arter (t. ex. arter av anodonta, leptodea, utterbackia, etc.) och mindre stora individer kan ha mycket bräckliga skal och svaga adductor muskler som kan bryta och riva lätt. Gill sampling kan betraktas som en stressfaktor om hanteringen inte görs ansvarsfullt och med försiktighet. En tidigare studie visade att hantering och luft exponering av musslor under reproducerbara aktiva tider kan orsaka olika fysiologiska påfrestningar, inklusive förtida frisättning av Gills innehåll34. Men en studie som utnyttjar en liknande metod som beskrivs här, fann hantering dräktiga kvinnliga musslor under Gills provtagning inte avbryta den nuvarande barnaskaran eller orsaka för tidig frisättning i både kort och lång sikt grubbla arter16. Dessutom måste en steril spruta användas under detta protokoll för att förhindra oavsiktlig infektion eller korskontaminering när punktera gälar av flera individer. Dessutom är glochidia bräckliga och kullar kan mognas och betonas men inte utvisas. Mogna glochidia i dålig hälsa kan resultera i färre individer reagerar på salt tester35. När man gör distinktionen mellan GD (T) och FDG (T) är det viktigt att salt test med stor urvalsstorlek gör anteckningar om observationer för att noggrant identifiera distinktioner mellan GD och FDG glochidia med hjälp av beskrivningarna i denna studie. När ordentlig vård tas, den minimala stress som induceras av detta förfarande kan möjliggöra för kvinnliga musslor att fortsätta ruinera glochidia naturligt och minska effekterna på rekrytering i befolkningen.

Ytterligare uppgifter kan registreras för att komplettera databasen och ge ett brett sammanhang för reproduktiva vanor sötvatten musslor. Vissa arter (t. ex. arter av Fusconaia), har observerats för att ha gälar av olika färger baserat på utvecklingsstadiet av glochidia51. Under en inledande graviditet kontroll av honan, en beskrivning av Gill färg kan ingå i de rapporterade uppgifterna för att möjliggöra framtida utredning. Dessutom, vid denna punkt i protokollet, kan forskarna notera om grubbedande kvinnliga hittades grubterlighet glochidia i de två yttre gälarna (ektobranchus), två inre gälar (endobranchus), eller alla fyra gälar (tetragenous)17. Denna information kan läggas till FMGA och bidra till att fylla i dataluckor när det gäller ruvar för varje undersökta arter. Miljöförhållanden, särskilt vattentemperatur, kan samlas in och registreras på fältet för en mer heltäckande observation av graviditet status och timing av arter vid olika latituder områden. Forskning visar att miljöparametrar, såsom temperatur, fotoperiod, flödeshastighet och tillgång till livsmedel, kan framkalla reproduktiva händelser i sötvatten musslor52,53,54,55 ,56. Ytterligare fält kan läggas till databasen som de lämnas in för att främja framtida forskning om abiotiska faktorer som påverkar graviditet. En modifiering av Capture-mark-recapture modellerad efter vår studie kan också läggas till detta protokoll, vilket skulle göra det möjligt för forskare att övervaka en specifik musslans reproduktiva vanor och avslöja information om flera kullar per år.

Riktigheten av informationen i FMGA beror på källan. Till exempel är felidentifiering av sötvatten musslor vanligt på grund av att många arter har liknande yttre egenskaper som gör det svårt att skilja mellan arter57. Ett Gill prov från en felidentifierad individ skulle kunna skapa förvirring och falsk information för en arternas häckningsperiod. Om en Gill prov tas, fotografier bör tas av inuti båda ventilerna (om individen inte är vid liv), utanför höger ventil, och umbo (gångjärn där två ventiler ansluta) och in med graviditet data via skrivbordet webbplats eller mobil applikation. Vi välkomnar också bilder av Gills innehåll. Inom inlämnings formulären finns en nedrullningsbar meny som gör det möjligt för insamlaren att ange sin förtroendenivå när det gäller artidentifiering. Innan posten har validerats kommer denna information att beaktas vid kontroll av insamlare identifiering mot sannolik distribution, etc. På grund av den höga graden av intraspecifika morfologisk variation hos arter av unionidae uppmuntras inlämning av vävnadsprover och kan behövas för att underlätta molekylär identifiering.

Framtida konsekvenser

Som en icke-dödlig metod, detta protokoll kan tillämpas på både vanliga och imperiled arter. Graviditet kalendrar för imperiled arter kan hjälpa bevarande chefer som arbetar med utrotningshotade arter lagstiftning och återhämtningsplanering genom att ge information om tidsperioder när arter är reproduktivt aktiva. De statliga och federala myndigheter som förvaltar at-risk arter kan bättre råda tillstånd tilldelningar för tider då arten inte är sårbara och reproducera, och även begränsa skörden av värd fisk under tider musslor är grubverande fullt utvecklad glochidia. Dessutom kan fältundersökningar inriktas på arter under icke-reproduktiva perioder för att minimera påverkan på rekryteringsprocesser. Den allmänt tillgängliga databasen, FMGA, tillhandahåller ett verktyg för forskare och chefer att få viktig reproduktiva information om alla mål sötvatten mussla arter. Databasen kommer också att belysa dataluckor och uppmuntra till ytterligare forskning om artspecifika brooderande mönster. Eftersom förstå en art reproduktions mönster möjliggör lämpliga förvaltningsbeslut som skall genomföras, vi hoppas att vårt protokoll och databas underlätta framtida sötvatten mussla forskning, bevarande, och återhämtning.

Disclosures

Författarna har inget att avslöja.

Acknowledgments

Författarna skulle vilja tacka finansieringskällorna: U.S. Fish and Wildlife Service och US Geological Survey. Ett särskilt tack till Andrew hartzog och Sandra Pursifull för att organisera fält besättningar och datainsamling, tillsammans med Lauren Patterson och Chris Anderson för deras värdefulla bidrag till databas utveckling. Vi vill också tacka alla som hjälpte till på området och laboratoriet inklusive Sherry Bostick, mark Cantrell, Sahale Casebolt, Jordan Holcomb, Howard Jelks, Gary Mahon, John McLeod, Kyle Moon, Cayla Morningstar, Emma Pistole, Matt Rowe, Channing St. Aubin och Jim Williams. All användning av handels-, firma-eller produktnamn är endast för beskrivande ändamål och innebär inte godkännande av den amerikanska regeringen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1.5 mL snap cap centrifuge tubes USA Scientific 1615-5510 Snap cap tubes are important in the field so the loose screw cap is not lost.
20 G needle on 10 mL disposable syringe Exelint International 26255 sterile 10 mL disposable syringe with needle Model: 10ml Luer Lock Tip W/20G X 1 1/2"
Dissecting Microscope any any
Marking Pen Fisher Scientific 13-379-4 This is what we used but any marker that can write on small plastic tubes will do. This one is fairly ethanol and water proof.
Molecular grade ethanol any any Needed if preserving gill contents. Non-denatured 95% is needed for genetic work, 70% is needed for SEM imaging work.
Paper any any Needed to record information on samples collected.
Pen/pencil any any If in the field, better to write on waterproof paper with pencil so it doesn't smear. If in the museum/lab, any writing utensil is fine.
Petri dish DWK Life Sciences (Kimble) 23000-9050 This is what we used but any petri dish available is fine. It is nicer to have the taller walls in case too much water is used.
Sodium Chloride any any Needed for NaCl test for reactive glochidia. Preserved samples do not need this.
Speculum any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.
Sterile water any any Added to gill samples to be evaluated for reactivity within 24 hours of collection.
Super glue Gorilla Gorilla super glue gel Used to apply tags and only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Tags Hallprint FPN 8x4 Only needed if conducting a capture-mark-recapture study.
Transfer Pipet Thermo Scientific Samco 225 This is what we use but any transfer pipet or squirt bottle is applicable.
Tweezers any any Needed to move crystals of NaCl for salt test. Preserved samples do not need this.
Waterproof paper RainWriter any Only needed if conducting work in the field. This allows you to record information on each individual gill contents are extracted from.
Wooden pick any any Only needed if you want help opening the valves of a live mussel.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Williams, J. D., Warren, M. L., Cummings, K. S., Harris, J. L., Neves, R. J. Conservation status of freshwater mussels of the United States and Canada. Fisheries. 18 (9), 6-22 (1993).
  2. Lopes-Lima, M., et al. Conservation status of freshwater mussels in Europe: state of the art and future challenges. Biological Reviews. 92 (1), 572-607 (2017).
  3. Zieritz, A., et al. Diversity, biogeography and conservation of freshwater mussels (Bivalvia: Unionida) in East and Southeast Asia. Hydrobiologia. 810 (1), 29-44 (2018).
  4. Haag, W. R., Williams, J. D. Biodiversity on the brink: an assessment of conservation strategies for North American freshwater mussels. Hydrobiologia. 735 (1), 45-60 (2014).
  5. Ferreira-Rodríguez, N., et al. Research priorities for freshwater mussel conservation assessment. Biological Conservation. 231, 77-87 (2019).
  6. Graf, D. L., Cummings, K. S. Review of the systematics and global diversity of freshwater mussel species (Bivalvia: Unionoida). Journal of Molluscan Studies. 73 (4), 291-314 (2007).
  7. Lydeard, C., Cummings, K. Freshwater mollusks of the world: a distribution atlas. , Johns Hopkins University Press. Baltimore, MD. (2019).
  8. Wächtler, K., Dreher-Mansur, M. C., Richter, T. Larval types and early postlarval biology in naiads (Unionoida). Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. Bauer, G., Wächtler, K. , Springer. Berlin, Heidelberg. 93-125 (2001).
  9. Dudgeon, D., et al. Freshwater biodiversity: importance, threats, status and conservation challenges. Biological Reviews. 81 (2), 163-182 (2006).
  10. Downing, J. A., Van Meter, P., Woolnough, D. A. Suspects and evidence: a review of the causes of extirpation and decline in freshwater mussels. Animal biodiversity and Conservation. 33 (2), 151-185 (2010).
  11. Vaughn, C. C. Ecosystem services provided by freshwater mussels. Hydrobiologia. 810 (1), 15-27 (2018).
  12. Aldridge, D. C., Fayle, T. M., Jackson, N. Freshwater mussel abundance predicts biodiversity in UK lowland rivers. Aquatic Conservation: Marine and Freshwater Ecosystems. 17 (6), 554-564 (2007).
  13. Barnhart, M. C., Haag, W. R., Roston, W. N. Adaptations to host infection and larval parasitism in Unionoida. Journal of the North American Benthological Society. 27 (2), 370-394 (2008).
  14. Saha, S., Layzer, J. B. Evaluation of a nonlethal technique for determining sex of freshwater mussels. Journal of the North American Benthological Society. 27 (1), 84-89 (2008).
  15. Tsakiris, E. T., Randklev, C. R., Conway, K. W. Effectiveness of a nonlethal method to quantify gamete production in freshwater mussels. Freshwater Science. 35 (3), 958-973 (2016).
  16. Gascho, L., Andrew, M., Stoeckel, J. A. Multi-stage disruption of freshwater mussel reproduction by high suspended solids in short-and long-term brooders. Freshwater Biology. 61 (2), 229-238 (2016).
  17. Bauer, G., Wächtler, K. Ecology and evolution of the freshwater mussels Unionoida. , Springer Science and Business Media. Berlin, Germany. (2012).
  18. Ortmann, A. E. Notes upon the families and genera of the najades. Annals of the Carnegie Museum. 8 (2), 222 (1912).
  19. Heard, W. H. Sexuality and other aspects of reproduction in Anodonta (Pelecypoda: Unionidae). Malacologia. 15, 81-103 (1975).
  20. Heard, W. H. Brooding patterns in freshwater mussels. Malacological Review. 7, Supplement 7: Bivalvia 105-121 (1998).
  21. Watters, G. T., O'Dee, S. H. Glochidial release as a function of water temperature: beyond bradyticty and tachyticty. Proceedings of the Conservation, Captive Care, and Propagation of Freshwater Mussels Symposium. , 135-140 (1998).
  22. Parker, R. S., Hackney, C. T., Vidrine, M. F. Ecology and Reproductive Strategy of a South Louisiana Freshwater Mussel, Glebula Rotundata (Lamarck) (Unionidae: Lampsilini). Freshwater Invertebrate Biology. 3 (2), 53-58 (1984).
  23. Jones, H. A., Simpson, R. D., Humphrey, C. L. The reproductive cycles and glochidia of fresh-water mussels (Bivalvia: Hyriidae) of the Macleay River, Northern New South Wales, Australia. Malacologia. 27 (1), 185-202 (1986).
  24. Price, J. E., Eads, C. B. Brooding patterns in three freshwater mussels of the genus Elliptio in the Broad River in South Carolina. American Malacological Bulletin. 29 (1), 121-126 (2011).
  25. Haag, W. R., Staton, J. L. Variation in fecundity and other reproductive traits in freshwater mussels. Freshwater Biology. 48 (12), 2118-2130 (2003).
  26. Soler, J., Wantzen, K. M., Jugé, P., Araujo, R. Brooding and glochidia release in Margaritifera auricularia (Spengler, 1793) (Unionoida: Margaritiferidae). Journal of Molluscan Studies. 84 (2), 182-189 (2018).
  27. Smith, D. G. Notes on the biology of Margaritifera margaritifera margaritifera (Lin.) in Central Massachusetts. American Midland Naturalist. , 252-256 (1976).
  28. O'Brien, C., Nez, D., Wolf, D., Box, J. B. Reproductive biology of Anodonta californiensis, Gonidea angulata, and Margaritifera falcata (Bivalvia: Unionoida) in the Middle Fork John Day River, Oregon. Northwest Science. 87 (1), 59-73 (2013).
  29. Haag, W. R., Warren, M. L. Host fishes and reproductive biology of 6 freshwater mussel species from the Mobile Basin, USA. Journal of the North American Benthological Society. 16 (3), 576-585 (1997).
  30. O'Dee, S. H., Watters, G. T. New or confirmed host identifications for ten freshwater mussels. Proceedings of the Conservation, Captive Care, and Propagation of Freshwater Mussels Symposium. , 77-82 (1998).
  31. Johnson, N. A., McLeod, J. M., Holcomb, J., Rowe, M., Williams, J. D. Early life history and spatiotemporal changes in distribution of the rediscovered Suwannee moccasinshell Medionidus walkeri (Bivalvia: Unionidae). Endangered Species Research. 31, 163-175 (2016).
  32. McLeod, J. M., Jelks, H. L., Pursifull, S., Johnson, N. A. Characterizing the early life history of an imperiled freshwater mussel (Ptychobranchus jonesi) with host-fish determination and fecundity estimation. Freshwater Science. 36 (2), 338-350 (2017).
  33. Carlson, S., Lawrence, A., Blalock-Herod, H., McCafferty, K., Abbott, S. Freshwater mussel survey protocol for the Southeastern Atlantic Slope and Northeastern Gulf drainages in Florida and Georgia. US Fish and Wildlife Service, Ecological Services and Fisheries Resources Offices and Georgia Department of Transportation, Office of Environment and Location. , Atlanta, Georgia. (2008).
  34. Waller, D. L., Rach, J. J., Cope, G. W., Miller, G. A. Effects of handling and aerial exposure on the survival of unionid mussels. Journal of Freshwater Ecology. 10 (3), 199-207 (1995).
  35. Fritts, A. K., et al. Assessment of toxicity test endpoints for freshwater mussel larvae (glochidia). Environmental Toxicology and Chemistry. 33 (1), 199-207 (2014).
  36. Christian, A. D., Monroe, E. M., Asher, A. M., Loutsch, J. M., Berg, D. J. Methods of DNA extraction and PCR amplification for individual freshwater mussel (Bivalvia: Unionidae) glochidia, with the first report of multiple paternity in these organisms. Molecular Ecology Notes. 7 (4), 570-573 (2007).
  37. Henley, W. F., Grobler, P. J., Neves, R. J. Non-invasive method to obtain DNA from freshwater mussels (Bivalvia: Unionidae). Journal of Shellfish Research. 25 (3), 975-978 (2006).
  38. ESRI. ArcGIS Desktop 10.6.1.9270. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2017).
  39. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Survey123 Field Application for ArcGIS 3.3.64. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  40. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Survey123 Connect for ArcGIS 3.3.51. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  41. ESRI. ArcGIS Online. ESRI Geospatial Cloud: Operations Dashboard for ArcGIS. Environmental Systems Research Institute (ESRI). , (2019).
  42. Johnson, N. A., Beaver, C. E. Empirical data supporting a non-lethal method for characterizing the reproductive status and larval development of freshwater mussels (Bivalvia: Unionida). U.S. Geological Survey data release. , (2019).
  43. Ortmann, A. E. A monograph of the naides of Pennsylvania. Memoirs of the Carnegie Museum. 8, (1919).
  44. Posey, W. R. Life History and Population Biology of the State Special Concern Ouachita Creekshell, Villosa arkansasensis (I. Lea 1862). Arkansas Game and Fish Commission. , (2007).
  45. Asher, A. M., Christian, A. D. Population characteristics of the mussel Villosa iris (Lea) (rainbow shell) in the Spring River watershed, Arkansas. Southeastern Naturalist. 11 (2), 219-239 (2012).
  46. Haag, W. R., Warren, M. L., Shillingsford, M. Host fishes and host-attracting behavior of Lampsilis altilis and Villosa vibex (Bivalvia: Unionidae). The American Midland Naturalist. 141 (1), 149-158 (1999).
  47. Roe, K. J., Hartfield, P. D. Ham,iota a new genus of freshwater mussel (Bivalvia: Unionidae) from the Gulf of Mexico drainages of the southeastern United States. Nautilus-Sanibel. 119 (1), 1-10 (2005).
  48. Williams, J. D., Butler, R. S., Warren, G. L., Johnson, N. A. Freshwater mussels of Florida. , University of Alabama Press. Tuscaloosa, AL. (2014).
  49. Jirka, K. J., Neves, R. J. Reproductive biology of four species of freshwater mussels (Molluscs: Unionidae) in the New River, Virginia and West Virginia. Journal of Freshwater Ecology. 7 (1), 35-44 (1992).
  50. Watters, G. T., O'Dee, S. H., Chordas, S. Patterns of vertical migration in freshwater mussels (Bivalvia: Unionoida). Journal of Freshwater Ecology. 16 (4), 541-549 (2001).
  51. Richardson, F., Martínez, P. Anodonta propagation studies: determination of mussel sexual maturity and Glochidia release agents. Proceedings of the Gulf and Caribbean Fisheries Institute. 48, 535-538 (2004).
  52. Heinricher, J. R., Layzer, J. B. Reproduction by individuals of a nonreproducing population of Megalonaias nervosa (Mollusca: Unionidae) following translocation. The American Midland Naturalist. 141 (1), 140-148 (1999).
  53. Watters, G. T., O'Dee, S. H. Glochidia of the freshwater mussel Lampsilis overwintering on fish hosts. Journal of Molluscan Studies. 65 (4), 453-459 (1999).
  54. Hastie, L. C., Young, M. R. Timing of spawning and glochidial release in Scottish freshwater pearl mussel (Margaritifera margaritifera) populations. Freshwater Biology. 48 (12), 2107-2117 (2003).
  55. Galbraith, H. S., Vaughn, C. C. Temperature and food interact to influence gamete development in freshwater mussels. Hydrobiologia. 636 (1), 35-47 (2009).
  56. Kobayashi, O., Kondo, T. Reproductive ecology of the freshwater pearl mussel Margaritifera togakushiensis (Bivalvia: Margaritiferidae) in Japan. Venus (Japan). 67 (3-4), 189-197 (2009).
  57. Shea, C. P., Peterson, J. T., Wisniewski, J. M., Johnson, N. A. Misidentification of freshwater mussel species (Bivalvia: Unionidae): contributing factors, management implications, and potential solutions. Journal of the North American Benthological Society. 30 (2), 446-458 (2011).

Tags

Biologi imperiled arter utrotningshotade arter bevarande livshistoria glochidia dräktig reproduktion
Standardisering av en icke-dödlig metod för att karakterisera reproduktions status och larv utveckling av sötvatten musslor (Bivalvia: Unionida)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, … More

Beaver, C. E., Geda, S. R., Johnson, N. A. Standardizing a Non-Lethal Method for Characterizing the Reproductive Status and Larval Development of Freshwater Mussels (Bivalvia: Unionida). J. Vis. Exp. (152), e60244, doi:10.3791/60244 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter